Name: taste exam: a brief and validated test
Uploaded: 2018-08-17T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
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Premi dal National Institutes of Health supportato questa ricerca (R01DC013588 a NAC, R21DC013886 NAC e DRR e supplemento di NIDCD amministrativa ricerca per promuovere emersione del clinico-scienziati nella ricerca Chemosensory a JED). Abbiamo raccolto dati di genotipo da attrezzatura acquistata in parte con fondi NIH da OD018125.

L'Università di Pennsylvania istituzionale Review board ha approvato questo protocollo. Abbiamo escluso soggetti se erano di età inferiore a 18 anni o erano incinte.
1. cavità valutazione: Valutazione di malattia e Papilla identificazione
<ol><li>Istruire il soggetto ad aprire la bocca.</li>
	<li>
Utilizzando una sorgente di luce come una penna illuminante o un proiettore, illuminare la cavità orale ed esaminare i sette siti secondari della zona (lingua, pavimento della bocca, mucosa orale, mucosa labial, gengiva, palato duro e trigono retromolare).
	<ol>
<li>Visualizzare la superficie dorsale della linguetta. Chiedere al soggetto di sollevare la linguetta ed esaminare la superficie ventrale della lingua e pavimento della bocca, facendo attenzione ad estendere l'esame posteriormente ai molari.</li>
		<li>Utilizzando un abbassalingua, lateralize guancia del soggetto per visualizzare la mucosa orale, come pure la gengiva laterale bilateralmente che circondano i denti superiori e inferiori.</li>
		<li>Estendere l'esame anteriormente sollevando le labbra superiori e inferiori per visualizzare le superfici della gengiva anteriore e della mucosa labiale.</li>
		<li>Infine, visualizzare il palato duro e trigono retromolare.</li>
		<li>Nota le lesioni, abrasioni e masse o segni di infiammazione.</li>
		<li>Ancora una volta, chiedere al soggetto di aprire la bocca ed estendere la lingua.</li>
		<li>Utilizzare una fonte di luce per visualizzare la superficie dorsale della linguetta.</li>
		<li>Identificare la presenza o l'assenza di FP, per esempio, una superficie di lingua liscia</li>
	</ol>
</li>
	<li>Notare i risultati dell'esame cavità orale prima di procedere con il test del gusto. Se gli investigatori conducono questo test di gusto in un contesto medico, i risultati inattesi dovrebbero richiamare ulteriore work-up.</li>
</ol>2. prova gusto psico-fisico
Nota: Le risorse e le descrizioni per il gusto di psicofisica test che seguono sono anche disponibili dalla pagina web seguente: https://osf.io/hn87s/.
<ol><li>
Preparazione tastant
	<ol>
<li>Preparare soluzioni come indicato di seguito. Rendere ogni soluzione utilizzando un matraccio per garantire precisione di concentrazioni da ± 0,0002 M. Dissolve campioni utilizzando acqua ultrapura. Adattare la scelta dei composti al raggiungimento degli obiettivi di ricerca. I composti inclusi in questa sezione sono pensati come un esempio.<ol>
<li>Denatonium benzoato (amaro): preparare una soluzione stock di 4,99 x 10-3 M denatonium benzoato sciogliendo 2,228 g di denatonium benzoato in 1 L di acqua. Aggiungere 180 µ l di questa soluzione in un matraccio tarato da 500 mL. Aggiungere acqua per portare il volume a 500 mL, producendo una soluzione con una concentrazione finale di 1,8 µM.</li>
			<li>PTC (amara): introdurre 0,0135 g di PTC in un matraccio tarato da 500 mL. Aggiungere acqua per portare il volume a 500 mL. PTC è difficile da sciogliere, quindi introdurre un ancoretta nel matraccio e riscaldare la soluzione a 70 ° C su una piastra calda. Utilizzare la barra per l'agitazione per miscelare la soluzione fino a quando tutti i soluto ha dissolto (~ 15 min). Questo produce una soluzione con una concentrazione finale di 180 µM.</li>
			<li>Chinino (amaro): introdurre 0,011 g di chinino HCl diidrato in un matraccio tarato da 500 mL. Aggiungere acqua per portare il volume a 500 mL, producendo una soluzione con una concentrazione finale di 56 µM.</li>
			<li>Cloruro di sodio (salato): posto 7,5 g di cloruro di sodio in un matraccio tarato da 500 mL. Aggiungere acqua per portare il volume a 500 mL, producendo una soluzione con una concentrazione finale di 0,25 M.</li>
			<li>Saccarosio (dolce): mettere 60 g di saccarosio in un matraccio tarato da 500 mL. Aggiungere acqua per portare il volume a 500 mL, producendo una soluzione con una concentrazione finale di 0,35 M.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Soluzioni di gusto Store a 4 ° C. Alcuni comunemente utilizzati composti di gusto sono sensibili alla luce, e gli investigatori dovrebbero avvolgerli in un foglio o altri materiali per ridurre la loro esposizione alla luce.</li>
		<li>Per identificare gli errori comuni nella preparazione di soluzione, riempire una tazza di degustazione con la vecchia soluzione e uno con la nuova soluzione. Gustare ogni soluzione per verificare che sono identici per forza.</li>
		<li>Include l'acqua come una soluzione di controllo, presentata in prima posizione per verificare soggetti capire la procedura di collaudo. Presenti soggetti con ogni tastant e il controllo tastant due volte, avendo cura di evitare che presenta lo stesso tastant consecutivamente. Ad esempio, per testare cinque tastants unico, presentano dodici campioni nel questionario (Vedi 2.2): cinque tastants ed acqua, ciascuno presentato due volte. Aliquota 5 mL di acqua nei flaconi di scintillazione di vetro individuali. Etichettare i tappi del flaconcino con un adesivo blu scuro recante il numero 1.</li>
