Name: technique to collect fungiform (taste) papillae from human tongue
Uploaded: 2010-09-18T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
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Questo lavoro è stato sostenuto da NIH R21 DC03969-01 (a JGB). Ringraziamo il Dr. Fritz Lischka per l&#39;acquisizione di singole cellule papille gustative, il Dott. Tauf Huque per l&#39;esecuzione della RT-PCR Figura 4B e il Sig. D. Bayley e la signora S. Alarcon per assistenza tecnica. M. Pepino Yanina è un tipo supportato da una DA07313 NIDAT32 Washington University School of Medicine, St. Louis, MO (Cottler, LB PI).

1. Introduzione e considerazioni generali La procedura generale prevede l&#39;anestesia locale di un piccolo (1 cm 2) area della superficie dorsale della lingua anteriore, seguita da rimozione di un numero (6-8) di fungiformi (gusto) papille da quella zona anestetizzati con una curva primavera micro -forbici (McPherson-Vännäs tipo # SR 5603, Roboz, Rockville, MD). Il rimosso papille fungiformi sono circa 0,25 mm 3 ciascuna. C&#39;è molto poco non papille (gusto) tessuto epiteliale rimosso con ogni papilla. Nuovo modulo papille in questo settore dopo 3 a 5 settimane e riprendere il funzionamento papille gustative (Spielman e Brand, osservazioni non pubblicate). Non vi è alcun effetto evidente sul gusto o sapore del cibo dopo la rimozione di questa piccola quantità di materiale gusto. Da studi che hanno contato papille gustative individuali nella lingua umano adulto, si può stimare che la lingua umana contiene circa 5000 papille gustative. La nostra procedura consente di rimuovere al massimo 20 a 25 di queste papille gustative (in media, ~ 3,5-4 papille fungiformi ogni papilla umani) 2, pari a circa lo 0,4% del totale. Inoltre non vi è dolore associato con la perdita chirurgica di questo tessuto. Ci si sente, ovviamente, un leggero dolore al sito di iniezione solo, come l&#39;ago entra nella lingua. Dopo l&#39;anestesia ha portato fuori, c&#39;è il disagio di tanto in tanto mite per meno di un giorno, ma questo disagio è molto meno di quello che si sperimenta dopo accidentalmente &quot;morde&quot; la lingua quelle. Negli ultimi anni abbiamo sviluppato una procedura alternativa che non include l&#39;anestesia. La tecnica per la rimozione dei tessuti è identico per entrambi. L&#39;unica differenza nella procedura è che il chirurgo non è più confinata ad un centimetro di diametro 1 2 zona in cui è stato affrontato l&#39;anestesia. Piuttosto s / he può scegliere qualsiasi sito sulla superficie dorsale della lingua in cui papille prominenti apparire. Il numero totale di papille rimosse sono limitate a 6-8 in entrambe le tecniche, con o senza anestesia se eseguito correttamente, il disagio di rimuovere 6-8 papille gustative fungiformi è considerato un problema minore se confrontato con il dolore associato con la somministrazione di anestesia locale Un&#39;indagine generale di individui che hanno subito entrambe le procedure, cioè, con e senza anestesia, ha dimostrato che la stragrande maggioranza dei soggetti si dispensano senza anestesia locale in tutte le biopsie futuro. Il chirurgo che ha sviluppato questa tecnica (AIS) e diversi colleghi insegnato dall&#39;autore che ha eseguito biopsie senza anestesia, hanno provato su se stessi e testimoniano che il disagio è temporaneo ed è considerata inferiore a quella di mordersi la lingua. Infine, decine di persone che hanno accettato di essere sottoposte a biopsia è stato chiesto se sarebbero disposti a provare la rimozione di una papilla senza anestesia e se lo ritengono di essere troppo doloroso che subirebbe l&#39;anestesia, hanno tutti convenuto di proseguire con la rimozione delle papille senza anestesia. L&#39;intero biopsia non dovrebbe richiedere più di 5-10 minuti. Se l&#39;anestesia è impiegato altri 2-3 minuti viene aggiunto. La biopsia viene generalmente effettuata nelle prime ore del mattino. Prima della biopsia, i volontari sono incaricati di mangiare un pasto leggero due ore prima dell&#39;ora di inizio prevista. Alla biopsia, il consenso informato scritto è ottenuta. I criteri di esclusione, al momento della biopsia includono quelli con gravi malattie croniche, sia sotto controllo farmacologico o non (ad esempio, eventuali malattie gastrointestinali, malattie neurodegenerative, tumori, discrasie ematiche, allergia al anestetici locali, ecc), quelli con frequenza cardiaca superiore a 100 o meno di 60; pressione sistolica maggiore di 145 o inferiore a 100; pressione diastolica superiore a 90 o meno di 60, e il parere del chirurgo che il soggetto può partecipare allo studio. Infine, è importante considerare che la procedura di biopsia dovrebbe essere effettuata nella stessa struttura dove il tessuto verranno trattati per l&#39;esame in quanto l&#39;integrità dei tessuti sta rapidamente persa, come abbiamo più volte notato dalla qualità diminuzione di mRNA. Per minimizzare questi problemi il tessuto della lingua devono essere trattati il ​​più rapidamente possibile. 2. Preparazione soggetto <ol><li> Il soggetto è seduto su una poltrona o un posto a sedere con un poggiatesta. </li><li> Controllare la frequenza cardiaca e la pressione arteriosa al momento della biopsia. Se dovesse cadere soggetto al di fuori del campo della pressione arteriosa, frequenza cardiaca o di una competenza orale, il chirurgo consiglia al soggetto che lui / lei prendere appuntamento immediato vedere un medico. </li><li> Ispezionare la cavità orale per la salute dei tessuti generale, con particolare attenzione agli indicatori di xerostomia, della lingua geografica o eventuali lesioni della lingua. Qualsiasi soggetto che mostra segni di patologie orali, comprese lesioni della lingua o della xerostomia sono esclusi dallo studio. Istruire il soggetto a sciacquare la bocca con acqua per rimuovere tutti i detriti dalla cavità oraley. Se necessario, la lingua è pulita con un scrapper lingua usa e getta per rimuovere la placca o detriti, che potrebbe essere portato in lingua durante l&#39;iniezione dell&#39;anestesia. Il chirurgo utilizza tamponi di garza sterile in una mano guantata di tenere il quarto anteriore della lingua che si estende dalla cavità orale. </li><li> Se l&#39;anestesia viene utilizzata, una siringa tubercolina 1cc con un calibro 28 x ½ &#39;ago contenente 0,25 ml di lidocaina (2%) con adrenalina (1:100.000) viene iniettata lentamente in un sito appena sotto la superficie dorsale della porzione anteriore della lingua . Il sito di anestesia è distale al sito di raccolta per evitare