Biz hasta doku örnekleri koleksiyonu ile yardım için Minnesota Üniversitesi Doku Alımı Tesisi çalışanlarına teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma MB Minnesota Yumurtalık Kanseri Birliği tarafından ve MB Jinekolojik Onkoloji Bölüm fonunun, Randy Tıraş Kanser Araştırma ve MB Toplum Fonu tarafından, Savunma Bakanlığı Yumurtalık Kanseri Araştırma Programı (OCRP) MB OC093424 tarafından desteklenmiştir. Maliyeciler, çalışma tasarımı, veri toplama ve analizi, yayımlamak için karar ya da yazının hazırlanmasında herhangi bir rolü vardı.

Etik Bildirimi Yumurtalık kanseri Katı numuneler Kurumsal Değerlendirme Kurulu Komite sonra Minnesota Üniversitesi Doku Alımı Tesisi (TPF) elde edilmiştir: İnsan Konu Kurulu (KİK) onayı. 1.. Reaktif Kur <ol><li> % 10 FBS ve 100 birim penisilin-streptomisin ile takviye DMEM ile tam bir DMEM ortamıyla hazırlayın. 4 ° C &#39;de sıcak bir orta depolamak ve 37 ° C, kullanımdan önce. </li><li> Birden fazla donma önlemek için 5-10 ml ayrı cilt içine kısım dispase II nonfrost ücretsiz dondurucuda -20 ° C&#39;de çözülür ve mağaza. </li></ol> 2. Doku Toplama <ol><li> Makroskopik olarak bir patolog tarafından kanser gibi tanımlanan alanlarda cerrahi sırasında yumurtalık kanseri (boyut olarak ~ 5 g) katı madde örnekleri toplamak. Klinik örnekler-de tespit ve kurumsal protokollere göre kayıtlıdır. </li><li> Steril, sc örnekleri yerleştirinrew kapak, polipropilen, buzla soğutulmuş PBS nin 30 ml &#39;si ile doldurulmuş bir kap ve numune. Ve numune toplama 30 dakika (Şekil 1) içinde, buz üzerinde işlem için araştırma laboratuvarında için cerrahi patoloji laboratuvar numunelerini taşımak. </li></ol> 3. Doku İşleme <ol><li> Steril koşullar altında çalışarak, bir Petri kabı üzerine numune (60 mm x 60 mm), taze, buz soğukluğunda 10 ml PBS ihtiva eden ve bundan başka (2 mm veya daha az) mümkün olan en küçük parçalar halinde kesilmiş, bir steril bir jilet kullanılarak (aktarmak Şekiller 2A ve 2B). </li><li> DMEM dispase II (2.4 U / ml) (30 dakika boyunca 37 ° C) önceden ısıtılmış 10 ml içeren, 15 ml konik tüp içine kıyılmış dokuları aktarın ve 30 dakika boyunca% 5 CO2 ile 37 ° C&#39;de inkübe edin. Örneklerin optimal sindirim sağlamak için, el ile hücre karışımının her bir 5 dakika çalkalayın. </li><li> 30 dakika inkübasyon, transferi (kullandıktan sonra10 ml serolojik pipet) bir hücre süzgecinden (70 um mesh) üzerine hücre bulamacı, 50 ml konik tüp üstüne yerleştirilir ve bir şırınga pistonunun kullanılarak örgü karşı hafif bir basınç uygulamak. (Mesh üstünde kalan) herhangi bir çözülmemiş doku atın ve 50 ml konik bir tüp içinde, steril, elde edilen hücre süspansiyonu toplar. 4 ° C &#39;de, 7 dakika (Şekil 3) için 320 x g&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Süpernatant atılır ve% 10 FBS içeren DMEM, 10 ml hücre pelletini. </li><li> Hücre% 5 CO2 ile bir Petri tabağına ve süspansiyon 37 ° C de (Şekil 4) inkübe edin. </li><li> Ilk kaplama 24 saat sonra, ortam, değiştirin. Bu, hücre kalıntılarının uzaklaştırılmasından ve kültür içinde mevcut olan eritrositlerin çoğunluğu için izin verir. </li><li> ORTA birincil EOC&#39;nin kültürleri aşağı uygulamalar için hazır sonra aşağıdaki iki hafta boyunca her üç günde bir değiştirin. </li></ol>

