저자는 그들의 귀중 한 도움과 편집이이 원고에 대 한 앤디 Poczobutt와 박사 파주시 조리 Leszczynski 감사 하고자 합니다.  국가 심 혼, 폐 및 혈액 연구소 (NHLBI RO1 HL078929, PPG HL014985 RO3 HL095439) 및 학과의 재향 군인의 업무 (가치 평가)에서 받은 보조금으로 지원.

관심과 동물 (쥐)의 사용에 대 한 모든 해당 국제, 국가, 또는 기관 지침이이 원고에 설명 된 실험에 따라 했다.
이 방법은 사용 FVBN 성인 쥐, 세 16-20 주,이 연구의 목적에 대 한 수를 발견. 1 일 1-5 단계를 포함 하 고 하루 2 단계 6-7 (그림 1)을 포함.
1. 장비 준비
<ol><li>(권장)으로 케 타 민/xylazine는 마 취약으로 사용 하는 경우 멸 균, 일회용 주사기와 바늘의 충분 한 공급을 보호 합니다. Isoflurane 마 취로 사용 하는 경우 산소 탱크와는 시작 하기 전에 실험에 대 한 적절 한 공급 되도록 isoflurane의 유체 레벨을 확인 하십시오. 또한, 호흡 회로 nosecone 모이고 유도 상자; 연결 호흡 회로에 새로운 목탄 용기를 연결. 산소 설정 하 고 2 단계 약 50 psi를 읽고 확인 하 여 유도 상자를 준비 합니다.</li>
	<li>37 ° c가 열 패드 설정</li>
	<li>수술에 대 한 직장 온도 프로브를 준비 합니다.</li>
</ol>2. 마우스 준비
이 단계는 마 취, 탈모, 및 위치 (성인 FVBN 쥐 나이 16-20 주)를 포함 합니다.
<ol><li>쥐의 무게 고 무게를 기록 합니다.</li>
	<li>쥐 anesthetize<ol>
<li>마 취 제와 xylazine IP 관리 (80-100 mg/kg 및 7.5-16 mg/kg, 각각). 그러나, 그것 마 취 제와 xylazine의 더 낮은 복용량으로 시작 하는 것이 좋습니다 (30mg/kg 및 6 mg/kg에 대 한 각각).</li>
		<li>약 0.1와 마 취 유지-0.25 시간 초기 수술 내내 마 취 제/xylazine의 복용량. 마 취 제와 xylazine 더 재현성 및 생존 관찰 했다이 특별 한 연구에 있는 선택의 마 취 에이전트 했다. 다른 연구에서 선택의 마 취 에이전트 다를 수 있습니다.  Isoflurane 사용 하는 경우 마우스 유도 챔버에 넣고 5 %isoflurane 마우스 지 면 완전 한 의식 때까지 설정. 다음 절차의 나머지 부분에 걸쳐 1.5-2.5 %isoflurane 설정 비 nosecone를 사용 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>모든 2-3 분 발가락 핀치 마 취의 적절 한 깊이를 확인 하 여 쥐를 모니터링 합니다.</li>
	<li>마우스의 복 부 목 부분을 면도.</li>
	<li>따뜻한 패드에 부정사 위치에 마우스를 놓습니다. 발 및 테이프로 수술 표면에 마우스의 발을 보호 합니다.</li>
	<li>수술 하는 동안 밖으로 건조를 방지 하기 위해 눈에 인공 눈물 연 고를 배치 합니다.</li>
</ol>3. 수술 정보
<ol><li>경 정 맥 이상 오른쪽 복 부 목에 1 cm 절 개를 하 게.</li>
	<li>혈관 확장을 촉진 하 고 통증 관리에 대 한 절 개 면에 하나 또는 두 방울 lidocaine (1-2%)를 적용 합니다. 적용 lidocaine에 대 일 분 기다립니다.</li>
	<li>노출 하 고 무딘 절 개를 통해 바로 내부 경 정 맥 혈관을 분리. 정 맥에서 4-0 봉합과 고 부드럽게 한 hemostat로 선박의 rostral 끝을 철회. 좋은 위, 아래 또는 넥타이, 꼬리 약 3 m m를 사용 하 여 정 맥의 직경을 통해 약 절반, 구멍을 잘라.</li>
	<li>태양광 발전-1 폴 리 비닐 카 테 터 끝에서 1.5 c m을 mark 선박 확장기를 사용 하 여 구멍을 통해 경 정 맥에 삽입 하 고 선박, 약 1.5 cm의 꼬리 끝 쪽으로 카 테 터를 스레드.</li>
	<li>4-0 실크 (컷), 아래 그릇의 꼬리 부분 내에서 안전 하 게 카 테 터를 묶어. Rostral 부분의 봉합 단계 3.3에서에서 rostral 경 정 맥을 연결 하는 데 사용 했다의 느슨한 끝을 가진 카 테 터의 외부에 선박을 묶어.</li>
	<li>느슨하게 압정 피부 체온의 손실과 조직의 건조를 방지 하는 4-0 실크로 테 주위 함께 다시.</li>
	<li>테 heparinized 염 (10 U/mL)를 포함 하는 주사기를 연결 하 고 카 테 터를 플러시.</li>
</ol>4입니다. 주사
<ol><li>경 정 맥 카 테 터, 다음 라인을 플러시 heparinized 염 분의 작은 볼륨으로 에반스 블루 솔루션 (0.9% 정상, unheparinized 염 분, 또는 약 50 mg/kg에 30 mg/mL 해결책의 50 μ)을 주사.</li>
	<li>2 분 후, 물질 P (0.9% 정상, unheparinized 염 분, 또는 1 nmol/kg에서 0.3 μ M 솔루션의 100 μ), 뒤에 라인을 플러시 heparinized 염 분의 작은 볼륨을 주입. 물질 P는 내 피 레이어; 통해 플라스마 단백질의 넘쳐 흐름을 증대 시킵니다. 이 프로토콜에서 그것은 일상적으로 쉽게 플라즈마 넘쳐 흐름 값을 측정 하는 약 1.5-fold의 플라즈마 넘쳐 흐름 값의 확대를 유도 합니다.</li>
	<li>물질 P 주입 후 18 분을 기다립니다. 이 기간 동안, 에반스 블루 염료 equilibrate 하 고 순환.</li>
	<li>자 궁 경부 전위와 마우스를 희생 하 여 물질 P (에반스 블루 주사 후 20 분)의 주사 후 18 분 실험을 종료 합니다. 그것은 가능성이 그 마우스 수 직접 cervically 탈 구, 첫 주는 취의 과다 복용 하지 않고 마우스는 아마 아직도 잘 마 취 수술에서. 그러나, 그것은 필요한 경우, 마 취약 케 타 민/xylazine, isoflurane, 또는 pentobarbital 과다 주어진 수 있습니다, 뒤에 자 궁 경관 탈 구.</li>
</ol>5입니다. 장기 절연
<ol><li>오픈 마우스의 흉 고 중력-perfuse (약 51 ㎝ 또는 20"의 높이)에서 심장 및 혈관 50mm 나트륨 시트르산, 산도 3.5의 50 mL와 함께. pH 3.5 아마도 에반스 블루 바인딩 알 부 민을 유지합니다.</li>
	<li>1-5 관련 기관 (조직) (예: 방광, 신장, 위, 간, 췌 장, 근 위 또는 원심 결 장, 회장, 십이지 장, 측면 피부, 귀, 꼬리, 심장, 또는 폐) 해 메스와 excise 고 경우 잔여 내용이 제거 현재.</li>
	<li>실 온 (RT) 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS; 나2HPO4, KH2PO4, 8.0 g의 0.24 g의 NaCl, 1.44 g와 0.20 g 1 L, pH 7.4에에서 KCl의)에서 장기를 씻어.</li>
	<li>오 점 조직으로 장기, 각 기관 반으로 자르고 각 절반 무게 (젖은 중량 g에서).</li>
	<li>1 개를 말리십시오 호, 48 h에 150 ° C에서 건조 오븐에서 조직의 절반.</li>
	<li>장소는 microfuge에 formamide의 일관 된 볼륨 (최대 200 µ L)에서 절반 관 48 h에 대 한 (그리고 72 h까지) 다른 조직 에반스 블루를 추출.</li>
</ol>6입니다. 조직 OD의 측정
<ol><li>폴리스 티 렌 96 잘 접시의 한 잘에 microfuge 관 및 장소에서 에반스 블루 생긴 formamide (후 48-72 h RT 외피)의 50 µ L을 제거 합니다. 수는 formamide 함께 조직 조각을 전송 하지 않도록 주의 하십시오.</li>
	<li>공백에 대 한 96 잘 접시의 두 빈 우물의 각 새로운, 순수한 formamide의 장소 50 µ L.</li>
	<li>측정 하 고 흡 광도 플레이트 리더에 96 잘 접시의 각의 OD620 기록. 620 nm에서 흡 광도 에반스 블루의 최대.</li>
</ol>7입니다. 플라즈마 넘쳐 흐름의 계산
<ol><li>건조 조직 무게 절반 48 h에 대 한 오븐에 왔다.</li>
	<li>특정 기관에서 각 개별 마우스,이 직물의 젖은 무게 반 시작 (5.4에서 얻은 단계), 관심의 절반이 같은 조직의 건조 중량으로 나눈 값 (7.1에서 얻은 단계)에 대 한 젖은 무게/건조 중량 비율을 계산 합니다.</li>
	<li>그것 전에 절반 젖은 여 formamide (단계 5.4에서에서 얻은)에 배치 했다 조직의 젖은 무게를 나누어 절반 formamide는 건조 중량 (g) 조직의 계산: 건조 중량 비율 (단계 7.2에서에서 계산)의 특정 기관에 대 한.</li>
	<li>OD620 수정 값을 계산 합니다. OD620 부터 (에반스 블루 주입 formamide 단계 6.3에서에서 얻은 각 조직에서를 포함 하는) 96 잘 접시의 각 실험 우물에서 값 빼기 빈 잘 OD620 값 (평균 OD620 의 가치 준비 단계 6.2에서 순수한 formamide를 포함 하는 두 개의 우물620 값 단계 6.3에서에서 얻은 세) 각 실험 값에서.</li>
	<li>계산 플라즈마 넘쳐 흐름 값 수정된 OD620 (에서 계산된 단계 7.4) 조직의 건조 중량으로 나누어 절반 formamide (에서 계산된 단계 7.3). 플라즈마 넘쳐 흐름의 단위 OD620/g 건조 중량을 될 것입니다.</li>
	<li>데이터를 분석 하 고 평균 ± SEM. 통계 t 시험 또는 단방향 분산 분석 고 있어의 다중 비교 테스트 (lycofs01.lycoming.edu), 적절 한 그룹을 비교 하는 표현.</li>
</ol>

