Name: protocol for isolating the mouse circle of willis
Uploaded: 2016-10-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
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이 작품은 파리 VI 대학과 피에르 파브르 혁신 기금에 의해 지원되었다.

모든 절차가 동물 실험에 대한 로컬 윤리위원회 (일드 프랑스 - 파리 -위원회 승인 4270)의 승인, 관리 및 실험 동물의 사용을위한 유럽 공동체 표준에 따라 수행 하였다. 1. 마취 <ol><li> 펜토 바르 비탈을 치사량을 주입 성인 마우스에 복강 내 (27 게이지 바늘 및 주사기를 1ml) (1 밀리그램 / 10g 체중까지) 수술 전. </li></ol> 2. 선박 관류 참고 : 혈관 재관류 동안 눈에 수의사 연고를 적용 할 필요가 없습니다. 이 절차는 (5-10 분) 신속하고 동물의 죽음에 끝납니다. 발가락 핀치와 응답의 부족을 확인합니다. <ol><li> 홍채 가위를 사용하여, 바로 흉곽 아래, 복벽과 복막에 약 4cm 길이 절개를합니다. </li><li> 연속 주 후 진동판에 작은 절개 (밀리미터 길이)를 확인하고전자 흉곽의 전체 길이를 따라 진동판의 절개은 흉강을 노출. </li><li> 멀리 흉골을 들어 올리고 지혈과 흉골의 끝 부분을 고정; 목에 지혈을 배치합니다. 조심스럽게 심장으로 흉골을 연결하는 지방 조직을 잘라. </li><li> 마음의 꼭대기에 좌심실을 통해 15 게이지 관류 바늘을 전달합니다. </li><li> 마지막으로, 출구를 만들기 위해 간 로브 중 하나를 잘라 가위를 사용합니다. 참고 : 또 다른 출구는 우심방에 절개를 만들 홍채 가위를 사용하여 만들 수 있습니다. </li><li> 2.5 ㎖ / 분의 속도로 작동하는 펌프를 인산 완충 용액 (PBS) 25 내지 50 ㎖로 동물을 관류. 간은 혈액으로 희게은 PBS로 교체해야합니다. </li><li> 간에서 유체가 완전히 명확하면 약 5 분 후, 재관류를 중지합니다. </li><li> 면역 염색 또는 일반 계획되는 경우, 파라 포름 알데히드의 50 mL로 동물 관류(PFA 4 PBS의 %) 15 분. 참고 :주의, PFA 연기는 독성. PFA와 동물의 재관류는 통풍이 흄 후드에서 수행되어야한다. </li></ol> 3. 뇌의 분리 및 윌리스의 원 <ol><li> 뇌의 분리 <ol><li> 수술 가위로 머리를 제거합니다. </li><li> 코에 목으로부터 피부를 따라, 홍채 가위와 정중선 절개를합니다. </li><li> 두개골을 노출하고 홍채 가위로 남아있는 근육과 지방 조직을 제거하는 피부를 낸다. </li><li> 한쪽 난원 매그넘에 홍채 가위의 날카로운 끝을 놓고 신중하게 (또한 외이도로 알려진) 외부 청각 (外耳道)에 두개골의 내부 표면을 따라 그들을 밀어 넣습니다. </li><li> 반대편 측면에 3.1.4에 설명 된 절개를 재현하고 시상 봉합의 시작에 간 정수리 뼈의 내부 표면을 따라 잘라 중간 선을합니다. </li><li> 조리개를 심고정면 뼈의 위, 오른쪽 눈 사이, 시상 봉합에서 다음 두 두개골을 분할을 엽니 다. </li><li> 후각 전구를 잡아와 복부 표면의 신경 연결을 차단하기 위해 홍채 가위를 사용하여 뇌를 들어 올립니다. </li><li> 뇌를 제거하고 소 분리를 위해 얼음처럼 차가운 PBS를 포함하는 60 mm 페트리 접시에 넣습니다. 