<ol>
	<li>Kurman, R. J., Visvanathan, K., Roden, R., Wu, T. C., Ie M, S. h. i. h. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+and+treatment+of+ovarian+cancer:+shifting+from+early+stage+to+minimal+volume+of+disease+based+on+a+new+model+of+carcinogenesis.">Early detection and treatment of ovarian cancer: shifting from early stage to minimal volume of disease based on a new model of carcinogenesis.</a> Am. J. Obstet. Gynecol. 198 (4), 351-356 (2008).</li><li>Kuhn, E., Kurman, R. J., Shih, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+Cancer+Is+an+Imported+Disease:+Fact+or+Fiction.">Ovarian Cancer Is an Imported Disease: Fact or Fiction.</a> Curr. Obstet. Gynecol. Rep. 1 (1), 1-9 (2012).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+biomarkers+for+ovarian.">Early detection biomarkers for ovarian.</a> J. Oncol. , (2012).</li><li>Shepherd, T. G., Theriault, B. L., Campbell, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nachtigal+M.W.+Primary+culture+of+ovarian+surface+epithelial+cells+and+ascites-derived+ovarian+cancer+cells+from+patients.">Nachtigal M.W. Primary culture of ovarian surface epithelial cells and ascites-derived ovarian cancer cells from patients.</a> Nat. Protoc. 1 (6), 2643-2649 (2006).</li><li>Tsao, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells+immortalized+by+human+papilloma+viral+oncogenes+(HPV-E6E7+ORFs).">Characterization of human ovarian surface epithelial cells immortalized by human papilloma viral oncogenes (HPV-E6E7 ORFs).</a> Exp. Cell. Res. 218 (2), 499-507 (1995).</li><li>Auersperg, N., Maines-Bandiera, S. L., Dyck, H. G., Kruk, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cultured+human+ovarian+surface+epithelial+cells:+phenotypic+plasticity+and+premalignant+changes.">Characterization of cultured human ovarian surface epithelial cells: phenotypic plasticity and premalignant changes.</a> Lab. Invest. 71 (4), 510-518 (1994).</li><li>Brewer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+model+of+normal,+immortalized+ovarian+surface+epithelial+and+ovarian+cancer+cells+for+chemoprevention+of+ovarian+cancer.">In vitro model of normal, immortalized ovarian surface epithelial and ovarian cancer cells for chemoprevention of ovarian cancer.</a> Gynecol. Oncol. 98 (2), 182-192 (2005).</li><li>Sueblinvong, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment,+characterization+and+downstream+application+of+primary+ovarian+cancer+cells+derived+from+solid+tumors.">Establishment, characterization and downstream application of primary ovarian cancer cells derived from solid tumors.</a> PLoS One. 7 (11), (2012).</li><li>Rockwell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo-in+vitro+tumour+cell+lines:+characteristics+and+limitations+as+models+for+human+cancer.">In vivo-in vitro tumour cell lines: characteristics and limitations as models for human cancer.</a> Br. J. Cancer Suppl. 41 (4), 118-122 (1980).</li><li>Wong, C., Chen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development,+application+and+limitations+of+breast+cancer+cell+lines+to+study+tamoxifen+and+aromatase+inhibitor+resistance.">The development, application and limitations of breast cancer cell lines to study tamoxifen and aromatase inhibitor resistance.</a> J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 131 (3-5), 83-92 (2012).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Yumurtalık kanseri etiyolojisi ve gelişme daha iyi anlaşılması, bu yıkıcı hastalıktan etkilenen kadınların sonucunu iyileştirmek için çok önemlidir. Bu bağlamda, kullanılmasıdır kurulmuş ve &quot;ticari olarak temin edilebilen&quot; yumurtalık kanseri hücre çizgisi şüphesiz son derece yararlı olmuştur. Ancak, bugün biz kanseri hücre hatları onlar heterojenitenin 9,10 eksikliği gibi birçok açıdan kökenli insan tümör temsilcisi olmadığını biliyorum. Burada, doğrudan cerrahi numune izolasyon 30 dakika içinde yumurtalık kanserinin klinik örneklerden izolasyon ve primer yumurtalık kanseri hücrelerinin kültür için hızlı ve güvenilir bir yöntem rapor. Birincil hücreler, assit sıvısı karşı sağlam bir örnekten izole edilir, çünkü bu asit önce sıvı oluşumu meydana zaman hastalığın erken aşamalarında hücrelerin izole edilmesi avantajına sahiptir. Bu teknik aynı zamanda zarf varbelirli bir sitenin birincil yumurtalık kanseri hücrelerini izole antage. Bu protokolü kullanarak canlı primer over kanseri hücreleri elde başarısı örnek ameliyatı takiben işlenebilir nasıl çabuk büyük ölçüde bağlıdır. En iyi sonuçlar için, numuneler cerrahi, 30 dakika içinde kabul edilmelidir. Eğer bu mümkün değilse, numune bir gece boyunca (PBS içerisinde) 4 ° C&#39;de tutulmuş ve ertesi gün işlenmelidir. Bizim tecrübelerimize göre, gece boyunca depolama Aşağıdaki örneklerde işleme verimini düşürür. Daha uzun süre 30 dakika boyunca dispase II maruz kalmak da hücre canlılığını azaltır ve gerçekleştirilmemelidir. II dispaz tedavisi için alternatif bir kolajenaz veya hyaluronidase bir tedavi olabilir. Bununla birlikte, bu azalma verimle 8 ile sonuçlanır. Diğerlerine göre çünkü klinik örneklerde büyük değişkenlik, bazı büyük kırmızı kan hücresi kontaminasyonu olabilir. Bu durumda, biz &quot;yıkama&quot; kıyılmış dokular (adım önermek3.1) PBS ile önceden enzimatik sindirim onları teşhir. Bu hazırlanmasında kırmızı kan hücrelerinin sayısını azaltmak ve sonuçta birinci epitel hücrelerinin yapışmasını kolaylaştırır. Klinik örnekler (onlar en kısa sürede cerrahi patoloji laboratuvarında varmak gibi sterilite kaybetmek) steril değildir, çünkü kesinlikle steril şartlarda tüm adımları gerçekleştirmek için önemlidir. Kültürün kirlenmesi mümkün olsa da, tipik olarak vakaların% 10&#39;dan daha az görülür. Yukarıdaki protokol klinik numunesinin tutarlı bir biçimde kullanılabilir. Bu protokolün başlıca sınırlaması her numune elde edilen hücrelerin sayısı, verilen örneklerin boyutuna fazlasıyla bağlıdır olmasıdır. Tipik Numune büyüklüğü, yaklaşık 3 cm x 3 cm &#39;dir. Diğer bir sınırlama gerçeği ile temsil edilen birincil yumurtalık kanser hücrelerinin in vitro kadar 10 geçişleri (ve bu nedenle yazarlara katlanarak büyürkending canlı stok yapmak için fırsat) onlar sonuçta senesce ve ölürler, böylece tek bir donörden hücre kullanılabilirliğini kısıtlamaktadır. Biz fibroblastlardan tümör hücrelerinin herhangi bir ayrılma yapmazlar birlikte, süreç boyunca serum içinde nispeten yüksek (% 10) konsantrasyonu, yumurtalık kanseri hücreleri, fibroblastlar üzerinde bir avantaj vermeyen olabileceğini hipotez. Ayrıca, stromal bölmesinde (fibroblastlar) ayrılması için daha az eğilimli hücreleri parçalamak olmayabilir ve ayırma sırasında filtre üzerinde kalır olasıdır. Bu protokol ile elde edilen hücreler yumurtalık kanseri başlangıcı ve gelişimine yol açan süreçleri anlamak yönelik soruşturma dahil, gelecekteki uygulamalar için son derece uygundur. Gelecekteki uygulamalar da in vitro için bu birincil hücreler kullanılarak ve yumurtalık kanseri gibi erken tespiti için biyolojik için yeni kemoterapi maddelerinin in vivo testler içerir.