<ol>
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저자는 공개 없다.

위에서 설명 했 듯이, 플라즈마 넘쳐 흐름의 연구의 원인에 관한 새로운 지식 또는 억제 또는 플라즈마 넘쳐 흐름을 치료 하는 새로운 방법에 궁극적으로 이어질 수 있습니다. 현재 원고에서 플라즈마 넘쳐 흐름 프로토콜 (위)의 성공적인 사용 입증 되었습니다 에반스 파란색 염료를 사용 하 여. 표시 된 데이터를 다시 있지만 NEP는 맥 관 구조를 보호 수 있습니다 가설 플라즈마 넘쳐 흐름에 대 한 이것은 보조 목표 현재,와 함께 기본 목표에 대 한 평균 실험실에서 쉽게 사용할 수 있는 최적화 된 프로토콜을 제시 되는 플라즈마 넘쳐 흐름의 미래 연구입니다. 여기 보고 프로토콜 다른 목표, 동물, 기관, 및 다른 조건, 미래 연구에 적응성에 초점을 맞추고 특히 유용 하기 때문에이 프로토콜은 사용 하 여 단순, 신뢰성, 경제적, 그리고 고려는 일반 일반적인 재료, 시 약, 및 유능한 직원의 가용성. 그러나 그것은 지적 이다,,이 프로토콜 그룹 동물 (8-12 반복 제안)의 당 반복의 공정한 금액을 요구할 것 이다 통계적으로 유효한 결과를 얻을.
수많은 연구와 혈관 침투성 및 플라즈마 넘쳐 흐름을 측정 하는 시도 자세히 보고 되었습니다. 지금까지, 대부분의 이러한 보고서의 세부 조사 플라즈마 넘쳐 흐름, 혈관 침투성2,3,6,11, 를 에반스 블루 염료 메서드와 함께 사용 되는 방법의 순열 12,13. 모든3,13,15,의24; 블루 에반스를 통합 하지 혈관 침투성 방법 적은 보고 왔다 이러한 다른 방법은 일반 평균 실험실에 대 한 액세스 요구 하는 복잡 한 방법, 전문된 장비 및 인력에 있고 일반적으로 비싸다.
위의 블루 에반스 프로토콜의 개발 참여의 많은 다른 순열을 수정 테스트. 초기 실험은 에반스 블루 마우스 꼬리 정 맥을 통해 주입 하는 시도에 집중 되었다. 그러나, 정 맥 주사 증명 기술적으로 도전적이 고 일관성 없는 결과, 경 정 맥 주사의 포함을 필요로 결과 및 위에서 설명한 터미널 수술 기법 꼬리. 많은 예비 실험 했다 또한 완료 하려고 블루와 물질 P. 에반스의 적절 한 농도 찾을 에반스 블루의 정확한 금액으로 약 200 mg/kg (50 mg/kg 현재 사용에 비해), 아래만이 실험에 사용 되는 물질 P 양의 중요 한 긴급, 수를 찾을 수 없습니다. 많은 실험 후에 1 nmole/kg 것 추가 물질 P, 1.5-fold 확대의 (그리고 따라서 더 쉽게 측정)의 이상적인 농도 이기 위하여 찾아냈다 플라즈마 넘쳐 흐름 값. 또한, 그것은 에반스 블루 equilibrate에 대 한 충분 한 시간을 허용 되어야 한다 발견 (> 10 분). 마우스의 하지만 기관 격리, 이전 희생 후 초과 에반스 블루를 제거 하는 혈관의 관류가 관류 단계4를 포함 하지 않는 다른 프로토콜 반대 현재 프로토콜의 필수 요소가 될 발견 됐다. Perfusate (부드러운 중력 기온 변화도 의해 전달)은 산도 3.5 솔루션 (에반스 블루 및 알 부 민 바인딩을 장려);의 50 mL paraformaldehyde, 많은 다른 에반스 블루 프로토콜6,10,25일에 현재 프로토콜에서 생략 됩니다. 이 프로토콜에서 해결 되었습니다 다른 요인은 doxycycline 차에 사용 되는 염료 영양 트랙에서 조직에 에반스 블루의 OD620 nm 측정 방해입니다. 따라서, 위의 실험에 undyed doxycycline 차를 사용 해야 했다. 또한, 중요 하 고 유용한 찾기 마우스의 거의 모든 장기는 만족 스럽게 격리 하 고 현재 프로토콜을 통해 검사 이다.