		<li>Ripetere questo processo per ogni tastant. Etichetta flaconcino tappi con un adesivo circolare secondo l'ordine di presentazione e il codice colore, esempio descritto di seguito; corrispondere le etichette del flaconcino con le etichette sul questionario di gusto (Vedi 2.2). Acqua (blu scuro) Chinina (blu chiaro) NaCl (verde) PTC (giallo) Saccarosio (arancione) Denatonium benzoato (rosso) NaCl (blu scuro) Denatonium benzoato (blu chiaro) Acqua (verde) Chinina (giallo) Saccarosio (arancione) PTC (rosso)</li>
		<li>Pacchetto campioni mettendoli in due scatole, campioni 1 – 6 e 7 – 12 nelle caselle denominate rispettivamente "scatola A" e "casella B," (Figura 1); altre strategie di packaging sono possibili.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56705/56705fig1v2.jpg"> Figura 1: gusto kit. Soggetti utilizzano il kit per intensità di gusto di tasso e la qualità dei vari tastants color-coded. Box A contiene campioni 1 – 6, 7 – 12 casella B. <a href="/files/ftp_upload/56705/56705fig1v2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<ol start="2"><li>
Questionario di gusto
	<ol>
<li>Preparare il questionario di gusto utilizzando una scala di categoria per valutare l'intensità di gusto e una scelta forzata per identificare la qualità di gusto di ogni tastant (Figura 2).</li>
		<li>Posizionare le etichette circolari del colore appropriato e il numero accanto al campione appropriato del questionario di gusto (Vedi 2.1.6).</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56705/56705fig2.jpg"> Figura 2: voce del questionario, che comprende una scala di categoria per voto di intensità di gusto e costretto la risposta scelta per qualità tastant. Il questionario di gusto sarà compresa una voce per ciascuna del color-coded tastants testato. <a href="/files/ftp_upload/56705/56705fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<ol start="3"><li>
Somministrazione di Test di gusto
	<ol>
<li>Fornire soggetti con scatola A, B, una bottiglia di acqua, tazza vuota, penna e carta e penna gusto questionario contenente voci per 12 campioni. Utilizzare la stessa marca di acqua minerale per tutta la durata di qualsiasi dato studio. Come alternativa a un questionario cartaceo, porta il materiale nel software sondaggio online e somministrato tramite tablet o desktop/Laptop. Un modello di esempio è disponibile presso https://osf.io/hn87s/.</li>
		<li>Indicare i soggetti che verrà chiesto di votare l'intensità e la qualità (ad es., salato, acido, amaro, dolce o nessun sapore) di ogni tastant. Inoltre, informare soggetti che non possono verificarsi tutte le qualità.</li>
		<li>Spiegare la procedura di collaudo, come segue: sciacquare la bocca due volte con acqua e sputare fuori in Coppa fornito. Versare tutto il campione 1 nella tua bocca e tenerlo lì per 5 secondi prima di sputare la soluzione nella tazza. Fare gargarismi o inghiottire la soluzione. Cerchio uno delle 13 linee verticali corrispondenti con intensità dell'esempio, su una scala da 0 a 12, da "nessuna intensità a tutti" a "estremamente intensa" e scegliere una qualità di unica per descrivere il gusto. In seguito, sciacquare la bocca con acqua due volte prima di procedere con l'esempio successivo.</li>
		<li>Osservare il soggetto di degustazione e valutazione del campione 1 (acqua). La deviazione di voto dalla "nessuna intensità a tutti" e "nessun sapore," ribadire le istruzioni questionario prima di consentire la prova procedere.</li>
		<li>Rivedere il questionario finito per completezza.</li>
		<li>Punteggio ottenuto valutazioni dell'intensità su una scala da 0 a 12 dalle linee verticali che i soggetti cerchiati. Media le due classificazioni di intensità per ogni tastant; Questo valore verrà utilizzato per l'analisi.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. genotipo
<ol><li>Raccogliere saliva da ciascun soggetto utilizzando un kit di raccolta del DNA della saliva.</li>
	<li>Purificare il DNA di genomic dal campione seguendo le istruzioni del produttore.</li>
	<li>Determinare il genotipo TAS2R38 utilizzando SNP genotyping saggi (rs713598, rs1726866, rs10246939)40.</li>
	<li>Determinare il genotipo di TAS2R19 utilizzando SNP genotyping assays (rs10772420)36.</li>
</ol>4. genotipo-fenotipo convalida
<ol><li>Rivedere i dati di controllo disponibili in pool oltre 800 soggetti genotipizzati per TAS2R38 (rs713598, rs1726866, rs10246939) e TAS2R19 (rs10772420) presso la seguente pagina web: https://carayata.shinyapps.io/TasteBoxplots/.</li>
	<li>Base al genotipo TAS2R38 di un soggetto, confrontare la propria risposta psicofisica gusto per l'amaro PTC composto con le norme per gli individui dello stesso genotipo. Le risposte devono corrispondere; Tuttavia, in rari casi, TAS2R38 genotipo non perfettamente predire PTC risultati sensoriali35.</li>
	<li>Dovrebbero risposte mostrano significativa divergenza, confrontare la risposta di gusto del soggetto per il chinino con le norme per gli individui dello stesso genotipo TAS2R19 . Risposte per intensità di chinino e genotipo devono corrispondere a36. Se tutti i risultati di gusto non corrispondono con il genotipo, è possibile che il soggetto (a) non comprende l'attività (b) è fornire valutazioni spurie o fingersi malato o (c) c'è stato un errore di raccolta dati da parte dell'investigatore.</li>
	<li>Identificazione degli outlier punto di dati e forse li esclude dall'analisi (Figura 3). Corrispondenza di risultati sensoriali con genotipizzazione obiettiva convalida l'affidabilità delle procedure di test psico-fisica.</li>
</ol>