Nispeten düşük insidansı rağmen, yumurtalık kanseri jinekolojik hastalıklar ve kadınlarda 1,2 arasında kanser ölümlerinin beşinci önde gelen nedeni arasında en ölümcül olanıdır. Bu sadakatle hastalığın 3&#39;ün başlangıcı ve ilerlemesini özetlemek güvenilir araçlar ve model eksikliğinden kaynaklanmaktadır. Yumurtalık kanseri hakkındaki bilgi, bugün çoğu asitik sıvı 4-7 geri ölümsüzleştirilmiş over yüzey epitel hücreleri (kaybetmez), yumurtalık kanseri hücre hatları ve primer yumurtalık kanser hücrelerinin kullanımı ile mümkün olmuştur. Ne yazık ki, bunların kullanımı ölümsüzleşme işlemi ile ya da in vitro pasajlar ilişkili genetik ve fenotipik bir dizi değişiklik ve asitik sıvı preparattan elde nüfusun heterojenliği dahil olmak üzere çeşitli sınırlamalara sahiptir. Bu nedenle, yumurtalık kanseri tanımlanabilir ve belirli katı örneklerden türetilmiş primer yumurtalık kanseri hücrelerinin uniqu temsilyumurtalık kanserinin ilerlemesini eğitim için e araçtır. Bu habis hücrelerin elde edilmesi ile ilgili başlıca zorluklar canlılık kaybına ve EOC, bu hücrelerin kültürü içinde çoğalma kapasitesinin vaktinden önce eksikliği ile birlikte stromal hücreleri ya da fibroblastlarının bir büyüme kaynaklanmaktadır. Katı tümörlerden tek hücre süspansiyonları oluşturmak için çeşitli yöntemler halen mekanik yollarla ya da enzimatik ayrışma yoluyla, ancak bazı teknikler tercih edilen sonucun 8 daha büyük bir miktarda, verim vardır. Burada, gösteriyor ki uygun, fibroblast içermeyen EOC hücrelerinin etkili bir kurtarma dispase II sonuçları ile enzimatik sindirim. Bu şekilde elde edilen kültürler EOC genetik manipülasyonu için son derece hassastır ve aynı zamanda, ilaç tarama deneylerinde yararlıdır, bu EOC kültürler çok alt uygulamalar için uygun olduğuna işaret etmektedir.

