وأيد هذا العمل من قبل جامعة باريس السادسة ومنحة بيير فابر الابتكار.

تم تنفيذ كافة الإجراءات وفقا للمعايير الجماعة الأوروبية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، وبموافقة لجنة الاخلاق المحلية لإجراء التجارب على الحيوانات (إيل دو فرانس-باريس-لجنة والاعتماد 4270). 1. التخدير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ جرعة قاتلة من بنتوباربيتال (تصل إلى 1 ملغ / 10 غرام من وزن الجسم) (إبرة 27 عيار وحقنة 1 مل) البريتونى إلى فئران بالغة قبل الجراحة. </li></ol> 2. السفينة الإرواء ملاحظة: ليست هناك حاجة لتطبيق التعليم والتدريب المهني مرهم للعين خلال نضح السفينة. هذا الإجراء السريع (5-10 دقائق) وينتهي في موت الحيوان. تأكيد عدم استجابة مع قليل أخمص قدميه. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص القزحية، وجعل شق، حوالي 4 سم، في جدار البطن والصفاق، فقط تحت القفص الصدري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير (بضعة ملليمترات طويلة) في الحجاب الحاجز ومن ثم continuالبريد شق في الحجاب الحاجز على طول القفص الصدري لفضح تجويف الجنبي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع القص بعيدا والمشبك غيض من القص مع مرقئ. وضع مرقئ على الرقبة. تقليم بعناية الأنسجة الدهنية التي تربط عظمة القص إلى القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اجتياز 15 عيار التروية الإبرة من خلال البطين الأيسر في قمة القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وأخيرا، استخدام مقص لقطع أحد فصوص الكبد لخلق متنفسا. ملاحظة: يمكن إنشاء منفذ بديل باستخدام مقص القزحية لخلق شق إلى الأذين الأيمن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يروي هذا الحيوان مع 25-50 مل من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) مع مضخة تعمل بمعدل 2.5 مل / دقيقة. يجب أن يتم استبدال الكبد بلانش لأن الدم مع برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ما يقرب من خمس دقائق، وبمجرد أن السائل من الكبد واضح تماما، ووقف نضح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا تم التخطيط المناعية أو تلطيخ العادية، يروي الحيوان مع 50 مل من امتصاص العرق(منهاج العمل، 4٪ في برنامج تلفزيوني) لمدة 15 دقيقة. ملاحظة: الحذر، والأبخرة PFA سامة. وينبغي أن يتم نضح من الحيوانات مع PFA في غطاء الدخان التهوية. </li></ol> 3. عزل الدماغ ودائرة ويليس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الدماغ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الرأس مع زوج من مقص جراحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق خط الوسط مع مقص القزحية، جنبا إلى جنب الجلد من العنق إلى الأنف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقليم قبالة الجلد لفضح الجمجمة وإزالة أي العضلات المتبقية والأنسجة الدهنية مع مقص القزحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع نهاية حادة من مقص القزحية إلى ماغنوم الثقبة على جانب واحد، وحرك لهم بعناية على طول السطح الداخلي للجمجمة إلى الصماخ السمعي الخارجي (المعروف أيضا باسم قناة الأذن). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنتاج شق صفها في 3.1.4 على الجانب المقابل، وجعل خط الوسط وقطع على طول السطح الداخلي من العظم بين الجداري لبدء الدرز السهمي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> زرع القزحيةمقص في العظم الجبهي، والحق بين العينين، في الدرز السهمي ثم فتحها لتقسيم الجمجمة في البلدين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع من الدماغ، والاستيلاء على بصيلات الشم وباستخدام مقص القزحية لقطع الاتصالات العصبية على سطحه البطني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الدماغ ووضعه في 60 ملم طبق بتري تحتوي على الجليد الباردة برنامج تلفزيوني لعزل البقر. تزج تماما الدماغ في برنامج تلفزيوني. إذا تم إصلاح الدماغ مع PFA 4٪ (لباجتزاء لاحق والمناعية أو تلطيخ العادية)، ويبقيه في حمام من 4٪ PFA في 4 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل دائرة ويليس ملاحظة: مطلوب مجهر تشريح لعزل البقر. يجب أن تبقى في الدماغ في 4 درجات مئوية في جميع أنحاء الإجراء بأكمله. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الدماغ رأسا على عقب (أي على السطح الظهري لل) لتصور البقرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط صغير للاستيلاء على الشرايين الدماغية الأمامية (ACA) في قاعدة الفص الشمي ( <strأونج&gt; لذلك، الشكل 1) وممارسة الضغط على فصلها من التواصل السفينة. استخدام نفس الإجراء لقطع الشرايين المتوسطة الدماغية (MCA) في ب (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام نهايات حادة من ملقط لرفع وإزالة الشرايين الكبرى التي تكون بقرة من القشرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ارفع بداية الخلفي التواصل الشرايين (PCA) لفصلهم من الدماغ، التي تجتاح الشرايين الدماغية المتوسطة (MCA) مع ملقط. التقاط الشرايين الأمامية (ACA وMCA) وسحبها بلطف على chiasm البصرية في الاتجاه الأمامي الظهري. لمنع الفوضى من البقر، يقطع الإجراء للتعامل مع الشرايين الأخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 3.2.2 و 3.2.3 للشرايين المخيخيتين والخلفية (SCA) / (PCA) (ج، الشكل 1) والشريان القاعدي (BA) (د، الشكل 1)، وسحب منهم في dorsal- الاتجاه الأمامي. وقف في نهاية الإجراء الموضح طن 3.2.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة البقر كامل عن طريق سحب بلطف مع ملقط. ضع بقرة في 60 ملم طبق بيتري مليئة الجليد الباردة برنامج تلفزيوني وإزالة أي أنسجة المخ تعلق المتبقية مع اثنين من ملقط، وعقد بقرة في مكان مع دبابيس صغيرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على بقرة تحصد في -80 درجة مئوية لمعالجتها لاحقا لتنقية الحمض النووي الريبي (عوائد استخراج الحمض النووي الريبي كميات كبيرة من الحمض النووي الريبي - ما يقرب من 500 نانوغرام) أو استخراج البروتين. ملاحظة: لا يمكن الحفاظ عليه البقرة خارج الحي لمدة 24 ساعة، من خلال تكييف نظام حمام الجهاز المتقدمة للماوس معزولة الشريان حاسة الشم 7. </li></ol></li></ol><img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig1.jpg" /> الشكل 1: رسم تخطيطي لعرض بطني من مخ الفأر تسليط الضوء على بقرة يتم تشكيل البقر اثنين من الشرايين السباتية الداخلية (MCA)، والتي هي مستمدة من اثنين من الشرايين الدماغية الأمامية (ACA)؛ وقاعديالشريان (BA) فروع في الخلفية (PCA) ومتفوقة (SCA) الشرايين الدماغية، واثنين من الشرايين الفقرية (VA).