interferenze con la lidocaina con studi successivi. Per confronto, la quantità di lidocaina iniettata (0,25 ml) è circa un quarto della quantità normalmente dato per il blocco del nervo a procedure dentali (0,8 ml a 1 ml). Dopo l&#39;inserimento dell&#39;ago, ma prima dell&#39;iniezione dell&#39;anestetico, aspirazione assicura che nessun vaso sanguigno viene colpito. Questa precauzione è presa anche se è anatomicamente improbabile che una nave di grandi dimensioni sarà colpito vicino alla superficie dorsale. Le arterie solo sulla superficie dorsale, le arterie dorsali lingue sono piccoli vasi sanguigni in primo luogo situato più posteriormente al terzo anteriore, dove la raccolta dei tessuti si verifica. Le arterie più grandi lingue e le vene linguali correre sulla superficie ventrale della lingua, lontana dalla zona dorsale ricevere anestesia 3. Il 1 area centimetri anestetizzati sembra essere leggermente pallido rispetto al tessuto circostante. Ciò è dovuto al rigonfiamento del tessuto in quanto comprime i piccoli vasi sanguigni. E &#39;anche per l&#39;effetto vasocostrittore della epinefrina. Dopo circa un minuto, una sonda viene utilizzata per testare l&#39;area di intorpidimento. Se l&#39;area non è insensibile, una seconda iniezione (da 0,1 a 0,2 ml) può essere somministrato. </li></ol> 3. Lingua Papille tecnica di rimozione <ol><li> Il quarto anteriore della lingua del soggetto è avvolto in una garza sterile (Figura 1) e tenuto nella mano sinistra del chirurgo (se si esegue la biopsia con la mano destra). Un angolo della garza viene lasciata aperta per permettere al chirurgo di pulire la lingua senza saliva. La lingua deve essere tenuto fermamente, ma, naturalmente, non in modo tale da causare disagio inutili. La punta del dito indice della mano sinistra è posizionata sotto la lingua direttamente sotto il sito in cui viene eseguita la biopsia. Premendo il dito indice verso l&#39;alto, la lingua diventa tesa sopra la punta del dito facendo le papille sporgere per una facile biopsia. </li><li> Criteri per la scelta papille per la biopsia: papille gustative sono facilmente distinguibili dalle circostanti filliform papille dalla loro forma e dimensione. Papille fungiformi sono rotondi e un po &#39;isolata dal circostante. Nelle loro immediate vicinanze vi è uno spazio circolare privo di filliform papille (Figura 2A, frecce blu). Questo spazio è di circa 1 mm di diametro. Un&#39;altra caratteristica distintiva delle papille fungiformi è estesa arborizzazione capillare visibile sulla parte superiore della maggior parte delle papille fungiformi soggetti giovani. Anche se arborizzazione rende più facile localizzare papille fungiformi, non sono necessariamente buoni predittori dell&#39;esistenza di papille gustative in quel papilla. Come una norma relativa raccolta inizia verso la fine anteriore e si allontana dalla punta della lingua per evitare emorragie capillari da oscurare il sito della collezione dei tessuti successiva. </li><li> Una volta che un buon papilla è stata identificata, una molla micro-forbici (McPherson-Vännäs, curva, tagliente affilato 5 mm, pettine, larghezza punta 0,2 mm lunghezza 3 &quot;(RS-5603, Roboz) è usato per tagliare fuori. Per utilizzare efficacemente le forbici micro chirurgico non si dovrebbe usare la punta della lama per il taglio, anzi, per quanto all&#39;interno della lama il più possibile (figura 1, l&#39;immagine ingrandita e la Figura 3), vicino al punto di intersezione con la lama opposta. La rimozione della papilla è realizzato con una mossa di taglio delle forbici (figura 1). ulteriormente all&#39;interno delle pale aprire la papilla appare mirata, più efficace è il taglio. Prestare attenzione che la posizione complessiva delle forbici devono essere paralleli con la superficie dorsale della lingua. </li><li> A volte la lingua diventa secco come il chirurgo sta cercando di identificare una papilla per la rimozione. Una volta asciutta, la capacità dell&#39;operatore di vedere chiaramente che è un papille fungiformi diventa più impegnativo e fa scorrere delle pale sopra la papilla molto difficile. Una lingua troppo secco rende di solito lo stick lama metallica alla lingua di effettuare il passaggio delicato intervento chirurgico meno controllabili. Lasciando che il soggetto vicino il suo / la sua bocca e la saliva sono venuti a contatto con la superficie della lingua aiuta il processo. Eccessivamente lingua bagnata non è buono neanche. Utilizzando l&#39;angolo della garza che si usa per tenere la lingua aiuta in questo processo. </li><li> Qualsiasi sanguinamento capillare che si verifica è trattato tamponando con garza sterile. Il sanguinamento di solito si ferma a pochi min<html> sce e non interferisce con la raccolta di tessuto aggiuntivo. Perché le papille estendono al di sopra della superficie epiteliale della lingua, e solo le superiori 3 / 4 di una papilla fungiformi viene rimosso (Figura 2B), quella parte del fungiform mostrando papille gustative, piccolo sanguinamento è previsto. </li><li> Usando un piccolo Dumont pinza (tipo Pattern), le papille rimossi sono collocati in refrigerata tampone Ringer di base (130 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl 2, 1 mM MgCl 2, 1 mM Na-piruvato, 20 mM HEPES-Na , pH 7.2; osmolalità di circa 305 osmols millisecondi) per le manipolazioni successive. E &#39;imperativo per pizzicare MAI la papilla tra le lame di una pinza. Il tessuto è molto fragile e deve essere maneggiato con estrema cura. </li><li> Dopo la rimozione delle papille, il soggetto rimane sulla sedia per 10-15 minuti. Ogni soggetto è detto di non mordere la lingua anestetizzata, ma per mantenere la loro lingua a riposo. Soggetti devono essere visivamente monitorato dal chirurgo curante. L&#39;anestesia è previsto a svanire in circa 30-60 minuti. Perché il sito di rimozione papille potrebbe essere leggermente dolorante dopo la biopsia, sono istruiti a essere consapevoli di piccante o caldo (temperatura) alimenti, bevande gassate o bevande che sono o molto freddi o caldi. Un ulteriore indizio è dato a soggetti che ogni leggera colorazione rossastra della saliva è normale e cesserà in caso di dissoluzione del coagulo. </li><li> I soggetti sono visti 30-40 giorni dopo la rimozione delle papille per la valutazione del sito in cui sono state rimosse le papille. In questo momento papille gustative dovrebbe avere completamente rigenerato. </li></ol> 5. Rappresentante Risultati Tessuti raccolti possono essere utilizzati per l&#39;immunoistochimica, RT-PCR, ibridazione in situ, l&#39;imaging