<table><tbody><tr><td>1x PBS, sterile&amp;nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Screw lid, polypropylene specimen container, sterile</td><td>Thermo Scientific</td><td>02 1090</td><td></td></tr><tr><td>DMEM medium, sterile&amp;nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum, sterile</td><td>Thermo Scientific Hyclone</td><td>SH30396.03</td><td></td></tr><tr><td>100x Penicillin-streptomycin, liquid</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II, sterile</td><td>Roche</td><td>04942 078 001</td><td></td></tr><tr><td>Small fine-tip forceps and scalpel blade, sterile</td><td>Fisher Scientific</td><td>forceps: 08-953E, blades: 08-927-5D</td><td></td></tr><tr><td>Small dissecting scissors, sterile</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-945</td><td></td></tr><tr><td>15 ml Conical capped tubes, sterile</td><td>BD Falcon</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Conical capped tubes, sterile</td><td>BD Falcon</td><td>352027</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Serological pipette, sterile&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>6 ml Syringe plunger, sterile&amp;nbsp;</td><td>Tyco Healthcare</td><td>8881516911</td><td></td></tr><tr><td>Nylon filter (70 &amp;mu;m ) cell strainer, sterile</td><td>BD Falcon</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>5 cm Petri dish, sterile&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>430166</td><td></td></tr><tr><td>10 cm Petri dish, sterile&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr></tbody></table>

method for obtaining primary ovarian cancer cells from solid specimens

Yumurtalık kanseri başlamasını ve ilerlemesini soruşturma için güvenilir araçlar acilen ihtiyaç vardır. Yumurtalık kanseri hücresi hatlarının kullanımı yumurtalık kanseri anlamak için değerli bir araç devam ederken, bunların kullanımı, birçok sınırlamalar vardır. Bu heterojenlik eksikliği ve genişletilmiş in vitro pasaj ile ilişkili genetik değişikliklerin bolluk vardır. Burada birincil yumurtalık kanseri hücrelerinin hızlı kurulması için bir yöntem sağlar: bir ameliyat sırasında toplanan katı klinik örnekler meydana açıklar. Yöntem, 30 dakika boyunca enzimatik sindirme klinik örnekleri tabi oluşur. İzole edilmiş hücre süspansiyonu büyümeye bırakılır ve ilaç taraması gibi alt uygulama için kullanılabilir. Kurulan yumurtalık kanseri hücre hatları üzerinden birincil yumurtalık kanseri hücre çizgilerinin avantajı, türetildikleri ve farklı sitelerde olup türetilebilir orijinal spesifik klinik numuneler için temsili olmasıdır primary veya metastatik over kanseri.