<ol>
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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+perception+of+quinine+taste+intensity+is+associated+with+common+genetic+variants+in+a+bitter+receptor+cluster+on+chromosome+12.">The perception of quinine taste intensity is associated with common genetic variants in a bitter receptor cluster on chromosome 12.</a> Human Molecular Genetics. 19 (21), 4278-4285 (2010).</li><li>Bobowski, N., Reed, D. R., Mennella, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+in+the+TAS2R31+bitter+taste+receptor+gene+relates+to+liking+for+the+nonnutritive+sweetener+Acesulfame-K+among+children+and+adults.">Variation in the TAS2R31 bitter taste receptor gene relates to liking for the nonnutritive sweetener Acesulfame-K among children and adults.</a> Science Reports. 6, 39135 (2016).</li><li>Allen, A. L., McGeary, J. E., Knopik, V. S., Hayes, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bitterness+of+the+non-nutritive+sweetener+acesulfame+potassium+varies+with+polymorphisms+in+TAS2R9+and+TAS2R31.">Bitterness of the non-nutritive sweetener acesulfame potassium varies with polymorphisms in TAS2R9 and TAS2R31.</a> Chemical Senses. 38 (5), 379-389 (2013).</li><li>Roudnitzky, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic,+genetic,+and+functional+dissection+of+bitter+taste+responses+to+artificial+sweeteners.">Genomic, genetic, and functional dissection of bitter taste responses to artificial sweeteners.</a> Human Molecular Genetics. 20 (17), 3437-3449 (2011).</li><li>Guo, S. W., Reed, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+phenylthiocarbamide+perception.">The genetics of phenylthiocarbamide perception.</a> Annals in Human Biology. 28 (2), 111-142 (2001).</li><li>Bartoshuk, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Labeled+scales+(e.g.,+category,+Likert,+VAS)+and+invalid+across-group+comparisons:+what+we+have+learned+from+genetic+variation+in+taste.">Labeled scales (e.g., category, Likert, VAS) and invalid across-group comparisons: what we have learned from genetic variation in taste.</a> Food Quality Prefererences. 14 (2), 125-138 (2003).</li></ol>

NAC e DRR sono co-inventori un brevetto in esame (terapie e diagnosi per infezione respiratoria 61/697.652, WO2013112865).

L'importanza di questo metodo è che utilizza un approccio multidisciplinare con caratteristiche da medicina (l'esame orale), psicologia sperimentale (la prova del gusto) e genetica (un passo di convalida). Informazioni di gusto sono probabilità di sviluppare come strumento diagnostico e prognostico perché gusto fornisce una finestra nella funzione delle proteine altrove nel corpo. Da un punto di vista di psicologia sperimentale, l'aggiunta di un semplice esame può identificare i soggetti che non sono appropriati per lo studio della funzione di gusto normativo. Da un punto di vista della genetica, queste procedure forniscono un modo semplice per studiare le relazioni genotipo-fenotipo facilmente riproducibile.
Misura gusto umano ha diverse caratteristiche critiche che sono immateriali ma importanti, tra cui aiutando il soggetto a sentire a facilitare e orientato al compito e soprattutto in campo medico, mantenendo la procedura breve, così l'attenzione del soggetto non fa Waver. È inoltre importante intervenire se soggetti risultano scomodi e averne le loro preoccupazioni, come ad esempio per quanto riguarda la natura degli stimoli test. I soggetti sono spesso rassicurati nell'apprendere che la maggior parte degli stimoli test sono negli alimenti, ad esempio, sale e zucchero. Questa procedura, pur semplice, presenta limitazioni significative. Mentre l'esame orale è di routine per gli investigatori con formazione medica, quelli con formazione di psicologia o genetica sperimentale rischiano di essere meno facile a riconoscere la malattia orale. Un'altra limitazione è la scala di valutazione che mentre facilmente comprensibile da parte di soggetti senza previa formazione, può oscurare differenze tra individui o gruppi di individui41. Infine, la guida su come trattare soggetti con mismatch tra genotipo e fenotipo nell'elaborazione statistica dei dati non è ancora codificata in regole semplici, ad esempio, eliminazione di soggetti che non riescono a soddisfare determinati test di verifica.
Guardando al futuro per applicazioni future, esami di gusto possono diventare parti di routine della medicina come visione e test dell'udito, che aumenterebbe la nostra comprensione di come il gusto si riferisce al benessere e malattia umana e ci permetterà di affinare questo semplice test.

