تقنية عزل وزراعة الخلايا الجذعية الوسيطة لنخاع عظم الفك الجرذ

توفر هذه الدراسة طريقة فعالة ومستقرة للحصول على ما يكفي من نخاع عظم الفك عالي الجودة ، والخلايا الجذعية الوسيطة ذات القدرة القوية على التمايز في وقت قصير. يمكن تطبيق الطريقة المتخصصة في عزل الخلايا الجذعية الوسيطة لنخاع عظم الفئران. نجحت دراستنا في عزل الخلايا الجذعية المتوسطة لنخاع عظم الفك عالية النقاء ، مما يوفر مصدرا كبيرا للخلايا لهندسة أنسجة عظم الفك ، لا سيما في سياق إصلاح عيوب العظام.

تحمل هذه التطورات وعدا كبيرا لهذا المجال. للبدء ، استخرج الفك السفلي للفجر من فأر قتل رحيم. ضع منقار rongeurs عند تقاطع قواطع الفك السفلي المستخرجة والضرس الأول.

اقطع الوصلة بين القواطع السفلية والفك السفلي ، ثم استخرج القواطع السفلية تماما. قم بإزالة جميع الأضراس ، متبوعا بالفك السفلي. الآن افصل الجزء المركزي من الفك السفلي على طول الحافة البعيدة للضرس الأخير ، وكشف تجويف النخاع.

بعد ذلك ، املأ حقنة يمكن التخلص منها سعة مليلتر واحد بوسيط كامل ألفا ميم. أدخل الإبرة في تجويف نخاع العظم. اغسل نخاع العظم بشكل متكرر في طبق مزرعة يحتوي على وسط ألفا MEM الكامل حتى يتحول لون العظم إلى اللون الأبيض.

انقل المحلول الذي تم شطفه إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 ملليلترا. جهاز الطرد المركزي المحلول عند 800 جم لمدة ثلاث دقائق في درجة حرارة الغرفة. عند اكتمال الطرد المركزي ، قم بإخراج الماصة الطافية ، ثم أضف 10 ملليلتر من وسط ألفا MEM الكامل إلى الأنبوب.

أعد تعليق الحبيبات في الوسط ، وانقل التعليق إلى طبق ثقافة جديد بعرض 10 سم. استخدم الآن رونجور عظمي لتقسيم الفك السفلي المتدفق إلى شرائح عظمية. انقل شرائح العظام إلى أنبوب يحتوي على ثلاثة ملليلتر من محلول الكولاجيناز من النوع الثاني 0.1٪.

ضع خليط شرائح العظم في شاكر لمدة 90 دقيقة عند 37 درجة مئوية و 200 دورة في الدقيقة. عند اكتمال الحضانة ، قم بالطرد المركزي للفك السفلي المهضوم عند 800 جم لمدة ثلاث دقائق في درجة حرارة الغرفة. قم بإخراج المادة الطافية للتخلص منها ، ثم انقل الخلايا المحصودة وشرائح العظام المهضومة إلى ألواح بئر تحتوي على 10 ملليلتر من وسط ألفا MEM الكامل.

احتضان المزارع عند 37 درجة مئوية في حاضنة مرطبة تحت مكملات ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪. بعد 72 ساعة ، استبدل نصف وسط الاستزراع بوسط طازج. عندما تكون الخلايا الملتصقة من 80 إلى 90٪ ملتقية ، قم بتمريرها بنسبة واحد إلى اثنين.

قم بإزالة شرائح العظام خلال الثقافة الفرعية الثانية. بعد 72 ساعة من الثقافة ، تم تعليق معظم الخلايا ودائريتها ، مع لصق عدد قليل منها بالحائط. ظهرت المستعمرات الملتصقة التي كانت عبارة عن مغازل أو تشبه الخلايا الليفية بعد خمسة أيام من الزراعة.

وصلت الخلايا الملتصقة إلى 90٪ من التقاء بحلول اليوم السابع ، وشكلت شكل مدرسة الأسماك. أظهرت الخلايا التي تم تمريرها تجانسا ، وكانت في الغالب على شكل مغزل ، وفي نمط يشبه الدوامة بعد التقاء.