Yumurtalık kanseri Taze klinik örnekleri (Şekil 1), ameliyat sonrası toplandı ve hücre karışımın küçük parçalar oluşturan (Şekil 2A ve 2B) kesilir. Bu, enzimatik tedaviye numunelerin uygun poz sağlar. Hücre bulamacı enzimatik sindirme maruz bırakılmış ve 30 dakika boyunca 37 ° C&#39;de inkübe edilir. Inkübasyon süresi boyunca bulamaç (özellikle her ajitasyon sonra) giderek daha bulanık hale gelir ve bu doku ayrıştırma bir işaretidir. İnkübasyon süresi sonunda, harç madde bir çözülmemiş doku (Şekil 3) için EOC hücreleri ayırmak için bir hücre süzgecinden üzerine aktarılır. Elde edilen hücre süspansiyonu,% 5 CO2 ve 37 ° C (F ŞEKIL 4) yerleştirilir. Bu aşamada hücre kültürlerinin morfolojisi tek bir hücre süspansiyonu olarak ve küçük topaklar hem de EOC hücrelerin varlığını ortaya koymaktadır. Bu noktada kültürü de ortaya presen<html> eritrositler ve Şekil 5&#39;te gösterildiği gibi, küçük enkaz ce. EOC yavaş yavaş (1-3 gün süre içinde) plastik, eritrositler ve hücre enkaz yapışır önemlisi ise olmayacak ve sonunda ve giderek &quot;kültürü yok&quot; olacaktır. , Başlangıç ​​ekiminden 3 gün olarak, EOC yapışkan kültürler EOC hücre kümeleri ve Şekil 6&#39;da gösterildiği gibi, daha az giderek artan bir eritrosit ve çöpleri göstermektedir. Gün 6-7 olarak, EOC hücreler girdap benzeri şekiller (ok) formu ve Şekil 7&#39;de gösterildiği gibi, EOC hücrelerin tipik arnavut kaldırımı morfolojiye yol açmıştır daha büyük bütünler oluşturmak için bir çok hücreli plastik yayılmaya başlar. 14. günde, EOC hücreler tipik Konfluent (Şekil 8) haline geldi ve artık alt test ve uygulamalar için hazır. pload/51581/51581fig1.jpg &quot;/&gt; Klinik numunelerin Şekil 1.. Collection. Yumurtalık kanseri Katı numuneler cerrahi zamanında toplandı ve buz soğukluğunda, 30 ml PBS ile dolu bir steril, vidalı kapak, polipropilen örnekler kaba yerleştirilir. <img alt="Şekil 2a," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51581/51581fig2ahighres.jpg" src="/files/ftp_upload/51581/51581fig2a.jpg" /><img alt="Şekil 2b" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51581/51581fig2bhighres.jpg" src="/files/ftp_upload/51581/51581fig2b.jpg" /> Klinik örneklerin Şekil 2.. İşleme. A), taze, buz gibi soğuk 1 x PBS. Yatak 10 ml ihtiva eden bir Petri çanağı üzerine transfer katı numune) klinik numuneler bundan başka boyutu yaklaşık 2 mm parçalar halinde kesilir. <p class = &quot;jove_content&quot; fo: keep-together.within-page = &quot;always&quot;&gt; <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51581/51581fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51581/51581fig3.jpg" /> Çözüşmemiş dokulardan EOC hücre Şekil 3.. Ayrılması. Enzimatik sindirme sonrasında, klinik numuneler bir hücre süzgecinden üzerine aktarılır ve yumuşak bir basınç bir şırınga pistonunun kullanılarak sindirilmiş klinik numuneler üzerinde tatbik edilir. Bu bağ dokuları ve EOC hücrelerin kurtarma EOC&#39;nin mekanik ayrılması için izin verir. <img alt="Şekil 4," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51581/51581fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51581/51581fig4.jpg" /> Şekil 4,. EOC hücreleri süspansiyonun kaplama. Herhangi bir çözülmemiş dokuları ayrılmasından sonra, hücre süspansiyonu santrifüj edilir ve DMEM cont 10 ml içinde tekrar süspanseAining,% 10 FBS ve% 5 CO2 ve 37 ° C de bir Petri kabı içinde inkübe <img alt="Şekil 5," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51581/51581fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51581/51581fig5.jpg" /> Hemen hemen sonra kaplama işlem. Hücre süspansiyon sonra EOC hücre kültürlerinin Şekil 5,. Morfoloji bir tek hücre süspansiyonları olarak EOC gösterir ve topaklar (her ikisi de oklarla gösterilen) içinde, eritrositler ve hücre döküntüsü yine bu aşamada boldur. Orijinal büyütme, 20X. <img alt="Şekil 6," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51581/51581fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51581/51581fig6.jpg" /> 3. günde EOC hücre kültürlerinin Şekil 6,. Morfoloji ile kaplanmış yarı-yapışkan EOC c göstermektedir 3 gün sonra değiştirilmiştir. EOC hücre kültürü kaplama sonrası(okla gösterilen) ell küme ve daha az eritrosit kirlenme. Orijinal büyütme, 20X. <img alt="Şekil 7" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51581/51581fig7highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51581/51581fig7.jpg" /> Şekil 7. Sonra ilk kaplama bir hafta. EOC hücre kültürü kaplama bir hafta sonra kurulan EOC kültürler doku kültürü plastik yayılan hücrelerin girdap gibi kümeler gösterir. Orijinal büyütme, 20X. <img alt="Şekil 8," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51581/51581fig8highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51581/51581fig8.jpg" /> Şekil 8,. Konfluent EOC kültürleri. Kültür içinde 14 gün sonra normal epitel arnavut kaldırımı morfoloji gösteren EOC hücrelerinin konfluent tek tabaka.

Watch this Scientific Journal Video about Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens at JoVE.com

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Bu çalışma, bir katı klinik örneklerden birincil yumurtalık kanser hücrelerinin izolasyonu ve karakterizasyonu için ayrıntılı bir yöntemi tarif etmektedir. Yumurtalık kanseri klinik örnekler alt uygulamalar için son derece uygun olan uygun bir, fibroblast içermeyen epitelyal yumurtalık kanseri (EOC) hücreleri elde etmek için enzimatik sindirme tabi tutulur.