del calcio, patch di serraggio e coltura di tessuti. Quando eseguito correttamente l&#39;aspetto delle papille sono sani cercando, bianco, circa 0,5-1 mm di diametro (Figura 2B). Papille raccolti per immunoistochimica sono elaborati sulla base di protocolli esistenti e pubblicato 4. Una gemma da un gusto tipico paraformaldehide-fisso papilla gusto è mostrato nella figura 4A. Papille biopsia può anche essere trattate enzimaticamente da 5 a raggiungere dissociazione delle cellule papille gustative. Dopo la dissociazione enzimatica, le cellule possono essere mantenute fino a 4 ore in un piatto umidificato Petri a 4C. In questo stato possono essere utilizzati per la PCR singola cellula (Figura 4B), Ca-imaging, ecc Le cellule mostrano una varietà di forme, molti sono sottili e bipolare (Figura 5A e 5B), come ci si aspetterebbe da una cellula papille gustative. Quando si raccolgono le cellule o l&#39;esecuzione di Ca-imaging, dopo circa 20 minuti al microscopio, le cellule iniziano a sviluppare vesciche apoptotici (Figura 6A e 6B, frecce) e molti di loro diventano rotonde. Utilizzando una tecnica sviluppata nel nostro laboratorio, le cellule sono state prelevati singolarmente con un patch-pipetta, come mostrato nella Figura 5A e 5B. Come accennato in precedenza, papille cominciano a ricrescere dopo 5 a 8 settimane. 7A figura mostra l&#39;aspetto di una lingua in cui sono stati rimossi 8 papille fungiformi dal lato sinistro lingua di un volontario senza utilizzare l&#39;anestesia. Avviso 8 posti leggermente rossastro, dove sono state tagliate le papille off. Nessun sanguinamento si osserva dopo l&#39;intervento chirurgico. L&#39;immagine attuale è stata scattata 10 minuti dopo la biopsia. 7B figura è l&#39;immagine della lingua dello stesso soggetto visto 40 giorni dopo la biopsia. Gara tutti papille sono ricresciuti. Per determinare se le papille rigenerati sono funzionali abbiamo chiesto ai nostri volontari di accettare una seconda biopsia che coinvolge le papille esattamente lo stesso. Per identificare correttamente le papille appropriato stavamo progettando di ri-raccolto, abbiamo generato una griglia (Figura 7C) che si inserisce l&#39;8 papille che sono stati rimossi, in primo luogo e sovrapposti sopra la lingua del volontario stesso dopo 40 giorni dopo biopsia iniziale . Aiutato dal contorno della lingua e la distanza dal margine alla griglia, una volta individuato, abbiamo rimosso alcune delle papille stesse esatte e trattati per loro immunoistochimica. Figura 4A è una di queste papille. Si noti la sagoma di un papille gustative (in giallo) e la colorazione immunopositive per fosfolipasi Cβ2 (PLCβ2), a 2 celle gusto tipo di trasduzione associati enzima. Questi dati dimostrano che utilizzando la procedura biopsia come sopra descritto, le papille fungiformi rigenerare sufficientemente da 40 giorni per avere anche in luogo probabile papille gustative funzionale. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Il quarto anteriore della lingua del soggetto è avvolto in una garza sterile e tiene nella mano sinistra del chirurgo. Lingua deve essere tenuto saldamente. L&#39;immagine ingrandita a destra mostra la posizione corretta delle forbici e la posizione della papilla in relazione alla lama. 201/2201fig2.jpg &quot;alt =&quot; Figura 2 &quot;/&gt; Figura 2. (A) papille fungiformi sono indicati con le frecce blu. Si tratta di strutture rotondo un po &#39;isolato dai suoi dintorni e nelle loro immediate vicinanze vi è uno spazio circolare privo di filliform papille. (B) papille fungiformi sapore sulla punta della primavera micro-forbici secondi dopo che è stato rimosso. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. Auto biopsia di una papilla fungiformi utilizzando uno specchio e senza anestesia. L&#39;inserto illustra la posizione complessiva delle forbici, che deve essere parallelo alla superficie dorsale della lingua. Se fatto correttamente e atraumatico, l&#39;anestesia è rinunciato praticamente da tutti i volontari. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig4a.jpg" alt="Figura 4a" /> Figura 4 A. Immunoistochimica di un bocciolo gusto. Un papilla ottica fungiformi visualizzati da Nomarski utilizzando anticorpi fosfolipasi β2 e taggati con Red proteina fluorescente. Il profilo della gemma gusto e poche cellule gusto verranno indicati in giallo. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig4b.jpg" alt="Figura 4b" /> B. RT-PCR di un recettore aspro sapore candidato, Acido Sensing Ion Canale 1 (ASIC1). M = marcatore. Corsie da 1 a 4 sono stati singola cellula RT-PCR per ASIC1 da quattro volontari diversi. Dopo la raccolta, papille fungiformi erano dissociate enzimaticamente le cellule singolarmente presi e espressione di ASIC1 sono stati fatti. 2 e 4 corsie erano espressione normale di ASIC1. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig5.jpg" alt="Figura 5" /> Figura 5. Immagine di A. cellule gustative singolo essere raccolto con una pipetta di patch. A grandi cellule epiteliali è visibile nell&#39;angolo in basso a sinistra (5A). Due i globuli rossi sono visibili anche al di sopra della pipetta di patch e dietro la canna di vetro. La cella gusto è di circa 30-50 micron di lunghezza e circa 6 micron di larghezza. Per avere un riferimento, un globulo rosso è di circa 7-8 micron di diametro. B. mostra un altro recettore cellulare gusto circondato da quattro cellule epiteliali. La cella gusto aspetto croccante. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig6.jpg" alt="Figura 6" /> Figura 6. A. immagini di cellule che ha iniziato a sviluppare vesciche apoptotici (fantasma come vesciche intorno collegato alla cella di gusto, frecce). B. Le cellule non sono più raccolte quando il loro aspetto cambia come mostrato qui. <img src="/files/ftp_upload/2201/2201fig7.jpg" alt="Figura 7" /> Figura 7. A. Dieci minuti dopo la rimozione di 8 papille gustative senza utilizzare l&#39;anestesia. I siti chirurgici sono visibili come macchie leggermente rossastro. Assenza di sanguinamento è notato. B. La lingua stessa 40 giorni dopo la biopsia. Gara tutti papille rigenerato. Per aiutare a identificare le papille rimosso come ricresciuti, una griglia è stata creata con il sito sull&#39;immagine a destra e spostato oltre le papille rigenerato sull&#39;immagine a sinistra. C. Le papille rigenerato apparso nel punto esatto stesso. La raccolta papille ripartire da questo gruppo seguito da immunoistochimica ha dimostrato che le papille rigenerato contenute cellule gustative funzionale (vedi Figura 4A).

