Sığır Kolostrumunda Toplam Protein ve Biyoaktif Protein Konsantrasyonlarının Belirlenmesi

Sığır kolostrumu, yeni doğan buzağı için hem birincil besin kaynağı hem de immünolojik destektir. Terapötik proteinlerin (laktoferrin ve IgG) seviyesinin anlaşılması, sığır kolostrum dozlaması ve insan tüketimi için standardizasyon için önemlidir.

Kolostrum, doğumdan hemen sonra memeliler tarafından üretilen karmaşık bir biyolojik sıvıdır. İyi bir makro ve mikro besin, biyoaktif peptitler ve büyüme faktörleri kaynağı olarak yenidoğanlar için tüm beslenme gereksinimlerini karşılar. Sığır kolostrumu, immünoglobulin G (IgG) ve laktoferrin içeren zengin protein içeriği nedeniyle potansiyel bir besin kaynağıdır ve biyoaktiftir. Bununla birlikte, sığır kolostrumundaki laktoferrin ve IgG seviyesi emzirme döneminde belirgin şekilde değişir. Bu nedenle, sığır kolostrumunun bir protein kaynağı olarak kullanılması için IgG ve laktoferrin konsantrasyonunun izlenmesi, incelenmesi gereken önemli bir sorudur. Bu makaledeki yöntemler, protein içeriğinin yanı sıra spesifik laktoferrin ve IgG konsantrasyonlarının nasıl belirleneceğini açıklamaktadır. Bu yöntemler aşağıdaki adımları içerir: Sığır kolostrum proteinlerinin izolasyonu, Bikinkoninik asit testi (BCA) ile protein konsantrasyonunun belirlenmesi, SDS-PAGE ile proteinlerin görselleştirilmesi, ELISA Testi kullanılarak laktoferrin ve IgG konsantrasyonunun belirlenmesi.

Kolostrum, doğumdan kısa bir süre sonra memeliler tarafından üretilen meme bezinin ilk salgısıdır. Kolostrum, makro ve mikro besinler, antimikrobiyal peptitler ve^{büyüme faktörleri 1,2,3,4} açısından zengindir. Bileşim, olgun süte ^5,6,7 geçiş yoluyla zaman içinde kademeli olarak değişir, ancak en önemlisi doğumdan sonraki 24 saat içinde 8. Kolostrumun bileşimi ayrıca yaş, parite, cins, sağlık ve beslenme durumu gibi maternal faktörlerin yanı sıra mevsim, erken doğum, erken emzirme, kolostral taşıma faktörleri (kolostrum havuzu ve depolama sıcaklığı) ve doğum indüksiyonu gibi dışsal faktörlerden de etkilenir ^9,10,11. Olgun sütle karşılaştırıldığında, kolostrum daha az laktoz ve daha fazla yağ, protein, peptitler, protein olmayan azot, kül, hormonlar, büyüme faktörleri, sitokinler, nükleotidler, vitaminler ve mineraller içerir¹². Sığır kolostrumu, immünoglobulinler, laktoferrin, α-laktalbümin (α-LA), β-laktoglobulin (β-Lg), laktoperoksidaz ve çeşitli büyüme faktörleri¹³ dahil olmak üzere çok çeşitli proteinler içerir. Sığır kolostrumunun toplam protein konsantrasyonu 11.26 mg / mL ile 169.55 mg / mL arasında değişmektedir¹⁴. Protein içeriği, sırasıyla ortalama 124.00 mg / mL ve 26.00 mg / mL konsantrasyonda peynir altı suyu ve kazein içerir¹⁵. Peynir altı suyu kısmı, IgG (%85-%90), IgM (%7) ve IgA (%5) olmak üzere üç ana tip immünoglobulin (Ig) ^içerir16. Sığır kolostrumundaki ana Ig, pasif bağışıklık sağlayan ve baldırda adaptif ve doğuştan gelen bağışıklık sistemlerini modüle eden^{IgG'dir 17}. İlk sağım sığır kolostrumunun başlangıç Ig konsantrasyonu 20 ila 200 mg / mL arasında değişebilir ve yaklaşık 0.4-1.0 mg / mL'ye düşebilir¹⁸. Ortalama IgG konsantrasyonu yaklaşık 60 mg / mL'dir ve olgun süte geçiş boyunca 1 mg / mL'nin altındaki seviyelere istikrarlı bir şekilde düşer¹⁹.