Katı Örneklerinin From İlköğretim Yumurtalık Kanseri Hücreleri alma için yöntem

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

method-for-obtaining-primary-ovarian-cancer-cells-from-solid-specimens

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

13.4K Görüntüleme.  University of Minnesota.  Bu çalışma, bir katı klinik örneklerden birincil yumurtalık kanser hücrelerinin izolasyonu ve karakterizasyonu için ayrıntılı bir yöntemi tarif etmektedir. Yumurtalık kanseri klinik örnekler alt uygulamalar için son derece uygun olan uygun bir, fibroblast içermeyen epitelyal yumurtalık kanseri (EOC) hücreleri elde etmek için enzimatik sindirme tabi tutulur. 

Video: Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical treatments and improved platinum-based chemotherapies, there has been little improvement in EOC survival rates for more than four decades 1,2. Whilst stage I tumors have 5-year survival rates &gt;85%, survival rates for stage III/IV disease are &lt;40%. Thus, the high rates of mortality for EOC could be significantly decreased if tumors were detected at earlier, more treatable, stages 3-5. At present, the molecular genetic and biological basis of early stage disease development is poorly understood. More specifically, little is known about the role of the microenvironment during tumor initiation; but known risk factors for EOCs (e.g. age and parity) suggest that the microenvironment plays a key role in the early genesis of EOCs. We therefore developed three-dimensional heterotypic models of both the normal ovary and of early stage ovarian cancers. For the normal ovary, we co-cultured normal ovarian surface epithelial (IOSE) and normal stromal fibroblast (INOF)&nbsp;cells, immortalized by retrovrial transduction of the catalytic subunit of human telomerase holoenzyme (hTERT) to extend the lifespan of these cells in culture. To model the earliest stages of ovarian epithelial cell transformation, overexpression of the CMYC oncogene in IOSE cells, again co-cultured with INOF cells. These heterotypic models were used to investigate the effects of aging and senescence on the transformation and invasion of epithelial cells. Here we describe the methodological steps in development of these three-dimensional model; these methodologies aren't specific to the development of normal ovary and ovarian cancer tissues, and could be used to study other tissue types where stromal and epithelial cell interactions are a fundamental aspect of the tissue maintenance and disease development.

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

We describe methodologies for establishing in vitro heterotypic three-dimensional models comprising ovarian fibroblasts and normal ovarian surface or ovarian cancer epithelial cells. We discuss the use of these models to study stromal-epithelial interactions that occur during ovarian cancer development.

Üç boyutlu heterotipik<em&gt; In Vitro</emYumurtalık Kanseri Başlatma ve İlerleme sırasında Stromal-Epitel Etkileşimleri&gt; Modelleme

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Tıp

Generation and Culturing of High-Grade Serous Ovarian Cancer Patient-Derived Organoids

Organoids are 3D dynamic tumor models that can be grown successfully from patient-derived ovarian tumor tissue, ascites, or pleural fluid and aid in the discovery of novel therapeutics and predictive biomarkers for ovarian cancer. These models recapitulate clonal heterogeneity, the tumor microenvironment, and cell-cell and cell-matrix interactions. Additionally, they have been shown to match the primary tumor morphologically, cytologically, immunohistochemically, and genetically. Thus, organoids facilitate research on tumor cells and the tumor microenvironment and are superior to cell lines. The present protocol describes distinct methods to generate patient-derived ovarian cancer organoids from patient tumors, ascites, and pleural fluid samples with a higher than 97% success rate. The patient samples are separated into cellular suspensions by both mechanical and enzymatic digestion. The cells are then plated utilizing a basement membrane extract (BME) and are supported with optimized growth media containing supplements specific to the culturing of high-grade serous ovarian cancer (HGSOC). After forming initial organoids, the PDOs can sustain long-term culture, including passaging for expansion for subsequent experiments.

Patient-derived organoids (PDO) are a three-dimensional (3D) culture that can mimic the tumor environment in vitro. In high-grade serous ovarian cancer, PDOs represent a model to study novel biomarkers and therapeutics.

Yüksek Dereceli Seröz Yumurtalık Kanseri Hasta Kaynaklı Organoidlerin Üretimi ve Kültürlenmesi

Organoids are 3D dynamic tumor models that can be grown successfully from patient-derived ovarian tumor tissue, ascites, or pleural fluid and aid in the ...

Kanser Araştırmaları

Two Methods for Establishing Primary Human Endometrial Stromal Cells from Hysterectomy Specimens

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell culture systems arising from human endometrial samples are no exception. Applications range from normal cyclic physiological processes to endometrial pathologies such as gynecological cancers, infectious diseases, and reproductive deficiencies. Here, we provide two methods for establishing primary endometrial stromal cells from surgically resected endometrial hysterectomy specimens. The first method is referred to as &#8220;the scraping method&#8221; and incorporates mechanical scraping using surgical or razor blades whereas the second method is termed &#8220;the trypsin method.&#8221; This latter method uses the enzymatic activity of trypsin to promote the separation of cells and primary cell outgrowth. We illustrate step-by-step methodology through digital images and microscopy. We also provide examples for validating endometrial stromal cell lines via quantitative real time polymerase chain reactions (qPCR) and immunofluorescence (IF).