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	<li>Breslin, P. A., Spector, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+taste+perception.">Mammalian taste perception.</a> Curr Biol. 26 (4), R148-R155 (2008).</li><li>Miller, I., Doty, R. I., Dekker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+the+peripheral+taste+system.">Anatomy of the peripheral taste system.</a> Handbook of Olfaction and Gustation. , 521-547 (1995).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Figure+12.67.">Figure 12.67.</a> Gray's Anatomy: The Anatomical Basis of Medicine and Surgery. , (1995).</li><li>Huque, T., Cowart, B. J., Dankulich-Nagrudny, L., Pribitkin, E. A., Bayley, D. L., Spielman, A., Feldman, I., S, R., Mackler, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sour+ageusia+in+two+individuals+implicates+ion+channels+of+the+ASIC+and+PKD+families+in+human+sour+taste+perception+at+the+anterior+tongue.">Sour ageusia in two individuals implicates ion channels of the ASIC and PKD families in human sour taste perception at the anterior tongue.</a> PLoS One. 4 (10), e7347-e7347 (2009).</li><li>MacDonald, J. F., Mody, I., Salter, M. W., Spielman, A. I., Spielman, A. I., Brand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patch-clamping+of+taste+cells+in+mouse.">Patch-clamping of taste cells in mouse.</a> Experimental Cell Biology of Taste and Olfaction. , 329-332 (1995).</li></ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Un notevole vantaggio di utilizzare cellule umane è la loro specificità. La procedura descritta in dettaglio fornisce tessuto lingua per l&#39;isolamento delle cellule gustative recettore dagli esseri umani. Queste cellule gustative possono essere utilizzati per studi molecolari, cercando di scoprire molecole importanti per la trasduzione di informazioni gusto, e per studi di imaging del calcio che monitorano l&#39;attività delle cellule gusto agli stimoli. Inoltre, il tessuto lingua forniti da questa procedura posso...