장기에 혈관 누출 넘쳐 흐름, 참조 또는 누설의 피에서 생산 하는 격차를 통해 혈장의 장기에 모 세관 venules 게시. 이 플라즈마 넘쳐 흐름 또는 증가 혈관 침투성, 선 동적인 응답의 어떤 종류에서 발생할 수 있는 중대 한 결과 있을 수 있습니다. 따라서, 그것은이 현상, 그, 변조기, 원인과 결과, 공부 하 고, 이해는 하 고 마찬가지로, 그 수 사관 좋은 도구 고 프로토콜 들을 공부 하는. 내 피 간격 다양 한 자극을 통해 생성 될 수 있습니다 하지만 일반적으로 endothelia에 tachykinins 펩 티 드 신경 전달 물질의 작용에 의해 생산 됩니다. Undecapeptide tachykinin neuropeptide, 물질 P1증가 플라즈마 넘쳐 흐름에서 결과,이 과정의 주요 자연적 중재자 중 하나입니다.
에반스 블루 염료의 알 부 민-바인딩 속성을 사용 하 여 조사 하 고 혈관 침투성 또는 플라즈마 넘쳐 흐름, 측정 방법 개발 되었습니다, 그리고 일반적으로 그들의 정확도, 단순, 경제, 안전, 그리고 허용 하는 기능에 대 한 알려져 있다는 플라즈마 넘쳐 흐름 여러 조직에서 한 번에 결정 그렇다면 원하는2,3,,45,6,,78,9 . FVBN 쥐의 장기에서 플라즈마 넘쳐 흐름을 평가 하기 위한이 에반스 블루 프로토콜, 사용 하지만 일반적으로 유용 하 고 적응력이 미래 연구를 실시 하 고 또는 평균 실험실을 포함 하는 몇 가지 중요 한 수정 추가 플라즈마 넘쳐 흐름 또는 혈관 침투성와 관련 된 요인의 중요 한 연구를 실시 합니다. 이 프로토콜에서 물질 P 1 nmol/kg, 1.5-fold에 의해 플라즈마의 넘쳐 흐름을 증대는에 쥐에 소개 된다. 이 프로토콜, 더 쉽게 관찰 하 고 얻을 수 있는 결과에 결과의 감도 증가 합니다. 침투성, 다양 한 다른 펩 티 드, 화학, 등 어떤 형태의 독성 부상에 영향을 주는 다른 요인 또는 사용 수 있습니다 원하는 대로 다른 실험실에 의해 공부. 경 정 맥 주사는 터미널 수술을 요하는 에반스 블루와 물질 P를 체계적으로, 소개 하는 것이 프로토콜에 사용 됩니다. 그러나, 경 정 맥 주사5,7,10을 필요한 터미널 수술 기법의 고려 사항 후에는 쉽게 마스터 하 고 다른 사람 보다 더 일관 된 결과의 생산으로 이어질 꼬리를 포함 하 여 정 맥 주사, 주사4,9정 맥. 복고풍 궤도 정 맥 공동 주사에 의해 배달 될 블루 에반스에 대 한 수 있습니다, 비록 문학에서 참조가 없습니다 발견 되었습니다 에반스 블루의 납품의이 메서드를 사용 하는. 그러나, 꼬리 정 맥 주사에 대해서 높은 수준의 전문성과 reproducibly 크게이 기술을 마스터 하는 것 성공적인 에반스 블루 주사에 대 한 그것의 사용을 제한 합니다. 반면, 대체 경 정 맥 주입 방법 우리의 프로토콜에 설명 된 대로 기술적으로 얻을 수 있는 솔루션을 제공 합니다. 마우스의 혈관의 관류에 대 한 중요 한 절차 수행 직후 에반스 블루 끼얹는다 마우스의 희생 초과 에반스 파란색 염료를 제거 하 고이 프로토콜 표준화 되었습니다. 관류의 앞에서 설명한 방법은 신중 하 게 검사 하 고 되었습니다 현재 절차를 수정. 여기에 설명 된 다른 수정 모두 최적화 하 고, 간단 하 고 저렴 한 있습니다.
에반스 블루 염색 방법의 몇 가지 중요 한 제한이 있습니다. 예를 들어 낮은 감도 가끔이 방법으로 관련 된 몇 가지 추가 총 병 리 학적 및 조직학 검사 조직의 에반스 블루 주입 동물에서 방지할 수 있습니다. 그러나,이 및 다른 제한은 그럼에도 불구 하 고, 여전히 에반스 블루를 사용 하는 모델과 다른 방법의 개발에 이르렀다. 에반스 블루의 측정 형광 (여 보다 시각 범위) 분광학 방법의 감도 증가 시킬 수 있습니다. 또한, 형광 현미경 검사 법 에반스 블루 스테인드 직물의 더 뚜렷한 위치11혈관 누출의 관찰에 대 한 허용 하도록 개발 되었다. 또한, 전체-바디 이미징 및 살아있는 동물의 스캔 이전 에반스 블루12 연속 방식에서 에반스 블루 농도의 조사에 대 한 수와 함께 주입 보다는 실험의 시간을 선택 하는 한 특정 시점. 그러나,이 메서드는 적절 한 영상 시설의 가용성을 필요로 하며 매우 비쌀 수 있습니다. 수정 에반스 블루와 수행 모델의 생체 외에서 종류에 관련 된와 같은 셀에 문화 또는 병아리 chorioallantoic 모델13 (CAM)는 또한 설명. 이러한 모델14 intravital 현미경 검사 법, 형광에 의해 모니터링 됩니다 시간이 지남에, 혈관 침투성 변화의 정량화를 허용 하지만 비보에 조건의 정확한 모델링에 관한 질문을 올릴 수 있고 수도 있습니다. 비싼.
에반스 블루의 관리를 포함 하지 않는 다른 방법을 결정 하 고 계량 혈관 누출 또는 침투성, 개발 되었습니다. 이러한 메서드 (예: 알 부 민 또는 fluorescein), 적절 한 형광 분자 또는 isotopically 레이블 또는 기타 태그 분자, 동물을 살 수를 고용할 수 있습니다 (또는 세포 문화 또는 chorioallantoic (캠)을 모델13, 비-침략 적 이어서 (애완 동물 스캐닝, MRI, intravital 현미경 검사 법, 전신 스캔) 이미징 또는 침략 이미징 (형광 현미경 검사 법)3,,1215. 이러한 기술을 다양 한 장점이 다른 에반스 블루 방법을 제공할 수 있습니다, 하지만 그들은 또한 그들의 상당한 복잡성, 필요한 전문 지식, 자원, 및 높은 금융 비용 포함 될 수 있습니다 있는 불리 있다.
Neprilysin16 (peptidase 효소 NEP, 또한 CD10, MME, 또는 Enkephalinase) 효소 대사와 내 인 성 물질 피의 비활성화를 통해 부분에서 플라즈마 넘쳐 흐름, 적어도 억제에 참여 제안 되었습니다. 따라서, 조직 세포 표면 peptidase NEP 발생 하는, 있을 수 있습니다 아마도 묻힐 peptidase 활동으로 물질 p, 효과의 감쇠
처음에, 우리는 FVBN 야생 타입 (WT)와 NEP 녹아웃 (KO) 마우스 수정된이 에반스 블루 프로토콜을 이용 하 여 물질 P 유도 플라즈마 넘쳐 흐름에 대 한 테스트. 물질 P 증강 플라즈마 넘쳐 흐름에 NEP 참여 이러한 초기 연구에서 의심 되었다 우리는 이것을 설명 하 고 추가 플라즈마 넘쳐 흐름에 관련 된 NEP의 역할 실험. 그러나,이 원고는 하지 NEP 또는 그것의 역할에서 플라즈마 넘쳐 흐름, 오히려 플라즈마 넘쳐 흐름 스스로 실험. NEP 결과이 수정된 프로토콜의 사용을 통해 얻을 수 있는 결과의 종류를 대표 합니다. 플라즈마 넘쳐 흐름을 측정 하는 에반스 블루 메서드 최적화 되었고 수정, FVBN 마우스 아래 자세히 설명 된 대로.