Misure di percezione gustativa umana possono essere sia parte delle cure mediche e un obiettivo della ricerca biomedica, ma gusto ha ricevuto scarsa attenzione rispetto con udito e visione (tabella 1). Dal punto di vista medico, quando i medici valutano i pazienti lamentano della perdita di gusto, nella maggior parte dei casi la perdita effettiva è di odore1, che ha portato al licenziamento di perdita del gusto come un reclamo di presentazione raro e spesso non valido. Distorsioni del gusto (disgeusia) sono più comuni e spesso derivano dagli effetti secondari dei farmaci o del nervo periferico lesioni2,3, ma nessuna forma è un trattamento efficace (diverso da quello di arresto del farmaco). I clinici hanno ignorato anche perdita del gusto perché fino ad ora ha avuto poco valore diagnostico o prognostico in proprio. Tuttavia, anche se la misura del gusto è stato una zona isolata, può ora entrando medicina della corrente principale con la rinascita di un apprezzamento storico che gusto può essere un attrezzo diagnostico o prognostico4,5. Per esempio, percezione di amarezza può predire la funzione immune6 o la volontà di un paziente di prendere il farmaco7. Tuttavia, i ricercatori biomedici hanno in gran parte trascurato gusto. Questa disattenzione può, in parte, riflettere il fatto che i primi progressi nella comprensione di questo sistema sensoriale ha le sue radici in psicologia sperimentale8, un campo con cui quelli in medicina può essere relativamente sconosciuti. Inoltre, rinnovato interesse nel gusto ha inaugurato gusto standardizzato metodi9 che si basano sulle precedenti metodi10, che pur completa sono lunghi e inadeguato per regolazioni cliniche. Infine, fiducia nelle misure di gusto può essere debole perché soggetti relazione sulla loro esperienza e convalida delle loro osservazioni finora è mancata. La nostra speranza è che una semplice misura che gli investigatori o i clinici possono facilmente amministrare acquisterà popolarità con entrambi i costituenti. Qui descriviamo un protocollo di esame di gusto semplice che ha tre parti: una valutazione della cavità orale, la prova del gusto e un passo di convalida utilizzando genotipo innato. In primo luogo, forniamo il contesto biologico per queste procedure, che si fondono pratiche semplici in medicina, misure sensoriali dalla psicologia sperimentale e la convalida delle risposte utilizzando il genotipo e la genetica.
Percezione del gusto inizia in bocca, quindi un esame gustativo efficace deve includere una breve valutazione clinica per malattie orali ovvie, arrossamento, gonfiore e altri lo scolorimento. Cavità orale contiene sette siti secondari: la lingua, gengiva, pavimento della bocca, mucosa orale, mucosa labiale, palato duro e il trigono retromolare. Studi precedenti di gusto umano focalizzata su partecipanti in buona salute o quelli con malattie ben definite, ma come prova gusto diventa routine in esami medici, è importante registrare le condizioni della cavità orale come parte della procedura.
La lingua stessa è una struttura muscolare racchiusa nella mucosa; che punteggiano la superficie dorsale è papille, le piccole strutture rialzate che danno la lingua sua texture uniche e contengono cellule del ricevitore di gusto. Classifichiamo le papille dalla loro forma: fungiformi, filiformi, foliate e circumvallate. Papille fungiformi (FP) sono anterolaterally trova sulla lingua e rotondi, con una forma a fungo11. Gli investigatori hanno pubblicato diversi metodi utili per quantificare FP e rivolgiamo ai lettori di queste fonti per misurazione protocolli12,13,14,15,16. Papille foliate, a forma di come le pagine di un libro (folia), si trovano esclusivamente sul posteriore laterale della linguetta superficie11. Papille circumvallate, trovate i terminalis solco della base lingua, sono grandi strutture a forma di cupola, circondati da pareti mucose (Latino circum, "surround", + vallum, "parete")11. La maggior parte delle papille numerose, filiforme, sono lunghe e sottili e non contengono recettori del gusto.
La gente differisce in anatomia di lingua. Mentre le fonti di questa variazione anatomica sono sconosciute, è determinato in parte dalla variazione genetica innata, con gli investigatori reporting 31% concordanza di anatomia di lingua tra dizigoti gemelli e 60% concordanza tra gemelli monozygotic17. Densità papillare si differenzia anche tra la gente, e anche se raro, almeno una malattia genetica (Disautonomia familiare) si traduce in un'assenza congenita di gusto papille18,19,20. Così, prima di eseguire test psico-fisico, è utile confermare la presenza di FP come parte della valutazione di breve e di notare la dimensione relativa e il colore della linguetta e prova della malattia orale.
Le papille del gusto contengono il sensoriali cellule che se stimolati avviano gusto sensazione. Gli esseri umani sono in grado di rilevare almeno cinque classi di gusto: salato, acido, amaro, dolce e umami. Mentre salato, dolce e umami gusti segnalare la presenza di fonti di cibo prezioso contenente cloruro di sodio, glucosio e aminoacidi, rispettivamente, amarezza e acidità segnalano la presenza di potenziali tossine e acidi dalla decomposizione batterica di cibo, rispettivamente e indurre il comportamento avversivo21. I gusti salati e acidi transduced attraverso l'attivazione di canali ionici trovato in alcuni tipi di cellule gustative, anche se la comprensione della trasduzione del sale è in continua evoluzione e può richiedere tipo I le celle anche22,23. Dolce, amaro e umami derivano dall'attivazione di recettori accoppiati a G-proteine sulle cellule di tipo II gusto, ognuno in sintonia con un gusto particolare. Eterodimeri di subunità di tre particolari recettori trasducono dolce e umami mentre composti amari attivano un gruppo di 25 diversi recettori amaro24. Questi recettori amari possono rispondere a molteplici composti amari, e un singolo composto amaro stimola spesso più di un recettore25. Nonostante la recente espansione delle conoscenze sulle basi molecolari del gusto, nuovi percorsi26 e nuove scoperte oltre le qualità di cinque gusto tradizionali (ad es., calcio27 o acido grasso28 percezione) possono ci attendono.
Ci sono almeno due aspetti sorprendenti delle famiglie dei ricevitori di gusto: geni che codificano per questi recettori possono differiscono notevolmente nella sequenza del DNA e quindi funzionare tra le persone, e molti tessuti del corpo esprimere questi geni21,29 , 30 , 31. questi siti extraorali comprendono il cervello, tiroide, superiore e inferiore delle vie respiratorie e del tratto gastrointestinale, tra molti altri21,29,30,31. Mentre i recettori del gusto a queste posizioni non partecipano nella percezione del gusto in senso tradizionale, probabilmente percepiscono l'ambiente chimico locale29,32. Ad esempio, l'epitelio ciliato delle vie respiratorie superiore esprime il recettore amaro T2R38 (amaro gusto recettore 38), che risponde ai composti chimici prodotti da batteri e influenza la risposta immunitaria innata32, come aumentando la clearance mucociliare e livelli di peptidi anti-microbica e l'ossido di azoto. Ciò che trova ha implicazioni mediche per la rinosinusite cronica, una malattia di infezione batterica cronica e infiammazione delle vie respiratorie superiori e seni paranasali.
Di particolare rilevanza per il gusto esame che descriviamo qui è che il recettore del sapore amaro T2R38, codificato dal gene TAS2R38 , esibisce la variabilità genetica e la sensibilità di gusto quindi variabile. Differenze percettive per l'amaro composto Feniltiocarbammide (PTC) furono descritti per la prima volta dal chimico Arthur Fox33; più tardi questo composto è stato identificato come un agonista del recettore T2R3834. Differenze individuali derivano dalla sequenza del DNA del gene TAS2R38 , che ha tre polimorfismi a singolo nucleotide, ogni cedimento sostituzioni dell'amminoacido (A49P, A262V e I296V; R: alanina, p: prolina, v: valina, isoleucina I:). Due aplotipi comuni risultato, Pad e AVI, con Pad/Pad individui altamente sensibile a PTC ("assaggiatori"), essendo relativamente insensibile ("non-assaggiatori") gli individui AVI/AVI ed eterozigoti AVI/Pad essere più variabile nella loro sensibilità 35. ci sono altri esempi di variazioni genetiche che influenzano la percezione di amaro, per esempio, del ricevitore di gusto T2R19, codificata dal gene TAS2R19 , allo stesso modo esibisce variabilità genetica e differenti sensibilità di gusto per il composto amaro chinino36. Allo stesso modo, la variazione TAS2R31 influenza l'amarezza percepita di uno dei dolcificanti ad alta potenza37,38,39.
Qui descriviamo un metodo rapido per caratterizzare il senso di un paziente del gusto che si basa su protocolli ad alto rendimento in medicina clinica, la psicologia sperimentale e la genetica.