<table><tbody><tr><td>McPherson-Vannas. Curved, sharp cutting edge 5mm. Comb, tip width 0.2 mm overall length 3&quot;</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5603, Roboz</td><td></td></tr><tr><td>Small Dumont forceps</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-4915, Roboz</td><td></td></tr></tbody></table>

technique to collect fungiform (taste) papillae from human tongue

Il senso del gusto è fondamentale per la vita umana. Si informa il corpo circa la qualità del cibo che sarà potenzialmente ingerito e stimola i processi metabolici che preparano il canale alimentare per la digestione. Costanti progressi si stanno compiendo verso la comprensione degli eventi biochimici e molecolari primi sottostante trasduzione del gusto (per una rassegna, Breslin e Spector, 2008 1). Tuttavia, i progressi fino ad oggi è in gran parte il risultato di modelli animali. Tuttavia, dal momento che marcate differenze nella specificità del recettore e la densità dei recettori variano da specie a specie, trasduzione gusto umano essere compresa solo utilizzando tessuti umani gusto. Qui si descrive una tecnica di biopsia per raccogliere umano papille fungiformi, visibili come strutture rosa anteriori arrotondati, di circa 0,5 mm di diametro che contengono le papille gustative. Queste papille biopsie sono utilizzati per scopi diversi tra cui l&#39;isolamento delle cellule vitali papille gustative, ibridazione in situ, immunoistochimica e, attraverso tecniche di biologia molecolare, l&#39;identificazione del gusto proteine ​​specifiche del romanzo.

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Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

Conoscenza dei meccanismi molecolari alla base di trasduzione gustativa ha recentemente goduto di significativi passi avanti, soprattutto grazie all&#39;utilizzo di modelli animali. Tuttavia, la grande diversità di sensibilità e specificità tra gusto garantisce mammiferi studi nel tessuto umano. Descriviamo una tecnica di biopsia per raccogliere cellule gustative viventi dalle papille sulla lingua umana.

Tecnica per raccogliere fungiformi (Gusto) Papille da lingua umana

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic ...

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Research

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Medicine

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

28.9K Views.  College of Dentistry, New York University. Conoscenza dei meccanismi molecolari alla base di trasduzione gustativa ha recentemente goduto di significativi passi avanti, soprattutto grazie all'utilizzo di modelli animali. Tuttavia, la grande diversità di sensibilità e specificità tra gusto garantisce mammiferi studi nel tessuto umano. Descriviamo una tecnica di biopsia per raccogliere cellule gustative viventi dalle papille sulla lingua umana.