<table><tbody><tr><td>isoflurane</td><td>Vet One</td><td>200-070</td><td>inhaled anesthetic</td></tr><tr><td>ketamine</td><td>Vet One</td><td>200-055</td><td>injectable anesthetic</td></tr><tr><td>xylazine</td><td>Lloyd Laboratories</td><td>139-236</td><td>injectable anesthetic</td></tr><tr><td>syringes (10,3 &amp;amp; 1 cc)</td><td>Becton Dickinson</td><td>309604, 309657, 309659</td><td></td></tr><tr><td>needles (20G1,23G1 &amp;amp; 26G1/2)</td><td>Becton Dickinson</td><td>305178, 305193, 305111</td><td></td></tr><tr><td>isoflurane induction chamber</td><td>VetEquip</td><td>941443</td><td>1 Liter</td></tr><tr><td>nosecone breathing circuits&amp;nbsp;</td><td>VetEquip</td><td>RC2</td><td>Rodent Circuit Controller 2</td></tr><tr><td>oxygen tank</td><td>Airgas</td><td>UN 1072</td><td>100% medical</td></tr><tr><td>heating pad</td><td>CWE Inc.</td><td>TC-1000</td><td>temperature controller</td></tr><tr><td>rectal temperature probe</td><td>CWE Inc.</td><td>10-09012</td><td>mouse</td></tr><tr><td>balance (for rodents)</td><td>Ohaus</td><td>CS 2000</td><td></td></tr><tr><td>surgical tools-scissors</td><td>Fine Science tools</td><td>15000-00</td><td>Vannas Spring scissors 3mm straight blade (cutting vessels)&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>surgical tools-forceps</td><td>Fine Science tools</td><td>11151-10</td><td>Graefe extra fine forceps (isolating mouse vessels)</td></tr><tr><td>surgical tools-hemostats</td><td>Fine Science tools</td><td>13009-12</td><td>Halstead-mosquito hemostats (blunt dissect, hold tissue)</td></tr><tr><td>surgical tools -suture drivers</td><td>Fine Science tools</td><td>12502-12</td><td>Olsen-Hegar suture drivers (suturing)</td></tr><tr><td>surgical tools-forceps</td><td>Fine Science tools</td><td>11627-12</td><td>Adson-Brown alligator forceps (tissue grasping suturing, rat)</td></tr><tr><td>surgical tools-scissors</td><td>Fine Science tools</td><td>14110-15</td><td>Mayo tough cut scissors 15 cm (surgery, dissection, bones, rat)</td></tr><tr><td>surgical tools-forceps</td><td>Fine Science tools</td><td>18025-10</td><td>suture tying forceps (used for Millar cath)</td></tr><tr><td>surgical tools-scissors</td><td>Fine Science tools</td><td>14078-10</td><td>Lexer Baby scissors straight (surgery, mouse)</td></tr><tr><td>surgical tools-forceps</td><td>Fine Science tools</td><td>11254-20</td><td>Dumont #5 fine-tip forceps (rat vessels, dissection)</td></tr><tr><td>surgical tools-scissors</td><td>Fine Science tools</td><td>14082-09</td><td>Dissector scissors 12 mm (surgery, rat mouse)</td></tr><tr><td>surgical tools-forceps</td><td>Fine Science tools</td><td>11051-10</td><td>10 cm Graefe forceps (tissue grasping, rat mouse)</td></tr><tr><td>surgical tools-forceps</td><td>Fine Science tools</td><td>11251-35</td><td>Dumont 5/45 forceps (introducer for vessels)</td></tr><tr><td>surgical tools-retractors</td><td>Fine Science tools</td><td>17012-11</td><td>Weitlaner retractors 2/3 tooth (rat surgical)</td></tr><tr><td>surgical tools-forceps</td><td>Fine Science tools</td><td>11294-00</td><td>Dumont #4 forceps (vessel isolation rats, mice)</td></tr><tr><td>surgical tools-forceps</td><td>Fine Science tools</td><td>11297-00</td><td>Dumont #7 forceps (tissue grasping, dissection)</td></tr><tr><td>surgical tools-scissors</td><td>Fine Science tools</td><td>14058-11</td><td>tough cut iris scissors (mouse dissection, bones)</td></tr><tr><td>surgical tools-forceps</td><td>Fine Science tools</td><td>11009-13</td><td>serrated, curved Semken forceps (tissue grasping, mouse rat)</td></tr><tr><td>surgical tools-hemostats</td><td>Fine Science tools</td><td>13003-10</td><td>Hartman curved hemostats (blunt dissect, hold tissue)</td></tr><tr><td>surgical tools-forceps</td><td>Fine Science tools</td><td>11006-12</td><td>Adson serrated forceps (tissue grasping)</td></tr><tr><td>clippers</td><td>Oster</td><td>A5</td><td></td></tr><tr><td>tape</td><td>Fisherbrand</td><td>159015G</td><td></td></tr><tr><td>artificial tear ointment</td><td>Akorn Inc</td><td>13985-600-03</td><td></td></tr><tr><td>lidocaine</td><td>Hospira</td><td>0409-4277-01</td><td>2% injectable</td></tr><tr><td>polyvinyl catheters</td><td>Tygon</td><td>PV-1</td><td></td></tr><tr><td>Evans blue</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>Substance P</td><td>Bachem&amp;nbsp;</td><td>H-1890</td><td></td></tr><tr><td>heparin</td><td>Sagent Pharmaceuticals</td><td>25201-400-10</td><td>1000 U/ml</td></tr><tr><td>saline solution</td><td>Hospira</td><td>0409-7138-09</td><td>0.9% sodium chloride</td></tr><tr><td>phenobarbital&amp;nbsp;</td><td>Vortech</td><td>0298-9373-68</td><td></td></tr><tr><td>sodium citrate</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP327-1</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4417-50TAB&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes for blotting</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666A</td><td></td></tr><tr><td>formamide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>47670</td><td></td></tr><tr><td>microbalance</td><td>Denver Instrument</td><td>APX-60</td><td></td></tr><tr><td>microfuge tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-534</td><td></td></tr><tr><td>polystyrene 96 well plate</td><td>Becton Dickenson</td><td>351172</td><td></td></tr><tr><td>absorbance plate reader</td><td>BioTek</td><td>Synergy 2</td><td></td></tr><tr><td>polyacrylamide gels</td><td>Bio-Rad</td><td>3450014&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>protein molecular weight standard</td><td>Bio-Rad</td><td>1610374</td><td></td></tr><tr><td>Protran supported nitrocellulose</td><td>Amersham (GE)</td><td>10600015</td><td></td></tr><tr><td>gel box</td><td>Bio-Rad</td><td>1658005</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP152-1</td><td></td></tr><tr><td>Tween20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P-1379</td><td></td></tr><tr><td>sodium chloride</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-1</td><td></td></tr><tr><td>primary NEP polyclonal antibody&amp;nbsp;</td><td>R &amp;amp; D Systems</td><td>AF1182</td><td></td></tr><tr><td>doxycycline chow</td><td>Teklad (HARLAN)</td><td>TD.130750&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>FVB/NJ wild type mice</td><td>Jackson</td><td>001800</td><td></td></tr><tr><td>secondary antibody (goat anti-rabbit)</td><td>ZyMed</td><td>81-6120</td><td></td></tr><tr><td>ECL solution-Western Lightening Plus</td><td>PerkinElmer</td><td>NEL104001EA</td><td></td></tr><tr><td>film</td><td>Pierce</td><td>34091</td><td></td></tr></tbody></table>

an optimized evans blue protocol to assess vascular leak in the mouse

혈관 누출 또는 플라즈마 넘쳐 흐름, 원인, 수 있으며 심각한 결과 또는 염증 반응의 증상이 있을 수 있습니다. 이 연구의 원인에 관한 새로운 지식 또는 억제 또는 플라즈마 넘쳐 흐름을 치료 하는 새로운 방법을 궁극적으로 발생할 수 있습니다. 연구원은 가장 좋은 방법 플라즈마 넘쳐 흐름을 공부에 대 한 사용할 수를 포함 하 여 적절 한 도구는 중요 하다. 이 문서에서 우리는 FVBN 쥐의 장기에서 플라즈마 넘쳐 흐름을 평가 하기 위한 에반스 블루 염색 방법을 사용 하 여 프로토콜을 설명 합니다. 이 프로토콜은 의도적으로 간단를 훌륭한 가능한 정도 하지만 제공 한다 고품질 데이터. 주로 하기 때문에 그것은 쉽게 사용 하 여 평균 실험실 에반스 블루 염료 선정 되었습니다. 우리 효소 neprilysin 플라즈마 넘쳐 흐름에 대 한 맥 관 구조를 보호 수 있습니다 가설에 대 한 증거와 지원을 제공 하기 위해이 프로토콜을 이용 했다. 그러나이 프로토콜을 실험적으로 사용 하 고 쉽게 이해, 예방, 또는 치료에서 중요 한 다른 요소를 포함할 수 있습니다 연구에 대 한 쥐의 다른 긴장에 또는 다른 종에서 많은 다른 장기 또는 조직에서 사용 하기 위해 적응 수 있습니다, 플라즈마 넘쳐 흐름입니다. 이 프로토콜은 광범위 하 게 최적화 및 사용, 경제, 및 재료와 장비,이 프로토콜에 사용 하 여 평균 실험실에 대 한 우수한 만들기의 일반적인 가용성의 용이성 기존 프로토콜과 결합 안정성에서 수정 장기에서 플라즈마 넘쳐 흐름 측정