<ol>
	<li>Beckmann, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-dependent+cerebrovascular+abnormalities+and+blood+flow+disturbances+in+APP23+mice+modeling+Alzheimer's+disease.">Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease.</a> J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).</li><li>Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+factors+effecting+cerebral+aneurysm+pathophysiology.">Physical factors effecting cerebral aneurysm pathophysiology.</a> Ann Biomed Eng. 41 (7), 1347-1365 (2013).</li><li>Ritz, K., Denswil, N., Stam, O., van Lieshout, J., Daemen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cause+and+mechanisms+of+intracranial+atherosclerosis.">Cause and mechanisms of intracranial atherosclerosis.</a> Circulation. 130 (16), 1407-1414 (2014).</li><li>Tulamo, R., Fr&#246;sen, J., Hernesniemi, J., Niemel&#228;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+changes+in+the+aneurysm+wall:+a+review.">Inflammatory changes in the aneurysm wall: a review.</a> J Neurointerv Surg. 2 (2), 120-130 (2009).</li><li>Yamada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+amyloid+angiopathy:+emerging+concepts.">Cerebral amyloid angiopathy: emerging concepts.</a> J Stroke. 17 (1), 17-30 (2015).</li><li>Oy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+atherosclerotic+stroke:+specific+focus+on+the+metabolic+syndrome+and+inflammation.">Intracranial atherosclerotic stroke: specific focus on the metabolic syndrome and inflammation.</a> Curr Atheroscler Rep. 8 (4), 330-336 (2006).</li><li>Lee, H. J., Dietrich, H. H., Han, B. H., Zipfel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+ex+vivo+model+for+the+study+of+cerebrovascular+function+utilizing+isolated+mouse+olfactory+artery.">Development of an ex vivo model for the study of cerebrovascular function utilizing isolated mouse olfactory artery.</a> J Korean Neurosurg Soc. 57 (1), 1-5 (2015).</li><li>Hosaka, K., Downes, D. P., Nowicki, K. W., Hoh, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+murine+intracranial+aneurysm+model:+aneurysm+formation+and+rupture+by+elastase+and+hypertension.">Modified murine intracranial aneurysm model: aneurysm formation and rupture by elastase and hypertension.</a> J Neurointerv Surg. 6 (6), 474-479 (2013).</li><li>Gauthier, S. A., Sahoo, S., Jung, S. S., Levy, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+cerebrovascular+cells+as+a+cell+culture+model+for+cerebral+amyloid+angiopathy:+isolation+of+smooth+muscle+and+endothelial+cells+from+mouse+brain.">Murine cerebrovascular cells as a cell culture model for cerebral amyloid angiopathy: isolation of smooth muscle and endothelial cells from mouse brain.</a> Methods Mol Biol. 849, 261-274 (2012).</li><li>Choi, S., Kim, J., Kim, K., Suh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+in+vitro+culture+of+vascular+endothelial+cells+from+mice.">Isolation and in vitro culture of vascular endothelial cells from mice.</a> Korean J Physiol Pharmacol. 19 (1), 35-42 (2015).</li><li>Peters, D. G., Kassam, A. B., Yonas, H., O'Hare, E. H., Ferrell, R. E., Brufsky, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+transcript+analysis+in+small+quantitiesof+mRNA+by+SAGE-Lite.">Comprehensive transcript analysis in small quantitiesof mRNA by SAGE-Lite.</a> Nucleic Acids Res. 27 (24), (1999).</li><li>Badhwar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stanimirovic,+Hamel,+&amp;+Haqqani+The+proteome+of+mouse+cerebral+arteries.">Stanimirovic, Hamel, &amp; Haqqani The proteome of mouse cerebral arteries.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 34 (6), 1033-1046 (2014).</li><li>Castro, L., Brito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Striatal+neurones+have+a+specific+ability+to+respond+to+phasic+dopamine+release.">Striatal neurones have a specific ability to respond to phasic dopamine release.</a> J Physiol. 591 (13), 3197-3214 (2013).</li><li>H&#252;bscher, D., Nikolaev, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+transgenic+mice+expressing+FRET+biosensors.">Generation of transgenic mice expressing FRET biosensors.</a> Methods Mol Biol. 1294, 117-129 (2015).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