Kolostrumdaki bir diğer önemli biyoaktif protein, 1.5-5 mg / mL konsantrasyonda demir bağlayıcı bir glikoprotein olan laktoferrindir. Laktoferrinin özellikleri arasında demir emilimini arttırmanın yanı sıra antimikrobiyal aktiviteye^{sahip olması 20,21}, lipopolisakkaritin bağlanması, bağışıklık modülasyonu ve bağırsak epitel hücrelerinin ve fibroblastların²² büyümesinin uyarılması yer alır. Sığır kolostrumunda ayrıca α-laktalbümin ve β-laktoglobulin bulunur. Bu proteinler esansiyel amino asit kaynaklarıdır ve ayrıca bakterisidal aktiviteye^sahiptir 23,24,25. Kolostrumdaki ortalama α-LA ve β-Lg konsantrasyonları sırasıyla ortalama 2.77 mg /^mL2 ve 11.5 mg / mL^26'dır. Daha sonra, bu konsantrasyonlar olgun sütte 1-1.5 mg / mL²⁷ ve 4.8 mg / mL^26'ya düşer. Kolostrum ayrıca önemli miktarda laktoperoksidaz (ortalama 22.8 μg/mL) ve lizozim (ortalama 0.40 μg/mL) ^içerir26. Laktoperoksidaz, reaktif oksijen türleri üreterek Gram pozitif ve negatif bakterilere²⁸ karşı antimikrobiyal aktiviteye sahip bir glikoproteindir. Lizozim, bakteri hücre duvarlarının peptidoglikan bileşenini parçalayarak bir antimikrobiyal ajan olarak işlev görür ve böylece hücre ölümüne^{yol açar 29,30}.

Özellikleri nedeniyle, IgG ve laktoferrin, bebek formüllerini, gıda takviyelerini, nekahet dönemleri ve sporcular için yüksek proteinli müstahzarları ve ayrıca farmakoloji ve kozmetolojiyi güçlendirmek için farklı gıda ürünlerine işlenir 31,32,33. Sığır kolostrumu, önemli bir IgG ve laktoferrin kaynağını temsil eder. Bununla birlikte, sığır kolostrumundaki bu biyoaktif proteinlerin bileşimi laktasyon döneminde belirgin şekilde değişir. Bu nedenle, araştırma ve gıda işleme için kullanılan kolostrum örneklerinde bu biyoaktif proteinlerin konsantrasyonundaki değişikliklerin izlenmesi kritik öneme sahiptir. Bu çalışma, buzağılamadan sonraki 6 gün boyunca sığır kolostrumundaki toplam protein, laktoferrin ve IgG'nin konsantrasyonunu ve bileşimlerini izleme yöntemlerini tanımlamayı amaçlamaktadır.

Kolostrum örnekleri, Temmuz-Ağustos döneminde öğlen buzağılamadan sonra 6 gün boyunca, Çanakkale, Türkiye'deki Uluova Süt Ticaret Şirketi'nden 28 Holstein süt ineğinden toplanmış ve derin dondurulmuş olarak toplanmıştır. Aynı gün toplanan numuneler, her numunenin gününe göre bir araya getirildi ve toplam protein, laktoferrin ve IgG konsantrasyonları için analiz edildi. Tüm örnekler iki kez test edildi.

1. Numune hazırlama

1. Analiz için seyreltilmiş bir numune elde etmek için 200 μL sığır kolostrumunu 400 μL dH₂O ile karıştırın. Tüm numuneleri buna göre seyreltin.
2. Seyreltilmiş ve seyreltilmemiş numuneleri 4 °C'de, 1000 x g'da 30 dakika santrifüjleyin.
3. Orta fazı uygun şekilde etiketlenmiş yeni bir tüpe ayırın. Adım 1.2'yi tekrarlayın. net orta faz elde etmek için. Tüm orta fazı ve seyreltilmiş numuneleri hemen kullanılmayacaksa -20 °C'de saklayın.
4. BCA, SDS-PAGE ve Laktoferrin tahlilleri için seyreltilmiş numunelerden elde edilen orta fazı kullanın. IgG testi için seyreltilmemiş numunelerden orta fazı toplayın.
5. Okumaların standart eğri aralığında olduğundan emin olmak için her numune için numune seyreltmeleri hazırlayın. Seyreltilmiş numunelerden elde edilen her bir orta fazı BCA testi için 1: 300'e ve Laktoferrin testi için 1: 30.000'e seyreltin ve seyreltilmemiş numunelerden elde edilen her orta fazı IgG testi için 1: 400.000'e seyreltin.
   NOT: Seyreltme faktörleri, absorbans değerine ve standart eğriye göre belirlenir.