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Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

In order to construct an effective and realistic model for tongue squamous cell carcinoma (TSCC) in vitro, the methods were created to produce decellularized tongue extracellular matrix (TEM) which provides functional scaffolds for TSCC construction. TEM provides an in vitro niche for cell growth, differentiation, and cell migration. The microstructures of native extracellular matrix (ECM) and biochemical compositions retained in the decellularized matrix provide tissue-specific niches for anchoring cells. The fabrication of TEM can be realized by deoxyribonuclease (DNase) digestion accompanied with a serious of organic or inorganic pretreatment. This protocol is easy to operate and ensures high efficiency for the decellularization. The TEM showed favorable cytocompatibility for TSCC cells under static or stirred culture conditions, which enables the construction of the TSCC model. A self-made bioreactor was also used for the persistent stirred condition for cell culture. Reconstructed TSCC using TEM showed the characteristics and properties resembling clinical TSCC histopathology, suggesting the potential in TSCC research.

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

A method is shown here for the preparation of the tongue extracellular matrix (TEM) with efficient decellularization. The TEM can be used as functional scaffolds for the reconstruction of a tongue squamous cell carcinoma (TSCC) model under static or stirred culture conditions.

Fabbricazione di lingua della matrice extracellulare e la ricostituzione di Carcinoma di cellule Squamous Tongue In Vitro

In order to construct an effective and realistic model for tongue squamous cell carcinoma (TSCC) in vitro, the methods were created to produce ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple stimuli and complex chemical molecules contained in foods. In human, individual fungiform papillae contain from zero to as many as 20 taste buds. There is no established protocol for culturing human taste cells, although the ability to maintain taste papillae cells in culture for multiple cell cycles would be of considerable utility for characterizing the molecular, regenerative, and functional properties of these unique sensory cells. Earlier studies of taste cells have been done using freshly isolated cells in primary culture, explant cultures from rodents, or semi-intact taste buds in tissue slices1,2,3,4. Although each of these preparations has advantages, the development of long-term cultures would have provided significant benefits, particularly for studies of taste cell proliferation and differentiation. Several groups, including ours, have been interested in the development and establishment of taste cell culture models. Most attempts to culture taste cells have reported limited viability, with cells typically not lasting beyond 3-5 d5,6,7,8. We recently reported on a successful method for the extended culture of rodent taste cells9. We here report for the first time the establishment of an in vitro culture system for isolated human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability. Cells displayed many molecular and physiological features characteristic of mature taste cells. Gustducin and phospholipase C &beta;2, (PLC-&beta;2) mRNA were detected in many cells by reverse transcriptase-polymerase chain reaction and confirmed by sequencing. Immunocytochemistry analysis demonstrated the presence of gustducin and PLC-&beta;2 expression in cultured taste cells. Cultured human fungiform cells also exhibited increases in intracellular calcium in response to appropriate concentrations of several taste stimuli indicating that taste receptors and at least some of the signalling pathways were present. These results sufficient indicate that taste cells from adult humans can be generated and maintained for at least eight passages. Many of the cells retain physiological and biochemical characteristics of acutely isolated cells from the adult taste epithelium to support their use as a model taste system. This system will enable further studies of the processes involved in proliferation, differentiation and function of mammalian taste receptor cells in an in vitro preparation.
Human fungiform taste papillae used for establishing human fungiform cell culture were donated for research following proper informed consent under research protocols that were reviewed and approved by the IRB committee. The protocol (#0934) was approved by Schulman Associates Institutional Review Board Inc., Cincinnati, OH. Written protocol below is based on published parameters reported by Ozdener et al. 201110.

We aimed to develop a reproducible protocol for isolating and maintaining long-term cultures of human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability.

Isolamento e la coltura di cellule umane Gusto papille fungiformi

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Neuroscienze

Measuring Oral Fatty Acid Thresholds, Fat Perception, Fatty Food Liking, and Papillae Density in Humans

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty acid receptors housed on taste cells. Previous research has shown that an individual&#39;s oral sensitivity to fatty acid, specifically oleic acid (C18:1) is associated with body mass index (BMI), dietary fat consumption, and the ability to identify fat in foods. We have developed a reliable and reproducible method to assess oral chemoreception of fatty acids, using a milk and C18:1 emulsion, together with an ascending forced choice triangle procedure. In parallel, a food matrix has been developed to assess an individual&#39;s ability to perceive fat, in addition to a simple method to assess fatty food liking. As an added measure tongue photography is used to assess papillae density, with higher density often being associated with increased taste sensitivity.

Oral chemoreception of fatty acids and the association with diet and fatty food preferences may enable the identification of mechanisms involved with the development of obesity and why dietary changes may be difficult for many individuals.

Misurazione orale acidi grassi Soglie, Fat Percezione, grasso alimentare Simpatia, e Papille densità di esseri umani

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty ...

Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure consistent scoring between scorers. This protocol builds off of a need that has arisen from the last two decades of taste research using FP as a proxy for taste pore density. FP density has historically been analyzed using Miller &#38; Reedy&#8217;s 1990 characterizations of their morphology: round, stained lighter, large, and elevated. In this work, the authors forewarned that stricter definitions of FP morphology needed to be outlined. Despite this call to action, follow up literature has been scarce, with most studies continuing to cite Miller &#38; Reedy&#8217;s original work. Consequently, FP density reports have been highly variable and, combined with small sample sizes, may contribute to the discrepant conclusions on the role of FP in taste sensitivity. The Genetics of Taste Lab explored this apparent inconsistency in counting and found that scorers were individually prioritizing the importance of these characteristics differently and had no guidance for when a papilla had some, but not all, of the reported qualities of FP. The result of this subjectivity is highly variable FP counts of the same tongue image. The Denver Papillae Protocol has been developed to remedy this consequence through use of a dichotomous key that further defines and prioritizes the importance of the characteristics put forth by Miller &#38; Reedy. The proposed method could help create a standard way to quantify FP for researchers in the field of taste and nutritional studies.

Here we present a protocol to measure fungiform papilla density from digital photographs. This method builds prioritization and objective characteristic metrics into the original descriptive work on fungiform papillae by Miller &#38; Reedy (1990).

Denver Papille protocollo per l&#39;analisi Obiettivo papille fungiformi

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

Taste Exam: A Brief and Validated Test

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement classic taste-testing methods in two ways. First, we explain how to do a brief assessment of the mouth, including the tongue, to ensure that taste papillae are present and to note evidence of relevant disease. Second, we draw on genetics to validate taste test data by comparing reports of perceived bitterness intensity and inborn receptor genotypes. Discordance between objective measures of genotype and subjective reports of taste experience can identify data collection errors, distracted subjects or those who have not understood or followed instructions. Our expectation is that fast and valid taste tests may persuade researchers and clinicians to assess taste regularly, making taste testing as common as testing for hearing and vision. Finally, because many tissues of the body express taste receptors, taste responses may provide a proxy for tissue sensitivity elsewhere in the body and, thereby, serve as a rapid, point-of-care test to guide diagnosis and a research tool to evaluate taste receptor protein function.

This protocol measures human taste responses and includes a brief anatomical assessment, a short taste test, and a validation method using the subject&#39;s reported sensation and taste receptor genotype.

Esame gustativo: Un Test breve e convalidato

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement ...

Medicina

Whole-Mount Staining, Visualization, and Analysis of Fungiform, Circumvallate, and Palate Taste Buds

Taste buds are collections of taste-transducing cells specialized to detect subsets of chemical stimuli in the oral cavity. These transducing cells communicate with nerve fibers that carry this information to the brain. Because taste-transducing cells continuously die and are replaced throughout adulthood, the taste-bud environment is both complex and dynamic, requiring detailed analyses of its cell types, their locations, and any physical relationships between them. Detailed analyses have been limited by tongue-tissue heterogeneity and density that have significantly reduced antibody permeability. These obstacles require sectioning protocols that result in splitting taste buds across sections so that measurements are only approximated, and cell relationships are lost. To overcome these challenges, the methods described herein involve collecting, imaging, and analyzing whole taste buds and individual terminal arbors from three taste regions: fungiform papillae, circumvallate papillae, and the palate. Collecting whole taste buds reduces bias and technical variability and can be used to report absolute numbers for features including taste-bud volume, total taste-bud innervation, transducing-cell counts, and the morphology of individual terminal arbors. To demonstrate the advantages of this method, this paper provides comparisons of taste bud and innervation volumes between fungiform and circumvallate taste buds using a general taste-bud marker and a label for all taste fibers. A workflow for the use of sparse-cell genetic labeling of taste neurons (with labeled subsets of taste-transducing cells) is also provided. This workflow analyzes the structures of individual taste-nerve arbors, cell type numbers, and the physical relationships between cells using image analysis software. Together, these workflows provide a novel approach for tissue preparation and analysis of both whole taste buds and the complete morphology of their innervating arbors.

This paper describes methods for tissue preparation, staining, and analysis of whole fungiform, circumvallate, and palate taste buds that consistently yield whole and intact taste buds (including the nerve fibers that innervate them) and maintain the relationships between structures within taste buds and the surrounding papilla.

Colorazione, visualizzazione e analisi di papille gustative fungiformi, circumvallate e palato

Taste buds are collections of taste-transducing cells specialized to detect subsets of chemical stimuli in the oral cavity. These transducing cells ...

&#181;Tongue: A Microfluidics-Based Functional Imaging Platform for the Tongue In Vivo

Intravital fluorescence microscopy is a tool used widely to study multicellular dynamics in a live animal. However, it has not been successfully used in the taste sensory organ. By integrating microfluidics into the intravital tongue imaging window, the &#181;Tongue provides reliable functional images of taste cells in vivo under controlled exposure to multiple tastants. In this paper, a detailed step-by-step procedure to utilize the &#181;Tongue system is presented. There are five subsections: preparing of tastant solutions, setting up of a microfluidic module, sample mounting, acquiring functional image data, and data analysis. Some tips and techniques to solve the practical issues that may arise when using the &#181;Tongue are also presented.

 &#181;Tongue: A Microfluidics-Based Functional Imaging Platform for the Tongue In Vivo

The article introduces the &#181;Tongue (microfluidics-on-a-tongue) device for functional taste cell imaging in vivo by integrating microfluidics into an intravital imaging window on the tongue.

