Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Bereich der Letentransplantation wie die Letentransplantation in das Omentum zu beantworten. Die Implikationen dieser Technik erstrecken sich auf die Therapie von Typ-I-Diabetes, da das Omentum als potenzieller Wertstandort für die Letentransplantation wieder auftaucht. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass die isolierten Inselchen mit Hydrogel gemischt werden und die Mischung in den Omentumbeutel der diabetischen Maus gelegt wird.
Beginnen Sie mit der Vorbereitung eines aseptischen Feldes im chirurgischen Bereich mit sterilem Material wie Vorhängen und Einwegartikeln. Legen Sie die sterilisierten chirurgischen Instrumente in das aseptische Feld. Wählen Sie die Spenderinseln unter dem Stereomikroskop mit einer 200-Mikroliter-Pipettenspitze aus.
Für jedes Tier 450 bis 500 Inselchen sammeln und in ein steriles 1,5-Milliliter-Snap-Top-Rohr mit 100 Mikroliter CMRL 10 66 Medium geben. Legen Sie die Röhre auf Eis, bis sie zur Transplantation bereit ist. Sobald die Inseln geerntet sind, tauen Keller Membran Matrix Hydrogel auf Eis.
Wiegen und taggen Sie alle diabetischen Empfängermäuse. Nach der Anästhesisierung der ersten Maus nach einem institutionell zugelassenen Protokoll, testen Sie die Tiefe der Anästhesie, indem Sie eine Zehenprise. Wenn es keinen Entzugsreflex gibt, ist das Niveau der Anästhesie für die Operation korrekt.
Verabreichen Sie die Tierarztsalbe an die Augen, um Trockenheit unter Anästhesie zu verhindern. Den Bauch mit 70% Ethanol abwischen. Dann rasieren Sie die Haare von der Operationsstelle.
Bedecken Sie das Tier mit einem sterilen Vorhang und desinfizieren Sie den Bereich mit einem Jodpeeling. Nach der Verwendung von ophthalmologischen Scheren, um einen 4 bis 5 Zentimeter Schnitt entlang der Mittellinie des Bauches zu erstellen, bewegen Sie den Darm auf die linke Seite und decken Sie mit saline getränkter Gaze, um Austrocknung während des Operationszufalls zu verhindern. Dann verwenden Sie Wattestäbchen, um den Magen vollständig freizulegen und das Omentum unter dem Magen zu lokalisieren.
An dieser Stelle sollte das Hydrogel vollständig aufgetaut werden. Drehen Sie das Rohr mit den Inseln 30 Sekunden lang mit 200 mal g. Entfernen Sie nach dem Spin den Überstand.
Dann aspirieren 50 Mikroliter des Hydrogels fügen Sie es in das Rohr mit den Inseln und mischen sanft die Bildung von Blasen zu vermeiden. Als nächstes verwenden Sie zwei Paar Zangen, um die Ränder des Omentums aufzunehmen und sanft zu einer Nut zwischen der Magenwand und dem Darm zu heben. An dieser Stelle in der Operation wird eine zweite Person benötigt, um die resuspendierte Insel Hydrogelmischung mit einer 200-Mikroliter-Pipettenspitze zu saugen und in die Nut zu geben.
Stellen Sie sicher, dass die Mischung gut in der Nut positioniert ist, indem Sie die Ränder des Omentums sanft anheben oder senken. Vervollständigen Sie die Positionierung der Mischung innerhalb von drei Minuten, bevor das Hydrogel erstarrt. Nach den Hydrogel-Sets das Omentum falten, um das Transplantat zu bedecken.
Das Omentum haftet an der umgebenden Magenwand, wenn sich das Hydrogel verfestigt. Wenn das Hydrogel vollständig verfestigt ist, verwenden Sie Wattestäbchen, um den Darm in der Bauchhöhle neu zu positionieren, wobei darauf geachtet wird, den Ort der Transplantation nicht zu berühren. Als nächstes 200 Mikroliter eines geeigneten Antibiotikums in die Bauchhöhle geben, um eine Infektion zu verhindern.
Verwenden Sie dann 4 O Naht, um den Bauch zu schließen. Im Allgemeinen werden Personen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten haben, weil die Standorte des Omentums bei Mäusen klein und anstrengend zu bewerten sind. Legen Sie die Maus in einen erwärmten Erholungskäfig, bis sie vollständig die externe Resüperkraft wiedererlangt.
Am nächsten Tag und jeden Tag danach für eine Woche, injizieren Sie Antibiotikum als post-chirurgieische Prophylaxe. Messen Sie auch den nicht fastenden Blutzuckerspiegel aus einer Blutprobe der Schwanzvene mit einem Blutzuckermessgerät einmal täglich nach der Transplantation. Bei der Transplantation in das Omentum kann das Islettransplantat eine verzögerte Funktion haben und zwei bis drei Wochen lang keinen völlig normalen Blutzuckerspiegel erreichen.
Das transplantierte Gewebe wurde 14 Tage nach der Transplantation aus der eingeschläferten Maus entnommen. Hier ist das Transplantat als Kernhaufen nach DAPI-Färbung sichtbar. Die Funktionalität des transplantierten Gewebes wird durch Immunfluoreszenzfärbung mit Antiinsulin-Antikörpern aufgedeckt.
H&E Färbung zeigt die transplantierten Gewebe umgeben von den Adipozyten des Omentums. Einmal gemeistert, kann diese Technik in einer Stunde durchgeführt werden, wenn sie richtig durchgeführt wird. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, sich auch daran zu erinnern, dass das Maus-Omentum zerbrechlich ist.
Nach diesem Verfahren, andere Methoden wie in verschiedenen High School verwendet, MB Leistung in allen, die bestimmte Fragen wie die Verbreitung von Derichtise in Vaskulolisierung und die Leistung beantworten wird. Nach dieser Entwicklung ebnete diese Technik den Forschern in ihrer Transplantation den Weg, um die Behandlung von Typ-I-Diabetes in mehr als einem Auszug zu erforschen. Nachdem Sie sich dieses Video angeschaut haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie die Inselchen in das Omentum in der Maus transplantieren können.