<table><tbody><tr><td>Disposable diagnostic penlight</td><td>Primacare</td><td>DL-9223</td><td></td></tr><tr><td>UltraLite Pro headlight</td><td>Integra LifeSciences</td><td>AX2100BIF</td><td></td></tr><tr><td>Millipore Q-Gard 2 water purification system</td><td>EMB Millipore</td><td>QGARD00D2</td><td></td></tr><tr><td>Denatonium benzoate&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5765</td><td></td></tr><tr><td>Phenylthiocarbamide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P7629</td><td></td></tr><tr><td>Quinine hydrochloride dihydrate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Q1125</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Chloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S1679</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>Glass scintillation vials</td><td>Thomas Scientific</td><td>1230L59</td><td>Same as Wheaton catalog no. 986580</td></tr><tr><td>Oragene Discover OGR-500 DNA collection kit</td><td>DNA Genotek</td><td>OGR-500</td><td></td></tr><tr><td>prepIT L2P Protocol reagents</td><td>DNA Genotek</td><td>PT-L2P-5</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;rs713598 &lt;/em&gt;TaqMan SNP genotyping assay</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C___8876467_10</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;rs1726866 &lt;/em&gt;TaqMan SNP genotyping assay</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C___9506827_10</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;rs10246939 &lt;/em&gt;TaqMan SNP genotyping assay</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C___9506826_10</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;rs10772420 &lt;/em&gt;TaqMan SNP genotyping assay</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C___1317426_10</td><td></td></tr></tbody></table>

taste exam: a brief and validated test

L'importanza emergente del gusto nella medicina e nella ricerca biomedica e nuove conoscenze sulle sue basi genetiche, ci ha spinto a integrare i metodi classici di degustazione in due modi. Innanzitutto, spieghiamo come fare una breve valutazione della bocca, compresa la lingua, per garantire che le papille del gusto sono presenti e notare la prova della malattia in questione. In secondo luogo, vogliamo disegnare sulla genetica per convalidare i dati di test di gusto da rapporti di confronto dei genotipi di recettore innato e amarezza percepita intensità. Discordanza tra misure obiettive del genotipo e rapporti soggettivi di esperienza di gusto può identificare errori di raccolta dati, soggetti distratti o coloro che non hanno capito o seguite le istruzioni. La nostra aspettativa è che prove di assaggio veloce e valido possono convincere i ricercatori e i clinici per valutare il gusto regolarmente, rendendo la prova gusto comune come test per la vista e dell'udito. Infine, perché molti tessuti del corpo esprimono recettori del gusto, sapore risposte possono fornire un proxy per la sensibilità del tessuto altrove nel corpo e, quindi, servire come un rapido, point-of-care test per diagnosi di guida e uno strumento di ricerca per la valutazione del ricevitore di gusto funzione della proteina.

I risultati del test di gusto hanno messo in comune per tutti i soggetti valutati (n = 840) e si sono presentati dopo la segregazione dal genotipo. L'insieme completo di dati è accessibile a https://carayata.shinyapps.io/TasteBoxplots/ e può essere esaminata per valutare ogni tastant e per genotipi TAS2R38 e TAS2R19 . Risultati confermano l'esistenza di differenze di gusto percettivo per PTC fra gli oggetti raggruppati per genotipo del ricevitore di TAS2R38 (Figura 3). Valutazioni di intensità di PTC sono significativamente differenti attraverso TAS2R38 genotipi (AVI/AVI, 0,86; AVI/PAD, 6,95; PAD/PAV, 8,18; One-way ANOVA, p < 0,0001). Risultati di intensità di chinina sono significativamente differenti anche tra genotipo TAS2R19 (A:A, 3,77; A:G, 3,08; G:G, 2.26; One-way ANOVA, p < 0,0001).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56705/56705fig3.jpg"> Figura 3: Risultati del questionario gusto PTC dal genotipo di TAS2R38 . Il questionario di gusto può essere utilizzato per separare gli individui dal genotipo TAS2R38 basato su valutazioni di intensità di amarezza PTC su una scala di categoria (* p < 0,0001). Qui vediamo alcuni valori erratici, punti dati situato fuori le recinzioni ("baffi") di questo boxplot (ad es., all'esterno di 1,5 volte l'intervallo interquartile sopra il quartile superiore e soffietto quartile inferiore) <a href="/files/ftp_upload/56705/56705fig3large.jpg" target="_blank">per favore clicca qui per visualizzare la versione ingrandita di questo figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Metrica</td>
			<td>Gusto</td>
			<td>Dell'udito</td>
			<td>Visione</td>
			<td>Dell'udito/gusto</td>
			<td>Visione/gusto</td>
		</tr>
<tr>
<td>PubMed</td>
			<td>36.302</td>
			<td>123.101</td>
			<td>171.522</td>
			<td>3.39</td>
			<td>4.72</td>
		</tr>
<tr>
<td>NIH Reporter</td>
			<td>6.144</td>
			<td>23.873</td>
			<td>54.858</td>
			<td>3,89</td>
			<td>8,93</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Abbiamo condotto una ricerca di testo di PubMed e NIH Reporter utilizzando un particolare senso come una parola chiave. PubMed è un database online di risultati sperimentali pubblicati e NIH Reporter è un database online che gli elenchi di ricerca progetti finanziati attraverso il National Institutes of Health. I valori nella colonna ' Udienza/gusto' mostrano un rapporto, cioè, ci sono oltre tre volte come molte pubblicazioni di riferimento dell'udito rispetto con gusto. Abbiamo raggiunto l'URL sotto il 31 gennaio 2018 alle 10 am EST.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">https://projectreporter.nih.gov/reporter.cfm</td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Tabella 1: Record identificati utilizzando il 'Gusto' versus 'Udienza' e 'Visione' come parole chiave.

