토끼의 허혈 및 재관류 손상 모델

이 프로토콜은 비생존 및 생존 실험을 위한 토끼 모델에서 제자리 급성 국소 심근 허혈 및 재관류 손상을 유도하기 위한 간단하고 신뢰할 수 있으며 재현 가능한 방법론을 제공합니다. 이 기술은 두 가지 다른 수술 방법을 통해 사망률과 이환율을 최소화합니다. 이 방법론은 비용 효율적이고 기술 수요가 적기 때문에 수술 전문 지식이 없어도 연구자가 수행할 수 있습니다.

미니 개흉술을 통해 LAD를 노출시키는 것은 어려울 수 있습니다. 옆으로 5-6cm 연장된 네 번째 늑간공간 전방 주흉골 절개를 하고 이러한 노출과 토끼 부검을 미리 연습하는 것이 좋습니다. 생존 연구를 위해 왼쪽 미니 개흉술을 수행하려면 베개를 사용하여 마취된 토끼의 왼쪽을 약 30도 들어 올립니다.

펠트 팁 마킹 펜으로 뼈 모양의 랜드마크를 촉진하고 윤곽을 그립니다. 10번 칼날을 사용하여 흉골의 측면 경계에 인접한 부분부터 측면으로 5-6cm까지 뻗어 있는 다섯 번째 갈비뼈 위에 있는 피부를 절개합니다. 전기소작술을 사용하여 대흉근을 내측으로 분할한 다음 세라투스 전방근을 측면으로 나눕니다.

그런 다음 신경 혈관 다발을 보존하기 위해 다섯 번째 갈비뼈 위의 늑간 근육을 나눕니다. 날카로운 절개를 사용하여 Metzenbaum 가위로 정수리 흉막을 절개하고 네 번째 늑간 공간을 통해 흉막 공간으로 조심스럽게 들어가 갈비뼈 스프레더 또는 흉골 견인기를 삽입할 수 있을 때까지 갈비뼈와 평행한 양방향으로 초기 흉막 절개를 확장합니다. 갈비뼈 공간 내에 갈비뼈 스프레더 또는 흉골 견인기를 놓고 넓혀 심장과 심낭을 시각화합니다.

DeBakey 겸자를 사용하여 심낭을 들어 올립니다. Metzenbaum 가위로 열고 LAD 동맥 격리를 진행합니다. 이것은 LAD와 그 가지에 적절하게 노출된 심장의 전외측 표면을 최적으로 시각화할 수 있습니다.

LAD 동맥을 분리하려면 테이퍼 바늘에 3-0 폴리프로필렌 봉합사로 세 번째 대각선 가지를 둘러싼 다음 바늘을 제거합니다. 생존의 경우 LAD를 분리하는 데 사용되는 3개의 3-0 폴리프로필렌 실을 자르고 끝을 느슨하게 묶습니다. 3개의 3-0 폴리프로필렌 실은 심장 적출 시 위험 부위와 경색 부위를 식별하는 데 사용됩니다.

수술 후 갈비뼈 주위에 2-0 Polyglactin 910 8자 바늘 두 개를 묶습니다. 3-0 폴리디옥사논 봉합사로 근육층과 피하층을 매끄럽게 닫습니다. 그런 다음 5-0 모노필라멘트 봉합사를 사용하여 피하 방식으로 피부를 닫습니다.

마지막으로 흉막 이상을 제거하기 위해 바늘 흉강천자를 시행합니다. 비생존 연구의 경우 구부러진 Mayo 가위를 사용하여 정중선 흉골 절개술을 즉시 진행하십시오. 흉골 견인기를 사용하여 심장과 심낭을 시각화하고 이전에 설명한 대로 심낭을 엽니다.

이전에 수행된 절차의 개흉술 부분 동안 배치된 3-0 폴리프로필렌 스레드 루프를 시각화합니다. LAD 동맥을 분리하려면 테이퍼 바늘에 3-0 폴리프로필렌 봉합사로 세 번째 대각선 가지를 둘러쌉니다. 그런 다음 바늘을 제거하고 폴리프로필렌 필라멘트의 양쪽 끝을 작은 비닐 튜브에 끼워 올가미를 만듭니다.

DeBakey 집게를 사용하여 두 개의 폴리프로필렌 필라멘트 사이에 직사각형 PTFE pledget를 놓고 격리된 LAD 동맥과 비닐 튜브 사이에 끼웁니다. 비닐 튜브를 누르고 폴리프로필렌 봉합사 필라멘트를 위로 당겨 관상 동맥을 막아 이 올가미를 조입니다. 원하는 조임을 유지하기 위해 모기 클램프를 사용하여 튜브를 고정하십시오.

심외막의 국소 청색증을 관찰하여 심근 허혈을 확인합니다. 허혈 유도 30분 후 올가미를 제거합니다. 실험이 끝나면 생화학 및 조직 분석을 위해 심장을 채취합니다.

허혈 전, 허혈 중 및 재관류에서 기록된 ECG는 빈맥, 부정맥, 전도 시스템 결함, 경색 관련 Q파 및 ST 세그먼트 편차의 발달을 보여주었습니다. 2D 에코 판독값은 허혈 전과 비교하여 허혈 및 허혈 후 동안 분수 단축이 감소했음을 보여주었습니다. 유도된 국소 심근 허혈의 30분 후, 심근 괴사의 증거가 관찰되었습니다.

가장 중요한 프로토콜 단계는 동맥을 손상시키거나 정맥 출혈을 일으키지 않고 LAD를 조심스럽게 둘러싸고, 혈관 경련을 방지하기 위해 PTFE 서약을 적절하게 배치하고, LAD를 포함하여 일관된 위험 영역을 만드는 것입니다. 이 방법론은 혈관 손상, 만성 심근 허혈 및 급성 심근 기절 모델에서 심혈관 분자 역학, 병태생리학적 메커니즘 및 치료 표적을 밝히고 유용성을 입증하며 진단 및 치료 알고리즘을 개발하는 데 유용합니다.