μTongue: una piattaforma di imaging funzionale basata sulla microfluidica per la lingua in vivo

Intravital fluorescence microscopy is a tool used widely to study multicellular dynamics in a live animal. However, it has not been successfully used in ...

Generation and Characterization of Murine Oral Mucosal Organoid Cultures

The mucous lining covering the inside of our mouth, the oral mucosa, is a highly compartmentalized tissue and can be subdivided into the buccal mucosa, gingiva, lips, palate, and tongue. Its uppermost layer, the oral epithelium, is maintained by adult stem cells throughout life. Proliferation and differentiation of adult epithelial stem cells have been intensively studied using in vivo mouse models as well as two-dimensional (2D) feeder-cell based in vitro models. Complementary to these methods is organoid technology, where adult stem cells are embedded into an extracellular matrix (ECM)-rich hydrogel and provided with a culture medium containing a defined cocktail of growth factors. Under these conditions, adult stem cells proliferate and spontaneously form three-dimensional (3D) cell clusters, the so-called organoids. Organoid cultures were initially established from murine small intestinal epithelial stem cells. However, the method has since been adapted for other epithelial stem cell types. Here, we describe a protocol for the generation and characterization of murine oral mucosal organoid cultures. Primary epithelial cells are isolated from murine tongue tissue, embedded into an ECM hydrogel, and cultured in a medium containing: epidermal growth factor (EGF), R-spondin, and fibroblast growth factor (FGF) 10. Within 7 to 14 days of initial seeding, the resulting organoids can be passaged for further expansion and cryopreservation. We additionally present strategies for the characterization of established organoid cultures via 3D whole-mount imaging and gene-expression analysis. This protocol may serve as a tool to investigate oral epithelial stem cell behavior ex vivo in a reductionist manner.

<meta charset="utf8"></head><body>Generazione e caratterizzazione di colture di organoidi murini della mucosa orale

We present a method for the generation and characterization of oral mucosal organoid cultures derived from the tongue epithelium of adult mice.

Generazione e caratterizzazione di colture di organoidi murini della mucosa orale

The mucous lining covering the inside of our mouth, the oral mucosa, is a highly compartmentalized tissue and can be subdivided into the buccal mucosa, ...

Biologia

The Tongue and Taste Buds

The surface of the tongue is covered with various small bumps called papillae, which either distribute what has been ingested (filiform papillae) or contain the sensory taste (or gustatory) receptor cells (fungiform, circumvallate, and foliate papillae). Embedded within each taste-related papilla are the taste buds&mdash;clusters of 30 to 100 gustatory receptor cells.

Gustatory receptor cells extend finger-like projections called gustatory hairs (or microvilli) into a region known as the taste pore. Here, many of the cells contain receptors that detect different tastants&mdash;the molecules that can be tasted. The average number of taste buds varies significantly among individuals, with estimates ranging from 2,000-10,000 taste buds. Taste cells have a lifespan of about 10-14 days and are continually replaced. Thus, each taste bud contains taste cells at different stages of development.

<h4>Different Types of Taste Papillae</h4>

Aside from the filiform papillae, which do not contain taste buds, the mushroom-shaped fungiform papillae are the most numerous. Fungiform papillae are predominantly located on the anterior two-thirds of the tongue and contain between one and eight taste buds each.

In contrast, the other two types of papillae&mdash;circumvallate and foliate&mdash;contain more than 100 taste buds per papilla. Circumvallate papillae, the largest type, are located at the back of the tongue in &ldquo;V&rdquo;-like formation. Nearby, on the sides of the tongue, are the foliate papillae.

<h4>The Myth of the Tongue&rsquo;s Taste Map</h4>

The work of many scientists, including Collings, Yanagisawa, and colleagues, indicates that the five basic tastes can be perceived anywhere across the tongue. Thus, distinct tastes are not restricted to particular regions, as typically indicated on tongue maps.

La lingua e le papille gustative

The surface of the tongue is covered with various small bumps called papillae, which either distribute what has been ingested (filiform papillae) or ...

Tecnica per raccogliere fungiformi (Gusto) Papille da lingua umana

Riepilogo

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Capitoli in questo video

Fabbricazione di lingua della matrice extracellulare e la ricostituzione di Carcinoma di cellule Squamous Tongue In Vitro

Isolamento e la coltura di cellule umane Gusto papille fungiformi

Misurazione orale acidi grassi Soglie, Fat Percezione, grasso alimentare Simpatia, e Papille densità di esseri umani

Denver Papille protocollo per l'analisi Obiettivo papille fungiformi

Esame gustativo: Un Test breve e convalidato

Colorazione, visualizzazione e analisi di papille gustative fungiformi, circumvallate e palato

μTongue: una piattaforma di imaging funzionale basata sulla microfluidica per la lingua in vivo

Generazione e caratterizzazione di colture di organoidi murini della mucosa orale

Generazione e caratterizzazione di colture di organoidi murini della mucosa orale

La lingua e le papille gustative