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Taste Exam: A Brief and Validated Test

Esame gustativo: Un Test breve e convalidato

Questo protocollo misura risposte gusto umano e include una breve valutazione anatomica, un test breve assaggio e un metodo di convalida utilizzando segnalato sensazione e gusto genotipo del ricevitore del soggetto.

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement ...

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

16.2K Views.  Perelman School of Medicine at the University of Pennsylvania. Questo protocollo misura risposte gusto umano e include una breve valutazione anatomica, un test breve assaggio e un metodo di convalida utilizzando segnalato sensazione e gusto genotipo del ricevitore del soggetto.

Video: Taste Exam: A Brief and Validated Test

Examination of Rapid Dopamine Dynamics with Fast Scan Cyclic Voltammetry During Intra-oral Tastant Administration in Awake Rats

Rapid, phasic dopamine (DA) release in the mammalian brain plays a critical role in reward processing, reinforcement learning, and motivational control. Fast scan cyclic voltammetry (FSCV) is an electrochemical technique with high spatial and temporal (sub-second) resolution that has been utilized to examine phasic DA release in several types of preparations. In vitro experiments in single-cells and brain slices and in vivo experiments in anesthetized rodents have been used to identify mechanisms that mediate dopamine release and uptake under normal conditions and in disease models. Over the last 20 years, in vivo FSCV experiments in awake, freely moving rodents have also provided insight of dopaminergic mechanisms in reward processing and reward learning. One major advantage of the awake, freely moving preparation is the ability to examine rapid DA fluctuations that are time-locked to specific behavioral events or to reward or cue presentation. However, one limitation of combined behavior and voltammetry experiments is the difficulty of dissociating DA effects that are specific to primary rewarding or aversive stimuli from co-occurring DA fluctuations that mediate reward-directed or other motor behaviors. Here, we describe a combined method using in vivo FSCV and intra-oral infusion in an awake rat to directly investigate DA responses to oral tastants. In these experiments, oral tastants are infused directly to the palate of the rat &#8211; bypassing reward-directed behavior and voluntary drinking behavior &#8211; allowing for direct examination of DA responses to tastant stimuli.

Rapid fluctuations in extracellular dopamine (DA) mediate both reward processing and motivated behavior in mammals. This manuscript describes the combined use of fast scan cyclic voltammetry (FSCV) and intra-oral tastant administration to determine how tastants alter rapid dopamine release in awake, freely moving rats.

Esame di Rapid dopamina Dynamics con Fast Scan voltammetria ciclica Durante intraorale sapida Amministrazione in Rats Awake

Rapid, phasic dopamine (DA) release in the mammalian brain plays a critical role in reward processing, reinforcement learning, and motivational control. ...

Ricerca

Comportamento

Protocol for Data Collection and Analysis Applied to Automated Facial Expression Analysis Technology and Temporal Analysis for Sensory Evaluation

We demonstrate a method for capturing emotional response to beverages and liquefied foods in a sensory evaluation laboratory using automated facial expression analysis (AFEA) software. Additionally, we demonstrate a method for extracting relevant emotional data output and plotting the emotional response of a population over a specified time frame. By time pairing each participant's treatment response to a control stimulus (baseline), the overall emotional response over time and across multiple participants can be quantified. AFEA is a prospective analytical tool for assessing unbiased response to food and beverages. At present, most research has mainly focused on beverages. Methodologies and analyses have not yet been standardized for the application of AFEA to beverages and foods; however, a consistent standard methodology is needed. Optimizing video capture procedures and resulting video quality aids in a successful collection of emotional response to foods. Furthermore, the methodology of data analysis is novel for extracting the pertinent data relevant to the emotional response. The combinations of video capture optimization and data analysis will aid in standardizing the protocol for automated facial expression analysis and interpretation of emotional response data.

A protocol for capturing and statistically analyzing emotional response of a population to beverages and liquefied foods in a sensory evaluation laboratory using automated facial expression analysis software is described.

Protocollo per la raccolta di dati e analisi applicata a Automated viso Tecnologia Espressione Analisi e analisi temporale per la valutazione organolettica

We demonstrate a method for capturing emotional response to beverages and liquefied foods in a sensory evaluation laboratory using automated facial ...

