В пробирке Метод для контроля концентрации галогенированные газов в культивированный альвеолярных клеток эпителия

Этот метод может помочь ответить на ключевой вопрос в области исследований травмы легких и ремонта, таких как тестирование галогенированных адъюнкт в качестве потенциальных новых методов лечения острого респираторного дистресс-синдрома. Основным преимуществом этого метода является то, что он опирается на очень простой метод культуры клеток и подвергать их галогенированных агентов для того, чтобы достичь точных и контролируемых концентраций. Для построения герметичной камеры используйте герметичную полипропиленовую коробку емкостью 6,5 литра.

Просверлите отверстие диаметром 2,5 сантиметра на нижней стороне боковой стенки коробки. Затем вставьте гофрированную трубку с зеленой меткой, которая будет служить в качестве газовой воздушной смеси входной трубы. И запечатать его силиконом.

Затем просверлите второе отверстие диаметром 2,5 сантиметра на верхней стороне противоположной боковой стены. Вставьте еще одну гофрированную трубку с красной меткой и соедините ее с угольным фильтром, который будет служить в качестве трубы выхода газовой смеси воздуха. Затем запечатай его силиконом.

Впоследствии просверлите плотное отверстие диаметром четыре миллиметра в центре стены. Вставьте короткую настойную трубку, которая соединена при многообразии с вращающимся мужским замком приманки. Подключите его к газоаанализу и запечатай с силиконом.

Затем поместите цифровой термометр в герметичную камеру. Под капотом лабораторного экстрактора наймите анестезиатичную схему машины для переключения газовой линии закиси азота на углекислый газ. Вставьте нагретый увлажнитель в трубу между обезболивающей машиной и герметичной камерой, чтобы согреть смесь потока газа примерно до 37 градусов по Цельсию.

Подключите герметичную камеру с зеленой отмеченной гофрированной трубкой в настраиваемую анестезиальную схему машины. Затем поместите герметичную камеру на горячую пластину, установленную до 37 градусов по Цельсию. Поместите шесть хорошо пластины, содержащие человека альвеолярных эпителиальных клеток в герметичной камере и запечатать крышку.

Регулировать скорость потока газа, чтобы быстро получить 5% CO2. Затем откройте галогенированный испаритель агента и отрегулируйте желаемый процент. Как только целевые значения будут достигнуты, уменьшите скорость потока свежего газа до одного литра в минуту.

Герметичная камера может поддерживаться с такой скоростью потока газа до тех пор, как это необходимо для эксперимента. Курсы концентрации севофлюрана и изофлюрана в среде были схожи с течением времени. Сразу же после того, как была установлена необходимая концентрация галогенированного агента, концентрации возросли в течение первого часа.

Затем было достигнуто плато, которое сохранялось до тех пор, пока не было остановлено управление галогенированным агентом. После перерыва в работе администрации концентрация снизилась в течение одного часа. Здесь показаны фракции галогенного агента с течением времени в герметичной камере, измеренной газоаанализатором.

Эта процедура является относительно недорогим и очень легко принять, даже если исследователи никогда не манипулировали герметичной камере раньше. После этой процедуры, другие методы, такие как белок и РНК количественной оценки, иммунофторесценции, измерения проницаемости белка и свободного транспорта могут быть выполнены для того, чтобы ответить на вопросы о конкретных последствиях галогенных агентов во время эпителиальной травмы легких и его разрешения. После его развития, этот метод может проложить путь для исследований в области острого респираторного дистресс-синдрома для дальнейшего изучения механизма, участвующих в эпителиальной травмы легких во время ОРДС и для тестирования новых методов лечения.