Bu protokol, hayatta kalmama ve sağkalım deneyleri için bir tavşan modelinde in situ akut bölgesel miyokard iskemisi ve reperfüzyon hasarını indüklemek için basit, güvenilir ve tekrarlanabilir bir metodoloji sağlar. Bu teknik, iki farklı cerrahi yaklaşımla minimal mortalite ve morbiditeye sahiptir. Metodoloji uygun maliyetlidir ve düşük teknik talebe sahiptir ve bu nedenle cerrahi uzmanlığı olmayan araştırmacılar tarafından gerçekleştirilebilir.
LAD'yi mini torakotomi ile açığa çıkarmak zor olabilir. Lateral olarak beş ila altı santimetre uzanan dördüncü bir interkostal boşluk anterior parasternal insizyon yapılmasını ve daha önce bu tür bir pozlama ve tavşan nekropsisi uygulanmasını öneririz. Hayatta kalma çalışmaları için sol mini torakotomi yapmak için, anestezi uygulanmış tavşanın sol tarafını bir yastık kullanarak yaklaşık 30 derece yükseltin.
Kemikli yer işaretlerini keçeli bir işaretleme kalemi ile palpe edin ve ana hatlarını çizin. 10 numaralı bir bıçak kullanarak, sternumun yan sınırına bitişik olandan yanal olarak beş ila altı santimetreye kadar uzanan beşinci kaburganın üzerindeki cildi kesin. Elektrokoter kullanarak, pektoralis majör kasını medial, ardından serratus anterior kasını laterale bölün.
Daha sonra nörovasküler demeti korumak için interkostal kasları beşinci kaburganın üzerine bölün. Keskin diseksiyon kullanarak, parietal plevrayı Metzenbaum makasıyla kesin, dördüncü interkostal boşluktan plevral boşluğa dikkatlice girin ve ilk plevral insizyonu bir kaburga yayıcı veya sternal ekartör yerleştirilene kadar kaburgaya paralel olarak her iki yönde uzatın. Kaburga boşluğuna bir kaburga yayıcı veya sternal ekartör yerleştirin ve kalbi ve perikardiyal keseyi görselleştirmek için genişletin.
Perikard'ı kaldırmak için DeBakey forseps kullanın. Metzenbaum makası ile açın ve LAD arter izolasyonu ile devam edin. Bu, LAD ve dallarına yeterli maruz kalma ile kalbin anterolateral yüzeyinin en iyi şekilde görselleştirilmesini sağlayacaktır.
LAD arterini izole etmek için, üçüncü diyagonal dalını konik bir iğne üzerinde 3-0 polipropilen sütür ile çevreleyin, ardından iğneyi çıkarın. Hayatta kalma durumlarında, LAD'yi izole etmek için kullanılan üç adet 3-0 polipropilen ipliği kesin ve uçları gevşek bir şekilde birbirine bağlayın. Üç adet 3-0 polipropilen iplik, kalbin toplanması sırasında risk altındaki bölgeyi ve enfarktüs bölgesini belirlemek için kullanılır.
Ameliyattan sonra, kaburgaların etrafına iki adet 2-0 Polyglactin 910 sekiz dikiş atın. Kas ve cilt altı katmanlarını 3-0 polidioksanon sütür ile koşarak kapatın. Daha sonra 5-0 monofilament sütür kullanarak cildi subkutiküler bir şekilde kapatın.
Son olarak, plevral hatayı boşaltmak için bir iğne torasentezi yapın. Hayatta kalma dışı çalışmalar için, kavisli Mayo makası kullanarak hemen orta hat sternotomisine devam edin. Kalbi ve perikardiyal keseyi görselleştirmek için sternal bir ekartör kullanarak, daha önce gösterildiği gibi perikardın açılmasını sağlayın.
İşlemin daha önce gerçekleştirilen torakotomi kısmı sırasında yerleştirilen 3-0 polipropilen iplik halkasını görselleştirin. LAD arterini izole etmek için, üçüncü diyagonal dalını bir konik iğne üzerinde 3-0 polipropilen sütür ile çevreleyin. Ardından iğneyi çıkarın ve bir tuzak oluşturmak için polipropilen filamentin her iki ucunu küçük bir vinil tüpten geçirin.
DeBakey forseps kullanarak, iki polipropilen filament arasına dikdörtgen bir PTFE rehin yerleştirin ve izole edilmiş LAD arteri ile vinil tüp arasına sıkıştırın. Koronal arteri tıkamak için vinil tüpe bastırarak ve polipropilen sütür filamentlerini yukarı çekerek bu tuzağı sıkın. İstenilen sızdırmazlığı korumak için tüpü bir sivrisinek kelepçesi kullanarak sıkıştırın.
Epikardın bölgesel siyanozunu gözlemleyerek miyokardiyal iskemiyi doğrulayın. 30 dakikalık iskemi indüksiyonundan sonra tuzağı çıkarın. Deneyin sonunda, biyokimyasal ve doku analizi için kalbi toplayın.
İskemi öncesi, iskemi sırasında ve reperfüzyonda kaydedilen EKG'lerde taşikardi, aritmiler, iletim sistemi defektleri, enfarktüs ilişkili Q dalgalarının gelişimi ve ST segment deviasyonu saptandı. 2D eko okumaları, fraksiyonel kısalmanın iskemi ve iskemi sonrası sırasında pre-iskemiye kıyasla azaldığını gösterdi. 30 dakikalık indüklenmiş bölgesel miyokard iskemisinden sonra, miyokard nekrozu bulguları gözlendi.
En kritik protokol adımları, artere zarar vermeden veya venöz kanamaya neden olmadan LAD'yi dikkatlice çevrelemek, vazospazmı önlemek için PTFE pledget'i uygun şekilde yerleştirmek ve risk altında tutarlı bir alan oluşturmak için LAD'yi dahil etmektir. Bu metodoloji, vasküler hasar, kronik miyokardiyal iskemi ve akut miyokardiyal çarpıcı modellerde kardiyovasküler moleküler mekaniği, patofizyolojik mekanizmaları ve terapötik hedefleri ortaya çıkarmak, kullanılabilirliği göstermek ve tanı ve tedavi algoritmaları geliştirmek için yararlıdır.