완전히 PBS의 뇌를 체험. 뇌가 4 % PFA로 고정 된 경우 (이후 절편 및 면역 염색 또는 일반 염색 용), 24 시간 동안 4 ° C에서 4 % PFA의 목욕에 보관합니다. </li></ol></li><li> 윌리스의 원의 분리 참고 : 해부 현미경이 암소 격리 필요합니다. 뇌는 전체 과정에 걸쳐 4 ° C에서 보관해야합니다. <ol><li> 소를 시각화하기 위해 거꾸로 (즉, 그것의 등쪽 표면에) 뇌를 넣습니다. </li><li> (후각 엽의 기지에서 전방 대뇌 동맥 (ACA)을 잡기 위해 작은 집게를 사용하여 <str옹&gt;을, 그림 1)과 발휘 압력 용기의 연속체에서 그들을 해리합니다. B의 중간 대뇌 동맥 (MCA) (그림 1) 잘라 동일한 절차를 사용합니다. </li><li> 피질에서 소를 형성하는 주요 동맥을 들어 올려 제거 포셉의 날카로운 끝을 사용합니다. </li><li> 포셉과 중간 대뇌 동맥 (MCA)을 파지하여, 뇌에서 분리하는 사후 통신 동맥 (PCA)의 시작을 올립니다. 전방 동맥 (ACA 및 MCA)를 선택하고 전방-등의 방향으로 광학 chiasm에 걸쳐 부드럽게 잡아 당깁니다. 암소의 중단을 방지하기 위해, 다른 혈관을 처리하는 절차를 중단. </li><li> 반복은 dorsal-에서 그들을 당기는 / (PCA) (C, 그림 1)과 기저 동맥 (BA) (D, 그림 1)에 대한 3.2.2와 우수한 후방 소뇌 동맥 (SCA) 3.2.3 단계 전방 방향. 기재된 절차 I의 끝에서 중지n은 3.2.4. </li><li> 포셉 부드럽게 당겨 전체 소를 제거합니다. 얼음처럼 차가운 PBS로 가득 찬 60 mm 페트리 접시에 소를 넣고 작은 핀 곳에서 소를 잡고, 두 집게로 남아있는 부착 된 뇌 조직을 제거합니다. </li><li> 또는 단백질 추출 - 다음 RNA 정화 처리 (약 500 ng의 RNA 추출 수율 RNA 많은 양의)에 대한 -80 ° C에서 수확 암소 보관하십시오. 참고 : 소는 격리 된 마우스 후각 동맥 위해 개발 된 장기 목욕 시스템을 적용하여, 24 시간 동안 생체 유지 될 수있다 (7). </li></ol></li></ol><img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig1.jpg" /> 그림 1 : 마우스 뇌 젖소를 강조 암소가 두 개의 전방 대뇌 동맥 (ACA)에서 파생 된 두 개의 내부 경동맥 동맥 (MCA)로부터 형성된다의 복부보기의 회로도;. 뇌 바닥동맥 (BA) 후부 (PCA)과 우수 (SCA)에 분기 대뇌 동맥, 두 개의 척추 동맥 (VA).