그림 1, 절차의 회로도 표시는 가장 안정적이 고 일관성 있는 물질 P 유도 플라즈마 넘쳐 흐름 값 FVBN 쥐의 장기에서 발견 되었습니다. 이 절차는 일반적으로 작업, 대기 시간의 적어도 48 h 구분의 2 일 걸립니다. 비교할 모든 실험에 일관 되 게 이렇게 훨씬 더, 밖으로 확산 가능 하다. 예를 들어 장기 주 1 격리 후 장기 수 플래시 액체 질소에서 냉동 고-80 ° C에 저장 (1 주에 몇 일) 이내 장기를 신중 하 게 녹고, 따라 그들은 PBS로 세척 고 프로토콜의 나머지 전에 얼룩이. 또한, 비록 조직의 건조 할 수 명시 (150 ° C에서 48 h에 대 한), 조직의 블루 에반스의 추출 절반 formamide 확장할 수 있습니다에서 48-72, formamide에서 시간은 모든 실험에 대 한 일관 된.
그림 2 및 표 1 에 데이터 설명 FVBN 야생 타입 (WT)와 NEP 녹아웃 (KO) 마우스17, 오 줌 방광에서 물질 P 유도 플라즈마 넘쳐 흐름 표시는이 연구소의 주로 사용할 수 없습니다 했다 NEP 및 레 귤 레이 션과 행동에 선택한 neuropeptides18,19의 오랜 관심사. NEP 코 마우스는 어떤 조직에 NEP를 표현 하지 않습니다. 그러나, NEP WT 쥐의 방광 내 이기는 하지만 낮은 레벨20,,2122에서 표현 된다. 그림 2 및 표 1 에이 두 그룹의 쥐에서 오 줌 방광에서 물질 P 유도 플라즈마 넘쳐 흐름에 차이가 있다 하는 것이 좋습니다. 이 의미는 역할 NEP에 대 한 오 줌 방광에서 물질 P 유도 플라즈마 넘쳐 흐름에 NEP의 표현 WT 및 NEP 코 쥐의 오 줌 방광의 주요 차이 잠재적으로 이후 합니다.
원래 데이터 (그림 2 및 표 1) 방광에 물질 P 유도 플라즈마 넘쳐 흐름에 NEP에 대 한 가능한 역할을 제안, 때문에 우리는 더욱 완벽 하 게 다른에서 플라즈마 넘쳐 흐름에 NEP의 관련을 조사 하기로 오르간입니다. 첫째, 우리가 만든 이중 유전자 변형 마우스 overexpress NEP 거의 보편적으로23. 세 가지 유형의 FVBN 마우스에서 데이터의 비교를 허용 하는이 조작된 마우스: WT 쥐16, 자연스럽 게 많은 조직;에 NEP의 제한 금액을 표현 하는 NEP 코 쥐17, 어떤 조직; 아무 NEP를 표현 하는 그리고 우리의 이중 유전자 변형 NEP overexpressor 마우스23, doxycycline의 관리에 따라 거의 모든 조직에는 overexpress NEP. 마우스 doxycycline 포함에 무료로 액세스할 수 있습니다 (그림 1); 수술 전 1 주 차 doxycycline 복용량은 차 우, 미색의 1 mg/kg 이다. NEP를 overexpress 이러한 이중 유전자 변형 마우스의 건설, NEP 분석 실험, westerns, 및 NEP mRNA 정량23설명 자세한 되었습니다 있다.
쥐의 이러한 3 종류,이 프로토콜 십이지23 (그림 3 및 표 2)를 포함 하 여 조직에서 플라즈마 넘쳐 흐름에 NEP에 대 한 역할을 보여줍니다. 이 실험에서 이중 유전자 변형 NEP overexpressor 마우스에 NEP overexpression 바뀌었고 먹이 의해, 1 주 1, 일 전에 doxycycline 포함 된 차 우에 대 한 (미색; 1 mg doxycycline/mg 차 우, 그림 3을). 컨트롤, 일부 WT 및 NEP 코 마우스 또한 하루 1 (그림 3b 와 3 c) 앞 주 동안 undyed doxycycline 차를 먹이 했다.
플라즈마 넘쳐 흐름에는 십이지에 FVBN 마우스, FVBN WT 및 NEP (이중 유전자 변형)의 십이지에 NEP의 식의 NEP의 역할을 확인 하려면 overexpressor 마우스 doxycycline 차 우를 먹이 polyclonal 항 체에 대 한 서 부 분석에 의해 확인 되었다 인간의 NEP (어떤 마우스 NEP와 cross-reacts)23. 이 분석 확인 WT duodenums 익스프레스 NEP 단백질의 적당 한 양의 하지만 NEP overexpressor duodenums 익스프레스 2-3 배 NEP 양의 WT duodenums에 의해 표현. NEP 코 쥐 정의 십이지 장에서 어떤 NEP를 표현 하지 않습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57037/57037fig1.jpg"> 그림 1: 물질 P 유도 플라즈마 넘쳐 흐름을 측정 하기 위한 프로토콜의 일반적인 스키마. FVBN 쥐 (나이 16-20 주)의 장기에서 물질 P 유도 플라즈마 넘쳐 흐름을 측정 하기 위한 프로토콜의 회로도 이 프로토콜 경 정 맥에 주사를 통해 에반스 블루 염색 방법으로 조직의 플라즈마 넘쳐 흐름의 측정을 포함 하 고 증강 하 고 쉽게 측정 플라즈마 넘쳐 흐름을 깨는 것 관리 물질 P 값, OD620/g 건조 중량의 단위로. 설명된 프로토콜 FVBN 마우스의 다양 한 기관에서 일관 된 물질 P 유도 플라즈마 넘쳐 흐름 값이 발견 되었습니다 그리고 일의 2 일 최소를 걸립니다. 1 일 및 2 일 이상 48 h 건조 하 고 추출 하는 조직에 대 한 대기 시간으로 구분 됩니다. <a href="https://cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/57037/57037fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57037/57037fig2.jpg"> 그림 2 : WT 및 NEP 코 쥐의 오 줌 방광에서 물질 P 유도 플라즈마 넘쳐 흐름. (사전 doxycycline) 없이 FVBN 쥐에서 방광 플라즈마 넘쳐 흐름 물질 P 관리에 의해 증강 하 고 OD620 nm/g 건조 중량으로 표현. 오 줌 방광 FVBN 야생 타입에서 고립 되었다 (WT; 백색 바, n = 12) 또는 FVBN NEP 녹아웃 (KO; 검은 바, n = 7) 마우스 위의 자세한 플라즈마 넘쳐 흐름에 대 한 프로토콜을 대상. 개별 값은 표 1에 주어진 다. 막대 위에 줄 평균 (SEM)의 표준 오차를 나타냅니다. WT 및 NEP 코 값으로 상당한 차이 p 줍니다 = 0.051 t 시험. <a href="https://cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/57037/57037fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57037/57037fig3.jpg"> 그림 3 : WT, NEP 코 및 NEP overexpressor 쥐의 십이지 장에서 물질 P 유도 플라즈마 넘쳐 흐름. (A-C) 십이지 장 플라즈마 넘쳐 흐름 물질 P 관리에 의해 증강 하 고 OD620/g 건조 중량으로 표현. (A) Duodenums 이전 doxycycline 없이 FVBN WT 쥐에서 고립 되었다 (-; 백색 바, n = 5), 사전 doxycycline 없이 NEP 코 쥐 (-; 빛 회색 바, n = 5), 사전 doxycycline 없이 NEP ovexpressor 이중 유전자 변형 마우스 (DT-; 어두운 회색 바, n = 5) 또는 NEP 이전 doxycycline와 ovexpressor 이중 유전자 변형 쥐 (DT +; 바 블랙, n = 4)과 위의 자세한 플라즈마 넘쳐 흐름에 대 한 프로토콜을 대상. 막대 위의 라인 대표는 SEM. NEP 코 (-) 값 동향 WT (-) 또는 DT (-) 값을 보다 높은 있지만이 차이가 통계적으로 중요 한 되지 않았습니다. 십이지 장 플라즈마 넘쳐 흐름 값 doxycycline 먹이, NEP ovexpressor 이중 유전자 변형 마우스 (DT +), 모든 다른 사람에 비해 그룹과 크게 감소 했다 (* p < 0.05, 분산 분석). (B, C) WT 및 NEP 코 쥐에서 십이지 장 플라즈마 넘쳐 흐름 값은 크게 영향을 받지 않습니다 doxycycline 관리 (p < 0.05). (B) WT 쥐 doxycycline 없이 (WT-; 백색 바, n = 5)와 아목시실린과와 WT 쥐 (WT +; 중간 회색 바, n = 7). Doxycycline 없이 (C) NEP 코 쥐 (코-; 빛 회색 바, n = 5) 및 NEP doxycycline와 코 (코 +; 중간 회색 바, n = 2). 개별 값을 B, C, 표 2에 주어진 a에서 합성으로 표시 합니다. 스프링 거 과학 + 비즈니스 미디어 허가 스프링 거 저널 제23 에서 사소한 수정 재현. <a href="https://cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/57037/57037fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>유전자 형</td>
			<td>섹스</td>
			<td>습식/건식 방광의 무게 비율</td>
			<td>방광의 무게를 절반 젖은 (g; 85 μ formamide)</td>
			<td>반 오 줌 방광의 건조 중량을 계산 (g)</td>
			<td>OD 620 nm-빈</td>
			<td>OD 620 nm/g 건조 중량 (오 줌 방광)</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT</td>
			<td>F</td>
			<td>4.737</td>
			<td>0.0038</td>
			<td>0.0008</td>
			<td>0.0150</td>
			<td>18.750</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT</td>
			<td>M</td>
			<td>4.632</td>
			<td>0.0045</td>
			<td>0.0010</td>
			<td>0.0100</td>
			<td>10.000</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT</td>
			<td>F</td>
			<td>4.700</td>
			<td>0.0048</td>
			<td>0.0010</td>
			<td>0.0280</td>
			<td>28.000</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT</td>
			<td>F</td>
			<td>4.625</td>
			<td>0.0068</td>
			<td>0.0015</td>
			<td>0.0230</td>
			<td>15.333</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT</td>
			<td>F</td>
			<td>4.546</td>
			<td>0.0077</td>
			<td>0.0017</td>
			<td>0.0400</td>
			<td>23.529</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT</td>
			<td>M</td>
			<td>4.800</td>
			<td>0.0094</td>
			<td>0.0020</td>
			<td>0.0570</td>
			<td>28.500</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT</td>
			<td>M</td>
			<td>5.500</td>
			<td>0.0095</td>
			<td>0.0017</td>
			<td>0.0240</td>
			<td>14.118</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT</td>
			<td>F</td>
			<td>4.316</td>
			<td>0.0098</td>
			<td>0.0023</td>
			<td>0.0660</td>
			<td>28.696</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT</td>
			<td>M</td>
			<td>5.061</td>
			<td>0.0121</td>
			<td>0.0024</td>
			<td>0.0400</td>
			<td>16.667</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT</td>
			<td>M</td>
			<td>5.061</td>
			<td>0.0192</td>
			<td>0.0038</td>
			<td>0.0330</td>
			<td>8.684</td>
		</tr>
<tr>
<td>SEM을 (위의 열에서 항목) + 의미</td>
			<td></td>
			<td>0.105 + 4.798</td>
			<td>0.0014 + 0.0088</td>
			<td>0.0003 + 0.0018</td>
			<td>0.0056 + 0.0336</td>
			<td>2.393 + 19.228</td>
		</tr>
<tr>
<td>코</td>
			<td>M</td>
			<td>4.316</td>
			<td>0.0196</td>
			<td>0.0045</td>
			<td>0.1610</td>
			<td>35.778</td>
		</tr>
<tr>
<td>코</td>
			<td>M</td>
			<td>4.600</td>
			<td>0.0134</td>
			<td>0.0029</td>
			<td>0.1020</td>
			<td>35.172</td>
		</tr>
<tr>
<td>코</td>
			<td>M</td>
			<td>4.377</td>
			<td>0.0104</td>
			<td>0.0024</td>
			<td>0.0410</td>
			<td>17.083</td>
		</tr>
<tr>
<td>코</td>
			<td>M</td>
			<td>4.727</td>
			<td>0.0258</td>
			<td>0.0055</td>
			<td>0.1410</td>
			<td>25.636</td>
		</tr>
<tr>
<td>코</td>
			<td>F</td>
			<td>4.539</td>
			<td>0.0025</td>
			<td>0.0006</td>
			<td>0.0250</td>