Establishing primary endometrial stromal cell culture systems from hysterectomy specimens is a valuable biological technique and a crucial step prior to pursuing a vast array of research aims. Here, we describe two methods used to establish stromal cultures from surgically resected endometrial tissues of human patients.&#160;

Histerektomi Örneklerden İlköğretim İnsan endometrial stroma hücrelerinde Kurulması İçin İki Yöntem

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell ...

Assessment of Ovarian Cancer Spheroid Attachment and Invasion of Mesothelial Cells in Real Time

Ovarian cancers metastasize by shedding into the peritoneal fluid and dispersing to distal sites within the peritoneum. Monolayer cultures do not accurately model the behaviors of cancer cells within a nonadherent environment, as cancer cells inherently aggregate into multicellular structures which contribute to the metastatic process by attaching to and invading the peritoneal lining to form secondary tumors. To model this important stage of ovarian cancer metastasis, multicellular aggregates, or spheroids, can be generated from established ovarian cancer cell lines maintained under nonadherent conditions. To mimic the peritoneal microenvironment encountered by tumor cells in vivo, a spheroid-mesothelial co-culture model was established in which preformed spheroids are plated on top of a human mesothelial cell monolayer, formed over an extracellular matrix barrier. Methods were then developed using a real-time cell analyzer to conduct quantitative real time measurements of the invasive capacity of different ovarian cancer cell lines grown as spheroids. This approach allows for the continuous measurement of invasion over long periods of time, which has several advantages over traditional endpoint assays and more laborious real time microscopy image analyses. In short, this method enables a rapid, determination of factors which regulate the interactions between ovarian cancer spheroid cells invading through mesothelial and matrix barriers over time.

Ovarian cancer cell invasion into the mesothelial lining of the peritoneum is a dynamic process over time. Utilizing a real time analyzer, the invasive capacity of ovarian cancer cells in a spheroid-mesothelial cell co-culture model can be quantified over prolonged time periods, providing insights into factors regulating the metastatic process.

Real Time Mezotelyal Hücrelerinin Yumurtalık Kanseri Sferoid Ek ve Invasion Değerlendirilmesi

Ovarian cancers metastasize by shedding into the peritoneal fluid and dispersing to distal sites within the peritoneum. Monolayer cultures do not ...

Ovarian Cancer Patient-Derived Organoid Models for Pre-Clinical Drug Testing

Ovarian cancer is a fatal gynecologic cancer and the fifth leading cause of cancer death among women in the United States. Developing new drug treatments is crucial to advancing healthcare and improving patient outcomes. Organoids are in-vitro three-dimensional multicellular miniature organs. Patient-derived organoid (PDO) models of ovarian cancer may be optimal for drug screening because they more accurately recapitulate tissues of interest than two-dimensional cell culture models and are inexpensive compared to patient-derived xenografts. In addition, ovarian cancer PDOs mimic the variable tumor microenvironment and genetic background typically observed in ovarian cancer. Here, a method is described that can be used to test conventional and novel drugs on PDOs derived from ovarian cancer tissue and ascites. A luminescence-based adenosine triphosphate (ATP) assay is used to measure viability, growth rate, and drug sensitivity. Drug screens in PDOs can be completed in 7-10 days, depending on the rate of organoid formation and drug treatments.

We present a protocol that can be used to conduct therapeutic drug testing with patient-derived ovarian cancer organoids.

Klinik Öncesi İlaç Testi için Yumurtalık Kanseri Hasta Kaynaklı Organoid Modeller

Ovarian cancer is a fatal gynecologic cancer and the fifth leading cause of cancer death among women in the United States. Developing new drug treatments ...

Over Kanseri-Omentum Etkileşimi için 3 Boyutlu Ex Vivo Model Oluşturulması

An Ex Vivo Model of Ovarian Cancer Peritoneal Metastasis Using Human Omentum

Ovarian cancer is the deadliest gynecologic malignancy. The omentum plays a key role in providing a supportive microenvironment to metastatic ovarian cancer cells as well as immune modulatory signals that allow tumor tolerance. However, we have limited models that closely mimic the interaction between ovarian cancer cells and adipose-rich tissues. To further understand the cellular and molecular mechanisms by which the omentum provides a pro-tumoral microenvironment, we developed a unique 3D ex vivo model of cancer cell-omentum interaction. Using human omentum, we are able to grow ovarian cancer cells within this adipose-rich microenvironment and monitor the factors responsible for tumor growth and immune regulation. In addition to providing a platform for the study of this adipose-rich tumor microenvironment, the model provides an excellent platform for the development and evaluation of novel therapeutic approaches to target metastatic cancer cells in this niche. The proposed model is easy to generate, inexpensive, and applicable to translational investigations.

