Method Article
يضع البروتوكول الحالي نموذجا لإصابة العصب الوجهي باستخدام الفحص المجهري للتحقيق في الآليات التشخيصية والعلاجية لشلل الوجه مجهول السبب.
شلل الوجه مجهول السبب هو أكثر أنواع إصابات العصب الوجهي شيوعا ، حيث يمثل ما يقرب من 70٪ من حالات شلل الوجه المحيطي. لا يمكن أن يؤدي هذا المرض إلى تغيير في تعبيرات الوجه فحسب ، بل يؤثر أيضا بشكل كبير على نفسية المرضى. في الحالات الشديدة ، يمكن أن يؤثر على العمل الطبيعي وحياة المرضى. لذلك ، فإن البحث عن إصلاح إصابات العصب الوجهي له أهمية سريرية مهمة. من أجل دراسة آلية هذا المرض ، من الضروري إجراء تجارب حيوانية ذات صلة ، من بينها أهم مهمة إنشاء نموذج حيواني له نفس التسبب في المرض البشري. إن ضغط العصب الوجهي داخل العظم الصخري ، وخاصة جذع العصب عند تقاطع الطرف البعيد للقناة السمعية الداخلية وجزء المتاهة ، هو التسبب في شلل الوجه مجهول السبب. من أجل محاكاة هذا المرض الشائع ، تم إنشاء نموذج إصابة الضغط للجزء الرئيسي خارج الجمجمة من العصب الوجهي في هذه الدراسة. تم تقييم الضرر العصبي عن طريق الفحص السلوكي والفيزيولوجي الكهربي والنسيجي. أخيرا ، تم اختيار 50 جم من القوة الثابتة و 90 ثانية إصابة المشبك كمعلمات إصابة لبناء نموذج مستقر لشلل الوجه مجهول السبب.
كنوع من شلل الوجه المحيطي ، فإن شلل الوجه مجهول السبب هو سمة من سمات المسببات غير المعروفة ، والبداية الحادة ، والدورة المحددة ذاتيا1،2. لا تزال مسببات وشلل الوجه مجهول السبب غير مؤكدة3. في الوقت الحاضر ، هناك طرق علاج مختلفة لشلل الوجه4 ، ويعكس تنوع العلاجات عدم وجود خيارات العلاج المثلى. يعد استخدام تقنيات البيولوجيا الخلوية والجزيئية لدراسة آلية إصابة العصب الوجهي هو الأساس لإنشاء طرق علاج فعالة لشلل الوجه. لذلك ، فإن نموذج إصابة العصب الوجهي المناسب والمستقر مهم بشكل خاص.
في الوقت الحاضر ، لا توجد طريقة قياسية لإنشاء نموذج إصابة العصب الوجهي. تشمل طرق التحضير الحالية تطعيم الفيروس5 ، والتقسيم6 ، والتحفيز البارد7 ، والضغط8 . يعتقد أن العدوى الفيروسية ، والتشنج الوعائي الغاذي العصبي ، والتهاب المناعة الذاتية ، وما إلى ذلك ، قد تسبب نقص التروية الموضعي والتنكس والوذمة في العصب الوجهي9،10،11. علاوة على ذلك ، يمكن أن تسبب جميع العوامل المذكورة أعلاه ضغطا على الجذع الرئيسي للعصب الوجهي في قناة العصب الوجهي العظمية الضيقة12،13. بالإضافة إلى ذلك ، كانت إصابات الأعصاب الطرفية الأكثر شيوعا التي تم تحديدها أثناء العمليات الجراحية هي الضغط والكدمة14. بناء على النظريات والظواهر السريرية المذكورة أعلاه ، نعتقد أن إعداد نموذج إصابة العصب الوجهي من خلال إصابة الضغط أكثر منطقية. ومع ذلك ، فإن معظم الطرق الحالية لتنفيذ إصابات الضغط لا توفر معايير كمية للقوة والوقت. في هذه الدراسة ، قمنا بقياس قوة ومدة إصابة الضغط لتحسين قابلية استنساخ النموذج المعمول به.
تمت الموافقة على جميع التجارب على والإشراف عليها من قبل لجنة أخلاقيات في مستشفى شينخوا التابعة لكلية الطب بجامعة شنغهاي جياوتونغ (XHEC-F-2023-061). تم استخدام ذكور الفئران Sprague-Dawley ، 200-300 جم ، في هذه الدراسة. تم الحصول على من مصدر تجاري (انظر جدول المواد). تم تقسيم الفئران بشكل عشوائي إلى أربع مجموعات (ن = 10): مجموعة جراحة الشام ، ومجموعة الإصابة 30 ثانية ، ومجموعة إصابة 60 ثانية ، ومجموعة إصابة 90 ثانية.