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	<li>Beckmann, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-dependent+cerebrovascular+abnormalities+and+blood+flow+disturbances+in+APP23+mice+modeling+Alzheimer's+disease.">Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease.</a> J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).</li><li>Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+factors+effecting+cerebral+aneurysm+pathophysiology.">Physical factors effecting cerebral aneurysm pathophysiology.</a> Ann Biomed Eng. 41 (7), 1347-1365 (2013).</li><li>Ritz, K., Denswil, N., Stam, O., van Lieshout, J., Daemen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cause+and+mechanisms+of+intracranial+atherosclerosis.">Cause and mechanisms of intracranial atherosclerosis.</a> Circulation. 130 (16), 1407-1414 (2014).</li><li>Tulamo, R., Fr&#246;sen, J., Hernesniemi, J., Niemel&#228;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+changes+in+the+aneurysm+wall:+a+review.">Inflammatory changes in the aneurysm wall: a review.</a> J Neurointerv Surg. 2 (2), 120-130 (2009).</li><li>Yamada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+amyloid+angiopathy:+emerging+concepts.">Cerebral amyloid angiopathy: emerging concepts.</a> J Stroke. 17 (1), 17-30 (2015).</li><li>Oy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+atherosclerotic+stroke:+specific+focus+on+the+metabolic+syndrome+and+inflammation.">Intracranial atherosclerotic stroke: specific focus on the metabolic syndrome and inflammation.</a> Curr Atheroscler Rep. 8 (4), 330-336 (2006).</li><li>Lee, H. 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S., Levy, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+cerebrovascular+cells+as+a+cell+culture+model+for+cerebral+amyloid+angiopathy:+isolation+of+smooth+muscle+and+endothelial+cells+from+mouse+brain.">Murine cerebrovascular cells as a cell culture model for cerebral amyloid angiopathy: isolation of smooth muscle and endothelial cells from mouse brain.</a> Methods Mol Biol. 849, 261-274 (2012).</li><li>Choi, S., Kim, J., Kim, K., Suh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+in+vitro+culture+of+vascular+endothelial+cells+from+mice.">Isolation and in vitro culture of vascular endothelial cells from mice.</a> Korean J Physiol Pharmacol. 19 (1), 35-42 (2015).</li><li>Peters, D. G., Kassam, A. B., Yonas, H., O'Hare, E. H., Ferrell, R. E., Brufsky, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+transcript+analysis+in+small+quantitiesof+mRNA+by+SAGE-Lite.">Comprehensive transcript analysis in small quantitiesof mRNA by SAGE-Lite.</a> Nucleic Acids Res. 27 (24), (1999).</li><li>Badhwar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stanimirovic,+Hamel,+&amp;+Haqqani+The+proteome+of+mouse+cerebral+arteries.">Stanimirovic, Hamel, &amp; Haqqani The proteome of mouse cerebral arteries.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 34 (6), 1033-1046 (2014).</li><li>Castro, L., Brito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Striatal+neurones+have+a+specific+ability+to+respond+to+phasic+dopamine+release.">Striatal neurones have a specific ability to respond to phasic dopamine release.</a> J Physiol. 591 (13), 3197-3214 (2013).</li><li>H&#252;bscher, D., Nikolaev, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+transgenic+mice+expressing+FRET+biosensors.">Generation of transgenic mice expressing FRET biosensors.</a> Methods Mol Biol. 1294, 117-129 (2015).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

