Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo del trapianto di isolotto come il trapianto di isolotto all'omento. Le implicazioni di questa tecnica si estendono verso la terapia del diabete di tipo I perché l'omento è ro emergente come potenziale sito di valore per il trapianto di isolotto. Il principale vantaggio di questa tecnica è che gli isolotti isolati vengono mescolati con idrogel e la miscela viene posta nella busta di omentum del topo diabetico.
Inizia preparando un campo asettico nell'area chirurgica con materiale sterile come tende e monouso. Posizionare gli strumenti chirurgici sterilizzati nel campo asettico. Selezionare gli isolotti donatori al microscopio stereo utilizzando una punta di pipetta da 200 microlitri.
Per ogni animale, raccogliere da 450 a 500 isolotti e trasferirli in un tubo superiore sterile a scatto da 1,5 millilitri con 100 microlitri di CMRL 10 66 medio. Posizionare il tubo sul ghiaccio fino a quando non è pronto per il trapianto. Una volta raccolti gli isolotti, scongelare l'idrogel a matrice di membrana basale sul ghiaccio.
Pesare e etichettare tutti i topi riceventi diabetici. Dopo aver anestetizzato il primo topo secondo un protocollo approvato istituzionalmente, testare la profondità dell'anestesia somministrando un dito del dito. Se non c'è un riflesso di astinenza, il livello di anestesia è corretto per l'intervento chirurgico.
Somministrare un unguento veterinario agli occhi per prevenire la secchezza durante l'anestesia. Tamponare l'addome con il 70% di etanolo. Quindi radere i capelli dal sito dell'intervento.
Coprire l'animale con un drappo sterile e disinfettare l'area con uno scrub allo iodio. Dopo aver usato le forbici oftalmiche per creare un'incisione da 4 a 5 centimetri lungo la linea mediana dell'addome, spostare l'intestino sul lato sinistro e coprire con garza imbevuta salina per prevenire la disidratazione durante la procedura chirurgica. Quindi utilizzare tamponi di cotone per esporre completamente lo stomaco e localizzare l'omento sotto lo stomaco.
A questo punto, l'idrogel dovrebbe essere completamente scongelato. Ruotare il tubo contenente gli isolotti a 200 volte g per 30 secondi. Dopo lo spin, rimuovere il supernatante.
Quindi aspirare 50 microlitri dell'idrogel aggiungerlo al tubo contenente gli isolotti e mescolare delicatamente evitando la formazione di bolle. Quindi utilizzare due paia di forcep per raccogliere i bordi dell'omento e sollevarlo delicatamente per formare una scanalatura tra la parete gastrica e l'intestino. A questo punto dell'intervento chirurgico, è necessaria una seconda persona per aspirare la miscela di idrogel di isolotto rimorsio con una punta di pipetta da 200 microliter e consegnarla nella scanalatura.
Assicurarsi che la miscela sia ben posizionata nella scanalatura sollevando o abbassando delicatamente i bordi dell'omento. Completare il posizionamento della miscela entro tre minuti prima che l'idrogel si solidifichi. Dopo i set di idrogel, piegare l'omento per coprire l'innesto.
L'omento aderirrà alla parete gastrica circostante man mano che l'idrogel si solidifica. Quando l'idrogel è completamente solidificato, utilizzare tamponi di cotone per riposizionare l'intestino nella cavità addominale facendo attenzione a non toccare il sito di trapianto. Successivamente erogare 200 microlitri di un antibiotico appropriato nella cavità addominale per prevenire l'infezione.
Quindi usa la sutura 4 O per chiudere l'addome. Generalmente gli individui nuovi a questo metodo avranno difficoltà perché i siti dell'omento nei topi sono piccoli e faticosi da valutare. Posizionare il mouse in una gabbia di recupero riscaldata fino a quando non riacquista completamente la reclinanza esterna.
Il giorno successivo e ogni giorno dopo per una settimana, iniettare antibiotico come profilassi post-operatoria. Inoltre, misurare il livello di glucosio nel sangue non a digiuno da un campione di sangue della vena della coda usando un misuratore di glucosio nel sangue una volta al giorno dopo il trapianto. Durante il trapianto nell'omento, l'innesto di isolotto può avere una funzione ritardata e non raggiungere un livello di glucosio nel sangue completamente normale per due o tre settimane.
Il tessuto innestato è stato recuperato dal topo eutanasiato 14 giorni dopo il trapianto. Qui l'innesto è visibile come un gruppo di nuclei dopo la colorazione DAPI. La funzionalità del tessuto innestato è rivelata dalla colorazione immunofluorescenza con anticorpi anti-insulina.
La colorazione H&E mostra i tessuti innestati circondati dagli adipociti dell'omento. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in un'ora se viene eseguita correttamente. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare anche che l'omento del mouse è fragile.
Seguendo questa procedura, altri metodi come utilizzati in diversi licei, prestazioni MB in tutto ciò che risponderà a domande particolari come la diffusione dell'isolotto nella vascuolizzazione e le prestazioni. Dopo questo sviluppo, questa tecnica ha spianato la strada ai ricercatori nel loro e trapianto per esplorare il trattamento per il diabete di tipo I in più di un estratto. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come trapiantare gli isolotti nell'omento nel topo.