1. تحريض التخدير وإعداد
2. إنشاء نموذج إصابة سحق موضعي للجذع خارج الجمجمة للعصب الوجهي
ملاحظة: تعقيم جميع المعدات قبل الاستخدام. تم إجراء جميع العمليات في غرفة العمليات.
3. الاختبار السلوكي
ملاحظة: تم تقييم وظيفة العصب الوجهي للفئران قبل الجراحة وبعد 48 ساعة من الجراحة (الشكل 1). تم حساب درجات رد الفعل الوميض وحركة الججس وموضع طرف الأنف15. كلما ارتفعت الدرجة الإجمالية ، زادت شدة درجة إصابة العصب الوجهي (الجدول 1).
4. الكشف الفيزيولوجي الكهربي العصبي
ملاحظة: تم إجراء التصوير الكهربائي للوجه (ENoG) قبل الإصابة ، وبعد الجراحة مباشرة ، وبعد 48 ساعة من الجراحة (الشكل 2 ، الجدول 2 ، الجدول 3 ، والجدول 4).
5. الفحص النسيجي
الاختبار السلوكي
قبل الجراحة ، كانت درجات رد الفعل الوامض وحركة الججس وموضع طرف الأنف 0 نقطة في جميع الفئران التجريبية ، مما يشير إلى أن جميع الفئران لديها وظيفة العصب الوجهي سليمة. في تقييم وظيفة العصب الوجهي بعد 48 ساعة من الجراحة, وجد أن الدرجات الفردية للفئران في كل مجموعة إصابة قد زادت. علاوة على ذلك ، زادت النتيجة الإجمالية تدريجيا مع إطالة وقت إصابة العصب الوجهي (الجدول 1).
أظهرت سجلات نشاط الوجه للفئران في كل مجموعة بعد 48 ساعة من الجراحة أن تناسق الوجه اختفى تدريجيا مع تمديد وقت الإصابة. في مجموعة الإصابات 30 ثانية ، كانت وجوه الفئران متناظرة بشكل أساسي. في مجموعة الإصابات 60 ثانية ومجموعة الإصابات 90 ثانية ، تحول طرف الأنف للفئران نحو الجانب السليم (الجانب الأيمن). كانت هذه الظاهرة أكثر وضوحا في مجموعة الإصابات في التسعينيات منها في المجموعات الأخرى (الشكل 1).
الكشف عن الفيزيولوجيا الكهربية العصبية
قبل الجراحة ، وجدت الاختبارات الفيزيولوجية الكهربية أن تحفيز الثقبة الخشائية للعصب الوجهي يمكن أن يولد بثبات موجات M (الشكل 2 أ ، د ، ز). مباشرة بعد الجراحة ، عند تحفيز الطرف القريب من موقع الإصابة ، تم تسجيل موجات M في مجموعة الإصابات 30 ثانية ، ولكن تم إطالة وتقليل كل من Lm و Am. في مجموعات الإصابات في الستينيات والتسعينيات ، لم يتم تسجيل موجات M. عند تحفيز الجزء البعيد من موقع الإصابة ، يمكن تسجيل موجات M بثبات في جميع مجموعات الإصابات الثلاث ، وكان شكل الموجة و Lm و Am متوافقا مع تلك التي سبقت الجراحة (الشكل 2 ب ، ه ، ح). بعد 48 ساعة من الجراحة ، كانت هناك اختلافات ذات دلالة إحصائية بين مجموعات الإصابة (الشكل 2C ، F ، I). في مجموعة الإصابات في 30 ثانية ، تم تسجيل موجات M في كل من التحفيز القريب والبعيد. علاوة على ذلك ، لم يكن هناك فرق ذي دلالة إحصائية في Lm قبل الجراحة وبعدها (انظر الجدول 2). في مجموعة الإصابات في 60 ثانية ، لم يتم تسجيل موجات M تحت التحفيز القريب. تحت التحفيز البعيد ، لم تسجل 70٪ من الفئران موجات M. تم تسجيل إمكانات عمل العضلات المركبة الضعيفة بشكل كبير (CMAP) في 30٪ من الفئران. تم إطالة وانخفاض Lm و Am بشكل ملحوظ ، على التوالي (انظر الجدول 3). بالنسبة لمجموعة الإصابات في التسعينيات ، لم يظهر التحفيز القريب أو البعيد CMAP (انظر الجدول 4).