우리는 윌리스의 원의 분리 여기를 재현 프로토콜을 설명합니다. 소를 포함하는 가장 일반적인 뇌 혈관 질환은 동맥 혈관의 벽에 영향을 모두 CAA 관련 vasculopathies, 두개 내 동맥 경화 및 두개 내 동맥류이다. 위험 인자로 잘 알려져 있지만, 이들 뇌 질환의 분자 기전은 잘 알려져 있지 남아 그 발생을 예측하기위한 특정한 생물학적 마커는 부족하다. 분자 변화를 거시적 인 관찰을 연결하는 형질 전...

또한 윌리스 (소), Willisor 윌리스 다각형의 루프의 원형으로 알려진 대뇌 동맥 원 (circulus 동맥 뇌종양은)) 먼저 그것은 시신경 chiasma 수 있습니다 시상 하부의 주위에있는 순환 문합 인 1664 년 토마스 윌리스에 의해 설명되었다 뇌와 주변 구조에 혈액을 공급하는 중앙 허브로 간주 될 수있다. 혈액 경동맥 및 척추 동맥을 통해 이러한 구성에 진입하며 내부 중간 및 후방 뇌동맥 통해 원 밖으로 흐른다. 이러한 동맥의 각각은 원호의 양측에 지점을 좌우되었다. 완전한 원을 동맥을 통신하는 기저, 포스트 소통하고, 전방 (그림 1과 그림 2). 유출 동맥 중 어느 하나에 장애가 혈류 위험함으로써 충분한 혈액이 (B)에 공급되도록 보장 경동맥 및 뇌동맥으로부터 원 입력 피 병합하여 최소화비. 이 구조는 내부 경동맥 폐색 심각한 질병에 부수적 혈류의 주요 경로로서 기능한다. 뇌 혈관 질환의 여러 유형의 소에서 자신의 기원을 가지고있다. 가장 일반적으로는 1, 2, 3이 질환으로 인한 혈관 확장에 관류 저하로 이어질 수있다. 대뇌 아밀로이드 혈관 병증 (CAA) -associated vasculopathies, 두개 내 죽상 경화증 및 두개 내 동맥류하고, 뇌내 및 / 또는 지주막 하 출혈 궁극적 허혈성 또는 출혈성 뇌졸중 또는로 변환 기껏해야 일시적 허혈성 발작. 아마도 조영술 결합 뇌 영상을 포함한 진단 절차에서의 최근 발전은 뇌 생검 없이도 가능 임상 이러한 주요 뇌 혈관 질환을 진단 만들었다. 그럼에도 불구하고, 효과적이고 특이 치료 (약물 또는 혈관)이 현재 부족과 새로운 정의 필요하다분자 표적. 인간에서 이들 질환의 예방을위한 신규 약물 표적의 식별은 동물 모델 및 소를 포함하는 뇌 - 혈관을 분리하는 방법이 필요하다. 이러한 모델은 두개 내 동맥 동맥류, CAA 또는 두개 내 동맥 경화증의 동물 모델에서 큰 혈관의 벽에 발생하는 염증을 포함하는 특정 변경에의 증거와 단서를 제공해야한다. 4, 5, 6 우리는 CAA와 같은 알츠하이머 질환에서 혈관 염증의 연구 (AD) 및 관련 질병을 촉진하기 위해 마우스 암소 분리하는 방법을 설립했다. 마우스 암소를 분리하는이 방법은 질병 진행 동안 뇌 염증 유전자 발현의 평가를 위해 개발되었다. 함께 leptomeningeal 및 pial 동맥의 벽 내에서 아밀로이드 베타 침착의 검출과,이 방법은 쉽게 저지 할 만들 수내 염증성 뇌 - 혈관 벽에 유전자 발현 및 Aβ 펩타이드의 축적 사이의 가능한 관계. 지주막 하 공간에 leptomeningeal 및 pial을 포함하는 뇌의 혈관 네트워크는 윌리스의 원을 형성하는 큰 동맥의 확장입니다. 여기서 설명한 방법은 임의의 마우스 계통의 암소를 분리하는 데 사용될 수 있고, 마우스 뇌 - 혈관의 대형 선박의 스크리닝 (예를 들어, 유전자 발현, 단백질 생산 및 번역 후 단백질 변형)의 모든 유형에 이용 될 수있다.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s Phosphate Buffered Saline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #55 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Hardened Fine Iris Scissors&amp;nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-11</td><td></td></tr><tr><td>Scissors - Straight / Sharp / Sharp&amp;nbsp;&amp;nbsp; 16.5 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>14002-16</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7b Forceps&amp;nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>11270-20</td><td></td></tr><tr><td>Stereoscopic Zoom Microscope</td><td>Nikon</td><td>SMZ745T</td><td></td></tr><tr><td>CellBIND Surface 60mm Culture Dish</td><td>Corning</td><td>#3295</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltic Pump - MINIPULS 3</td><td>Gilson</td><td>M312</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodique</td><td>Ceva Sant&amp;eacute; Animale</td><td>FR/V/2770465 3/1992</td><td></td></tr></tbody></table>

protocol for isolating the mouse circle of willis

윌리스 (COW)의 대뇌 동맥 원 (circulus 동맥 뇌종양) 또는 원은 뇌와 주변 구조에 혈액을 공급하는 광학 chiasma 및 시상 하부를 둘러싸는 순환 문합이다. 이는 대뇌 아밀로이드 혈관 병증 (CAA) -associated vasculopathies, 두개 내 죽상 경화증 및 두개 뇌 동맥류 등 여러 질병에 관여하고있다. 자신의 예방을위한 새로운 약물 표적의 식별을 위해 이러한 질병의 기초가되는 분자 메커니즘의 연구는 동물 모델을 필요로한다. 다른 사람들이 여기에 설명 된 CoW.The 방법 임의의 마우스 계통의 소 분리에 적합하며 (유전자, 단백질 생산의 발현을 선별하기위한 상당한 잠재력을 가지고 포함하는 뇌 - 혈관의 분리를 포함하는 반면 이러한 모델 중 일부는, 형질 전환 될 수있다 번역 후 단백질 수정 등 secretome 분석) 마우스 cerebro-의 대형 선박에 대한 연구혈관. 또한 절연 마우스 후각 동맥 위해 개발 기관 욕 시스템을 적용하여, 생체 외 연구에 사용될 수있다.