2. BCA protein tahlil kitini kullanarak protein konsantrasyonunu belirleyin

1. Standartların ve reaktiflerin hazırlanması
   1. Test için kullanılmak üzere ticari olarak temin edilebilen kitte sağlanan reaktifleri kullanın (Malzeme Tablosuna bakınız): 0.1 M sodyum hidroksit içinde sodyum karbonat, sodyum bikarbonat, bikinkoninik asit ve sodyum tartrat içeren BCA reaktifi A. BCA reaktifi B, %4 bakır sülfat içerir. Albümin (BSA) standartları,% 0.9 salin ve% 0.05 sodyum azid içinde 2.0 mg / mL'de sığır serum albümini içerir.
   2. Tüm numuneleri ve protein standartlarını oda sıcaklığına (RT) dengeleyin.
   3. 50:1 oranında A:B reaktifini karıştırarak yeterli hacimde çalışma reaktifi (WR) hazırlayın. Her numune ve standart için 200 μL WR gereklidir.
   4. Seyreltilmiş albümin (BSA) standartlarını, 20-2.000 μg / mL nihai BSA konsantrasyonu arasında bir çalışma aralığı sunan aşağıdaki seyreltme şemasına (Tablo 1) göre hazırlayın. Seyreltici olarak dH₂O kullanın.

Tablo 1: BSA standartlarının seyreltme şeması.

2. BCA tahlil prosedürü
   1. Her BCA standardının veya numunenin 25 μL'sini 96 oyuklu bir plakaya aktarın. Her iyi içeren standarda veya numuneye 200 μL WR ekleyin. Plakayı bir tabak çalkalayıcı üzerinde 30 saniye boyunca iyice karıştırın.
   2. Plakayı bir plaka kapatıcı ile örtün ve 37 °C'de 30 dakika inkübe edin. İnkübasyondan sonra, reaksiyonların yaklaşık 10 dakika boyunca RT'ye dengelenmesine izin verin. Her plakayı, ilgili yazılımıyla birlikte bir mikroplaka okuyucu kullanarak 562 nm'de okuyun.
3. Standart eğri oluşturma ve sonuçları belirleme
   1. Standartlar ve numuneler için absorbans değerlerini kaydedin. Seyreltme serisi için lütfen Tablo 1'e bakınız. Standartların ve numunenin her bir absorbans değerinden standart işlenmemiş parçanın absorbans değerlerini çıkarın. Toplam protein konsantrasyonunu tahmin etmek için her standart ve numune için yinelenen okumaların ortalamasını alın.
   2. X eksenindeki her standart için düzeltilmiş ortalama absorbansı ve y eksenindeki konsantrasyonu çizerek standart bir eğri oluşturun. Dört parametreli eğri uyumunu sağlayabilen uygun yazılımla doğrusal bir eğri çizin.
   3. Konsantrasyona tepkisini enterpolasyon yaparak her bir numunenin konsantrasyonunu belirlemek için standart eğriyi kullanın. Numunenin gerçek konsantrasyonunu elde etmek için seyreltme faktörü (adım 1.5) ile çarpın.