الفحص المرضي
أظهر تلطيخ H & E أنه لم يكن هناك أي ضرر لعينة العصب الوجهي في مجموعة الجراحة الوهمية ، وأن مورفولوجيا العصب الوجهي كانت كاملة. في مجموعة الإصابات في الثلاثينيات ، لم يكن هناك انهيار محوري كبير أو إزالة الميالين من العصب البعيد في الموقع المتضرر ، وكان مورفولوجيا المحاور وأغماد المايلين مشابهة لتلك الخاصة بالمجموعة الضابطة. كانت النوى الملطخة بعمق لا تزال موزعة بالتساوي ، ولم تكن هناك زيادة كبيرة في العدد. في كل من مجموعات الإصابات في الستينيات والتسعينيات ، لوحظ حدوث تغيرات في الانهيار المحوري وإزالة الميالين في الأعصاب البعيدة في الموقع المتضرر ، مع تورم ألياف عصبية مرئي وانقطاع طبيعي للمحاور وأغلفة المايلين. تحت مجهر عالي الطاقة (400x) ، لوحظ أن عدد النوى الملطخة بعمق في العينة قد زاد بشكل كبير ، وظهر عدد كبير من النوى المستديرة ، والتي كانت تعتبر ضامة متسللة. كما تضخمت نواة خلية شوان الأصلية المسطحة بشكل كبير. كانت التغييرات المرضية المذكورة أعلاه أكثر وضوحا في مجموعة الإصابات في التسعينيات منها في مجموعة الإصابات في 60 ثانية (الشكل 3).
الشكل 1: صور تمثيلية تم التقاطها بعد 48 ساعة من الجراحة تظهر ملامح الوجه لمجموعات مختلفة من الفئران. (A-D) الأمامي: يعرض الجزء الأمامي. (E-H) Inferior: يعرض الجزء السفلي. التحكم الصحي: مجموعة جراحة الوهم. 30 ثانية: مجموعة إصابات 30 ثانية. 60 ثانية: 60 ثانية مجموعة الإصابات. 90 ثانية: 90 ثانية مجموعة الإصابات. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: الشكل الموجي التمثيلي ل CMAP المستحث بالقرب من نقطة إصابة العصب في كل مجموعة في أوقات مختلفة. (أ ، د ، ز) CMAP الناتج عن التحفيز في الثقبة القبرية قبل الإصابة. (ب ، ه ، ح) CMAP الناتج عن المحفزات البعيدة والقريبة مباشرة بعد الإصابة. (ج ، و ، أنا) CMAP الناتج عن المحفزات البعيدة والقريبة بعد 48 ساعة من الإصابة. في BC و E-F و H-I ، تم إنشاء الصفين العلويين من أشكال الموجة عن طريق التحفيز البعيد ، بينما تم إنشاء الصفوف الثلاثة السفلية من أشكال الموجة عن طريق التحفيز القريب. 30 ثانية: مجموعة إصابات 30 ثانية. 60 ثانية: 60 ثانية مجموعة الإصابات. 90 ثانية: 90 ثانية مجموعة الإصابات. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: صور تلطيخ H & E التمثيلية لأعصاب الوجه المقطوعة في كل مجموعة بعد 48 ساعة من الإصابة. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
مجموعة جراحة الشام | مجموعة الإصابات 30 ثانية | مجموعة الإصابات 60 ثانية | مجموعة الإصابات في 90 ثانية | |
منعكس وميض | 0 ± 0 | 0.5 ± 0.53 | 1.4 ± 0.70 | 2 ± 0 |
حركة الاهتزازات | 0 ± 0 | 0.6 ± 0.52 | 1.0 ± 0.67 | 2 ± 0 |
وضع طرف الأنف | 0 ± 0 | 0.1 ± 0.32 | 0.8 ± 0.42 | 1 ± 0 |
مجموع النقاط | 0 ± 0 | 1.2 ± 0.92 | 3.2 ± 1.23 | 5 ± 0 |
الجدول 1: درجة وظيفة العصب الوجهي للفئران بعد 48 ساعة من الجراحة (ن = 10).
ما قبل الجراحة | مباشرة بعد الإصابة | 48 ساعة بعد الإصابة | |||
قريب | بعيد | قريب | بعيد | ||
لومن (مللي ثانية) | 1.12 ± 0.09 | ** 1.54 ± 0.12 | 1.13 ± 0.19 | 1.13 ± 0.21 | 1.12 ± 0.13 |
صباحا (mv) | 4.16 ± 0.52 | ** 1.36 ± 0.72 | 4.17 ± 0.63 | *3.83 ± 0.75 | *3.92 ± 1.11 |
الجدول 2: الكمون (Lm) والسعة (Am) لموجات M في نقاط زمنية مختلفة في مجموعة الإصابة 30 ثانية (ن = 10). * يشير إلى اختلاف إحصائي بين المجموعات (P < 0.05) ، ** يشير إلى اختلاف معتد به بين المجموعات (P < 0.01). تمت مقارنة جميع النتائج مع ما قبل الجراحة.