<html> PBS를 관류 마우스를 살해하고 프로토콜의 3.2 절에 설명 된대로 소는 격리됩니다. 해부가 제대로 수행 될 때, 소는 한 조각에서 와야 인해 혈관에 잔류 혈액의 부재로 약간 투명해야한다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig2.jpg" /> 그림 2 : 분리 후 마우스 소. 10 cm 페트리 접시에서 암소...

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Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.

윌리스의 마우스 원을 분리하는 프로토콜

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.0K 조회수.  Sorbonne Universités. We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.

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A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

왼쪽 앞쪽에 내림차순 동맥의 결찰을 통해 심근 허혈 - 재관류 손상의 생쥐 모델

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

연구

의학

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident cells. A key mechanism of this inflammatory response is the migration of circulating immune cells to the ischemic brain facilitated by chemokine release and increased endothelial adhesion molecule expression. Brain-invading leukocytes are well-known contributing to early-stage secondary ischemic injury, but their significance for the termination of inflammation and later brain repair has only recently been noticed.
Here, a simple protocol for the efficient isolation of immune cells from the ischemic mouse brain is provided. After transcardial perfusion, brain hemispheres are dissected and mechanically dissociated. Enzymatic digestion with Liberase&#160;is followed by density gradient (such as Percoll) centrifugation to remove myelin and cell debris. One major advantage of this protocol is the single-layer density gradient procedure which does not require time-consuming preparation of gradients and can be reliably performed. The approach yields highly reproducible cell counts per brain hemisphere and allows for measuring several flow cytometry panels in one biological replicate. Phenotypic characterization and quantification of brain-invading leukocytes after experimental stroke may contribute to a better understanding of their multifaceted roles in ischemic injury and repair.

Inflammation plays a central role in the pathogenesis of ischemic stroke. Increasing evidence suggests that it acts as a double-edged sword which exacerbates early brain injury, but also contributes to later repair. This protocol describes the isolation of immune cells from the ischemic brain and their subsequent flow cytometric phenotyping.

허혈성 마우스 뇌에서 면역 세포의 분리 및 유세포 분석

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

면역학 및 감염병학

Conjunctival Commensal Isolation and Identification in Mice

The ocular surface was once considered immune privileged and abiotic, but recently it appears that there is a small, but persistent commensal presence. Identification and monitoring of bacterial species at the ocular mucosa have been challenging due to their low abundance and limited availability of appropriate methodology for commensal growth and identification. There are two standard approaches: culture based or DNA sequencing methods. The first method is problematic due to the limited recoverable bacteria and the second approach identifies both live and dead bacteria leading to an aberrant representation of the ocular space. We developed a robust and sensitive method for bacterial isolation by building upon standard microbiological culturing techniques. This is a swab-based technique, utilizing an &#8220;in-lab&#8221; made thin swab that targets the lower conjunctiva, followed by an amplification step for aerobic and facultative anaerobic genera. This protocol has allowed us to isolate and identify conjunctival species such as Corynebacterium spp., Coagulase Negative Staphylococcus spp., Streptococcus spp., etc. The approach is suitable to define commensal diversity in mice under different disease conditions.

Presented here is a protocol for the isolation and amplification of aerobic and facultative anaerobic mouse conjunctival commensal bacteria using a unique eye swab and culture-based enrichment step with subsequent identification by microbiological based methods and MALDI-TOF mass spectrometry.

마우스의 결막 장금 격리 및 식별

The ocular surface was once considered immune privileged and abiotic, but recently it appears that there is a small, but persistent commensal presence. ...