			<td>41.667</td>
		</tr>
<tr>
<td>코</td>
			<td>M</td>
			<td>4.457</td>
			<td>0.0149</td>
			<td>0.0033</td>
			<td>0.1420</td>
			<td>43.030</td>
		</tr>
<tr>
<td>SEM을 (위의 열에서 항목) + 의미</td>
			<td></td>
			<td>0.062 + 4.503</td>
			<td>0.0032 + 0.0144</td>
			<td>0.0032 0.0007 +</td>
			<td>0.0233 + 0.1020</td>
			<td>4.065 + 33.061</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1: 개별 WT 및 NEP 코 쥐의 오 줌 방광에서 물질 P 유도 플라즈마 넘쳐 흐름. FVBN 쥐 (없이 사전 doxycycline)에서 플라즈마 넘쳐 흐름 값 FVBN WT에서 OD620 nm/g 건조 중량으로 개별적으로 표현 되었다 (n = 12) 또는 NEP 코 (n = 7) 마우스 위의 자세한 플라즈마 넘쳐 흐름에 대 한 프로토콜을 대상. 성별 차이가 플라즈마 넘쳐 흐름 값에서 분명 했다. 오 줌 방광 했다 격리; 개별 값은 방광, 방광의 젖은 무게의 계산된 습식/건식 무게 비율에 대 한 formamide에 절반, 계산 자체 무게는 방광의 formamide (에 주어진된 g), 수정 된 OD620 nm (샘플 OD620 nm에 절반 meanOD620 nmof 마이너스 공백 (순수 formamide), 및 OD620 nm/g에서 계산 된 플라즈마 넘쳐 흐름 값 건조 무게 (는 수정된 OD620 nm, 계산 된 건조 중량으로 나눈 값). 결과 플라즈마 넘쳐 흐름 값은 그림 2를 만드는 데 사용 되었다.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>유전자 형 및 doxycycline 차 우, (-) 없이 또는 (+)</td>
			<td>섹스</td>
			<td>습식/건식 십이지의 무게 비율</td>
			<td>십이지의 무게를 절반 젖은 (g; 85 μ formamide)</td>
			<td>십이지의 건조 중량을 절반 계산 (g)</td>
			<td>OD 620 nm-빈</td>
			<td>OD620 nm/g 건조 중량 (십이지 장)</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT-</td>
			<td>M</td>
			<td>4.927</td>
			<td>0.0307</td>
			<td>0.0062</td>
			<td>0.0640</td>
			<td>10.272</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT-</td>
			<td>F</td>
			<td>4.912</td>
			<td>0.0172</td>
			<td>0.0035</td>
			<td>0.0460</td>
			<td>13.138</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT-</td>
			<td>M</td>
			<td>5.333</td>
			<td>0.0281</td>
			<td>0.0053</td>
			<td>0.0960</td>
			<td>18.221</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT-</td>
			<td>F</td>
			<td>5.433</td>
			<td>0.0375</td>
			<td>0.0069</td>
			<td>0.1010</td>
			<td>14.634</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT-</td>
			<td>M</td>
			<td>5.179</td>
			<td>0.0287</td>
			<td>0.0055</td>
			<td>0.0430</td>
			<td>7.759</td>
		</tr>
<tr>
<td>SEM을 (위의 열에서 항목) + 의미</td>
			<td></td>
			<td>5.157 0.105 +</td>
			<td>0.0033 + 0.0284</td>
			<td>0.0055 0.0006 +</td>
			<td>0.0122 + 0.0700</td>
			<td>1.798 + 12.805</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT +</td>
			<td>M</td>
			<td>5.342</td>
			<td>0.0542</td>
			<td>0.0101</td>
			<td>0.1520</td>
			<td>14.981</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT +</td>
			<td>M</td>
			<td>5.653</td>
			<td>0.0477</td>
			<td>0.0084</td>
			<td>0.1120</td>
			<td>13.272</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT +</td>
			<td>M</td>
			<td>5.700</td>
			<td>0.0564</td>
			<td>0.0099</td>
			<td>0.1110</td>
			<td>11.218</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT +</td>
			<td>F</td>
			<td>5.542</td>
			<td>0.0498</td>
			<td>0.0090</td>
			<td>0.1430</td>
			<td>15.914</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT +</td>
			<td>F</td>
			<td>5.723</td>
			<td>0.0266</td>
			<td>0.0046</td>
			<td>0.0470</td>
			<td>10.112</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT +</td>
			<td>F</td>
			<td>5.186</td>
			<td>0.0262</td>
			<td>0.0051</td>
			<td>0.0470</td>
			<td>9.304</td>
		</tr>
<tr>
<td>WT +</td>
			<td>M</td>
			<td>5.543</td>
			<td>0.0342</td>
			<td>0.0062</td>
			<td>0.0480</td>
			<td>7.779</td>
		</tr>
<tr>
<td>SEM을 (위의 열에서 항목) + 의미</td>
			<td></td>
			<td>0.075 + 5.527</td>
			<td>0.0049 + 0.0422</td>
			<td>0.0076 0.0009 +</td>
			<td>0.0175 + 0.0943</td>
			<td>1.142 + 11.797</td>
		</tr>
<tr>
<td>KO-</td>
			<td>F</td>
			<td>5.763</td>
			<td>0.0209</td>
			<td>0.0036</td>
			<td>0.0690</td>
			<td>19.025</td>
		</tr>
<tr>
<td>KO-</td>
			<td>M</td>
			<td>4.232</td>
			<td>0.0164</td>
			<td>0.0039</td>
			<td>0.1010</td>
			<td>26.061</td>
		</tr>
<tr>
<td>KO-</td>
			<td>M</td>
			<td>4.810</td>
			<td>0.0227</td>
			<td>0.0047</td>
			<td>0.0880</td>
			<td>18.647</td>
		</tr>
<tr>
<td>KO-</td>
			<td>F</td>
			<td>5.650</td>
			<td>0.0363</td>
			<td>0.0064</td>
			<td>0.0600</td>
			<td>9.339</td>
		</tr>
<tr>
<td>KO-</td>
			<td>M</td>
			<td>5.212</td>
			<td>0.0178</td>
			<td>0.0034</td>
			<td>0.0640</td>
			<td>18.739</td>
		</tr>
<tr>
<td>SEM을 (위의 열에서 항목) + 의미</td>
			<td></td>
			<td>0.282 + 5.133</td>
			<td>0.0035 + 0.0228</td>
			<td>0.0005 + 0.0044</td>
			<td>0.0764 0.0078 +</td>
			<td>2.659 + 18.362</td>
		</tr>
<tr>
<td>코 +</td>
			<td>M</td>
			<td>5.128</td>
			<td>0.0193</td>
			<td>0.0038</td>
			<td>0.0600</td>
			<td>15.941</td>
		</tr>
<tr>
<td>코 +</td>
			<td>M</td>
			<td>5.030</td>
			<td>0.0459</td>
			<td>0.0091</td>
			<td>0.1980</td>
			<td>21.697</td>
		</tr>
<tr>
<td>(위의 열에서 항목)의 범위 + 의미</td>
			<td></td>
			<td>0.049 + 5.079</td>
			<td>0.0133 + 0.0326</td>
			<td>0.0027 ± 0.0065</td>
			<td>0.0690 + 0.1290</td>
			<td>2.878 + 18.819</td>
		</tr>
<tr>
<td>DT-</td>
			<td>M</td>
			<td>5.426</td>
			<td>0.0322</td>
			<td>0.0059</td>
			<td>0.0775</td>
			<td>13.058</td>
		</tr>
<tr>
<td>DT-</td>
			<td>M</td>
			<td>4.255</td>
			<td>0.0360</td>
			<td>0.0085</td>
			<td>0.0895</td>
			<td>10.579</td>
		</tr>
<tr>
<td>DT-</td>
			<td>M</td>
			<td>4.818</td>
			<td>0.0306</td>
			<td>0.0064</td>
			<td>0.1460</td>
			<td>22.989</td>
		</tr>
<tr>
<td>DT-</td>
			<td>M</td>
			<td>5.189</td>
			<td>0.0197</td>
			<td>0.0038</td>
			<td>0.0380</td>
			<td>10.010</td>
		</tr>
<tr>
<td>DT-</td>
			<td>F</td>
			<td>5.500</td>
			<td>0.0256</td>
			<td>0.0047</td>
			<td>0.0390</td>
			<td>8.379</td>
		</tr>
<tr>
<td>SEM을 (위의 열에서 항목) + 의미</td>
			<td></td>
			<td>0.229 + 5.038</td>
			<td>0.0028 + 0.0288</td>
			<td>0.0008 + 0.0059</td>
			<td>0.0780 0.0198 +</td>
			<td>2.3607 + 13.003</td>
		</tr>
<tr>
<td>DT +</td>
			<td>M</td>
			<td>5.008</td>
			<td>0.0694</td>
			<td>0.0139</td>
			<td>0.0270</td>
			<td>1.948</td>
		</tr>
<tr>
<td>DT +</td>
			<td>M</td>
			<td>4.750</td>
			<td>0.0660</td>
			<td>0.0139</td>
			<td>0.0070</td>
			<td>0.504</td>
		</tr>
<tr>
<td>DT +</td>
			<td>M</td>
			<td>5.495</td>
			<td>0.0587</td>
			<td>0.0107</td>
			<td>0.0692</td>
			<td>6.478</td>
		</tr>
<tr>
<td>DT +</td>
			<td>M</td>
			<td>5.233</td>
			<td>0.0542</td>
			<td>0.0104</td>
			<td>0.0620</td>
			<td>5.986</td>
		</tr>
<tr>
<td>SEM을 (위의 열에서 항목) + 의미</td>
			<td></td>
			<td>0.159 + 5.121</td>
			<td>0.0034 + 0.0621</td>
			<td>0.0010 + 0.0122</td>
			<td>0.0147 + 0.0413</td>
			<td>1.478 + 3.729</td>
		</tr>
</tbody></table>표 2: 개별 WT, NEP 코 및 NEP overexpressor 쥐의는 duodenums에서 물질 P 유도 플라즈마 넘쳐 흐름. FVBN 마우스 (또는 사전 doxycycline 없이)에서 플라즈마 넘쳐 흐름 값 FVBN WT 쥐에서 OD620 nm/g 건조 중량으로 개별적으로 표현 되었다 (n 5, 그리고 n = = 7, doxycycline), NEP 코 쥐 (n = 5, 그리고 n = 2, doxycycline), 및 NEP overexpressor 이중 유전자 변형 마우스 (n = 5, 그리고 n = 4, doxycycline). 마우스 위에 설명된대로 플라즈마 넘쳐 흐름에 대 한 프로토콜을 받게 했다. 성별 차이가 플라즈마 넘쳐 흐름 값에서 분명 했다. Duodenums은 격리; 플라즈마 넘쳐 흐름을 계산에 사용 하는 개별 값은 표 1에 설명 된 대로. 결과 플라즈마 넘쳐 흐름 값은 그림 3A-C를 만드는 데 사용 되었다.