ما قبل الجراحة | مباشرة بعد الإصابة | 48 ساعة بعد الإصابة | |||
قريب | بعيد | قريب | Δ بعيد | ||
لومن (مللي ثانية) | 1.12 ± 0.09 | / | 1.12 ± 0.21 | / | ** 2.04 ± 0.81 |
صباحا (mv) | 4.16 ± 0.52 | / | 4.14 ± 0.56 | / | *3.92 ± 1.11 |
الجدول 3: الكمون (Lm) والسعة (Am) لموجات M في نقاط زمنية مختلفة في مجموعة الإصابات 60 ثانية (ن = 10). Δ يشير إلى أن 30٪ فقط من الفئران (ن = 3) تظهر موجات M. / يشير إلى عدم ظهور أي شكل موجي. * يشير إلى الاختلاف الإحصائي بين المجموعات (P < 0.05)، ** يشير إلى اختلاف معتد به بين المجموعات (P < 0.01). تمت مقارنة جميع النتائج مع ما قبل الجراحة.
ما قبل الجراحة | مباشرة بعد الإصابة | 48 ساعة بعد الإصابة | |||
قريب | بعيد | قريب | Δ بعيد | ||
لومن (مللي ثانية) | 1.12 ± 0.09 | / | 1.13 ± 0.11 | / | / |
صباحا (mv) | 4.16 ± 0.52 | / | 4.15 ± 0.67 | / | / |
الجدول 4: الكمون (Lm) والسعة (Am) لموجات M في نقاط زمنية مختلفة في مجموعة الإصابة في 90 ثانية (ن = 10). / يشير إلى عدم ظهور أي شكل موجي.
من الضروري دراسة آلية إصلاح إصابة العصب الوجهي لدى المرضى الذين يعانون من شلل الوجه مجهولالسبب 17. يجب أن تفي درجة نموذج إصابة العصب الوجهي بالمتطلبات التالية. أولا ، يجب ألا تكون درجة إصابة العصب الوجهي خفيفة جدا ، مثل درجة سندرلاند من الدرجة1 ، والتي يمكن أن تصلح ذاتيا تماما دون تدخل من المخدرات. ثانيا ، لا ينبغي أن تكون شديدة جدا ، مثل درجة سندرلاند الخامسة ، والتي تتطلب تدخلا جراحيا. ثالثا ، يجب أن تكون درجة إصابة العصب الوجهي مستقرة وموحدة. لذلك ، من المهم دمج الاختبارات السلوكية والفيزيولوجية الكهربية والنسيجية كأساس لاختيار النموذج.
العوامل التي تؤثر على قوة إصابة السحق هي حجم القوة ومدة العمل. في هذه الدراسة ، استخدمنا ملقطا كمية للإصابة العصبية الطرفية عصامية ، مع تعيين القوة كمية (50 جم) ووقت الفعل كمتغيرات (لقط لمدة 30 ثانية و 60 ثانية و 90 ثانية على التوالي). قمنا بتسجيل وتقييم درجة شلل الوجه من خلال ملاحظة منعكس الوميض وحركة الاهتزاز وموضع طرف الأنف للفئران. هذا مشابه لمقياس House Brackmann (H-B) المستخدم بشكل شائع في التقييمالسريري 19. وجدنا أن متوسط الدرجة الإجمالية لتقييم وظيفة العصب الوجهي كان 1.2 ± 0.92 نقطة في مجموعة الإصابة 30 ثانية ، مما يشير إلى شلل خفيف في العصب الوجهي. عندما كان وقت الإصابة 60 ثانية ، كان متوسط النتيجة الإجمالية 3.2 ± 1.23 نقطة ، وأظهرت الفئران أعراض شلل الوجه الواضحة ، مثل اختفاء منعكس الوميض ، وانخفاض نشاط المجسات ، والتغيرات في موضع طرف الأنف. في مجموعة الإصابات في التسعينيات ، أظهرت جميع الفئران شلل كامل في الوجه من 5 نقاط.
