Travmatik Beyin Hasarında Kanama ve Enflamasyonu İncelemek için Bıçak Yaralı Fare Modeli

TVI'de kanamayı durdurmak ve iltihabı baskılamak için bir yöntem geliştirmekle ilgileniyoruz, bu nedenle sadece bir iğne kullanarak kolayca bir TVI kitle modeli yapmak için bir protokol oluşturduk. Bıçak yarası TVI modelimiz kanamayı ve gri aktivasyonu kayganlaştırdığı için faydalıdır. Protokolümüzün diğer tekniklere göre üç temel avantajı vardır.

Özel bir ekipman veya alet gerekmez. Kolay ve hızlı bir şekilde yapılabilir ve yara o kadar küçüktür ki farenin davranışını etkilemez, bu nedenle herkes bunu yüksek tekrarlanabilirlik ile gerçekleştirebilir. Laboratuvarımız, travmatik beyin hasarının onarımı sırasında nöronların, gri hücrelerin ve glial hücrelerin ve parazitlerin iletişimine odaklanacaktır.

İletişim, onarımda kritik bir rol oynar. Ancak şu ana kadar tam olarak anlaşılamamıştır. Protokolümüz iletişimi analiz etmek için çok kullanışlıdır.

Başlamak için, anestezi uygulanmış fareyi ventral tarafına bir kağıt havlu üzerine yerleştirin. Ayak parmağınızı sıkıştırma testi ile farenin derinlemesine uyuşturulduğunu onaylayın. Her biri üç kez Betadine ve% 70 etanol ovma turları değiştirerek cerrahi bölgeyi dezenfekte edin.

Şimdi, oksipital cildi künt forseps ile kavrayın ve kafatasına veya herhangi bir organa zarar vermeden oksipital kemiği ortaya çıkarmak için bir ila 1,5 milimetre genişliğinde bir kesi yapın. Ardından, kafatası boyunca serebral korteks ile beyincik arasındaki sınırı gözlemlemek için kesiği nazikçe ve yavaşça açın. Fare kraniyotomisi yapmak için, oksipital kemiğin sağ yarım küresinde bir iğne ile küçük bir delik açın.

Beyin parankimine zarar vermemeye dikkat ederek, bıçak yarası iğnelemesi için bir yerleştirme noktası oluşturmak üzere iğneyi hafifçe döndürün. Bıçak yarası için, yerleştirme noktasından uygun iğneyi sokun ve serebral korteksi rostral kaudal eksen boyunca bıçaklayın. Son olarak, yarım yuvarlak şekilli bir iğne ile naylon 3-0 sütür kullanarak cilt kesisini dikin.

İşlem sonrası yara mikroskopi ile doğrulandı. IGG ekstravazasyonu yaralanmadan bir gün sonra zirve yaptı, ardından ilerleyici iyileşme ve üç, beş ve yedi günlerde boyama yoğunluğunda bir azalma oldu. Evan'ın beyin parankimine mavi boya sızıntısı, yaralanmadan hemen sonra meydana geldi ve konsantrasyonu bir saat zirveye ulaştı.

Boya konsantrasyonu bir ve üç gün sonra yavaş yavaş azaldı. IBA1 pozitif mikroglia ve GFAP pozitif astrositlerin pik birikimi, yaralanmadan sırasıyla beş ve üç gün sonra meydana geldi ve varlıkları yedi gün azaldı. Tümör nekroz faktörü alfa, interlökin altı ve interlökin bir beta dahil olmak üzere inflamatuar sitokinler, yaralanmadan bir gün sonra pik mRNA ekspresyonu gösterirken, transforme edici büyüme faktörü beta bir, yaralanmadan üç gün sonra zirve yaptı.