نحن هنا وصف بروتوكول استنساخه لعزل دائرة ويليس. الاضطرابات الدماغية الأكثر شيوعا التي تنطوي على بقرة هي vasculopathies المصاحب الجهاز المركزي للمحاسبات، وتصلب الشرايين داخل الجمجمة وتمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة، والتي تؤثر على جدران الأوعية الشريانية. عوامل الخطر معروفة جيدا، ولكن المرضية الجزيئية هذه الاضطرابات الدماغية تزال غير مفهومة تماما وعلامات بيولوجية محددة للتنبؤ حدوثها تفتقر. وهناك اهتمام كبير في طرق لعزل البقرة من الفئران المعدلة وراثيا لربط الملاحظات العيانية مع التغيرات الجزيئية. على سبيل المثال، عن طريق الحث على تمدد الأوعية الدموية متسقة في نموذج الفأر التي طرقت جين معين من أصل (كما وصفها هوساكا وآخرون. 8)، وتحليل البقر، فإنه ينبغي أن يكون من الممكن تحديد ما إذا كانت العلاجات التي تستهدف البروتين المشفرة بواسطة هذا الجين يمكن منع تمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة و / أو نزيف تحت العنكبوتية. Obviouخبيث، ويمكن أيضا أن تستخدم هذه الطريقة لتحليل تأثير دواء معين على تطور vasculopathies المصاحب الجهاز المركزي للمحاسبات في مختلف نماذج الماوس المعدلة وراثيا من م. فمن الأسهل لعزل الشرايين الماوس من لتنقية microvessels الماوس بأكملها، ولكن مثل هذه العينات هي مع ذلك أكثر صعوبة في الفئران مما كانت عليه في الفئران. في الواقع، تم تضمين بقرة الفئران في السحايا أشد بكثير، مما يجعل من الممكن لعزل الهيكل كله دفعة واحدة. وبالإضافة إلى مشكلة صغر حجم السفن في الفئران، وهذا الإجراء هو أيضا صعبة نظرا لشفافية من السفن التالية نضح مع برنامج تلفزيوني قبل إزالة الدماغ. ولذلك نوصي ممارسة دون ضخ، بدءا من الخطوة 3 بعد التخدير لجعله أسهل للتمييز بين الأوعية الدموية. وأخيرا، والماوس الأوعية الدماغية هي دقيقة جدا وكسر بسهولة، وينبغي أن يتم تشريح بعناية جدا، دون التسرع، للتأكد من أن هيكل كاملمعزولة في قطعة واحدة، عن طريق الاستيلاء على أول هيئة مكافحة الفساد. نقاء إعداد البقر يمكن تقييمها من خلال مقارنة مستويات التعبير عن الجينات العصبية والأوعية. مع الممارسة، ويوفر بقرة واحدة فقط RNA كافية لدراسة 5-10 تعبيرات الجين. لفحص واسعة النطاق، ينبغي تجميع بعض الأبقار الماوس. وصف غوتييه وآخرون. 9 وسيلة لعزل قطع صغيرة من microvessels (على أساس استخدام كولاجيناز / dispase الهضم أجزاء من الدماغ ومن الخرز الزجاجي للاعتراض عليها) التي تعطي العضلات الملساء أو الخلايا البطانية التي يمكن الاحتفاظ بها في الثقافة عندما وضعت في وسيلة مناسبة. ميزة أسلوبنا هو أنه يعزل السفن الكبيرة، دون تغيير هيكل السفينة. قد يكون تشريح فروع محددة من البقرة أيضا من الاهتمام، لتحديد العلاقة بين الشخصية التعبير الجيني فرع معين واحتمال التعرض للامراض القلبية الوعائيةوفاق، مثل تمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة. قد توفر هذه النهج تفسيرا لماذا ترتبط بعض ACA الاختلافات التشريحية والجينية تعاني من معدلات أعلى من تمدد الأوعية الدموية ACA. هذا تشريح يتطلب الضغط الممارس مع ملقط على قاعدة كل فرع معين، لفصل ذلك من الفروع الأخرى، في بداية الإجراء بقرة العزلة. وهكذا، بالإضافة إلى مما يجعل من الممكن لاستخلاص الخلايا من البقرة 10 أو للكشف عن التعبير الجيني 11 و بروتين إنتاج 12 أو التعديلات البروتين posttranslational، وهذه الطريقة يمكن أن تستخدم في السابق الدراسات المجراة، ببساطة عن طريق تكييف نظام حمام الجهاز ضعت ل الماوس معزولة الشرايين حاسة الشم. 7 المتابعون حضانة البقر كامل في الثقافة المتوسطة التي تحتوي على المضادات الحيوية، ويمكن الحصول على secretome الصادرة عن هذه بنية محددة وتحليلها. ومن شأن تحليل هذه secretome في نماذج الماوس من الجهاز المركزي للمحاسبات جعلها بوssible، على سبيل المثال، لتحديد حالة المتعلقة الجهاز المركزي للمحاسبات التهابات هذه الشرايين الدماغية. ويمكن أيضا أن تستخدم وسيلة مشروط مما أدى إلى تحديد الآثار المترتبة على secretome على كل جدار الوعاء الدموي نوع من الخلايا النمط الظاهري. ويمكن أيضا أن تستخدم الاستعدادات بقرة المرضية لتحديد الاختلافات المحتملة في الإشارات البيوكيميائية، مثل الأدينوزين الحلقي غوانوزين (المركب)، الأدينوزين الأدينوزين الحلقي (المخيم)، أو الكالسيوم 2+ تركيزات، كشف مع مضان بالرنين نقل الطاقة (الحنق) أجهزة الاستشعار تستند في عملها. وقد استخدمت أجهزة الاستشعار التي ألقيت من الفيروسات على الاستعدادات شريحة الدماغ تحتوي على الخلايا العصبية الحية الناضجة يمكن الوصول إليها تجريبيا مع التشكل الحفاظ عليها، مما أدى إلى الكشف عن خلافات عميقة في استجابة D1 بين العصبونات القشرية الهرمية والجسم المخطط الخلايا العصبية الشوكية المتوسطة 13 نماذج من الأمراض القلبية الوعائية في الفئران المعدلة وراثيا معربا القائم على الحنق رسول الثاني البروتينات الاستشعار 14للتصوير من الإشارات البيوكيميائية في البقرة معزولة ويجب أن تقدم مزيد من التبصر في الكيمياء الحيوية، الفيزيولوجيا المرضية، والعلاج الدوائي لهذه الأمراض.