Isolation of Primary Mouse Hepatocytes for Nascent Protein Synthesis Analysis by Non-radioactive L-azidohomoalanine Labeling Method

Hepatocytes are parenchymal cells of the liver and engage multiple metabolic functions, including synthesis and secretion of proteins essential for systemic energy homeostasis. Primary hepatocytes isolated from the murine liver constitute a valuable biological tool to understand the functional properties or alterations occurring in the liver. Herein we describe a method for the isolation and culture of primary mouse hepatocytes by performing a two-step collagenase perfusion technique and discuss their utilization for investigating protein metabolism. The liver of an adult mouse is sequentially perfused with ethylene glycol-bis tetraacetic acid (EGTA) and collagenase, followed by the isolation of hepatocytes with the density gradient buffer. These isolated hepatocytes are viable on culture plates and maintain the majority of endowed characteristics of hepatocytes. These hepatocytes can be used for assessments of protein metabolism including nascent protein synthesis with non-radioactive reagents. We show that the isolated hepatocytes are readily controlled and comprise a higher quality and volume stability of protein synthesis linked to energy metabolism by utilizing the chemo-selective ligation reaction with a Tetramethylrhodamine (TAMRA) protein detection method and western blotting analyses. Therefore, this method is valuable for investigating hepatic nascent protein synthesis linked to energy homeostasis. The following protocol outlines the materials and methods for the isolation of high-quality primary mouse hepatocytes and detection of nascent protein synthesis.

Here, we present a protocol for the isolation of healthy and functional primary mouse hepatocytes. Instructions for detecting hepatic nascent protein synthesis by non-radioactive labeling substrate were provided to help understand the mechanisms underlying protein synthesis in the context of energy-metabolism homeostasis in the liver.

비 방사성 L-azidohomoalanine 라벨 방법에 의해 초기 단백질 합성 분석에 대 한 기본 마우스 Hepatocytes의 절연

Hepatocytes are parenchymal cells of the liver and engage multiple metabolic functions, including synthesis and secretion of proteins essential for ...

고립된 시상하부 뉴런의 호르몬, 대사 및 전기 조절(Hormonal, Metabolic, and Electrical Regulation of Isolated Hypothalamic Neurons)

Isolation of Targeted Hypothalamic Neurons for Studies of Hormonal, Metabolic, and Electrical Regulation

The hypothalamus regulates fundamental metabolic processes by controlling functions as varied as food intake, body temperature, and hormone release. As the functions of the hypothalamus are controlled by specific subsets of neuronal populations, the ability to isolate them provides a major tool for studying metabolic mechanisms. In this regard, the neuronal complexity of the hypothalamus poses exceptional challenges. 
For these reasons, new techniques, such as Magnetic-Activated Cell Sorting (MACS), have been explored. This paper describes a new application of magnetic-activated cell sorting (MACS) using microbead technology to isolate a targeted neuronal population from prenatal mice brains. The technique is simple and guarantees a highly pure and viable primary hypothalamic neuron culture with high reproducibility. The hypothalamus is gently dissociated, neurons are selectively isolated and separated from glial cells, and finally, using a specific antibody for a cell surface marker, the population of interest is selected. 
Once isolated, targeted neurons can be used to investigate their morphological, electrical, and endocrine characteristics and their responses in normal or pathological conditions. Furthermore, given the variegated roles of the hypothalamus in regulating feeding, metabolism, stress, sleep, and motivation, a closer look at targeted and region-specific neurons may provide insight into their tasks in this complex environment.

저자 스포트라이트: 시상하부 신경 메커니즘 통찰력(Hypothalamic Neural Mechanism Insights) 

Here we present a protocol to grow specific hypothalamic cell subtypes in culture. The cells can be selected based on opportune/unique membrane markers and used in many applications, including immunofluorescence, electrophysiological, and biochemical assays.

호르몬, 대사 및 전기 조절 연구를 위한 표적 시상하부 뉴런의 분리

The hypothalamus regulates fundamental metabolic processes by controlling functions as varied as food intake, body temperature, and hormone release. As ...