Yazar Spotlight: Kanser-Adipoz Mikroçevre Etkileşimini Araştırmak için Gelişmiş Ex Vivo Model 

This protocol describes the establishment of a three-dimensional (3D) ex vivo model of cancer cell-omentum interaction. The model provides a platform for elucidating pro-tumor mechanisms within the adipose niche and for testing novel therapies.

İnsan Omentumu Kullanılarak Over Kanseri Periton Metastazının Ex Vivo Modeli

Ovarian cancer is the deadliest gynecologic malignancy. The omentum plays a key role in providing a supportive microenvironment to metastatic ovarian ...

Yumurtalık Kanserinin Standardize Edilmesi Organoid Biyobankacılık

Strategy for Biobanking of Ovarian Cancer Organoids: Addressing the Interpatient Heterogeneity across Histological Subtypes and Disease Stages

While the establishment of an ovarian cancer biobank from patient-derived organoids along with their clinical background information promises advances in research and patient care, standardization remains a challenge due to the heterogeneity of this lethal malignancy, combined with the inherent complexity of organoid technology. This adaptable protocol provides a systematic framework to realize the full potential of ovarian cancer organoids considering a patient-specific variability of progenitors. By implementing a structured experimental workflow to select optimal culture conditions and seeding methods, with parallel testing of direct 3D seeding versus a 2D/3D route, we obtain, in most cases, robust long-term expanding lines suitable for a broad range of downstream applications. 
Notably, the protocol has been tested and proven efficient in a great number of cases (N = 120) of highly heterogeneous starting material, including high-grade and low-grade ovarian cancer and stages of the disease with primary debulking, recurrent disease, and post-neoadjuvant surgical specimens. Within a low Wnt, high BMP exogenous signaling environment, we observed progenitors being differently susceptible to the activation of the Heregulin 1 &#223; (HER&#223;-1)-pathway, with HER&#223;-1 promoting organoid formation in some while inhibiting it in others. For a subset of the patient's samples, optimal organoid formation and long-term growth necessitate the addition of fibroblast growth factor 10 and R-Spondin 1 to the medium. 
Further, we highlight the critical steps of tissue digestion and progenitor isolation and point to examples where brief cultivation in 2D on plastic is beneficial for subsequent organoid formation in the Basement Membrane Extract type 2 matrix. Overall, optimal biobanking requires systematic testing of all main conditions in parallel to identify an adequate growth environment for individual lines. The protocol also describes the handling procedure for efficient embedding, sectioning, and staining to obtain high-resolution images of organoids, which is required for comprehensive phenotyping.

Yazar Spotlight: Yumurtalık Kanserinde Kişiselleştirilmiş Tıbbı Geliştirme 

This protocol offers a systematic framework for the establishment of ovarian cancer organoids from different disease stages and addresses the challenges of patient-specific variability to increase yield and enable robust long-term expansion for subsequent applications. It includes detailed steps for tissue processing, seeding, adjusting media requirements, and immunofluorescence staining.

Yumurtalık Kanseri Organoidlerinin Biyobankacılığı Stratejisi: Histolojik Alt Tipler ve Hastalık Evrelerinde Hastalar Arası Heterojenliğin Ele Alınması

While the establishment of an ovarian cancer biobank from patient-derived organoids along with their clinical background information promises advances in ...

Katı Örneklerinin From İlköğretim Yumurtalık Kanseri Hücreleri alma için yöntem

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Üç boyutlu heterotipik

Yüksek Dereceli Seröz Yumurtalık Kanseri Hasta Kaynaklı Organoidlerin Üretimi ve Kültürlenmesi

Histerektomi Örneklerden İlköğretim İnsan endometrial stroma hücrelerinde Kurulması İçin İki Yöntem

Real Time Mezotelyal Hücrelerinin Yumurtalık Kanseri Sferoid Ek ve Invasion Değerlendirilmesi

Klinik Öncesi İlaç Testi için Yumurtalık Kanseri Hasta Kaynaklı Organoid Modeller

İnsan Omentumu Kullanılarak Over Kanseri Periton Metastazının Ex Vivo Modeli

İnsan Omentumu Kullanılarak Over Kanseri Periton Metastazının Ex Vivo Modeli

İnsan Omentumu Kullanılarak Over Kanseri Periton Metastazının Ex Vivo Modeli

Yumurtalık Kanseri Organoidlerinin Biyobankacılığı Stratejisi: Histolojik Alt Tipler ve Hastalık Evrelerinde Hastalar Arası Heterojenliğin Ele Alınması

Yumurtalık Kanseri Organoidlerinin Biyobankacılığı Stratejisi: Histolojik Alt Tipler ve Hastalık Evrelerinde Hastalar Arası Heterojenliğin Ele Alınması