دائرة الدماغية الشريانية (الدائرة الشريانية الدماغية)، المعروف أيضا باسم دائرة ويليس (البقرة)، حلقة من Willisor ويليس المضلع) وصفت لأول مرة من قبل توماس ويليس في 1664. وهو مفاغرة الدورة الدموية الموجودة في جميع أنحاء التصالبة البصرية وتحت المهاد التي يمكن أن تعتبر محورا مركزيا توريد الدم إلى الدماغ والهياكل المحيطة بها. يدخل الدم هذا الهيكل عن طريق الشريان السباتي الداخلي والشرايين الفقرية ويتدفق من دائرة عن طريق الوسط الداخلي والشرايين المخية الخلفية. وقد تركت كل من هذه الشرايين والحق الفروع على جانبي الدائرة. وقاعدي، وظيفة التواصل، والتواصل الشرايين كاملة دائرة الأمامي (الشكل 1 والشكل 2). تم تصغير خطر تدفق الدم وضعف في أي من الشرايين تدفق من دمج الدم دخول دائرة من الشريان السباتي والشرايين الدماغية، مما يضمن أن يتم توفير كمية كافية من الدم إلى بالمطر. ويقدم هيكل أيضا الطريق الرئيسي لتدفق ضمانات الدم في أمراض انسداد حاد في الشريان السباتي الداخلي. عدة أنواع من الاضطرابات الدماغية لديهم أصلهم في البقرة. الأكثر شيوعا هي الدماغي اعتلال وعائي اميلويد (CAA) vasculopathies -associated وتصلب الشرايين داخل الجمجمة وتمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة. 1، 2، 3 وهذه الاضطرابات قد يؤدي إلى نقص انسياب الدم بسبب توسع الأوعية، وداخل المخ و / أو تحت العنكبوتية نزيف ترجمة في نهاية المطاف إلى السكتات الدماغية الإقفارية أو النزفية أو ، في أحسن الأحوال، نوبة نقص تروية عابرة. جعلت التطورات الحديثة في إجراءات التشخيص، بما في ذلك تصوير الأعصاب، وربما جنبا إلى جنب مع القسطرة، من الممكن تشخيص هذه الأمراض الدماغية الكبرى سريريا، دون الحاجة لخزعة الدماغ. ومع ذلك، علاجات فعالة ومحددة (الدوائية أو اللف) تفتقر حاليا، وبالتالي هناك حاجة لتعريف جديدأهداف جزيئية. وتحديد الأهداف عقار جديد للوقاية من هذه الأمراض في البشر تتطلب النماذج الحيوانية وسبل عزل الدماغية، الأوعية الدموية بما في ذلك بقرة. وينبغي لهذه النماذج أن يقدم دليلا على والقرائن إلى تغييرات محددة، بما في ذلك التغيرات الالتهابية، والتي تحدث في جدران الأوعية الكبيرة في النماذج الحيوانية من تمدد الأوعية الدموية في الشريان داخل الجمجمة، الجهاز المركزي للمحاسبات أو تصلب الشرايين داخل الجمجمة. 4، 5، 6 قمنا بتأسيس طريقة لعزل الماوس بقرة لتسهيل الدراسات من التهاب الأوعية في مرض الزهايمر (AD) والأمراض ذات الصلة، مثل الجهاز المركزي للمحاسبات. وقد تم تطوير هذه الطريقة لعزل البقرة الماوس لتقييم التعبير الجيني الدماغية التهابات أثناء تطور المرض. جنبا إلى جنب مع الكشف عن ترسب اميلويد بيتا داخل جدران السحايا الرقيقة وحنوني الشرايين، يمكن لهذا الأسلوب يجعل من الاسهل لردعمنجم العلاقة المحتملة بين التعبير الجيني التهاب في جدار الأوعية الدموية الدماغية، وتراكم Aβ الببتيد. شبكة الأوعية الدموية في الدماغ، بما في ذلك السحايا الرقيقة وحنوني في الفضاء تحت العنكبوتية، هو امتداد للشرايين الكبيرة تشكيل دائرة ويليس. ويمكن استخدام الأسلوب هو موضح هنا لعزل بقرة من أي سلالة الماوس ويمكن استخدامها لجميع أنواع الفرز (على سبيل المثال، التعبير الجيني، وإنتاج البروتين والتعديلات البروتين posttranslational) على السفن الكبيرة من الفأرة الدماغية، الأوعية الدموية.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s Phosphate Buffered Saline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #55 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Hardened Fine Iris Scissors&amp;nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-11</td><td></td></tr><tr><td>Scissors - Straight / Sharp / Sharp&amp;nbsp;&amp;nbsp; 16.5 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>14002-16</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7b Forceps&amp;nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>11270-20</td><td></td></tr><tr><td>Stereoscopic Zoom Microscope</td><td>Nikon</td><td>SMZ745T</td><td></td></tr><tr><td>CellBIND Surface 60mm Culture Dish</td><td>Corning</td><td>#3295</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltic Pump - MINIPULS 3</td><td>Gilson</td><td>M312</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodique</td><td>Ceva Sant&amp;eacute; Animale</td><td>FR/V/2770465 3/1992</td><td></td></tr></tbody></table>