Psychophysical Tracking Method to Measure Taste Preferences in Children and Adults

The Monell two-series, forced-choice, paired-comparison tracking method provides a reliable measure of sweet taste preferences from childhood to adulthood. The method, which is identical for children, adolescents, and adults, is of short duration (&#60; 15 min), does not rely on sustained attention or place demands on memory (which would yield spurious age differences), and minimizes the impact of language development, making this method amenable to the cognitive limitations of pediatric populations. In this whole-mouth tasting method, subjects are asked to taste (without swallowing) pairs of solutions of different sucrose concentrations and to point to the solution they prefer. Each subsequent pair contains the participant&#39;s preceding preferred concentration and an adjacent stimulus concentration. The procedure continues until the subject chooses either a given concentration of sucrose when paired with both a higher and a lower concentration, or the highest or lowest concentration two consecutive times. Subjects are prevented from reaching response criteria on the basis of first or second position bias by the two-series design of the method, which counterbalances the order of solution presentation within each pair between the series (the weaker concentration is presented first in Series 1, second in Series 2). The geometric mean of the two sucrose concentrations chosen in Series 1 and 2 is an estimate of the participant&#39;s most preferred level of sucrose. Sucrose preference as determined with this laboratory-based measure has been shown to be associated with preference for sugars in foods and beverages and with taste receptor genotype, family history of alcoholism, and race/ethnicity, as well as depressive symptomatology among pediatric populations. The method has real-world relevance and has been applied to determine most preferred level of other tastes (e.g., salt), making it a valuable psychophysical tool.

Sweet taste has powerful hedonic appeal among people of all ages, particularly children. Described herein is a reliable and valid method that can be used to determine the level of sweetness most preferred, making it a valuable psychophysical tool for scientists.

Psicofisico monitoraggio metodo per misurare preferenze alimentari nei bambini e adulti

The Monell two-series, forced-choice, paired-comparison tracking method provides a reliable measure of sweet taste preferences from childhood to ...

Measuring Oral Fatty Acid Thresholds, Fat Perception, Fatty Food Liking, and Papillae Density in Humans

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty acid receptors housed on taste cells. Previous research has shown that an individual&#39;s oral sensitivity to fatty acid, specifically oleic acid (C18:1) is associated with body mass index (BMI), dietary fat consumption, and the ability to identify fat in foods. We have developed a reliable and reproducible method to assess oral chemoreception of fatty acids, using a milk and C18:1 emulsion, together with an ascending forced choice triangle procedure. In parallel, a food matrix has been developed to assess an individual&#39;s ability to perceive fat, in addition to a simple method to assess fatty food liking. As an added measure tongue photography is used to assess papillae density, with higher density often being associated with increased taste sensitivity.

Oral chemoreception of fatty acids and the association with diet and fatty food preferences may enable the identification of mechanisms involved with the development of obesity and why dietary changes may be difficult for many individuals.

Misurazione orale acidi grassi Soglie, Fat Percezione, grasso alimentare Simpatia, e Papille densità di esseri umani

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty ...

Neuroscienze

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival. The most obvious application of these chemosenses is to be able to distinguish good food sources from potentially dangerous food sources. Gustation requires physical contact with a chemical compound which is able to signal through taste receptors that are expressed on the surface of neurons. In insects, these gustatory neurons can be located across the animal's body allowing taste to play an important role in many different behaviors. Insects typically prefer compounds containing sugars, while compounds that are considered bitter tasting are avoided. Given the basic biological importance of taste, there is intense interest in understanding the molecular mechanisms underlying this sensory modality. We describe an adult Drosophila taste assay which reflects the preference of the animals for a given tastant compound. This assay may be applied to animals of any genetic background to examine the taste preference for a desired soluble compound.

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste is an important sensory process which facilitates attraction to beneficial substances and avoidance of toxic substances. This protocol describes a simple ingestion assay for determining Drosophila gustatory preference for a given chemical compound.

Gusto Preferenza Assay per adulti<em&gt; Drosophila</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

New Methods to Study Gustatory Coding

The sense of taste allows animals to detect chemicals in the environment, giving rise to behaviors critical for survival. When Gustatory Receptor Neurons (GRNs) detect tastant molecules, they encode information about the identity and concentration of the tastant as patterns of electrical activity that then propagate to follower neurons in the brain. These patterns constitute internal representations of the tastant, which then allow the animal to select actions and form memories. The use of relatively simple animal models has been a powerful tool to study basic principles in sensory coding. Here, we propose three new methods to study gustatory coding using the moth Manduca sexta. First, we present a dissection procedure for exposing the maxillary nerves and the subesophageal zone (SEZ), allowing recording of the activity of GRNs from their axons. Second, we describe the use of extracellular electrodes to record the activity of multiple GRNs by placing tetrode wires directly into the maxillary nerve. Third, we present a new system for delivering and monitoring, with high temporal precision, pulses of different tastants. These methods allow the characterization of neuronal responses in vivo directly from GRNs before, during and after tastants are delivered. We provide examples of voltage traces recorded from multiple GRNs, and present an example of how a spike sorting technique can be applied to the data to identify the responses of individual neurons. Finally, to validate our recording approach, we compare extracellular recordings obtained from GRNs with tetrodes to intracellular recordings obtained with sharp glass electrodes.

We present three new methods to study gustatory coding. Using a simple animal, the moth Manduca sexta (Manduca), we describe a dissection protocol, the use of extracellular tetrodes to record the activity of multiple gustatory receptor neurons, and a system for delivering and monitoring precisely timed pulses of tastants.

Nuovi metodi per studiare la codifica gustativa

The sense of taste allows animals to detect chemicals in the environment, giving rise to behaviors critical for survival. When Gustatory Receptor Neurons ...

A Rapid Food-Preference Assay in Drosophila

To select food with nutritional value while avoiding the consumption of harmful agents, animals need a sophisticated and robust taste system to evaluate their food environment. The fruit fly, Drosophila melanogaster, is a genetically tractable model organism that is widely used to decipher the molecular, cellular, and neural underpinnings of food preference. To analyze fly food preference, a robust feeding method is needed. Described here is a two-choice feeding assay, which is rigorous, cost-saving, and fast. The assay is Petri-dish-based and involves the addition of two different foods supplemented with blue or red dye to the two halves of the dish. Then, ~70 prestarved, 2-4-day-old flies are placed in the dish and&#160;allowed to choose between blue and red foods in the dark for about 90 min. Examination of the abdomen of each fly is followed by the calculation of the preference index. In contrast to multiwell plates, each Petri dish takes only ~20 s to fill and saves time and effort. This feeding assay can be employed to quickly determine whether flies like or dislike a particular food.

