In Vitro Méthode de contrôle des Concentrations de gaz halogénés en cellules épithéliales alvéolaires

Cette méthode peut aider à répondre à la question clé dans le domaine de la recherche sur les lésions pulmonaires et la réparation, comme l’essai de l’adjonction halogène comme thérapies novatrices potentielles pour le syndrome de détresse respiratoire aiguë. Le principal avantage de cette technique est qu’elle repose sur une méthode très simple pour la culture des cellules et les exposer à des agents halogènes afin d’atteindre des concentrations précises et contrôlées. Pour construire la chambre hermétique, utilisez une boîte hermétique en polypropylène d’une capacité de 6,5 litres.

Percer un trou de 2,5 centimètres de diamètre sur le côté inférieur de la paroi latérale de la boîte. Insérez ensuite un tube ondulé avec une marque verte qui servira de tuyau d’entrée de mélange d’air gazeux. Et scellez-le avec du silicone.

Ensuite, percer un deuxième trou avec un diamètre de 2,5 centimètres sur le côté supérieur de la paroi latérale opposée. Insérez un autre tube ondulé avec une marque rouge et connectez-le avec un filtre à charbon de bois qui servira de tuyau de sortie du mélange d’air gazeux. Ensuite, scellez-le avec du silicone.

Percez ensuite un trou serré d’un diamètre de quatre millimètres au centre du mur. Insérez le tube à perfusion courte qui est relié à un collecteur avec une serrure de leurre mâle rotatif. Branchez-le à un analyseur de gaz et scellez-le avec du silicone.

Placez ensuite un thermomètre numérique à l’intérieur de la chambre hermétique. Sous un capot extracteur de laboratoire, personnalisez un circuit de machine anesthésique pour changer la ligne de gaz d’oxyde nitreux par le dioxyde de carbone. Insérez un humidificateur chauffé dans le tuyau entre la machine anesthésique et la chambre hermétique pour réchauffer le mélange de débit de gaz à environ 37 degrés Celsius.

Branchez la chambre hermétique avec le tube ondulé vert marqué dans le circuit personnalisé de machine anesthésique. Ensuite, placez la chambre hermétique sur une plaque chauffante fixée à 37 degrés Celsius. Placer une plaque de six puits contenant des cellules épithéliales alvéolaires humaines dans la chambre hermétique et sceller le couvercle.

Réguler le débit de gaz pour obtenir rapidement 5% de CO2. Ouvrez ensuite l’évaporateur d’agent halogène et ajustez le pourcentage désiré. Une fois que les valeurs cibles sont atteintes, réduisez le débit de gaz frais à un litre par minute.

La chambre hermétique peut être maintenue avec ce débit de gaz aussi longtemps que nécessaire pour l’expérience. Les cours des concentrations de sevoflurane et d’isoflurane dans le milieu étaient semblables au fil du temps. Immédiatement après que la concentration requise d’agent halogène a été réglée, les concentrations ont augmenté au cours de la première heure.

Un plateau a alors été atteint qui a persisté jusqu’à ce que l’administration de l’agent halogène ait été arrêtée. Après interruption de l’administration, les concentrations ont diminué en moins d’une heure. On y voit les fractions d’agent halogène au fil du temps dans la chambre hermétique mesurée par l’analyseur de gaz.

Cette procédure est relativement peu coûteuse et très facile à adopter même lorsque les chercheurs n’ont jamais manipulé une chambre hermétique auparavant. Suite à cette procédure, d’autres méthodes comme la quantification des protéines et de l’ARN, l’immunofluorescence, la mesure de la perméabilité des protéines et le transport gratuit peuvent être effectuées afin de répondre aux questions sur les effets spécifiques des agents halogènes pendant les lésions pulmonaires épithéliales et sa résolution. Après son développement, cette technique peut ouvrir la voie à la recherche dans le domaine du syndrome de détresse respiratoire aiguë pour étudier davantage le mécanisme impliqué dans les lésions pulmonaires épithéliales pendant ards et pour tester de nouvelles thérapies.