3. SDS-PAGE testi kullanılarak proteinin görselleştirilmesi

1. Numune ve çözeltilerin hazırlanması
   1. Stok çözeltileri hazırlayın
      1. % 10 (a / h) SDS, 1.5 M Tris-HCl pH 8.3, 0.5 M Tris-HCl pH 6.8,% 10 (a / h) amonyum persülfat (APS) çözeltisi hazırlayın (taze hazırlayın).
      2. (w/v) SDS: 1 g SDS tartın ve 10 mL dH₂O ekleyin.
      3. M Tris-HCl pH 8.8: 18.15 g Tris ağırlığında ve ~ 60 mL dH₂O ile çözün. HCl ile pH 8.8'e ayarlayın. Hacmi 100 mL'ye getirmek için dH₂O ekleyin.
      4. M Tris-HCl pH 6.8: 6.00 g Tris tartın ve ~ 60 mL dH₂O ile çözün. HCl ile pH 6.8'e ayarlayın. Hacmi 100 mL'ye getirmek için dH₂O ekleyin.
      5. APS: 15 mg APS ağırlığında ve 150 μL dH₂O ekleyin.
         DİKKAT: Akrilamid ve SDS toksik ve zararlıdır. Koruyucu eldiven giyin ve bir kapüşon altında çalışın.
   2. 950 μL 2x SDS-PAGE numune tamponuna 50 μL β-Merkaptoetanol ekleyerek numune tamponunu hazırlayın.
      DİKKAT: β-merkaptoetanol solunduğunda toksiktir. Koruyucu eldiven giyin ve bir kapüşon altında çalışın.
   3. 100 mL 10x Tris-glisin SDS Çalışma Tamponunu 900 mL dH₂O ile karıştırarak çalışan tamponu hazırlayın.
   4. Boyama solüsyonunu hazırlayın (% 45 dH₂O,% 45 Metanol,% 10 buzlu asetik asit, 2 g Coomassie Brilliant Blue R).
   5. Leke giderme solüsyonunu hazırlayın (% 50 dH₂O,% 40 Metanol,% 10 buzlu asetik asit).
2. Jelin hazırlanması
   1. Test için jel kaseti, güç kaynakları, elektrotlar ve kablolar dahil olmak üzere elektroforez ünitesi ekipmanını hazırlayın. Cam plakaları etanol ile temizleyin ve sandviçi monte edin. Cam plakaların ve ara parçaların alt kenarlarının iyi hizalandığından emin olun.
   2. 3.5 mL dH₂O, 2.4 mL %40 Akrilamid/Metilen bis Akrilamid, 2 mL 1.5M Tris-HCl, 100 μL %10 (a/h) SDS, 80 μL %10 APS, 8 μL N,N,N',N'-Tetrametil etilendiamin (TEMED) içeren ayırıcı jel karışımını hazırlayın.
      DİKKAT: TEMED toksik ve/veya tahriş edicidir. Koruyucu eldiven giyin ve bir kapüşon altında çalışın.
   3. Ayırıcı jel karışımını, daha kısa plakanın üst kısmının yaklaşık 1-1,5 cm altında bir seviyeye kadar jel plakalarına dökün.
   4. Jelin üst kısmındaki kabarcıkları gidermek ve polimerize jelin kurumasını önlemek için ayırma jelinin üst kısmını izopropanol ile kaplayın.
   5. Ayırma jeli en az 15 dakika polimerize olduktan sonra ayırma jelinin üzerine izopropanol dökün.
   6. 1.92 mL dH₂O, 300 μL %40 Akrilamid/Metilen bis Akrilamid, 750 μL 0.5M Tris-HCl, 100 μL %10 (a/h) SDS, 30 μL %10 APS ve 3 μL TEMED içeren istifleme jeli karışımını hazırlayın.
   7. İstifleme jeli solüsyonunu, jel plakaların doldurulması için ayırma jelinin üzerine dökün. Tarağı ara parçaların üstüne yerleştirin.
   8. İstifleme jelinin oda sıcaklığında yaklaşık 15 dakika polimerize olmasına izin verin.
3. Jeli çalıştırmak
   1. Jeli elektrot tertibatına takın. Cihazın her iki haznesine taze hazırlanmış 1x Tris-glisin SDS Çalışma Tamponu ekleyin.
   2. Tarağı çıkarın.
   3. Seyreltilmiş numunelerin 5 μL'lik merdivenini (10-250 kDa) ve orta fazının 8 μL'sini jelin kuyucuklarına yükleyin. Boya ayırıcı jele geçene kadar jeli 80 V'ta çalıştırın ve boya jelin dibine ulaşana kadar 120 V'a yükseltin. Boya jelin dibine ulaştıktan sonra uygulanan gücü kapatın.
4. Jelin lekelenmesi ve lekelenmesinin giderilmesi
   1. Çalışma tamamlandıktan sonra jeli cihazdan çıkarın ve ara parçaları ve cam plakaları çıkarın. Jeli küçük bir tepsiye yerleştirin.
   2. 55 rpm'de hafifçe çalkalayarak 30 dakika boyunca boyama solüsyonu (adım 3.1.4) ekleyerek jeli boyayın.
   3. Boyama solüsyonunu jelden dökün. Jeli az miktarda leke giderici solüsyonla durulayın ve boyayı atın.
   4. Jeli kaplamak için yeterli miktarda leke giderme solüsyonu ekleyin ve bantlar görünene kadar ~ 1 saat hafifçe sallayarak lekeyi çıkarın.