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An Optimized Evans Blue Protocol to Assess Vascular Leak in the Mouse

이 문서에는 다른 긴장, 종, 그리고 다른 장기 나 조직에 사용 하기 위해 적용할 수 있는 FVBN 쥐의 장기에서 플라즈마 넘쳐 흐름을 평가 하기 위한 에반스 블루 염료 메서드를 사용 하 여, 최적화 된, 경제적이 고 간단한 프로토콜 설명 합니다.

최적화 된 에반스 블루 마우스에서 혈관 누출을 평가 하는 프로토콜

Vascular leak, or plasma extravasation, has a number of causes, and may be a serious consequence or symptom of an inflammatory response. This study may ...

an-optimized-evans-blue-protocol-to-assess-vascular-leak-in-the-mouse

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

26.3K 조회수.  University of Colorado Denver. 이 문서에는 다른 긴장, 종, 그리고 다른 장기 나 조직에 사용 하기 위해 적용할 수 있는 FVBN 쥐의 장기에서 플라즈마 넘쳐 흐름을 평가 하기 위한 에반스 블루 염료 메서드를 사용 하 여, 최적화 된, 경제적이 고 간단한 프로토콜 설명 합니다.

비디오: An Optimized Evans Blue Protocol to Assess Vascular Leak in the Mouse

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain barrier1. The barrier selectively excludes molecules from crossing between the blood and the brain based upon their size and charge. This function can impede the delivery of therapeutics for neurological disorders. A number of chemotherapeutic drugs, for example, will not effectively cross the blood-brain barrier to reach tumor cells2. Thus, improving the delivery of drugs across the blood-brain barrier is an area of interest.
The most prevalent methods for enhancing the delivery of drugs to the brain are direct cerebral infusion and blood-brain barrier disruption3. Direct intracerebral infusion guarantees that therapies reach the brain; however, this method has a limited ability to disperse the drug4. Blood-brain barrier disruption (BBBD) allows drugs to flow directly from the circulatory system into the brain and thus more effectively reach dispersed tumor cells. Three methods of barrier disruption include osmotic barrier disruption, pharmacological barrier disruption, and focused ultrasound with microbubbles. Osmotic disruption, pioneered by Neuwelt, uses a hypertonic solution of 25% mannitol that dehydrates the cells of the blood-brain barrier causing them to shrink and disrupt their tight junctions. Barrier disruption can also be accomplished pharmacologically with vasoactive compounds such as histamine5 and bradykinin6. This method, however, is selective primarily for the brain-tumor barrier7. Additionally, RMP-7, an analog of the peptide bradykinin, was found to be inferior when compared head-to-head with osmotic BBBD with 25% mannitol8. Another method, focused ultrasound (FUS) in conjunction with microbubble ultrasound contrast agents, has also been shown to reversibly open the blood-brain barrier9. In comparison to FUS, though, 25% mannitol has a longer history of safety in human patients that makes it a proven tool for translational research10-12.
In order to accomplish BBBD, mannitol must be delivered at a high rate directly into the brain's arterial circulation. In humans, an endovascular catheter is guided to the brain where rapid, direct flow can be accomplished. This protocol models human BBBD as closely as possible. Following a cut-down to the bifurcation of the common carotid artery, a catheter is inserted retrograde into the ECA and used to deliver mannitol directly into the internal carotid artery (ICA) circulation. Propofol and N2O anesthesia are used for their ability to maximize the effectiveness of barrier disruption13. If executed properly, this procedure has the ability to safely, effectively, and reversibly open the blood-brain barrier and improve the delivery of drugs that do not ordinarily reach the brain 8,13,14.

Blood-brain barrier disruption aids the delivery of certain drugs to the brain. Mannitol delivered intra-arterially shrinks cells surrounding blood vessels in order to physically disrupt the barrier.

혈액 - 뇌 장벽 장애의 쥐 모델 Neurovascular 치료학 타겟이 분명한 허용하려면

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

연구

의학

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under physiologic conditions the endothelium is impermeable to albumin, so Evans blue bound albumin remains restricted within blood vessels. In pathologic conditions that promote increased vascular permeability endothelial cells partially lose their close contacts and the endothelium becomes permeable to small proteins such as albumin. This condition allows for extravasation of Evans Blue in tissues. A healthy endothelium prevents extravasation of the dye in the neighboring vascularized tissues. Organs with increased permeability will show significantly increased blue coloration compared to organs with intact endothelium. The level of vascular permeability can be assessed by simple visualization or by quantitative measurement of the dye incorporated per milligram of tissue of control versus experimental animal/tissue. Two powerful aspects of this assay are its simplicity and quantitative characteristics. Evans Blue dye can be extracted from tissues by incubating a specific amount of tissue in formamide. Evans Blue absorbance maximum is at 620 nm and absorbance minimum is at 740 nm. By using a standard curve for Evans Blue, optical density measurements can be converted into milligram dye captured per milligram of tissue. Statistical analysis should be used to assess significant differences in vascular permeability.

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

We are presenting an in vivo assay to test blood vessel permeability. This assay is based on intravenous injection of a dye and subsequent visualization of its diffusion into interstitial spaces.

<em&gt; 생체 내</em혈관 투과율을 테스트하려면&gt; 분석

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. Exposure to an allergen in a sensitized individual can result in clinical symptoms that vary from minor erythema to life threatening anaphylaxis. In the laboratory, various animal models have been developed to understand the mechanisms driving allergic responses. Herein, we describe a detailed method for measuring changes in vascular permeability to quantify localized allergic responses. The local anaphylaxis assay was first reported in the 1920s, and has been adapted from the technique published by Kojima et al. in 20071. In this assay, mice sensitized to OVA are challenged in the left ear with vehicle and in the right ear with OVA. This is followed by an intravenous injection of Evans Blue dye. Ten min after injecting Evans Blue, the animal is euthanized and the dye that has extravasated into the ears is extracted overnight in formamide. The absorbance of the extracted dye is then quantified with a spectrophotometer. This method reliably results in a visual and quantifiable manifestation of a local allergic response.

Allergic responses, characterized by the activation of mast cells and basophils, are driven by the cross-linking of IgE and release of proinflammatory mediators. A quantitative assessment of allergic responses can be achieved by using Evans Blue dye to monitor changes in vascular permeability after allergen challenge.