A Rapid Food-Preference Assay in Drosophila

We present a protocol for a two-choice feeding assay for flies. This feeding assay is fast and easy to run and is suitable not only for small-scale laboratory research, but also for high-throughput behavioral screens in flies.

Un saggio rapido di preferenza alimentare in Drosophila

To select food with nutritional value while avoiding the consumption of harmful agents, animals need a sophisticated and robust taste system to evaluate ...

Whole-Mount Staining, Visualization, and Analysis of Fungiform, Circumvallate, and Palate Taste Buds

Taste buds are collections of taste-transducing cells specialized to detect subsets of chemical stimuli in the oral cavity. These transducing cells communicate with nerve fibers that carry this information to the brain. Because taste-transducing cells continuously die and are replaced throughout adulthood, the taste-bud environment is both complex and dynamic, requiring detailed analyses of its cell types, their locations, and any physical relationships between them. Detailed analyses have been limited by tongue-tissue heterogeneity and density that have significantly reduced antibody permeability. These obstacles require sectioning protocols that result in splitting taste buds across sections so that measurements are only approximated, and cell relationships are lost. To overcome these challenges, the methods described herein involve collecting, imaging, and analyzing whole taste buds and individual terminal arbors from three taste regions: fungiform papillae, circumvallate papillae, and the palate. Collecting whole taste buds reduces bias and technical variability and can be used to report absolute numbers for features including taste-bud volume, total taste-bud innervation, transducing-cell counts, and the morphology of individual terminal arbors. To demonstrate the advantages of this method, this paper provides comparisons of taste bud and innervation volumes between fungiform and circumvallate taste buds using a general taste-bud marker and a label for all taste fibers. A workflow for the use of sparse-cell genetic labeling of taste neurons (with labeled subsets of taste-transducing cells) is also provided. This workflow analyzes the structures of individual taste-nerve arbors, cell type numbers, and the physical relationships between cells using image analysis software. Together, these workflows provide a novel approach for tissue preparation and analysis of both whole taste buds and the complete morphology of their innervating arbors.

This paper describes methods for tissue preparation, staining, and analysis of whole fungiform, circumvallate, and palate taste buds that consistently yield whole and intact taste buds (including the nerve fibers that innervate them) and maintain the relationships between structures within taste buds and the surrounding papilla.

Colorazione, visualizzazione e analisi di papille gustative fungiformi, circumvallate e palato

Taste buds are collections of taste-transducing cells specialized to detect subsets of chemical stimuli in the oral cavity. These transducing cells ...

&#181;Tongue: A Microfluidics-Based Functional Imaging Platform for the Tongue In Vivo

Intravital fluorescence microscopy is a tool used widely to study multicellular dynamics in a live animal. However, it has not been successfully used in the taste sensory organ. By integrating microfluidics into the intravital tongue imaging window, the &#181;Tongue provides reliable functional images of taste cells in vivo under controlled exposure to multiple tastants. In this paper, a detailed step-by-step procedure to utilize the &#181;Tongue system is presented. There are five subsections: preparing of tastant solutions, setting up of a microfluidic module, sample mounting, acquiring functional image data, and data analysis. Some tips and techniques to solve the practical issues that may arise when using the &#181;Tongue are also presented.

 &#181;Tongue: A Microfluidics-Based Functional Imaging Platform for the Tongue In Vivo

The article introduces the &#181;Tongue (microfluidics-on-a-tongue) device for functional taste cell imaging in vivo by integrating microfluidics into an intravital imaging window on the tongue.

μTongue: una piattaforma di imaging funzionale basata sulla microfluidica per la lingua in vivo

Intravital fluorescence microscopy is a tool used widely to study multicellular dynamics in a live animal. However, it has not been successfully used in ...

Psychophysical Tracking Method to Assess Taste Detection Thresholds in Children, Adolescents, and Adults: The Taste Detection Threshold (TDT) Test

This paper describes a two-alternative, forced-choice, staircase, tracking procedure, called the Taste Detection Threshold (TDT) test, that provides a reliable measure of sweet, salty, and umami taste detection thresholds from childhood to adulthood. Advantages of the method include procedures that are identical for children and adults, thus allowing the determination of age-related and individual differences in taste perception, if any, and tasks that can be completed in a relatively short time frame, do not rely on continuous attention or require memorization, control for subjective response biases, and minimize the impact of language development. After a 1 hour fast, participants are presented with pairs of solutions; in each pair, one solution is water, and the other solution contains varying concentrations of the tastant.
Using a whole-mouth tasting method, participants taste each solution (without swallowing and with rinsing between tastings) and then point to the solution with a taste or that tastes different from water. The concentration of the stimulus in the subsequent pair increases after a single incorrect response and decreases after two consecutive correct responses. A reversal occurs when the concentration sequence changes direction. The task is deemed completed after the occurrence of four reversals, provided there are a maximum of two dilution steps between two successive reversals, and the series of reversals do not form an ascending pattern. These additional criteria ensure greater reliability in outcomes. The TDT is then calculated as the geometric mean of the concentrations of the four reversals. This method has real-world relevance as it provides information on a dimension of taste perception that is independent of hedonics, and that can change with aging and certain disease states, making it a valuable psychophysical test.

Psychophysical Tracking Method to Assess Taste Detection Thresholds in Children, Adolescents, and Adults: The Taste Detection Threshold TDT Test

Psychophysical tools measure the functionality of the taste system for both research and health assessment purposes. This paper describes a method to measure taste detection thresholds that can determine the lowest concentration of sucrose, sodium chloride, or monosodium glutamate that can be tasted by individuals as young as 6 years.

Metodo di monitoraggio psicofisico per valutare le soglie di rilevamento del gusto in bambini, adolescenti e adulti: il test della soglia di rilevamento del gusto (TDT)

This paper describes a two-alternative, forced-choice, staircase, tracking procedure, called the Taste Detection Threshold (TDT) test, that provides a ...