4. Sığır Laktoferrin ELISA kullanarak laktoferrin konsantrasyonu

1. Standartların ve reaktiflerin hazırlanması
   1. Bu test için piyasada bulunan Sığır LF / LTF / Laktoferrin ELISA Kitini kullanın.
   2. Tüm örnekleri ve standartları RT olarak dengeleyin.
   3. Yakalanan antijene bağlanmaktan sorumlu olan yeterli hacimde tespit reaktifi A ve B Çalışma Çözeltisi hazırlayın.
   4. Tespit reaktifleri A ve B'yi sırasıyla test seyrelticileri A ve B kullanarak 1:100 oranına seyreltin.
   5. 30x yıkama tamponu konsantresini dH₂O ile seyrelterek 1x çalışan bir yıkama tamponu hazırlayın.
   6. Steril bir mikrotüpe yeterli miktarda 3,3",5,5" -Tetrametilbenzidin (TMB) substrat çözeltisi koyun.
   7. Bir tüp liyofilize standart (100 ng / mL) 0.5 mL numune seyreltici ile yeniden süspanse edin ve hafif çalkalama ile RT'de 10 dakika inkübe edin. Liyofilize sanple'ın tamamının altta toplandığından emin olmak için şişeyi döndürün.
   8. Aşağıdaki seyreltme şemasına göre standart bir seyreltme serisi hazırlayın (Tablo 2).

Tablo 2: Sığır laktoferrin standartlarının seyreltme şeması.

2. Sığır Laktoferrin konsantrasyonunun ölçülmesi
   1. Her bir laktoferin standardından 100 μL pipetleyin veya numuneyi kaplanmış 96 oyuklu şerit plakasına pipetleyin. Buharlaşmayı önlemek için plakayı bir plaka kapatıcı ile örtün. 37 °C'de 1 saat inkübe edin.
   2. Her kuyucuğun sıvısını aspire edin. Her kuyucuğa 100 μL algılama reaktifi A çalışma çözeltisi ekleyin. Bir tabak kapatıcı ile örtün ve iyice karıştırmayı sağlamak için hafifçe çalkalayın. 37 °C'de 1 saat inkübe edin.
   3. Her kuyucuktan sıvıyı aspire ettikten sonra yaklaşık 350 μL 1x yıkama tamponu ekleyerek üç kez yıkayın. Tamamen aspire etmeden önce her yıkamanın 1-2 dakika oturmasına izin verin. Son yıkamadan sonra, kalan yıkama tamponunu çıkarmak için aspire edin, ardından plakayı ters çevirin ve temiz, emici bir kağıda vurun.
   4. Her kuyucuğa 100 μL algılama reaktifi B çalışma çözeltisi ekleyin. Yeni bir plaka kapatıcı ile örtün. 37 °C'de 30 dakika inkübe edin. Sıvıyı her kuyucuktan aspire edin ve adım 4.2.3'te açıklandığı gibi beş kez yıkayın. Her bir oyuğa 90 μL TMB substrat çözeltisi koyun ve yeni bir plaka kapatıcı ile örtün.
   5. 37 °C'de ışıktan uzakta 10-20 dakika inkübe edin. Periyodik olarak izleyerek en uygun rengi kontrol edin. Kuyucuktaki yoğun mavi rengin yüksek konsantrasyonlu laktoferrin içerdiğini gözlemleyin.
   6. Her kuyucuğa 50 μL durdurma çözeltisi ekleyin. Renk maviden sarıya değişecektir. Her bir kuyucuğun absorbansını, ilgili yazılımıyla birlikte bir mikroplaka okuyucu kullanarak hemen 450 nm'de ölçün.
      NOT: Renk değişimi homojen olana kadar iyice karıştırmayı sağlamak için plakaya hafifçe vurun.
3. Standart eğri oluşturma ve sonuçları belirleme
   1. Laktoferrin konsantrasyonunu tahmin etmek için veri üretimi için adım 2.3.1'i izleyin.
   2. Adım 2.3.2'de açıklandığı gibi her standart için düzeltilmiş ortalama absorbansı çizerek, ancak dört parametreli eğri uyumunu sağlayabilen uygun yazılımla bir polinom eğrisi çizerek standart bir eğri oluşturun.
   3. Absorpsiyon değerini adım 2.3.3'te açıklandığı gibi oluşturulan denklem üzerine enterpolasyon yaparak her bir numunenin laktoferin içeriğini hesaplayın.