마우스에 현지 아나필락시스 측정

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

면역학 및 감염병학

Using Adeno-associated Virus as a Tool to Study Retinal Barriers in Disease

M&#252;ller cells are the principal glial cells of the retina. Their end-feet form the limits of the retina at the outer and inner limiting membranes (ILM), and in conjunction with astrocytes, pericytes and endothelial cells they establish the blood-retinal barrier (BRB). BRB limits material transport between the bloodstream and the retina while the ILM acts as a basement membrane that defines histologically the border between the retina and the vitreous cavity. Labeling M&#252;ller cells is particularly relevant to study the physical state of the retinal barriers, as these cells are an integral part of the BRB and ILM. Both BRB and ILM are frequently altered in retinal disease and are responsible for disease symptoms.
There are several well-established methods to study the integrity of the BRB, such as the Evans blue assay or fluorescein angiography. However these methods do not provide information on the extent of BRB permeability to larger molecules, in nanometer range. Furthermore, they do not provide information on the state of other retinal barriers such as the ILM. To study BRB permeability alongside retinal ILM, we used an AAV based method that provides information on permeability of BRB to larger molecules while indicating the state of the ILM and extracellular matrix proteins in disease states. Two AAV variants are useful for such study: AAV5 and ShH10. AAV5&#160;has a natural tropism for photoreceptors but it cannot get across to the outer retina when administered into the vitreous when the ILM is intact (i.e., in wild-type retinas). ShH10 has a strong tropism towards glial cells and will selectively label M&#252;ller glia in both healthy and diseased retinas. ShH10 provides more efficient gene delivery in retinas where ILM is compromised. These viral tools coupled with immunohistochemistry and blood-DNA analysis shed light onto the state of retinal barriers in disease.

To investigate the blood-retinal barrier permeability and the inner limiting membrane integrity in animal models of retinal disease, we used several adeno-associated virus (AAV) variants as tools to label retinal neurons and glia. Virus mediated reporter gene expression is then used as an indicator of retinal barrier permeability.

도구로 아데노 관련 바이러스를 사용하여 질병 망막 장벽을 연구하는

M&#252;ller cells are the principal glial cells of the retina. Their end-feet form the limits of the retina at the outer and inner limiting membranes ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent re-oxygenation of the tissues (reperfusion). In the skin, ischemia-reperfusion (IR) is the main contributing factor to the pathophysiology of pressure ulcers. While the cascade of events leading up to the inflammatory response has been well studied, the spatial and temporal responses of the different subsets of immune cells to an IR injury are not well understood. Existing models of IR using the clamping technique on the skin flank are highly invasive and unsuitable for studying immune responses to injury, while similar non-invasive magnet clamping studies in the skin flank are less-than-ideal for intravital imaging studies. In this protocol, we describe a robust model of non-invasive IR developed on mouse ear skin, where we aim to visualize in real-time the cellular response of immune cells after reperfusion via multiphoton intravital imaging (MP-IVM).

This protocol describes the induction of an ischemia-reperfusion (IR) model on mouse ear skin using magnet clamping. Using a custom-built intravital imaging model, we study in vivo inflammatory responses post-reperfusion. The rationale behind the development of this technique is to extend the understanding of how leukocytes respond to skin IR injury.

면역 반응의 생체 내에 다중 광자 이미징을위한 마우스 귀 피부에 유도 허혈 - 재관류 손상

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke involves middle cerebral artery occlusion (MCAO). Infarct zone, brain edema and blood-brain barrier (BBB) breakdown are measured as parameters that reflect the extent of brain injury after MCAO. A significant limitation to this method is that these measurements are normally obtained in different rat brain samples, leading to ethical and financial burdens due to the large number of rats that need to be euthanized for an appropriate sample size. Here we present a method to accurately assess brain injury following MCAO by measuring infarct zone, brain edema and BBB permeability in the same set of rat brains. This novel technique provides a more efficient way to evaluate the pathophysiology of stroke.

This protocol describes a novel technique of measuring the three most important parameters of ischemic brain injury on the same set of rodent brain samples. Using only one brain sample is highly advantageous in terms of ethical and economic costs.

설치류 뇌 샘플의 단일 세트에서 뇌졸중 후 뇌 부종, 경색 영역 및 혈액 뇌 장벽 고장 측정

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...

신경과학

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To properly leverage this greater translatability, there is a need to devise reproducible methods of drawing quantitative data from these images. Optical coherence tomography (OCT) imaging can resolve retinal histology at micrometer resolution and reveal functional differences in vascular blood flow. Here, we delineate noninvasive vascular readouts that we use to characterize pathological damage post vascular insult in an optimized mouse model of retinal vein occlusion (RVO). These readouts include live imaging analysis of retinal morphology, disorganization of retinal inner layers (DRIL) measure of capillary ischemia, and fluorescein angiography measures of retinal edema and vascular density. These techniques correspond directly to those used to examine patients with retinal disease in the clinic. Standardizing these methods enables direct and reproducible comparison of animal models with clinical phenotypes of ophthalmic disease, increasing the translational power of vascular injury models.

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Here, we present three data analysis protocols for fluorescein angiography (FA) and optical coherence tomography (OCT) images in the study of Retinal Vein Occlusion (RVO).

생체 내 재현성 촉진을 위한 마우스 망막의 혈관 손상 판독

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...

A Fluorescence Assay for Evaluating the Permeability of a Cardiac Microvascular Endothelial Barrier in a Rat Model of Ischemia/reperfusion

Revascularization therapies for culprit arteries, regardless of percutaneous coronary intervention and coronary artery bypass grafting, are considered the best strategy for improving the clinical prognosis of patients with acute coronary syndrome (ACS). Nonetheless, myocardial reperfusion following effective revascularization can trigger significant cardiomyocyte death and coronary endothelial collapse, known as myocardial ischemia/reperfusion injury (MIRI). Usually, endothelial cells and their intercellular tight junctions cooperatively maintain the microvascular endothelial barrier and its relatively low permeability but fail in reperfusion areas. 
Microvascular endothelial hyperpermeability induced by ischemia/reperfusion (IR) contributes to myocardial edema, increased infiltration of pro-inflammatory cells, and aggravated intramyocardial hemorrhage, which may worsen the prognosis of ACS. The tracer used in this study-70,000 Da FITC-dextran, a branched glucose molecule labeled by fluorescein isothiocyanate (FITC)-appears too large to infiltrate the cardiac microvascular endothelium in normal conditions. However, it is capable of infiltrating a broken barrier after MIRI. Thus, the higher the endothelial permeability is, the more FITC-dextran accumulates in the extravascular intercellular space. Thus, the intensity of fluorescence from FITC can indicate the permeability of the microvascular endothelial barrier. This protocol takes advantage of FITC-dextran to evaluate the cardiac microvascular endothelial barrier functionally, which is detected by an automated quantitative pathology imaging system.

<meta charset="utf8"></head><body>허혈/재관류의 쥐 모델에서 심장 미세혈관 내피 장벽의 투과성을 평가하기 위한 형광 분석

Here, we describe a method to functionally assess the endothelial barrier of cardiac microvessels after ischemia/reperfusion injury via the measurement of the mean fluorescence intensity of extravasated 70,000 Da FITC-dextran in comparison with Evans Blue.

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Evaluating Vascular Hyperpermeability-inducing Agents in the Skin with the Miles Assay

The primary function of the vascular endothelium in vertebrate organisms is to serve as a barrier between the blood and each tissue of the body, whereby the permeability of the endothelium to blood cells, plasma macromolecules, and water can be adapted according to the physiological need. In certain diseases, cytokines and growth factors are released that target the endothelial barrier to transiently increase vascular permeability; however, their prolonged presence may cause chronic vascular hyperpermeability and thereby tissue-damaging edema. The Miles assay is an in vivo technique that allows researchers to study vascular hyperpermeability through the proxy measurement of vascular leakage. Here, we provide a detailed protocol on how to perform this procedure in the mouse, which is the most widely used model organism to study mammalian physiology and pathology. The procedure involves the intravenous injection of Evans blue dye to label the circulating albumin followed by multiple intradermal injections of permeability-inducing agents and vehicle control solutions into opposing flanks of the mouse. Consequently, Evans blue dye gradually leaks into the dermis, where it accumulates and can be extracted for quantification as leakage induced by the permeability-inducing agent relative to the vehicle. The Miles assay can be performed in wild type or genetically modified mouse models and may be combined with drug administration to study molecular mechanisms that regulate vascular permeability and identify agents/targets capable of inducing or blocking hyperpermeability.

Here, we present a protocol to measure the vascular leakage induced by intradermal administration of permeability promoting agents into the murine skin. This technique can be used to determine the ability of molecules to promote or inhibit vascular leakage or to study the molecular mechanisms that regulate vascular permeability.

마일 분석 결과 함께 피부에 혈관 Hyperpermeability 유도 요원 평가

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최적화 된 에반스 블루 마우스에서 혈관 누출을 평가 하는 프로토콜

요약

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