protocol for isolating the mouse circle of willis

دائرة الدماغية الشريانية (الدائرة الشريانية الدماغية) أو دائرة ويليس (البقرة) هي مفاغرة الدورة الدموية المحيطة التصالبة البصرية وتحت المهاد التي تزود الدم إلى الدماغ والهياكل المحيطة بها. وقد تورط في العديد من الاضطرابات الدماغية، بما في ذلك اعتلال وعائي دماغي اميلويد (CAA) vasculopathies -associated وتصلب الشرايين داخل الجمجمة وتمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة. تتطلب دراسات الآليات الجزيئية الكامنة وراء هذه الأمراض لتحديد أهداف عقار جديد للوقاية من النماذج الحيوانية. قد يكون بعض من هذه النماذج المعدلة وراثيا، في حين أن آخرين سوف تشمل عزل الدماغية، الأوعية الدموية، بما في ذلك طريقة CoW.The الموصوفة هنا هي مناسبة لعزل بقرة في أي سلالة الماوس ولديه إمكانات كبيرة لفحص (التعبير عن الجينات، وإنتاج البروتين، التعديلات البروتين posttranslational، تحليل secretome، الخ) دراسات على السفن الكبيرة من cerebro- الماوسالأوعية الدموية. ويمكن أن تستخدم أيضا لدراسات المجراة سابقا، من خلال تكييف نظام حمام الجهاز وضعت للمعزولة الشرايين الماوس حاسة الشم.

