טכניקה לבידוד ותרבית של תאי גזע מזנכימליים של מח עצם לסת חולדה

מחקר זה מספק שיטה יעילה ויציבה להשגת מספיק מח עצם לסת באיכות גבוהה, תאי גזע מזנכימליים עם יכולת התמיינות חזקה תוך זמן קצר. ניתן ליישם את השיטה מבוססת הנישה בבידוד של תאי גזע מזנכימליים של מח עצם של חולדות. המחקר שלנו מבודד בהצלחה תאי גזע מזנכימליים של מח עצם לסת בטוהר גבוה, ומציע מקור תאים משמעותי להנדסת רקמת עצם הלסת, במיוחד בהקשר של תיקון פגמים בעצם.

התקדמות זו טומנת בחובה הבטחה משמעותית לתחום. כדי להתחיל, חלץ לסת תחתונה של חולדה מחולדה שהורדמה. מקם את מקור החולדה במפגש החותכות של הלסת התחתונה של חולדה שחולצה והטוחנת הראשונה.

נתק את החיבור בין החותכות התחתונות ללסת התחתונה, ואז חלץ את החותכות התחתונות לחלוטין. הסר את כל הטוחנות ואחריו את ראמוס הלסת התחתונה. כעת הפרד את החלק המרכזי של הלסת התחתונה לאורך הקצה הדיסטלי של הטוחנות האחרונה, וחשוף את חלל המח.

לאחר מכן, מלאו מזרק חד פעמי של מיליליטר אחד במדיום שלם אלפא MEM. הכנס את המחט לחלל מח העצם. שטפו את מח העצם שוב ושוב לתוך צלחת תרבית המכילה מדיום שלם אלפא MEM עד שהעצם הופכת ללבנה.

העבירו את התמיסה שנשטפה לצינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר. צנטריפוגה את התמיסה ב 800 גרם למשך שלוש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר השלמת הצנטריפוגה, פיפטה החוצה את הסופרנטנט, ואז הוסף 10 מיליליטר של מדיום שלם אלפא MEM לצינור.

השעו מחדש את הגלולה במדיום, והעבירו את המתלה לצלחת תרבית חדשה ברוחב 10 סנטימטרים. כעת השתמש ב-rungeur עצם כדי לחלק את הלסת התחתונה הסמוקה לפרוסות עצם. העבירו את פרוסות העצם לתוך שפופרת המכילה שלושה מיליליטר של תמיסת קולגנאז 0.1% מסוג II.

הכניסו את תערובת פרוסות העצם לשייקר למשך 90 דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס ו-200 סל"ד. בסיום הדגירה, צנטריפוגה את הלסת התחתונה המעוכלת בחום של 800 גרם למשך שלוש דקות בטמפרטורת החדר. פיפט החוצה את הסופרנטנט כדי להשליך אותו, ואז העביר את התאים שנקטפו ואת פרוסות העצם המעוכלות לצלחות באר המכילות 10 מיליליטר של מדיום שלם אלפא MEM.

דגרו את התרביות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באינקובטור לח תחת תוספת פחמן דו חמצני של 5%. לאחר 72 שעות, החלף מחצית ממדיום התרבות במדיום טרי. כאשר התאים הדבקים הם 80 עד 90% מתלכדים, העבירו אותם ביחס של אחד לשניים.

הסר את פרוסות העצם במהלך תת-התרבות השנייה. לאחר 72 שעות של תרבית, רוב התאים היו תלויים ועגולים, וכמה מהם נדבקו לקיר. מושבות דבקות שהיו צירים או דמויי פיברובלסטים הופיעו לאחר חמישה ימים של תרבית.

התאים הדבקים הגיעו למפגש של 90% ביום השביעי, ויצרו צורת בית ספר לדגים. התאים העוברים הראו הומוגניות, היו בעיקר בצורת ציר, ובדפוס דמוי מערבולת לאחר מפגש.