Este protocolo fornece uma metodologia simples, confiável e reprodutível para induzir isquemia miocárdica regional aguda e lesão de reperfusão in situ em um modelo de coelho para experimentos de não sobrevida e sobrevida. Esta técnica tem mortalidade e morbidade mínimas através de duas abordagens cirúrgicas diferentes. A metodologia é custo-efetiva e de baixa demanda técnica, podendo ser realizada por investigadores sem experiência cirúrgica.
Expor a DA através de uma minitoracotomia pode ser um desafio. Recomendamos fazer uma quarta incisão paraesternal anterior no espaço intercostal estendendo-se cinco a seis centímetros lateralmente e praticar essa exposição e necropsia prévia em coelhos. Para realizar uma minitoracotomia esquerda para estudos de sobrevida, elevar o lado esquerdo do coelho anestesiado aproximadamente 30 graus usando um travesseiro.
Palpar e delinear os pontos de referência ósseos com uma caneta de marcação com ponta de feltro. Com lâmina número 10, incisar a pele sobre a quinta costela, estendendo-se de forma adjacente à borda lateral do esterno até cinco a seis centímetros lateralmente. Com o uso do eletrocautério, dividir o músculo peitoral maior medialmente, seguido lateralmente do músculo serrátil anterior.
Em seguida, divida os músculos intercostais acima da quinta costela para preservar o feixe neurovascular. Usando dissecção aguda, incida a pleura parietal com tesoura de Metzenbaum, entre cuidadosamente no espaço pleural através do quarto espaço intercostal e estenda a incisão pleural inicial em ambas as direções paralelas à costela até que um espalhador de costelas ou afastador esternal possa ser inserido. Coloque um espalhador de costelas ou afastador esternal dentro do espaço costal e amplie-o para visualizar o coração e o saco pericárdico.
Use pinças DeBakey para levantar o pericárdio. Abra-o com tesoura de Metzenbaum e prossiga com o isolamento da artéria LAD. Isso proporcionará ótima visualização da superfície anterolateral do coração com exposição adequada à DA e seus ramos.
Para isolar a artéria DAD, circunde seu terceiro ramo diagonal com uma sutura de polipropileno 3-0 em uma agulha de conicidade e, em seguida, remova a agulha. Em casos de sobrevivência, apague os três fios de polipropileno 3-0 usados para isolar o LAD e amarre frouxamente as extremidades. Os três fios de polipropileno 3-0 são usados para identificar a área de risco e a zona de infarto ao colher o coração.
No pós-operatório, amarre dois pontos de Poliglactina 910 2-0 ao redor das costelas. Fechar as camadas muscular e subcutânea com fio de polidioxanona 3-0 de forma corrida. Em seguida, fechar a pele de forma subcuticular com fio monofilamentar 5-0.
Finalmente, realizar uma toracocentese com agulha para evacuar o erro pleural. Para estudos de não sobrevida, proceder imediatamente com esternotomia mediana usando tesoura curva de Mayo. Utilizando afastador esternal para visualização do coração e saco pericárdico, abra o pericárdio, conforme demonstrado anteriormente.
Visualize a alça de polipropileno 3-0 colocada durante a porção de toracotomia previamente realizada do procedimento. Para isolar a artéria DAD, circunde seu terceiro ramo diagonal com uma sutura de polipropileno 3-0 em uma agulha de conicidade. Em seguida, remova a agulha e rosqueie ambas as extremidades do filamento de polipropileno através de um pequeno tubo de vinil para formar uma armadilha.
Usando pinças de DeBakey, coloque uma pinça retangular de PTFE entre os dois filamentos de polipropileno, sanduíchendo-a entre a artéria LAD isolada e o tubo de vinil. Aperte essa armadilha pressionando o tubo de vinil e puxando para cima os filamentos de sutura de polipropileno para ocluir a artéria coronal. Aperte o tubo usando uma braçadeira de mosquito para manter a estanqueidade desejada.
Confirmar isquemia miocárdica observando cianose regional do epicárdio. Remover a armadilha após 30 minutos da indução da isquemia. Ao final do experimento, colher o coração para análise bioquímica e tecidual.
Os ECGs registrados na pré-isquemia, durante a isquemia e reperfusão demonstraram taquicardia, arritmias, defeitos do sistema de condução, desenvolvimento de ondas Q relacionadas ao infarto e desvio do segmento ST. As leituras eco 2D mostraram que o encurtamento fracionado diminuiu durante a isquemia e pós-isquemia em comparação com a pré-isquemia. Após 30 minutos de isquemia miocárdica regional induzida, observou-se evidência de necrose miocárdica.
As etapas mais críticas do protocolo são circundar cuidadosamente a DAE sem danificar a artéria ou causar sangramento venoso, colocar adequadamente o pledget de PTFE para evitar vasoespasmo e incluir a LAD para criar uma área consistente de risco. Essa metodologia é útil em modelos de lesão vascular, isquemia miocárdica crônica e atordoamento miocárdico agudo para desvendar a mecânica molecular cardiovascular, mecanismos fisiopatológicos e alvos terapêuticos, demonstrando usabilidade e desenvolvendo algoritmos diagnósticos e terapêuticos.