<html> قتل الماوس perfused برنامج تلفزيوني ويتم عزل البقر كما هو موضح في الفقرة 3.2 من البروتوكول. عند إجراء تشريح بشكل صحيح، يجب أن البقرة يخرج في قطعة واحدة، وينبغي أن تكون شفافة بعض الشيء نظرا لعدم وجود الدم المتبقي في الأوعية الدموية. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig2.jpg" /> الشكل 2: البقرة ماوس بعد عزل. (أ) لمحة عامة عن بقرة في 10 سم طبق بتري. (ب) تفاصيل عن مختلف فروع البقرة. مولودية الجزائر لالشرايين الدماغية المتوسطة، هيئة مكافحة الفساد لالأمامي الشرايين الدماغية، درجة البكالوريوس لالشريان القاعدي، PCA لاحق الشرايين الدماغية وهيئة السلع التموينية لالشرايين الدماغية متفوقة. <a href="https://ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/54352/54352fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> خيمة. &quot;FO: المحافظة على together.within الصفحات =&quot; 1 &quot;&gt; نقاء إعداد البقر يمكن التحقق عن طريق ضمان أن الجينات الأوعية الدموية محددة يتم التعبير بقوة في حين أن التعبير عن الجينات العصبية غير قابل للكشف وبشكل أكثر تحديدا، ينبغي البقرة تنظيف على وجه التحديد التعبير عن الأوعية الدموية على نحو سلس علامات الخلايا العضلية، مثل السلس الأكتين العضلات (SMA)، على نحو سلس العضلات الميوسين السلسلة الثقيلة (SM-MHC) وsmoothelin. ويتم التعبير عن هذه العلامات بالكاد في أجزاء أخرى من الدماغ. هناك نمط الآخر من التعبير يجب أن تكون الحصول على جينات الخلايا العصبية، مع علامات العصبية (موج، MAP2) فقط للكشف بالكاد في البقرة. مستويات مرنا يمكن تقييم من قبل RT-QPCR مع التطبيع بالنسبة لنسخة الجين المرجعية (هنا، أن من GAPDH). وتظهر نتائج نموذجية في الشكل 3A وباء. <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/54352/54352fig3.jpg" /&gt; الرقم 3: التعبير عن العصبية ومقلص الجينات في دائرة ماوس ويليس والدماغ تم تطبيع النتائج RT-QPCR ضد هؤلاء لجين المرجعية (GAPDH). يتم التعبير على أنها متوسط ​​± SD من 6-12 تجارب مستقلة. مقارنة بين البقر مع الدماغ: م، لم تكن كبيرة، *، P &lt;0.05، **، P &lt;0.005، و***، P &lt;0.001 (A) التعبير عن الجينات مقلص: SMA (سلسة الأكتين العضلات)، smoothelin، SM-MHC (العضلات الملساء-الميوسين السلسلة الثقيلة 11) وE-selectin (ب) التعبير عن الجينات العصبية: موج (المايلين دبقية قليلة التغصن بروتين سكري) وMAP2 (أنيبيب المرتبطة بروتين 2). نمط التعبير من البطانية علامة E-selectin في الدماغ تفتقر البقرة هي مشابهة جدا لتلك التي تم الحصول عليها لعينات البقر، ربما تعكس وجود شبكة الشعيرات الدموية في الدماغ. <stronز&gt; الجدول 1 يسرد أرقام حزب المحافظين متوسط لكل نسخة. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> ا. </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="2"> يعني حزب المحافظين </td><td colspan="3"> GAPDH </td><td colspan="3"> SMA </td><td colspan="3"> Smoothelin </td><td colspan="3"> SM-MHC </td><td colspan="3"> E-سيل </td></tr><tr><td> تعني </td><td> SD </td><td> N </td><td> تعني </td><td> SD </td><td> N </td><td> تعني </td><td> SD </td><td> N </قوية&gt; </td><td> تعني </td><td> SD </td><td> N </td><td> تعني </td><td> SD </td><td> N </td></tr><tr><td> بقرة </td><td> 20.86 </td><td> 0.93 </td><td> 12 </td><td> 22.02 </td><td> 0.67 </td><td> 12 </td><td> 25.29 </td><td> 1.89 </td><td> 12 </td><td> 23.37 </td><td> 0.80 </td><td> 12 </td><td> 30.56 </td><td> 1.66 </td><td> 12 </td></tr><tr><td> دماغ </td><td> 18.71 </td><td> 0.72 </td><td> 6 </td><td> 33.91 </td><td> 2.06 </td><td> 6 </td><td> 31.08 </td><td> 3.17 </td><td> 6 </td><td> 26.05 </td><td> 0.73 </td><td> 6 </td><td> 28.45 </td><td> 0.63 </td><td> 6 </td></tr><tr><td> ب. </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td> &lt;td&gt; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="2"> يعني حزب المحافظين </td><td colspan="3"> GAPDH </td><td colspan="3"> موج </td><td colspan="3"> MAP2 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> تعني </td><td> SD </td><td> N </td><td> تعني </td><td> SD </td><td> N </td><td> تعني </td><td> SD </td><td> N </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> بقرة </td><td> 21.04 </td><td> 0.41 </td><td> 6 </td><td> 32.13 </td><td> 1.63 </td><td> 6 </td><td> 30.21 </td><td> 0.85 </td><td> 6 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> دماغ </td><td> 19.09 </td><td> 0.49 </td><td> 6 </td><td> 26.43 </td><td> 0.88 </td><td> 6 </td><td> 23.30 </td><td> 0.99 </td><td> 6 </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> تستند متوسط معبر للتعبير عن العصبية ومقلص الجينات في دائرة ماوس ويليس والدماغ الحسابات على مقارنة بين دورة دقيقة من نقاط العبور (اف ب) تحدد عند مستوى ثابت من مضان: الجدول 1. معبر هو العدد دورة المقابلة لأقصى قدر من مشتقات الثانية من منحنى التضخيم. ترتبط القيم حزب المحافظين أعلى مع انخفاض مستويات التعبير. لجين معين، ويعتبر التعبير أن تكون غير قابلة للكشف إذا تجاوز حزب المحافظين 35. (A) حزب المحافظين من الجين إشارة: GAPDH. والجينات مقلص: SMA، smoothelin، SM-MHC وselectin E (B) حزب المحافظين من الجين إشارة: GAPDH. والجينات العصبية: موج وMAP2.

Watch this Scientific Journal Video about Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis at JoVE.com

Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.

بروتوكول لعزل الدائرة ماوس ويليس

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and ...

protocol-for-isolating-the-mouse-circle-of-willis

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.0K Views.  Sorbonne Universités. We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.

Video: Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

A الفئران نموذج من عضلة القلب إصابة نقص التروية، ضخه من خلال ربط الشريان الأمامي اليسار تنازليا

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Medicine

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident cells. A key mechanism of this inflammatory response is the migration of circulating immune cells to the ischemic brain facilitated by chemokine release and increased endothelial adhesion molecule expression. Brain-invading leukocytes are well-known contributing to early-stage secondary ischemic injury, but their significance for the termination of inflammation and later brain repair has only recently been noticed.
Here, a simple protocol for the efficient isolation of immune cells from the ischemic mouse brain is provided. After transcardial perfusion, brain hemispheres are dissected and mechanically dissociated. Enzymatic digestion with Liberase&#160;is followed by density gradient (such as Percoll) centrifugation to remove myelin and cell debris. One major advantage of this protocol is the single-layer density gradient procedure which does not require time-consuming preparation of gradients and can be reliably performed. The approach yields highly reproducible cell counts per brain hemisphere and allows for measuring several flow cytometry panels in one biological replicate. Phenotypic characterization and quantification of brain-invading leukocytes after experimental stroke may contribute to a better understanding of their multifaceted roles in ischemic injury and repair.