أظهر الكشف الفيزيولوجي الكهربي العصبي أن تحفيز الطرف القريب مباشرة بعد الإصابة يشير إلى ضعف التوصيل في مجموعة الإصابة 30 ثانية ، بينما يشير تحفيز الأطراف القريبة والبعيدة بعد 48 ساعة إلى التعافي الجزئي لوظيفة التوصيل. وهذا يعني أنه كان هناك تدمير محوري جزئي في العصب الوجهي التالف لحظة الإصابة. ومع ذلك ، كان هذا الضرر خفيفا نسبيا ، ويمكن لوظيفة التوصيل العصبي أن تصلح ذاتيا جزئيا. لذلك ، لم يكن نموذج مجموعة الإصابة في 30 ثانية يفضي إلى ملاحظة تأثير التدخل العلاجي على إصلاح العصب الوجهي. بالنسبة لمجموعة الإصابة في التسعينيات ، لم يلاحظ أي شكل موجي في الطرف القريب من التحفيز مباشرة بعد الإصابة ، مما يشير إلى أن جميع المحاور في المنطقة المحلية للإصابة قد فقدت وظيفة التوصيل. ومع ذلك ، لم يلاحظ أي شكل موجي في الطرف البعيد من التحفيز بعد 48 ساعة ، مما يشير إلى أن جميع الأعصاب في الطرف البعيد لنقطة التحفيز قد خضعت لتنكس Wallerian في غضون 48 ساعة ، وفقدت وظيفة التوصيل العصبي تماما. في هذا الوقت ، لا يمكن أن يظهر شكل الموجة بشكل طبيعي في الطرف القريب من التحفيز. لذلك ، كان هذا النموذج مناسبا لأبحاث شلل الوجه مجهول السبب. بالنسبة لمجموعة الإصابات في الستينيات ، وجدنا أن التأثيرات الفيزيولوجية الكهربية المكتشفة لم تكن مستقرة ولم تكن مناسبة للبحث اللاحق.
وجد فحص مورفولوجيا الأنسجة أنه لم يكن هناك أي تغيير كبير تقريبا في مجموعة الإصابة 30 ثانية بعد 48 ساعة من الإصابة ، مما يشير إلى أن درجة الضرر كانت خفيفة وتم إصلاحها بشكل أساسي ، بما يتماشى مع درجة سندرلاند من الدرجة الأولى. أظهرت كل من مجموعة الإصابات في 60 ثانية ومجموعة الإصابات في التسعينيات التغيرات المرضية المبكرة النموذجية للتنكسالواليري 20. من بينها ، أظهرت مجموعة الإصابات في التسعينيات تغييرات أكثر أهمية ، مثل التفكك المحوري ، وإزالة الميالين ، وتكاثر خلايا شوان ، وتسلل البلاعم ، مما يشير إلى درجة أكثر خطورة من الضرر في هذه المجموعة. لم تتسبب جميع مجموعات الإصابة في إتلاف الغشاء الخارجي للعصب والفاسيكولوس. لذلك ، لم تكن هناك إصابة من الدرجة الرابعة إلى الخامسة في سندرلاند.
على الرغم من أن هذا النموذج الحيواني يمكن أن يعكس بدقة خصائص شلل العصب الوجهي ، إلا أنه لا يمكن أن يقترب تماما من الحدوث الفعلي لشلل الوجه لدى البشر. بالمقارنة مع طرق التحضير الأخرى ، تم تحديد قوة ووقت ضغط العصب الوجهي في هذه الدراسة ، وكان إعداد النموذج قابلا للتكرار. سيكون هذا النموذج الحيواني مفيدا في تشخيص وعلاج شلل الوجه مجهول السبب.
وأعلن أصحاب البلاغ أنه لا يوجد تضارب في المصالح متنافسا.
تم دعم هذا العمل من خلال منح المشاريع من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82203637) ومؤسسة تطوير العلوم والتكنولوجيا التابعة لجامعة نانجينغ الطبية (NMUB20210220).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
4% paraformaldehyde fixing solution | Beyotime Biotechnology | P0099 | |
Clean bench | Airtech | ||
Electronic balance | Shanghai Precision Instrument Factory | AS909 | |
Freezing microtome | Leica | CM1900 | |
Hematoxylin eosin (HE) staining kit | Beyotime Biotechnology | C0105S | |
Ketamine | Sigma | 57074-21-2 | |
Optical photographic microscope | Olympus | IX90 | |
Pentobarbital sodium | ChemSrc | 57-33-0 | |
Quantitative peripheral nerve injury forceps | In-house | Patent number: CN20082015530.3 | |
Sprague-Dawley rats | Jiangsu Jicui Yaokang Biotechnology Co., Ltd | ||
Surgical operating microscope | OPMI 1FR proergo | ZEISS |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved