Name: real-time x-ray imaging of lung fluid volumes in neonatal mouse lung
Uploaded: 2016-07-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 26 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time X-ray Imaging of Lung Fluid Volumes in Neonatal Mouse Lung at JoVE.com

This work is supported by a grant awarded to MNH by Children's Healthcare of Atlanta, the APS 2014 Short-Term Research Education Program to Increase Diversity in Health-Related Research (STRIDE) fellowship awarded to PT, and the University of Notre Dame Integrated Imaging Facility.

すべての実験技術は、施設ケアと使用委員会の指針に従って実施されなければなりません。 1. X線画像取得<ol><li> ソフトウェアの概要（ソフトウェアの設定の概要については、図1を参照してください）。 <ol><li>直接ファイル]タブ下のキャプチャ]ボタンを選択します。 </li><li> [設定]ドロップダウンメニューでは、 現在のセッションを選択します。 </li><li> 露光時間の下にあるドロップダウンボックスで、 標準的な露出を選択します 。 </li><li> 2.00分に露光時間を設定し 、 第 1に対するエクスポージャー 。 2ピクセルにXビニングとYビニングを設定します 。 図1を参照してください。 </li><li>エクスポートオプション]ドロップダウンメニューから最終的な蓄積を選択します 。 </li><li> 照明設定では、SELECTのX線 照明ソース ]ドロップダウンメニューから。デフォルトKVPは35に設定されています。 </li><li>対応するX線参照ファイルを適用するために、 参照ファイルを適用し 、ドロップダウンメニューで自動選択を選択します 。 （セクション2を参照してください）​​。 </li><li>設定するには、setカメラでは、2.51にFストップを設定します。 </li><li> PN10マウス用の125.64にFOV（視野）を設定します。 </li><li> 13に焦点面を設定し 、 焦点面のスライダーの横にあるドロップダウンメニューでは、X線を選択します。 </li><li> X線の場合は、ドロップダウンメニューで0に励起フィルターと発光フィルターを設定します。 </li><li>次の設定を上に新規 ] をクリックして現在のセッションを保存します。 例えば 、設定ファイルを取得新規の名前を入力し、「議定書を作るためのJoveのシングル露出イベント。」 図2を参照してください。 </li></oL&gt; </li><li> X線イメージングプロトコルの作成 <ol><li>開いているウィンドウの右側に作成/編集プロトコルボタンをクリックします。 </li><li>新しいプロトコルのポップアップウィンドウが表示され、右上隅にある[新規 ]ボタンをクリックします</li><li>プロトコルは、例えば、下の「Joveのデモプロトコル」を保存し、[OK]をクリックする名前を入力します。 （ 図3を参照してください）。 </li><li>プロトコル手順でのプロトコルポップアップウィンドウの底部には、前にイメージキャプチャ]ドロップダウンメニューで選択され、そのステップ1が赤い文字で強調表示されていることを確認し、選択された新しいイメージをキャプチャし、 何もしません 。 </li><li> キャプチャの設定では、ステップ1.1.12から、最近生成された単一露光イベントを選択します。 </li><li> イメージキャプチャした後、ドロップダウンメニューからウェイト（秒）を選択します。 </li><li> [編集]ボタンをクリックして、標準ポップアップボックスにE 180、および各2分の取得後3分間の待ち時間を追加し、[OK]をクリックします。 </li><li>右のステップ1]タブをクリックし、 重複するステップを選択することにより、ステップ1が重複しています。 2時間の観察期間のための23の複製を作成します。 （ 図4を参照してください）。 </li><li>最後のステップ（ステップ24）で、 ウェイト（秒）から何もしないように設定した後 、 イメージキャプチャを変更します。 </li><li> [保存]ボタンをクリックし、プロトコルエディタを終了します。 </li></ol></li></ol> 2.イルミネーション参照ファイル注：オーダー実験を通じて得られたX線画像の検出器の均一性の変化のために、自動的に正しいX線画像にX線照射参照ファイルを適用します。以下に説明する手順は、in vivo動物イメージングシステムではブルカーに固有のものです。他のインビボイメージングシステムもよいです利用される。 <ol><li>分子イメージングソフトウェアを開き、 キャプチャ]ボタンをクリックして照明参照ファイルを生成します。 </li><li>ポップアップメニューを使用して、照明ソースのX線キャプチャ設定を確立する（上記のセクション1で推奨設定を参照）、露光方式でイルミネーションリファレンスを選択します。標準エクスポージャーは、ドロップダウンボックスの下にこれを見つけることができます。 （ 図5を参照してください）。 </li><li>画像ステーションからのすべてのサンプルを削除します。 4×4ビニングにXとYのビニングを設定します。 表1を参照：照明参照ファイルの露光時間を正確に露光時間を決定します。 </li><li>押して、 公開します。 </li><li> 参照ファイルを適用します。下のドロップダウンメニューから[自動選択]を選択することで、参照ファイルを適用します。 （ 図 6を参照してください）。照明参照ファイルが自動的にすべてのX線イムに適用されます同じカメラ設定で撮影した年代。同じカメラの設定は次の実験に利用されている場合は2.4繰り返される必要はありません - 2.1ステップ。 注：照明参照ファイルは、画像取得後に適用され得るか、またはエラーメッセージが参照ファイルの自動選択の後に発生した場合。 イメージ&gt;イメージ数学&gt;タイプ：タスク&gt;計算：照明補正照明基準は、分子イメージングソフトウェアのナビゲーションパネルで次の一連のコマンドを使用して、後の画像キャプチャをファイルに適用します。あなたが照明参照ファイル（Y）を適用したい入力画像（X）を選択します。修正したファイル（Z）の名前を変更します。 （ 図7を参照してください）。 </li></ol> 3.動物の取り扱い<ol><li> 動物の取得 <ol><li>商業ブリーダーから妊娠中のダムを購入するか、制度的なガイドラインに従って、年齢（歳以上）の12週目に家の中で雌マウスを繁殖秒。 </li><li>生後日（PN）10までの授乳中の母親を持つハウス新生マウス。 </li></ol></li><li> 動物麻酔（PN 10） <ol><li> 40分まで持続する長時間の麻酔効果のためにPN 10匹のマウスを麻酔するために、ケタミン/キシラジンのカクテルを準備します。キシラジンの75μlの（100 mg / mlで）にケタミン（100 mg / mlで）の500μLを加えます。ケタミン（100mg / kg）を作るために0.9％生理食塩水で1:10に希釈/キシラジン（10mg / kg）麻酔薬カクテル。 </li><li>新生マウスを計量。 </li><li> 31 G 5/16インチ（8ミリメートル）針で3/10注射器を使用して、腹腔内注射による麻酔の体重の10μL/グラムを管理します。 </li><li>体熱の過度の損失を防ぐために乾燥して絶縁された動物を保管してください。 </li></ol></li></ol> 4.気管点眼<ol><li> 140のNaCl、5mMのKCl、1mMのCaCl 2を、および10mMのHEPESからなる気管内生理食塩水溶液を調製。 pH値= 7.4。この解決策の浸透圧はする必要があります319モスモル/キロのH 2 O </li><li>マウントは、外科手術用テープを使用して、傾斜した手術用ボード上にアップ腹側動物を麻酔しました。動物の頭をEnsurethat傾斜の上部に表示されます。 </li><li>動物を麻酔し、手術の準備ができていることを確認するために、つま先のピンチを実行します。すべての外科の分野、機器、および動物の胸部を消毒。 </li><li>首（喉の領域）の前方 - 内側腹側面に小さな（3ミリメートル）切開手術用メスを用いてさておき、サイズ11プッシュ広頸筋を作成し、気管を可視化し、アクセスするために鈍い鉗子を使用して、気管の筋肉を前方。 </li><li> 31 G 5/16インチ（8ミリメートル）の針を用いて露光気管を介して生理食塩水の - （30μlの最終体積約10）重量の3μL/グラムを植え付けます。マイナー切開を動物の撮像中に開いたままにし、通常よく自分自身を癒すされます。切開部は、同様に、開いたままにできるかどうかを決定するために動物リソースのローカル部門に相談してください。それ以外の場合は、縫合糸がよいです必要とされます。 </li></ol> 5.動物イメージング<ol><li>底が透明な、取り外し可能な、動物イメージングトレイに腹側に子犬を置きます。 X線ビームは、胸部領域の上に直接になるように動物を中央に配置します。 </li><li>奇数動物コホートについては、トレイの中央に、偶数番目のコホートに直接最初の子犬を置き、他の動物がトレイ上に置かれたときに動物の全てが集中しているように、ちょうど中央の左の最初の子犬を置きます。 </li><li> X線撮影キャビネットにイメージングトレイを戻し、キャビネットドアを閉じます。 </li><li>麻酔下の動物の体温を維持するために、動物熱制御ユニットの電源をオンにします。 37℃ - 約35のチャンバー温度を達成するために、高い設定を使用します。動物を麻酔し、2時間の撮像手順の期間を通して固定化されることを保証するために、動物の麻酔ユニット（酸素を介して配信気化イソフルラン）をオンにします。 </li><li> X線撮像プロトコルを実行<ol><li> 例えば 、 キャプチャをクリックして、適切なプロトコルを選択し、[ プロトコル ]ドロップダウンメニューから&quot;Joveのデモプロトコル」。 （ 図8を参照してください）。 </li><li>分子イメージングソフトウェア上の実行選択した プロトコル]ボタンをクリックします。 注：ポップアップウィンドウがプロトコルウインドウが消えます完了すると、画像取得の状況を追跡するために表示されます。 X線の線量は0.3ミリレムより&lt;低く、または歯科X線よりも約10倍以下です。他のX線手順と同様に、残留放射線はありません。 </li><li> 2時間の取得セッションが完了すると、撮像トレイから動物を削除し、それらのケージに戻します。ラックに戻る前に完全な回復のために動物を監視します。 </li></ol></li></ol> 6.データ解析注意：分子イメージングソフトウェアには、定量化およびXRの翻訳を可能にします肺液クリアランスの速度にAYピクセル強度。概要は、以下の手順X線画像を正規化し、興味（ROI）の定義された領域内の強度を定量化するために必要な手順を説明します。 <ol><li> ROIテンプレートをデザイン 注意：利息テンプレートの領域は、2時間の試験中に取り込まれたX線画像に固有作成する必要があり、実験群の間でX線強度を比較するために使用されるべきです。生理食塩水の課題の小さなボリュームは通常、肺4-6の左上葉に蓄積するので、ROI（複数可）は、肺のこの部分に焦点を当てるべきです。 <ol><li> 2時間のセットの最初と最後のX線画像を開きます。最初のX線画像のウィンドウを選択します。 </li><li>ナビゲーションツールバーで、 マニュアル-のROI&gt; 新規ROIの設定を選択します。 </li><li> ROI楕円をクリックして、適切に赤まで定義されていないマウスの左lung.An ROIをカバーしてROIを作成し、ROIがDRで概説別の位置にagged。定義されたROIは数に青で概説されます。 </li><li>複数の子犬を撮影している場合は、赤をクリックして、同じセットでより多くの個々のROIを作成するために、他のマウスの左肺にROIとドラッグを概説。赤をドラッグして、背景ROIを作成するための明確な背景を持つ領域にROIを概説。 <ol><li>直接第二のリブの下で、各マウスの左肺 ​​の上に位置するように関心領域を位置決めするためのポインタの選択を選択します 。 </li></ol></li><li>上部のツールバーには、 画像表示をクリックします。 </li><li>設定されたROIの位置を維持しながら、最後のX線画像をオーバーレイする画像表示ダイアログにオーバーレイをチェックしてください。必要に応じて、ROIの位置を調整し、両方の画像に十分な肺のカバレッジを確保するために、ナビゲーションツールバーにポインタの選択を選択します。 </li><li>マニュアルROI]ダイアログで、[ テンプレート ]&gt; [ テンプレートに保存します。名前トン彼は、テンプレート、[OK]をクリックします。 </li><li>両方の画像を閉じます。変更を保存するようプロンプトが表示されたら、[ いいえ ] を選択します。 </li><li>研究中に撮影したすべての画像を開くことによって、流体のクリアランスを分析するために捕捉され、各X線画像にROIテンプレートを適用します。開いているファイルを選択して起動し、 マニュアルのROI&gt; テンプレート ] をクリックします。 </li><li>ドロップダウンメニューから、以前に作成したROIテンプレートを選択し、開いているすべてのドキュメントに適用]をクリックします。 </li></ol></li><li> スプレッドシートへの画像からのエクスポート数値ROIデータ <ol><li>左上隅には、[ ファイル ]&gt; [ データのエクスポート ]&gt; [ROI]をクリックします。 </li><li>ポップアップダイアログでExcelに 表示さ れ 、 自動開く ように確認してください。 </li><li> すべてエクスポート開くドキュメントを選択します 。 </li><li>ファイルに名前を付けて保存 ] をクリックします。 </li><li>分子イメージングソフトウェアを閉じます。 </li></ol></li></オール&gt;

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	<li>Institute of Laboratory Animal Resources. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , (2011).</li><li>Helms, M. N., Torres-Gonzalez, E., Goodson, P., Rojas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+tracheal+instillation+of+solutes+into+mouse+lung.">Direct tracheal instillation of solutes into mouse lung.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Hilgendorff, A., Reiss, I., Ehrhardt, H., Eickelberg, O., Alvira, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+lung+disease+in+the+preterm+infant.+Lessons+learned+from+animal+models.">Chronic lung disease in the preterm infant. Lessons learned from animal models.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 50, 233-245 (2014).</li><li>Goodson, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nadph+oxidase+regulates+alveolar+epithelial+sodium+channel+activity+and+lung+fluid+balance+in+vivo+via+O2-+signaling.">Nadph oxidase regulates alveolar epithelial sodium channel activity and lung fluid balance in vivo via O2- signaling.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302, L410-L419 (2012).</li><li>McNeilly, T. N., Tennant, P., Lujan, L., Perez, M., Harkiss, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+infection+efficiencies+of+peripheral+lung+and+tracheal+tissues+in+sheep+infected+with+Visna/maedi+virus+via+the+respiratory+tract.">Differential infection efficiencies of peripheral lung and tracheal tissues in sheep infected with Visna/maedi virus via the respiratory tract.</a> J Gen Virol. 88, 670-679 (2007).</li><li>Starcher, B., Williams, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+intratracheal+instillation+of+endotoxin+into+the+lungs+of+mice.">A method for intratracheal instillation of endotoxin into the lungs of mice.</a> Lab Anim. 23, 234-240 (1989).</li><li>Downs, C. A., Kumar, A., Kreiner, L. H., Johnson, N. M., Helms, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=H2O2+regulates+lung+ENaC+via+ubiquitin-like+protein+Nedd8.">H2O2 regulates lung ENaC via ubiquitin-like protein Nedd8.</a> J Biol Chem. 288, 8136-8145 (2013).</li><li>Gammon, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+anatomical,+molecular,+and+functional+imaging+of+the+lung+with+multiple+modalities.">Preclinical anatomical, molecular, and functional imaging of the lung with multiple modalities.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 306, L897-L914 (2014).</li><li>Takemura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+regulation+of+epithelial+sodium+channels+in+rat+alveolar+type+2+epithelial+cells.">Cholinergic regulation of epithelial sodium channels in rat alveolar type 2 epithelial cells.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 304, L428-L437 (2013).</li><li>Lewis, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+imaging+of+the+lungs+using+x-ray+phase+contrast.">Dynamic imaging of the lungs using x-ray phase contrast.</a> Phys Med Biol. 50, 5031-5040 (2005).</li><li>Nyren, S., Radell, P., Mure, M., Petersson, J., Jacobsson, H., Lindahl, S. G., Sanchez-Crespo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalation+anesthesia+increases+V/Q+heterogeneity+during+spontaneous+breathing+in+healthy+subjects.">Inhalation anesthesia increases V/Q heterogeneity during spontaneous breathing in healthy subjects.</a> Anesthesiology. 113 (6), 1370-1375 (2010).</li></ol>

この記事では、ブルカー・バイオスピン主催のマルチモーダル前臨床イメージングに特別な問題の一部です。

X線撮影を使用して、新生児の肺の鮮明な画像は、肺流体量について分析することができます。我々 7,3,11、および他の10は 、正常に自由に麻酔をかけた動物モデルを呼吸で肺液量の動的変化を決定するために、X線撮影を利用しているが、この技術は、新生児肺損傷の研究を進めるための大きな可能性を秘めています。肺液量を（例えば、X線位相constrast 10とは対照的に）評価するための我々のアプローチを使用する際の1つの主な利点は、最大5つのPN10の仔マウスを同時に研究施設とコアで共通の場所である、撮像システムを使用して研究することができることです。 溺れまたは肺を崩壊しないよう、適切な肺液量を浸透させる、このプロトコルの実装を成功するために重要であり、X線撮影プロトコルを適用することができる前に、実験的に探求する必要があるかもしれません。このアッセイの感度は非常に小さいvolumの検出を可能にX線検出による点眼生理食塩水のエス。私たちは、生理食塩水10μlの容量で点滴注入新生児肺のX線不透過性の違いを識別することができました。生理食塩水の課題を吸収することができないため、ナトリウムチャネル阻害剤は、歯槽空間に導入されるときにX線陰影の差がより顕著であり、肺は、空域内に流体を分泌し続けます。生理食塩水の不適切に高い容量が導入された場合に、麻酔のポートを介してチャンバに流入する酸素の撮像チャンバーに動物を配置すると、浸水肺内の呼吸を容易にすることができます。 X線撮影を使用して我々の結果は、肺湿潤対乾燥重量比を、タンパク質濃度4の決意するためのエバンスブルーのような多くの従来の手法を用いて測定肺胞液クリアランスと同等です。現在、このアプローチは、新生仔マウスの仔にも適用することができることを示しています。このX線イム肺流体容積を決定するためのエージング手法を容易に追加の画像モダリティと組み合わせることができます。例えば、蛍光マーカーまたは生物発光プローブを同時に胞に注入し、評価することができます。 （蛍光および発光プローブの検出は、8に記載されており、この報告書の範囲を超えています）。蛍光バイオマーカーを検出する能力と一緒に（X線撮影を使用して）肺流体の体積を同時登録する能力は、この動的なアッセイおよび肺流体クリアランスを測定するための商業的なシステムを使用するいくつかの利点の一つです。クリアランスと相対的な肺流体の体積を決定するためにこの方法を利用する他の利点は、（したがって、統計的に有意な観察結果を達成するために必要な動物の数を減少させる）の長手方向の研究を実施する能力は、自由呼吸における肺流体体積の小さな変化を検出する能力を含みます、麻酔、新生児の仔マウス。 ANを使用することの1つの制限インビボイメージング法では、しかし、麻酔が肺内のガスとの血流の分布を変化させることができるということです。換気と灌流のミスマッチ（V / Q）とシャントは、このように体の酸素を低減し、12人の健康な成人ボランティアに麻酔下で増加することが示されています。この悪影響は、しかしながら、吸入酸素濃度を増加させることによって補償することができます。技術的な観点からは、X線束のエネルギー撮像システムとの間のばらつきは、画像検査を実行する前に、各システムの最適化を必要とし得ます。例えば、より多くの磁束および/または優れた量子効率を有する検出器とX線源を持つシステム上、高いF /停止とX線インピーダンスの小さな変化を評価する際に下ビニング状態が良好な画像品質を提供することがあります。

出生時、新生児の肺は体の十分な換気と酸素化を確立するために、流体再吸収する器官に流体分泌から遷移しなければなりません。出生時の促進機構（または阻害する）肺液の効果的なクリアランスは不明です。 C57BL / 6新生児仔マウスに肺胞液クリアランスの速度をモデル化する流​​体吸収率を高めたり、減衰させることができる調節因子のより良い理解につながります。また、急性肺損傷または感染の他の新生児のモデルに適用することができ、呼吸困難と新生児のための新規治療戦略につながる可能性があります。 新生児肺は大人の肺に比べて非常に少量ですので、洗浄またはgravimetrical測定に依存している歯槽流体クリアランスの従来の対策は正確に新生児肺モデルにおける肺流体クリアランスを研究するのに適切ではないかもしれません。このプロトコルでは、我々はを可能にするアッセイを実証します小動物イメージャーを用いて、生後10日目のC57BL / 6マウスの仔における歯槽流体クリアランス速度の正確な決意。透視アプローチを使用する1つの主要な利点は、動物は、インビボで画像化されることです。彼らは自由に呼吸していると、将来の観測や研究のために、この低侵襲性アッセイから回復することができます。この方法の全体的な目標は、新生児の肺における肺水腫をモデル化し、新生児肺の肺胞液クリアランスの速度を評価することです。縮小戦略が必要とされる動物の数を減少させ、まだ実験的な出力を最大にするために、この技術は、部分的には、開発されました。この技術は、X線画像を用いて、肺液容積の優れた検出を可能にし、基本的な動物の拘束に熟練を必要とし、1を取り扱います。小動物手術と気管点滴2、小動物イメージャ、および基本的な画像解析ソフトウェア。 in vivoでの肺液量を評価したい研究者（自由にBREathingは、その用途に適した、この手順を見つけることができます）動物モデルを麻酔しました。最後に、このプロトコルは、高酸素誘発性肺傷害、機械換気、および肺の炎症3のモデルを含む気管支肺異形成症のメカニズムの研究に使用される新生児の肺損傷の他の既存のモデルを、増強することができます。

<table><tbody><tr><td>Preclinical Imaging System (In- Vivo MS FX PRO)</td><td>Bruker; Billerica, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Ketaset; Fort Dodge Animal Health, IA</td><td>26637-411-01</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Lloyd Laboratories; Shenandoah, IA</td><td>4821</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&#039;s Phosphate Buffered Saline (with Calcium and Magnesium)&amp;nbsp;</td><td>Lonza; Walkersville, MD</td><td>17-513F</td><td></td></tr><tr><td>Sodium chloride</td><td>Amresco; Solon, OH</td><td>241</td><td></td></tr><tr><td>Potassuim chloride</td><td>Fisher Scientific; Fair Lawn, NJ</td><td>P217-3</td><td></td></tr><tr><td>Calcium chloride</td><td>Sigma-Aldrich; St. Loius, MO</td><td>C5080</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich; St. Loius, MO</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>0.3 ml insulin syringe with 31 G x 5/16&quot; (8 mm) needle</td><td>BD Insulin Syringe; Franklin Lakes, NJ</td><td>328438</td><td></td></tr></tbody></table>

real-time x-ray imaging of lung fluid volumes in neonatal mouse lung

出生時、肺は独立して呼吸への適応を可能にする吸収に分泌から深遠な表現型のスイッチを、受けます。この表現型を促進し、維持することは生涯を通じて正常な肺胞の成長とガス交換の中で非常に重要です。 インビトロ研究における いくつかは、肺流体クリアランスの速度に影響を与えることができる重要な調節タンパク質、シグナル伝達分子、ステロイドホルモンの役割を特徴としています。しかし、 生体内検査でこれらの調節因子は、周産期の肺の液体吸収の調節において重要な生理学的役割を果たしているかどうかを評価するために実施されなければなりません。このように、リアルタイムX線イメージングの利用が周産期肺流体クリアランス、または肺水腫を決定するために、フィールドでの技術の進歩を表しています。ここで、我々は、出生後の日に説明し、C57BL / 6マウスにおいて、肺胞、肺流体クリアランスと肺胞洪水の速度を評価するためのアプローチを示している10私たちX線撮影と分析をる。このプロトコルの実装を成功させるには、制度上の動物のケアと使用委員会（IACUC）、in vivoでの小動物X線撮像システム、および互換性の分子イメージングソフトウェアからの事前承認を必要とします。

図9の左側のパネル- 10は、ベースライン（プレ点滴注入）で撮像されたPN 10のマウスの肺です。これらの画像は、新生児肺の左葉に生理食塩水の課題の成功点滴を示しています。 図9では、マウスの肺は、気管（2.1節を参照）上で定義された食塩水を注入しました。 図9の真ん中と右のパネルは、5分および2時間後に点滴を得た同じマウスからのX線像です。この動物は、正常生理食塩水チャレンジをクリアしていました。具体的には、この動物のROIのX線強度は、画素密度および肺流体ボリュームとの間の逆相関関係があり、したがって、515に187.67の増加しました;つまり、より大きな相対値が、少ない流体肺に存在します。 少ない流体attenuatiがある場合には（それゆえ大きい報告された値） より X線エネルギーが吸収されていることを理解するのに役立つかもしれませんX線をngの。 図10では、PN 10のマウスの肺は、気管上皮ナトリウムチャネル活性を遮断することによって、生理食塩水チャレンジの歯槽流体クリアランスを阻害した（2.1に記載され生理食塩水に再構成された）酸化型グルタチオンを含む化合物と点滴しました。この動物のROIの数値は、X線不透過性を増加させることを示す前植え付けるとポスト点眼X線画像化されたファイルから減少します。 64、およびに減少 - - 具体的には、動物の正味の強度は、約5分後に点眼した再び182、肺内の流体のROIのピクセル強度と量と反比例の関係に注意してください。肺の左上葉に増加した流体は、X線た吸収を減衰させます。 収集ソフトウェアはまた、研究者が表現することができながらも、ROIの正味の強度を評価することは、肺流体クリアランスの速度の変化を定量的に評価することができますグラム/ cm 3との点でデータが必要であれば。また（ すなわち、変化の尺度、研究者らは、独自のコントロールとして各動物を使用することができ、そのような= 5分トンのように、最初の時点（イオ）に、すべてのX線強度を正規化し、X線不透過性の正味の変更を報告します肺液量で）。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/52751/52751fig1.jpg" /> 図1。 露出設定。このスクリーンショットは、このプロトコルで利用される適切な露出設定を示している。 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52751/52751fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/52751/52751fig2.jpg" /> 図2.設定ファイル 。このスクリーンショットは、使用されるフ​​ァイルの設定を生成する際の重要なステップを示していますプロトコルインチポップアップウィンドウが表示され、（図示のように）取得設定ファイルの新しい名前を要求します。 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52751/52751fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/52751/52751fig3.jpg" /> 3. イメージングプロトコル図 。このスクリーンショットは、新しいイメージングプロトコルが正常に作成されたかどうかを決定する上で重要なステップを示しています。 （示されるように）ポップアップウィンドウが表示され、新しいプロトコル名が生成されたプロトコルのために要求されます。 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52751/52751fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/52751/52751fig4.jpg" /> 図4. Protのocol手順。このスクリーンショットは、取得設定ファイルを複製し、新しいステップを挿入、またはイメージングプロトコル内のステップを削除するためのショートカットを示している。 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52751/52751fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図5" src="/files/ftp_upload/52751/52751fig5.jpg" /> 5.イルミネーション参考図 。このスクリーンショットは、照明参照コマンドと照明参照ファイルを作成するための適切な動物イメージングソフトウェアで適切な設定を示す。 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52751/52751fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図6" src="/files/ftp_upload/52751/52751fig6.jpg" /> 図6.自動選択 </strong&gt;。このスクリーンショットは、自動選択機能と照明参照ファイルを適用するための適切な動物イメージングソフトウェアで適切な設定を示す。 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52751/52751fig6large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図7" src="/files/ftp_upload/52751/52751fig7.jpg" /> 図7.光量を補正する。このスクリーンショットは、動物の撮影後に生成された照明参照ファイルの適切なアプリケーションを示している。 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52751/52751fig7large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図8" src="/files/ftp_upload/52751/52751fig8.jpg" /> 図8.プロトコルを実行します。このスクリーンショット選択したプロトコルを実行する方法を示しています。 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52751/52751fig8large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図9" src="/files/ftp_upload/52751/52751fig9.jpg" /> クリア肺の 図9 のX線画像 PN 10肺の代表的な画像生理食塩水チャレンジ（プレ植え付ける;左パネル）を受信する前に。 5分後に点滴（中央のパネル）、および生理食塩水のチャレンジがそうでなければ健康な肺（右パネル）からクリアした後に2時間。 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52751/52751fig9large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図10" src="/files/ftp_upload/52751/52751fig10.jpg" /> 浸水肺の図10のX線画像。Represen10肺前に生理食塩水チャレンジを受信するPNのtative画像（プリ植え付ける;左のパネル）傍細胞溶質輸送を阻害グルタチオンジスルフィドを含みます;グルタチオンジスルフィド（中央のパネル）、および肺胞の洪水（右パネル）につながる傍細胞輸送を阻害した後2時間の5分後に点滴。 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52751/52751fig10large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td>フィルタなし= </td><td> 10秒の暴露</td></tr><tr><td> 0.1ミリメートル= </td><td> 15秒暴露</td></tr><tr><td> 0.2ミリメートル= </td><td> 20秒の暴露</td></tr><tr><td> 0.4ミリメートル= </td><td> 30秒の曝露</td></tr><tr><td> 0.8ミリメートル= </td><td> 30秒の曝露</td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="2"> X線フィルタのサイズは、CRのための特定の露光時間と相関します照明参照ファイルを食べます。 </td></tr></tbody></table> 表1.イルミネーション参照ファイル。このファイルは、イメージング研究に使用されるX線フィルタに基づいて照明参照ファイルを生成するための適切な露光時間を報告します。

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Real-time X-ray Imaging of Lung Fluid Volumes in Neonatal Mouse Lung

We present a protocol to assess the rate of alveolar fluid clearance or pulmonary edema in neonatal mouse lung using X-ray imaging technology.

新生児マウスの肺における肺流体体積のリアルタイムX線イメージング

At birth, the lung undergoes a profound phenotypic switch from secretion to absorption, which allows for adaptation to breathing independently. Promoting ...

real-time-x-ray-imaging-of-lung-fluid-volumes-in-neonatal-mouse-lung

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

8.6K ビュー.  Emory University. We present a protocol to assess the rate of alveolar fluid clearance or pulmonary edema in neonatal mouse lung using X-ray imaging technology. 

ビデオ: Real-time X-ray Imaging of Lung Fluid Volumes in Neonatal Mouse Lung

Long-term High-Resolution Intravital Microscopy in the Lung with a Vacuum Stabilized Imaging Window

Metastasis to secondary sites such as the lung, liver and bone is a traumatic event with a mortality rate of approximately 90% 1. Of these sites, the lung is the most difficult to assess using intravital optical imaging due to its enclosed position within the body, delicate nature and vital role in sustaining proper physiology. While clinical modalities (positron emission tomography (PET), magnetic resonance imaging (MRI) and computed tomography (CT)) are capable of providing noninvasive images of this tissue, they lack the resolution necessary to visualize the earliest seeding events, with a single pixel consisting of nearly a thousand cells. Current models of metastatic lung seeding postulate that events just after a tumor cell&#39;s arrival are deterministic for survival and subsequent growth. This means that real-time intravital imaging tools with single cell resolution 2 are required in order to define the phenotypes of the seeding cells and test these models. While high resolution optical imaging of the lung has been performed using various ex vivo preparations, these experiments are typically single time-point assays and are susceptible to artifacts and possible erroneous conclusions due to the dramatically altered environment (temperature, profusion, cytokines, etc.) resulting from removal from the chest cavity and circulatory system 3. Recent work has shown that time-lapse intravital optical imaging of the intact lung is possible using a vacuum stabilized imaging window 2,4,5 however, typical imaging times have been limited to approximately 6 hr. Here we describe a protocol for performing long-term intravital time-lapse imaging of the lung utilizing such a window over a period of 12 hr. The time-lapse image sequences obtained using this method enable visualization and quantitation of cell-cell interactions, membrane dynamics and vascular perfusion in the lung. We further describe an image processing technique that gives an unprecedentedly clear view of the lung microvasculature.

This protocol describes the use of multiphoton microscopy to perform long-term high-resolution, single cell imaging of the intact lung in real time using a vacuum stabilized imaging window.

真空安定化撮像窓と肺における長期高分解能生体顕微鏡

Metastasis to secondary sites such as the lung, liver and bone is a traumatic event with a mortality rate of approximately 90% 1. Of these sites, the lung ...

がん研究

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic alterations in oncogenes such as the KRAS oncogene, which constitutes ~25% of lung cancer cases. The difficulty in therapeutically targeting KRAS-driven lung cancer partly stems from having poor models that can mimic the progression of the disease in the lab. We describe a method that permits the relative quantification of primary KRAS lung tumors in a Cre-inducible LSL-KRAS G12D mouse model via ultrasound imaging. This method relies on brightness (B)-mode acquisition of the lung parenchyma. Tumors that are initially formed in this model are visualized as B-lines and can be quantified by counting the number of B-lines present in the acquired images. These would represent the relative tumor number formed on the surface of the mouse lung. As the formed tumors develop with time, they are perceived as deep clefts within the lung parenchyma. Since the circumference of the formed tumor is well-defined, calculating the relative tumor volume is achieved by measuring the length and width of the tumor and applying them in the formula used for tumor caliper measurements. Ultrasound imaging is a non-invasive, fast and user-friendly technique that is often used for tumor quantifications in mice. Although artifacts may appear when obtaining ultrasound images, it has been shown that this imaging technique is more advantageous for tumor quantifications in mice compared to other imaging techniques such as computed tomography (CT) imaging and bioluminescence imaging (BLI). Researchers can investigate novel therapeutic targets using this technique by comparing lung tumor initiation and progression between different groups of mice.

This protocol describes the steps taken to induce KRAS lung tumors in mice as well as the quantification of formed tumors by ultrasound imaging. Small tumors are visualized in early timepoints as B-lines. At later timepoints, relative tumor volume measurements are achieved by the measurement tool in the ultrasound software.

超音波画像によるマウスにおける肺腫瘍の進行の検出

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. Despite advances in knowledge of this illness, the availability of intensive care units (ICU), and the use of potent antimicrobial agents and effective vaccines, the mortality rates remain high1. Streptococcus pneumoniae is the leading pathogen of community-acquired pneumonia (CAP) and one of the most common causes of bacteremia in humans. This pathogen is equipped with an armamentarium of surface-exposed adhesins and virulence factors contributing to pneumonia and invasive pneumococcal disease (IPD). The assessment of the in vivo role of bacterial fitness or virulence factors is of utmost importance to unravel S. pneumoniae pathogenicity mechanisms. Murine models of pneumonia, bacteremia, and meningitis are being used to determine the impact of pneumococcal factors at different stages of the infection. Here we describe a protocol to monitor in real-time pneumococcal dissemination in mice after intranasal or intraperitoneal infections with bioluminescent bacteria. The results show the multiplication and dissemination of pneumococci in the lower respiratory tract and blood, which can be visualized and evaluated using an imaging system and the accompanying analysis software.

Streptococcus pneumoniae is the leading pathogen causing severe community-acquired pneumonia and responsible for over 2&#160;million deaths worldwide. The impact of bacterial factors implicated in fitness or virulence can be monitored in real-time in an acute mouse pneumonia or bacteremia model using bioluminescent bacteria.

生物発光細菌を使用してリアルタイムに急性肺炎のマウスモデルにおける肺炎球菌の毒性因子の影響を以下の

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

免疫・感染学

Vascular Casting of Adult and Early Postnatal Mouse Lungs for Micro-CT Imaging

Blood vessels form intricate networks in 3-dimensional space. Consequently, it is difficult to visually appreciate how vascular networks interact and behave by observing the surface of a tissue. This method provides a means to visualize the complex 3-dimensional vascular architecture of the lung.
To accomplish this, a catheter is inserted into the pulmonary artery and the vasculature is simultaneously flushed of blood and chemically dilated to limit resistance. Lungs are then inflated through the trachea at a standard pressure and the polymer compound is infused into the vascular bed at a standard flow rate. Once the entire arterial network is filled and allowed to cure, the lung vasculature may be visualized directly or imaged on a micro-CT (&#181;CT) scanner.
When performed successfully, one can appreciate the pulmonary arterial network in mice ranging from early postnatal ages to adults. Additionally, while demonstrated in the pulmonary arterial bed, this method can be applied to any vascular bed with optimized catheter placement and endpoints.

The aim of this technique is ex vivo visualization of pulmonary arterial networks of early postnatal and adult mice through lung inflation and injection of a radio-opaque polymer-based compound via the pulmonary artery. Potential applications for casted tissues are also discussed.

マイクロCTイメージング用成人および早期産後マウス肺の血管鋳造

Blood vessels form intricate networks in 3-dimensional space. Consequently, it is difficult to visually appreciate how vascular networks interact and ...

発生生物学

A Multimodal Imaging Approach Based on Micro-CT and Fluorescence Molecular Tomography for Longitudinal Assessment of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Mice

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a fatal lung disease characterized by the progressive and irreversible destruction of lung architecture, which causes significant deterioration in lung function and subsequent death from respiratory failure.
The pathogenesis of IPF in experimental animal models has been induced by bleomycin administration. In this study, we investigate an IPF-like mouse model induced by a double intratracheal bleomycin instillation. Standard histological assessments used for studying lung fibrosis are invasive terminal procedures. The goal of this work is to monitor lung fibrosis through noninvasive imaging techniques such as Fluorescent Molecular Tomography (FMT) and Micro-CT. These two technologies validated with histology findings could represent a revolutionary functional approach for real time non-invasive monitoring of IPF disease severity and progression. The fusion of different approaches represents a step further for understanding the IPF disease, where the molecular events occurring in a pathological condition can be observed with FMT and the subsequent anatomical changes can be monitored by Micro-CT.

We describe a non-invasive multimodal imaging approach based on Micro-CT and fluorescence molecular tomography for longitudinal assessment of the mouse lung fibrosis model induced by double intratracheal instillation of bleomycin.

マウスにおけるブレオマイシン誘発肺線維症の縦断的評価マイクロ CT と蛍光分子トモグラフィーに基づくマルチ モーダル イメージング手法

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a fatal lung disease characterized by the progressive and irreversible destruction of lung architecture, which ...

A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a protocol for studying the pathogenesis of E. coli O1:K1:H7, a serotype responsible for high mortality rates in neonates. Our method utilizes intravital imaging of neonatal pups at different time points during the progression of infection. This imaging, paralleled by measurement of bacteria in the blood, inflammatory profiling, and tissue histopathology, signifies a rigorous approach to understanding infection dynamics during sepsis. In the current report, we model two infectious inoculums for comparison of bacterial burdens and severity of disease. We find that subscapular infection leads to disseminated infection by 10 h post-infection. By 24 h, infection of luminescent E. coli was abundant in the blood, lungs, and other peripheral tissues. Expression of inflammatory cytokines in the lungs is significant at 24 h, and this is followed by cellular infiltration and evidence of tissue damage that increases with infectious dose. Intravital imaging does have some limitations. This includes a luminescent signal threshold and some complications that can arise with neonates during anesthesia. Despite some limitations, we find that our infection model offers an insight for understanding longitudinal infection dynamics during neonatal murine sepsis, that has not been thoroughly examined to date. We expect this model can also be adapted to study other critical bacterial infections during early life.

Infection of neonatal mice with bioluminescent E. coli O1:K1:H7 results in a septic infection with significant pulmonary inflammation and lung pathology. Here, we describe procedures to model and further study neonatal sepsis using longitudinal intravital imaging in parallel with enumeration of systemic bacterial burdens, inflammatory profiling, and lung histopathology.

グラム陰性細菌敗血症の新生児画像モデル

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a ...

Intravital Widefield Fluorescence Microscopy of Pulmonary Microcirculation in Experimental Acute Lung Injury Using a Vacuum-Stabilized Imaging System

Intravital imaging of leukocyte-endothelial interactions offers valuable insights into immune-mediated disease in live animals. The study of acute lung injury (ALI)/acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other respiratory pathologies in vivo is difficult due to the limited accessibility and inherent motion artifacts of the lungs. Nonetheless, various approaches have been developed to overcome these challenges. This protocol describes a method for intravital fluorescence microscopy to study real-time leukocyte-endothelial interactions in the pulmonary microcirculation in an experimental model of ALI. An in vivo lung imaging system and 3-D printed intravital microscopy platform are used to secure the anesthetized mouse and stabilize the lung while minimizing confounding lung injury. Following preparation, widefield fluorescence microscopy is used to study leukocyte adhesion, leukocyte rolling, and capillary function. While the protocol presented here focuses on imaging in an acute model of inflammatory lung disease, it may also be adapted to study other pathological and physiological processes in the lung.

Intravital fluorescence microscopy can be utilized to study leukocyte-endothelial interactions and capillary perfusion in real-time. This protocol describes methods to image and quantify these parameters in the pulmonary microcirculation using a vacuum-stabilized lung imaging system.

真空安定化イメージングシステムを用いた実験的急性肺損傷における肺微小循環の生体内広視野蛍光顕微鏡

Intravital imaging of leukocyte-endothelial interactions offers valuable insights into immune-mediated disease in live animals. The study of acute lung ...

Hyperpolarized 129Xe Lung MRI and Spectroscopy in Mechanically Ventilated Mice

Hyperpolarized (HP) xenon-129 (129Xe) is an inhaled magnetic resonance imaging (MRI) contrast agent with unique spectral and physical properties that can be exploited to quantify pulmonary physiology, including ventilation, restricted diffusion (alveolar-airspace size), and gas exchange. In humans, it has been used to evaluate disease severity and progression in a variety of pulmonary disorders and is approved for clinical use in the United States and United Kingdom. Beyond its clinical applications, the ability of 129Xe MRI to noninvasively assess pulmonary pathophysiology and provide spatially resolved information is valuable for preclinical research. Among animal models, mice are the most widely used due to the accessibility of genetically modified disease models. Here, 129Xe MRI is promising as a minimally invasive, radiation-free, and sensitive technique to longitudinally monitor lung disease progression and therapy response (e.g., in drug discovery). This technique can extend to preclinical applications by incorporating an MRI-triggered, free-breathing apparatus or mechanical ventilator to deliver gas. Here, we describe the steps and provide checklists to ensure robust data collection and analysis, including creating a thermally polarized xenon gas phantom for quality control, optimizing polarization, animal handling (sedation, intubation, ventilation, and care for mice), and protocols for ventilation, restricted diffusion, and gas exchange data. While preclinical 129Xe MRI can be applied in various animal models (e.g., rats, pigs, sheep), this protocol focuses on mice due to the challenges posed by their small anatomy, which are balanced by their affordability and the availability of many disease models.

Hyperpolarized xenon MRI can quantify regional lung microstructure (air-space dimensions) and physiology (ventilation and gas exchange) in translational research and clinical care. Although challenging, it can provide comparable pulmonary insights in preclinical studies. This protocol describes the infrastructure and procedures needed to perform routine xenon lung MRI in mice.

Hyperpolarized (HP) xenon-129 (129Xe) is an inhaled magnetic resonance imaging (MRI) contrast agent with unique spectral and physical properties that can ...

生物工学

<meta charset="utf8"></head><body>蛍光顕微鏡分析のための肺における真菌胞子局在の保存(英語)

Efficient Method for Imaging Murine Lungs that Preserves Spatial Dynamics of Fungal Spores in the Airways

Fungi infect humans when environmental spores are inhaled into the lungs. The lung is a heterogeneous organ. Conducting airways, including bronchi and bronchioles, branch until terminating in the alveolar airspace where gas exchange occurs. Infections originating in the bronchioles or alveoli elicit distinct host responses and disease manifestations. Therefore, understanding precisely where spores naturally localize in the lungs, particularly soon after infection, expands opportunities for investigation of host-pathogen interactions. Herein, we detail an in-situ analysis of lungs from mice infected with Coccidioides posadasii cts2/ard1/cts3&#916; arthroconidia. Conventional methods for histological preservation involve liquid inflation of the airways with a fixative solution, which displaces the natural location of aspirated fungal particles, pushing spores from proximal bronchioles to terminal airspaces.
Conversely, this method of air-inflation with blood vasculature perfusion-fixation preserves the physiologic position of fungal spores within the bronchioles. Moreover, we describe a simple approach to cryopreserving, embedding, and imaging lung specimens. We also share high-throughput computational techniques via the open-source QuPath program to analyze the spatial distribution of fungal spores within the lung. The method presented here is simple and quick, requires minimal equipment to perform, and can be easily adapted for use with many respiratory fungal infection models.

<meta charset="utf8"></head><body>気道内の真菌胞子の空間動態を保存するマウス肺の効率的なイメージング法

We present a method for a fungal pathogenesis model that preserves the natural positioning of fungal spores in the lung airways for analysis via fluorescent microscopy.

気道内の真菌胞子の空間動態を保存するマウス肺の効率的なイメージング法

Fungi infect humans when environmental spores are inhaled into the lungs. The lung is a heterogeneous organ. Conducting airways, including bronchi and ...

新生児マウスの肺における肺流体体積のリアルタイムX線イメージング

要約

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真空安定化撮像窓と肺における長期高分解能生体顕微鏡

超音波画像によるマウスにおける肺腫瘍の進行の検出

生物発光細菌を使用してリアルタイムに急性肺炎のマウスモデルにおける肺炎球菌の毒性因子の影響を以下の

マイクロCTイメージング用成人および早期産後マウス肺の血管鋳造

マウスにおけるブレオマイシン誘発肺線維症の縦断的評価マイクロ CT と蛍光分子トモグラフィーに基づくマルチモーダルイメージング手法

グラム陰性細菌敗血症の新生児画像モデル

真空安定化イメージングシステムを用いた実験的急性肺損傷における肺微小循環の生体内広視野蛍光顕微鏡

Hyperpolarized ¹²⁹Xe Lung MRI and Spectroscopy in Mechanically Ventilated Mice

気道内の真菌胞子の空間動態を保存するマウス肺の効率的なイメージング法

気道内の真菌胞子の空間動態を保存するマウス肺の効率的なイメージング法

新生児マウスの肺における肺流体体積のリアルタイムX線イメージング

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真空安定化撮像窓と肺における長期高分解能生体顕微鏡

超音波画像によるマウスにおける肺腫瘍の進行の検出

生物発光細菌を使用してリアルタイムに急性肺炎のマウスモデルにおける肺炎球菌の毒性因子の影響を以下の

マイクロCTイメージング用成人および早期産後マウス肺の血管鋳造

マウスにおけるブレオマイシン誘発肺線維症の縦断的評価マイクロ CT と蛍光分子トモグラフィーに基づくマルチ モーダル イメージング手法

グラム陰性細菌敗血症の新生児画像モデル

真空安定化イメージングシステムを用いた実験的急性肺損傷における肺微小循環の生体内広視野蛍光顕微鏡

Hyperpolarized 129Xe Lung MRI and Spectroscopy in Mechanically Ventilated Mice

気道内の真菌胞子の空間動態を保存するマウス肺の効率的なイメージング法

気道内の真菌胞子の空間動態を保存するマウス肺の効率的なイメージング法

マウスにおけるブレオマイシン誘発肺線維症の縦断的評価マイクロ CT と蛍光分子トモグラフィーに基づくマルチモーダルイメージング手法

Hyperpolarized ¹²⁹Xe Lung MRI and Spectroscopy in Mechanically Ventilated Mice