Inflammation plays a central role in the pathogenesis of ischemic stroke. Increasing evidence suggests that it acts as a double-edged sword which exacerbates early brain injury, but also contributes to later repair. This protocol describes the isolation of immune cells from the ischemic brain and their subsequent flow cytometric phenotyping.

العزلة وتحليل تدفق Cytometric من الخلايا المناعية من الدماغ الدماغية ماوس

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Immunology and Infection

Conjunctival Commensal Isolation and Identification in Mice

The ocular surface was once considered immune privileged and abiotic, but recently it appears that there is a small, but persistent commensal presence. Identification and monitoring of bacterial species at the ocular mucosa have been challenging due to their low abundance and limited availability of appropriate methodology for commensal growth and identification. There are two standard approaches: culture based or DNA sequencing methods. The first method is problematic due to the limited recoverable bacteria and the second approach identifies both live and dead bacteria leading to an aberrant representation of the ocular space. We developed a robust and sensitive method for bacterial isolation by building upon standard microbiological culturing techniques. This is a swab-based technique, utilizing an &#8220;in-lab&#8221; made thin swab that targets the lower conjunctiva, followed by an amplification step for aerobic and facultative anaerobic genera. This protocol has allowed us to isolate and identify conjunctival species such as Corynebacterium spp., Coagulase Negative Staphylococcus spp., Streptococcus spp., etc. The approach is suitable to define commensal diversity in mice under different disease conditions.

Presented here is a protocol for the isolation and amplification of aerobic and facultative anaerobic mouse conjunctival commensal bacteria using a unique eye swab and culture-based enrichment step with subsequent identification by microbiological based methods and MALDI-TOF mass spectrometry.

عزل الملتحمة والهوية في الفئران

The ocular surface was once considered immune privileged and abiotic, but recently it appears that there is a small, but persistent commensal presence. ...

Isolation of Primary Mouse Hepatocytes for Nascent Protein Synthesis Analysis by Non-radioactive L-azidohomoalanine Labeling Method

Hepatocytes are parenchymal cells of the liver and engage multiple metabolic functions, including synthesis and secretion of proteins essential for systemic energy homeostasis. Primary hepatocytes isolated from the murine liver constitute a valuable biological tool to understand the functional properties or alterations occurring in the liver. Herein we describe a method for the isolation and culture of primary mouse hepatocytes by performing a two-step collagenase perfusion technique and discuss their utilization for investigating protein metabolism. The liver of an adult mouse is sequentially perfused with ethylene glycol-bis tetraacetic acid (EGTA) and collagenase, followed by the isolation of hepatocytes with the density gradient buffer. These isolated hepatocytes are viable on culture plates and maintain the majority of endowed characteristics of hepatocytes. These hepatocytes can be used for assessments of protein metabolism including nascent protein synthesis with non-radioactive reagents. We show that the isolated hepatocytes are readily controlled and comprise a higher quality and volume stability of protein synthesis linked to energy metabolism by utilizing the chemo-selective ligation reaction with a Tetramethylrhodamine (TAMRA) protein detection method and western blotting analyses. Therefore, this method is valuable for investigating hepatic nascent protein synthesis linked to energy homeostasis. The following protocol outlines the materials and methods for the isolation of high-quality primary mouse hepatocytes and detection of nascent protein synthesis.

Here, we present a protocol for the isolation of healthy and functional primary mouse hepatocytes. Instructions for detecting hepatic nascent protein synthesis by non-radioactive labeling substrate were provided to help understand the mechanisms underlying protein synthesis in the context of energy-metabolism homeostasis in the liver.

عزل خلايا الكبد الماوس الأساسي لتحليل توليف البروتين الوليدة بأسلوب العلامات غير مشعة L-أزيدوهوموالانيني

Hepatocytes are parenchymal cells of the liver and engage multiple metabolic functions, including synthesis and secretion of proteins essential for ...

التنظيم الهرموني والأيضي والكهربائي للخلايا العصبية المعزولة تحت المهاد

Isolation of Targeted Hypothalamic Neurons for Studies of Hormonal, Metabolic, and Electrical Regulation

The hypothalamus regulates fundamental metabolic processes by controlling functions as varied as food intake, body temperature, and hormone release. As the functions of the hypothalamus are controlled by specific subsets of neuronal populations, the ability to isolate them provides a major tool for studying metabolic mechanisms. In this regard, the neuronal complexity of the hypothalamus poses exceptional challenges. 
For these reasons, new techniques, such as Magnetic-Activated Cell Sorting (MACS), have been explored. This paper describes a new application of magnetic-activated cell sorting (MACS) using microbead technology to isolate a targeted neuronal population from prenatal mice brains. The technique is simple and guarantees a highly pure and viable primary hypothalamic neuron culture with high reproducibility. The hypothalamus is gently dissociated, neurons are selectively isolated and separated from glial cells, and finally, using a specific antibody for a cell surface marker, the population of interest is selected. 
Once isolated, targeted neurons can be used to investigate their morphological, electrical, and endocrine characteristics and their responses in normal or pathological conditions. Furthermore, given the variegated roles of the hypothalamus in regulating feeding, metabolism, stress, sleep, and motivation, a closer look at targeted and region-specific neurons may provide insight into their tasks in this complex environment.