신경과학

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs from the coronary circulation. Hearts with intact aortic arches were removed and perfused via retrograde Langendorff with digestion solution containing 300 Units/ml of collagenase type II, 0.1 mg/ml soybean trypsin inhibitor and 1 M CaCl2. The perfusates were collected at 15 min intervals for 90 min, pelleted by centrifugation, resuspended in plating media, and plated on tissue culture dishes. VSMCs were characterized by presence of SM22&#945;, &#945;-SMA, and vimentin. One of the main advantages of using this technique is the ability to isolate VSMCs from the coronary circulation of mice. Although the small number of cells obtained can limit some of the applications for which the cells can be utilized, isolated coronary VSMCs can be used in a variety of well-established cell culture techniques and assays. Studies investigating VSMCs from genetically modified mice can provide further information about structure-function and signaling processes associated with vascular pathologies.

The purpose of this protocol is to demonstrate the isolation and culture techniques of murine primary vascular smooth muscle cells (VSMCs) from the coronary circulation. Once VSMCs have been isolated, they can be used for many standard culture techniques.

쥐 관상 동맥 혈관 평활근 세포의 분리

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

생물학

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

Sections of paraffin embedded tissues are routinely used for studying tissue histology and histopathology. However, it is difficult to determine what the three-dimensional tissue morphology is from such sections. In addition, the sections of tissues examined may not contain the region within the tissue that is necessary for the purpose of the ongoing study. This latter limitation hinders histopathological studies of blood vessels since vascular lesions develop in a focalized manner. This requires a method that enables us to survey a wide area of the blood vessel wall, from its surface to deeper regions. A whole mount en face preparation of blood vessels fulfills this requirement. In this article, we will demonstrate how to make en face preparations of the mouse aorta and carotid artery and to immunofluorescently stain them for confocal microscopy and other types of fluorescence-based imaging.

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

A procedure for making en face preparations of the mouse carotid artery and aorta is described. Such preparations, when immunofluorescently stained with specific antibodies, enable us to study localization of proteins and identification of cell types within the entire vascular wall by confocal microscopy.

마우스 혈관의 얼굴 준비

Sections of paraffin embedded tissues are routinely used for studying tissue histology and histopathology. However, it is difficult to determine what the ...

A Simple and Effective Method to Consistently Isolate Mouse Cardiomyocytes

The need for reproducible yet technically simple methods yielding high-quality cardiomyocytes is essential for research in cardiac biology. Cellular and molecular functional experiments (e.g., contraction, electrophysiology, calcium cycling, etc.) on cardiomyocytes are the gold standard for establishing mechanism(s) of disease. The mouse is the species of choice for functional experiments and the described technique is specifically for the isolation of mouse cardiomyocytes. Previous methods requiring a Langendorff apparatus require high levels of training and precision for aortic cannulation, often resulting in ischemia. The field is shifting toward Langendorff-free isolation methods that are simple, are reproducible, and yield viable myocytes for physiological data acquisition and culture. These methods greatly diminish ischemia time compared to aortic cannulation and result in reliably obtained cardiomyocytes. Our adaptation to the Langendorff-free method includes an initial perfusion with ice-cold clearing solution, use of a stabilizing platform that ensures a steady needle during perfusion, and additional digestion steps to ensure reliably obtained cardiomyocytes for use in functional measurements and culture. This method is simple and quick to perform and requires little technical skill.

The gold standard in cardiology for cellular and molecular functional experiments are cardiomyocytes. This article describes adaptations to the non-Langendorff technique to isolate mouse cardiomyocytes.

마우스 심근 세포를 일관되게 분리하는 간단하고 효과적인 방법

The need for reproducible yet technically simple methods yielding high-quality cardiomyocytes is essential for research in cardiac biology. Cellular and ...

윌리스의 마우스 원을 분리하는 프로토콜

요약

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왼쪽 앞쪽에 내림차순 동맥의 결찰을 통해 심근 허혈 - 재관류 손상의 생쥐 모델

허혈성 마우스 뇌에서 면역 세포의 분리 및 유세포 분석

마우스의 결막 장금 격리 및 식별

비 방사성 L-azidohomoalanine 라벨 방법에 의해 초기 단백질 합성 분석에 대 한 기본 마우스 Hepatocytes의 절연

호르몬, 대사 및 전기 조절 연구를 위한 표적 시상하부 뉴런의 분리

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