5. Sığır IgG ELISA kullanılarak numunelerin IgG konsantrasyonu tayini

1. Standartların ve reaktiflerin hazırlanması
   1. Sığır IgG ELISA Kitinde verilenlerden gerekli olanları kullanın.
   2. Tüm örnekleri ve standartları RT olarak dengeleyin.
   3. 10 μL yaban turpu peroksidaz (HRP)-avidin konsantresini (100x) 990 μL Enzim-Antikor Konjuge seyreltici ile seyrelterek yeterli hacimde çalışan Enzim-Antikor Konjuge çözeltisi hazırlayın.
   4. 20x yıkama tamponu konsantresini dH₂O ile seyrelterek yeterli hacimde 1x yıkama tamponu hazırlayın.
   5. 20x seyreltici konsantresini dH₂O ile seyrelterek yeterli hacimlerde 1x seyreltici çözeltisi hazırlayın.
   6. Sığır IgG kalibratörüne 1.0 mL dH₂O ekleyin ve eriyene kadar hafifçe karıştırın. Kalibratörün nihai konsantrasyonu 123.000 ng/mL'dir.
   7. Tablo 3'te açıklanan seyreltme şemasına göre standart seyreltme serisini hazırlayın.

Tablo 3: Sığır IgG standartlarının seyreltme şeması.

2. Sığır IgG ELISA testi prosedürü
   1. Her bir IgG standardından 100 μL pipetleyin veya numuneyi kaplanmış 96 oyuklu şerit plakasına pipetleyin. Plakayı bir plaka kapatıcı ile örtün ve RT'de 30 dakika inkübe edin. Sıvıyı her kuyudan aspire edin.
   2. Kuyuları 1x yıkama tamponu ile doldurarak dört kez yıkayın ve aspire edin. Son yıkamadan sonra, kalan yıkama tamponunu çıkarmak için aspire edin, ardından plakayı ters çevirin ve temiz emici kağıda vurun. Her oyuğa 100 μL uygun şekilde seyreltilmiş Enzim-Antikor Konjugatı ekleyin. Bir tabak kapatıcı ile örtün ve iyice karıştırmayı sağlamak için hafifçe çalkalayın.
   3. RT'de 10 dakika inkübe edin. Kalan yıkama tamponunu adım 5.2.2'de açıklandığı gibi kuyulardan yıkayın ve çıkarın. Her oyuğa 100 μL TMB substratı ekleyin; Yeni bir plaka kapatıcı ile örtün.
   4. RT'de ışıktan tam olarak 10 dakika uzakta inkübe edin. Her kuyucuğa 100 μL durdurma çözeltisi ekleyerek reaksiyonu durdurun. Her plakayı, ilgili yazılımıyla birlikte bir mikroplaka okuyucu kullanarak 450 nm'de okuyun.
3. Standart eğri oluşturma ve sonuçları belirleme
   1. IgG konsantrasyonunu tahmin etmek için veri baskısı için adım 2.3.1'i izleyin.
   2. X eksenindeki konsantrasyonu ve y eksenindeki her standart için düzeltilmiş ortalama absorbansı çizerek standart bir eğri oluşturun. Dört parametreli eğri uyumunu sağlayabilen uygun yazılımla bir polinom eğrisi çizin.
   3. Absorpsiyon değerini adım 2.3.3'te açıklandığı gibi oluşturulan denklem üzerine enterpolasyon yaparak her bir numunenin IgG içeriğini hesaplayın.

Protokolü takiben, sığır kolostrum örnekleri protein, laktoferrin ve IgG konsantrasyonunu belirlemek için analiz edildi. Sığır kolostrumunun protein, laktoferrin ve IgG analizlerinin sonuçları Tablo 4'te gösterilmiştir.

Tablo 4: Sığır kolostrumunun protein, laktoferrin ve IgG konsantrasyonu.

Bu çalışma, olgun süte geçiş boyunca kolostrumdaki protein, laktoferrin ve IgG konsantrasyonlarındaki önemli değişiklikler hakkında bilgi sağlar. Laktoferrin ve IgG konsantrasyonundaki değişikliklerin tespiti sandviç ELISA ile gerçekleştirildi ve toplam protein konsantrasyonu BCA testi ile analiz edildi. Sonuçlar, erken kolostrumun en yüksek protein, laktoferrin ve IgG konsantrasyonuna sahip olduğunu ve daha sonra önümüzdeki 3 gün içinde azaldığını göstermek...

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Bu çalışma Uluova Süt Ticaret A.Ş. (Uluova Süt Ticaret A.Ş.) tarafından desteklenmiştir. RMD ve BMH, bebek mikrobiyomunu restore etmeye odaklanan bir şirket olan Evolve BioSystems'in çalışanlarıdır.