Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo de transplante de ilhotas, como o transplante de ilhotas para o omento. As implicações dessa técnica se estendem para a terapia do diabetes tipo I porque o omento é ressurgente como um potencial local de valor para o transplante de ilhotas. A principal vantagem dessa técnica é que as ilhotas isoladas são misturadas com hidrogel e a mistura é colocada na bolsa de omento de camundongo diabético.
Comece preparando um campo asséptico na área cirúrgica com material estéril, como cortinas e descartáveis. Coloque os instrumentos cirúrgicos esterilizados no campo asséptico. Escolha as ilhotas do doador sob o microscópio estéreo usando uma ponta de pipeta de 200 microlitros.
Para cada animal, colete de 450 a 500 ilhotas e transfira para um tubo superior estéril de 1,5 mililitro com 100 microlitres de cmrl 10 66 médio. Coloque o tubo no gelo até estar pronto para o transplante. Uma vez que as ilhotas tenham sido colhidas, descongele o hidrogel da matriz de membrana do porão no gelo.
Pesar e marcar todos os ratos beneficiários diabéticos. Depois de anestesiar o primeiro rato de acordo com um protocolo institucionalmente aprovado, teste a profundidade da anestesia administrando uma pitada de dedo do dedo do dedo. Se não houver reflexo de abstinência, o nível de anestesia está correto para a cirurgia.
Administre a pomada veterinária nos olhos para evitar o ressecamento enquanto estiver sob anestesia. Cotonete o abdômen com 70% de etanol. Então raspe o cabelo do local da cirurgia.
Cubra o animal com uma cortina estéril e desinfete a área com um esfoliante de iodo. Depois de usar uma tesoura oftálmica para criar uma incisão de 4 a 5 centímetros ao longo da linha média do abdômen, mova os intestinos para o lado esquerdo e cubra com gaze salina encharcada para evitar a desidratação durante o procedimento cirúrgico. Em seguida, use cotonetes de algodão para expor totalmente o estômago e localizar o omento abaixo do estômago.
Neste ponto, o hidrogel deve ser completamente descongelado. Gire o tubo contendo as ilhotas a 200 vezes g durante 30 segundos. Depois do giro, remova o supernaspe.
Em seguida, aspire 50 microliters do hidrogel adicioná-lo ao tubo contendo as ilhotas e misturar suavemente evitando a formação de bolhas. Em seguida, use dois pares de fórceps para pegar as bordas do omento e criá-lo suavemente para formar uma ranhura entre a parede gástrica e os intestinos. Neste ponto da cirurgia, uma segunda pessoa é necessária para aspirar a mistura de hidrogel de ilhotas resuspended com uma ponta de pipeta de 200 microliter e entregá-la no sulco.
Certifique-se de que a mistura está bem posicionada na ranhura, levantando suavemente ou baixando as bordas do omento. Complete o posicionamento da mistura dentro de três minutos antes que o hidrogel se solidifique. Depois do hidrogel definir, dobre o omento para cobrir o enxerto.
O omento vai aderir à parede gástrica circundante à medida que o hidrogel se solidificar. Quando o hidrogel estiver completamente solidificado, use cotonetes de algodão para reposicionar os intestinos na cavidade abdominal, tomando cuidado para não tocar no local do transplante. Em seguida, dispense 200 microliters de um antibiótico apropriado para a cavidade abdominal para prevenir infecções.
Em seguida, use sutura 4 O para fechar o abdômen. Geralmente, indivíduos novos nesse método lutarão porque os locais do omento em camundongos são pequenos e cansativos de avaliar. Coloque o mouse em uma gaiola de recuperação aquecida até que ele recupere totalmente a recumbência externa.
No dia seguinte e todos os dias depois de uma semana, injete antibiótico como profilaxia pós-cirurgia. Além disso, meça o nível de glicose no sangue não em jejum de uma amostra de sangue da veia da cauda usando um medidor de glicose no sangue uma vez por dia após o transplante. Ao transplantar para o omento, o enxerto de ilhota pode ter uma função atrasada e não atingir um nível de glicemia completamente normal por duas a três semanas.
O tecido enxertado foi recuperado do rato eutanizado 14 dias após o transplante. Aqui o enxerto é visível como um aglomerado de núcleos após a coloração da DAPI. A funcionalidade do tecido enxertado é revelada pela coloração de imunofluorescência com anticorpos anti-insulina.
A coloração de H&E mostra os tecidos enxertados cercados pelos adipócitos do omento. Uma vez dominada, essa técnica pode ser feita em uma hora se for realizada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar também que o omento do rato é frágil.
Após esse procedimento, outros métodos como o utilizado em diferentes escolas secundárias, o desempenho de MB em todos os que responderão a perguntas particulares como a disseminação da ilhota na vascuolização e o desempenho. Após esse desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para os pesquisadores em seu transplante explorarem o tratamento para diabetes tipo I em mais de um trecho. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como transplantar as ilhotas para o omento no mouse.