تسليط الضوء على المؤلف: رؤى الآلية العصبية تحت المهاد 

Here we present a protocol to grow specific hypothalamic cell subtypes in culture. The cells can be selected based on opportune/unique membrane markers and used in many applications, including immunofluorescence, electrophysiological, and biochemical assays.

عزل الخلايا العصبية تحت المهاد المستهدفة لدراسات التنظيم الهرموني والأيضي والكهربائي

The hypothalamus regulates fundamental metabolic processes by controlling functions as varied as food intake, body temperature, and hormone release. As ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs from the coronary circulation. Hearts with intact aortic arches were removed and perfused via retrograde Langendorff with digestion solution containing 300 Units/ml of collagenase type II, 0.1 mg/ml soybean trypsin inhibitor and 1 M CaCl2. The perfusates were collected at 15 min intervals for 90 min, pelleted by centrifugation, resuspended in plating media, and plated on tissue culture dishes. VSMCs were characterized by presence of SM22&#945;, &#945;-SMA, and vimentin. One of the main advantages of using this technique is the ability to isolate VSMCs from the coronary circulation of mice. Although the small number of cells obtained can limit some of the applications for which the cells can be utilized, isolated coronary VSMCs can be used in a variety of well-established cell culture techniques and assays. Studies investigating VSMCs from genetically modified mice can provide further information about structure-function and signaling processes associated with vascular pathologies.

The purpose of this protocol is to demonstrate the isolation and culture techniques of murine primary vascular smooth muscle cells (VSMCs) from the coronary circulation. Once VSMCs have been isolated, they can be used for many standard culture techniques.

عزل الفئران التاجي الأوعية الدموية خلايا العضلات الملساء

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

Biology

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

Sections of paraffin embedded tissues are routinely used for studying tissue histology and histopathology. However, it is difficult to determine what the three-dimensional tissue morphology is from such sections. In addition, the sections of tissues examined may not contain the region within the tissue that is necessary for the purpose of the ongoing study. This latter limitation hinders histopathological studies of blood vessels since vascular lesions develop in a focalized manner. This requires a method that enables us to survey a wide area of the blood vessel wall, from its surface to deeper regions. A whole mount en face preparation of blood vessels fulfills this requirement. In this article, we will demonstrate how to make en face preparations of the mouse aorta and carotid artery and to immunofluorescently stain them for confocal microscopy and other types of fluorescence-based imaging.

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

A procedure for making en face preparations of the mouse carotid artery and aorta is described. Such preparations, when immunofluorescently stained with specific antibodies, enable us to study localization of proteins and identification of cell types within the entire vascular wall by confocal microscopy.

في إعداد الوجه من ماوس سفن الدم

Sections of paraffin embedded tissues are routinely used for studying tissue histology and histopathology. However, it is difficult to determine what the ...

A Simple and Effective Method to Consistently Isolate Mouse Cardiomyocytes

The need for reproducible yet technically simple methods yielding high-quality cardiomyocytes is essential for research in cardiac biology. Cellular and molecular functional experiments (e.g., contraction, electrophysiology, calcium cycling, etc.) on cardiomyocytes are the gold standard for establishing mechanism(s) of disease. The mouse is the species of choice for functional experiments and the described technique is specifically for the isolation of mouse cardiomyocytes. Previous methods requiring a Langendorff apparatus require high levels of training and precision for aortic cannulation, often resulting in ischemia. The field is shifting toward Langendorff-free isolation methods that are simple, are reproducible, and yield viable myocytes for physiological data acquisition and culture. These methods greatly diminish ischemia time compared to aortic cannulation and result in reliably obtained cardiomyocytes. Our adaptation to the Langendorff-free method includes an initial perfusion with ice-cold clearing solution, use of a stabilizing platform that ensures a steady needle during perfusion, and additional digestion steps to ensure reliably obtained cardiomyocytes for use in functional measurements and culture. This method is simple and quick to perform and requires little technical skill.

The gold standard in cardiology for cellular and molecular functional experiments are cardiomyocytes. This article describes adaptations to the non-Langendorff technique to isolate mouse cardiomyocytes.

طريقة بسيطة وفعالة لعزل خلايا عضلة القلب في الفئران باستمرار

The need for reproducible yet technically simple methods yielding high-quality cardiomyocytes is essential for research in cardiac biology. Cellular and ...

بروتوكول لعزل الدائرة ماوس ويليس

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

A الفئران نموذج من عضلة القلب إصابة نقص التروية، ضخه من خلال ربط الشريان الأمامي اليسار تنازليا

العزلة وتحليل تدفق Cytometric من الخلايا المناعية من الدماغ الدماغية ماوس

عزل الملتحمة والهوية في الفئران

عزل خلايا الكبد الماوس الأساسي لتحليل توليف البروتين الوليدة بأسلوب العلامات غير مشعة L-أزيدوهوموالانيني

عزل الخلايا العصبية تحت المهاد المستهدفة لدراسات التنظيم الهرموني والأيضي والكهربائي

عزل الخلايا العصبية تحت المهاد المستهدفة لدراسات التنظيم الهرموني والأيضي والكهربائي

عزل الخلايا العصبية تحت المهاد المستهدفة لدراسات التنظيم الهرموني والأيضي والكهربائي

عزل الفئران التاجي الأوعية الدموية خلايا العضلات الملساء

في إعداد الوجه من ماوس سفن الدم

طريقة بسيطة وفعالة لعزل خلايا عضلة القلب في الفئران باستمرار