Sıçan Çene Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücrelerinin İzolasyonu ve Kültürü Tekniği

Bu çalışma, kısa sürede yeterli sayıda yüksek kaliteli çene kemik iliği, güçlü farklılaşma yeteneğine sahip mezenkimal kök hücrelerin elde edilmesi için etkili ve stabil bir yöntem sunmaktadır. Niş tabanlı yöntem, sıçan kemik iliği mezenkimal kök hücrelerinin izolasyonunda uygulanabilir. Çalışmamız, yüksek saflıkta çene kemik iliği mezenkimal kök hücrelerini başarılı bir şekilde izole ederek, özellikle kemik defekti onarımı bağlamında çene kemiği dokusu mühendisliği için önemli bir hücre kaynağı sunmaktadır.

Bu gelişmeler alan için önemli bir umut vaat ediyor. Başlamak için, ötenazi yapılmış bir sıçandan bir sıçan mandibulası çıkarın. Rongeurs gagasını, çıkarılmış bir sıçan mandibulasının kesici dişleri ile ilk azı dişinin birleştiği yere yerleştirin.

Alt kesici dişler ile alt çene arasındaki bağlantıyı kesin, ardından alt kesici dişleri tamamen çıkarın. Tüm azı dişlerini ve ardından mandibular ramusu çıkarın. Şimdi mandibulanın orta kısmını son azı dişinin distal kenarı boyunca ayırın ve ilik boşluğunu ortaya çıkarın.

Ardından, bir mililitrelik tek kullanımlık bir şırıngayı alfa MEM tam ortamla doldurun. İğneyi kemik iliği boşluğuna yerleştirin. Kemik iliğini, kemik beyazlaşana kadar alfa MEM tam besiyeri içeren bir kültür kabına tekrar tekrar yıkayın.

Yıkanan çözeltiyi 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın. Çözeltiyi oda sıcaklığında üç dakika boyunca 800 G'de santrifüjleyin. Santrifüjleme tamamlandığında, süpernatanı pipetleyin, ardından tüpe 10 mililitre alfa MEM tam ortamı ekleyin.

Peleti ortamda yeniden süspanse edin ve süspansiyonu 10 santimetre genişliğinde yeni bir kültür kabına aktarın. Şimdi kızarmış mandibulayı kemik dilimlerine bölmek için bir kemik rongeur kullanın. Kemik dilimlerini üç mililitre% 0.1 tip II kollajenaz çözeltisi içeren bir tüpe aktarın.

Kemik dilimi karışımını 37 santigrat derece ve 200 RPM'de 90 dakika boyunca bir çalkalayıcıya koyun. İnkübasyon tamamlandığında, sindirilmiş mandibulayı oda sıcaklığında üç dakika boyunca 800 G'de santrifüjleyin. Süpernatanı atmak için pipetleyin, ardından hasat edilen hücreleri ve sindirilmiş kemik dilimlerini 10 mililitre alfa MEM tam ortam içeren kuyu plakalarına aktarın.

Kültürleri% 5 karbondioksit takviyesi altında nemlendirilmiş bir inkübatörde 37 santigrat derecede inkübe edin. 72 saat sonra, kültür ortamının yarısını taze ortamla değiştirin. Yapışık hücreler% 80 ila% 90 birleştiğinde, bunları bir ila iki oranında geçirin.

İkinci alt kültür sırasında kemik dilimlerini çıkarın. 72 saatlik kültürden sonra, çoğu hücre askıya alındı ve yuvarlaktı, birkaçı duvara yapıştırıldı. İğ veya fibroblast benzeri olan yapışık koloniler, beş günlük kültürden sonra ortaya çıktı.

Yapışık hücreler yedinci günde %90 birleşmeye ulaştı ve bir balık okulu şekli oluşturdu. Pasajlı hücreler homojenlik gösterdi, ağırlıklı olarak iğ şeklindeydi ve birleşmeden sonra girdap benzeri bir desendeydi.