Ce protocole fournit une méthodologie simple, fiable et reproductible pour induire in situ une ischémie myocardique régionale aiguë et une lésion de reperfusion dans un modèle de lapin pour des expériences de non-survie et de survie. Cette technique a une mortalité et une morbidité minimales via deux approches chirurgicales différentes. La méthodologie est rentable et a une faible exigence technique et peut donc être réalisée par des chercheurs sans expertise chirurgicale.
L’exposition de la DAL par une mini-thoracotomie peut être difficile. Nous recommandons de faire une quatrième incision parasternale antérieure de l’espace intercostal s’étendant latéralement de cinq à six centimètres et de pratiquer une telle exposition et une nécropsie de lapin au préalable. Pour effectuer une mini-thoracotomie gauche pour les études de survie, élevez le côté gauche du lapin anesthésié d’environ 30 degrés à l’aide d’un oreiller.
Palpez et tracez les repères osseux à l’aide d’un feutre. À l’aide d’une lame numéro 10, inciser la peau recouvrant la cinquième côte, s’étendant de l’adjacent au bord latéral du sternum jusqu’à cinq à six centimètres latéralement. À l’aide de l’électrocautérisation, divisez le muscle grand pectoral médialement, suivi du muscle dentelé antérieur latéralement.
Divisez ensuite les muscles intercostaux au-dessus de la cinquième côte pour préserver le faisceau neurovasculaire. À l’aide d’une dissection nette, incisez la plèvre pariétale avec des ciseaux de Metzenbaum, pénétrez soigneusement dans l’espace pleural par le quatrième espace intercostal et prolongez l’incision pleurale initiale dans les deux directions parallèlement à la côte jusqu’à ce qu’un écarteur de côtes ou un écarteur sternal puisse être inséré. Placez un écarteur de côtes ou un écarteur sternal dans l’espace thoracique et élargissez-le pour visualiser le cœur et le sac péricardique.
Utilisez une pince DeBakey pour soulever le péricarde. Ouvrez-le avec des ciseaux Metzenbaum et procédez à l’isolement de l’artère LAD. Cela permettra une visualisation optimale de la surface antérolatérale du cœur avec une exposition adéquate au LAD et à ses branches.
Pour isoler l’artère LAD, entourez sa troisième branche diagonale d’une suture en polypropylène 3-0 sur une aiguille conique, puis retirez l’aiguille. Dans les cas de survie, coupez les trois fils de polypropylène 3-0 utilisés pour isoler le LAD et attachez sans serrer les extrémités ensemble. Les trois fils de polypropylène 3-0 sont utilisés pour identifier la zone à risque et la zone d’infarctus lors du prélèvement du cœur.
Après l’opération, faites deux mailles en forme de huit Polyglactine 910 2-0 autour des côtes. Fermez les couches musculaires et sous-cutanées avec une suture en polydioxanone 3-0 en mode courant. Fermez ensuite la peau de manière sous-cuticulaire à l’aide d’une suture monofilament 5-0.
Enfin, effectuez une thoracentèse à l’aiguille pour évacuer l’erreur pleurale. Pour les études de non-survie, procéder immédiatement à une sternotomie médiane à l’aide de ciseaux Mayo courbés. À l’aide d’un écarteur sternal pour visualiser le cœur et le sac péricardique, ouvrez le péricarde comme démontré précédemment.
Visualisez la boucle de fil en polypropylène 3-0 placée pendant la partie de la procédure consacrée à la thoracotomie précédemment effectuée. Pour isoler l’artère LAD, entourez sa troisième branche diagonale d’une suture en polypropylène 3-0 sur une aiguille conique. Retirez ensuite l’aiguille et enfilez les deux extrémités du filament de polypropylène dans un petit tube en vinyle pour former un collet.
À l’aide d’une pince DeBakey, placez un gage rectangulaire en PTFE entre les deux filaments de polypropylène, en le prenant en sandwich entre l’artère LAD isolée et le tube en vinyle. Serrez ce collet en appuyant sur le tube en vinyle et en tirant sur les filaments de suture en polypropylène pour obstruer l’artère coronaire. Fixez le tube à l’aide d’une pince à moustiques pour maintenir l’étanchéité souhaitée.
Confirmer l’ischémie myocardique en observant une cyanose régionale de l’épicarde. Retirez le collet après 30 minutes d’induction de l’ischémie. À la fin de l’expérience, prélevez le cœur pour l’analyse biochimique et tissulaire.
Les ECG enregistrés à la pré-ischémie, pendant l’ischémie et la reperfusion ont mis en évidence une tachycardie, des arythmies, des défauts du système de conduction, le développement d’ondes Q liées à l’infarctus et une déviation du segment ST. Les lectures de l’écho 2D ont montré que le raccourcissement fractionnaire diminuait pendant l’ischémie et la post-ischémie par rapport à la pré-ischémie. Après 30 minutes d’ischémie myocardique régionale induite, des signes de nécrose myocardique ont été observés.
Les étapes les plus critiques du protocole consistent à encercler soigneusement le LAD sans endommager l’artère ni provoquer de saignement veineux, à placer de manière appropriée le PTFE pour prévenir le vasospasme et à inclure le LAD pour créer une zone à risque constante. Cette méthodologie est utile dans les modèles de lésions vasculaires, d’ischémie myocardique chronique et d’étourdissement myocardique aigu pour dévoiler la mécanique moléculaire cardiovasculaire, les mécanismes physiopathologiques et les cibles thérapeutiques, en démontrant la facilité d’utilisation et en développant des algorithmes de diagnostic et de traitement.
