Modelo de camundongo com ferida por faca para estudar hemorragia e inflamação em lesão cerebral traumática

Estamos interessados em desenvolver um método para parar a hemorragia e suprimir a inflamação no TVI, por isso estabelecemos um protocolo para fazer facilmente um modelo de massa TVI usando apenas uma agulha. Nosso modelo TVI de ferida por faca é benéfico porque lubrifica a hemorragia e a ativação cinza. Nosso protocolo tem três vantagens principais em comparação com outras técnicas.

Nenhum equipamento ou ferramenta específica é necessário. Isso pode ser feito com facilidade e rapidez, e a ferida é tão pequena que não afeta o comportamento do mouse, então qualquer pessoa pode fazer isso com alta reprodutibilidade. Nosso laboratório se concentrará na comunicação de neurônios, células cinzentas e células gliais e parasitas durante o reparo de lesões cerebrais traumáticas.

A comunicação desempenha um papel crítico no reparo. No entanto, não é totalmente compreendido até agora. Nosso protocolo é muito útil para analisar a comunicação.

Para começar, coloque o camundongo anestesiado em seu lado ventral sobre uma toalha de papel. Confirme se o mouse está profundamente anestesiado com um teste de pinça do dedo do pé. Desinfete o local da cirurgia alternando rodadas de Betadine e esfoliante com etanol a 70% três vezes cada.

Agora, segure a pele occipital com uma pinça romba e faça uma incisão de um a 1,5 milímetro de largura para expor o osso occipital sem danificar o crânio ou qualquer órgão. Em seguida, abra a incisão de forma suave e lenta para observar o limite entre o córtex cerebral e o cerebelo através do crânio. Para realizar a craniotomia do camundongo, crie um pequeno orifício no hemisfério direito do osso occipital com uma agulha.

Gire suavemente a agulha para fazer um ponto de inserção para agulhamento de facada, tomando cuidado para não danificar o parênquima cerebral. Para a ferida por facada, insira a agulha apropriada do ponto de inserção e esfaqueie o córtex cerebral ao longo do eixo caudal rostral. Finalmente, suture a incisão da pele usando uma sutura de náilon 3-0 com uma agulha de formato semi-redondo.

A ferida após o procedimento foi confirmada por microscopia. O extravasamento de IGG atingiu o pico um dia após a lesão, seguido de recuperação progressiva e redução da intensidade da coloração em três, cinco e sete dias. O vazamento de corante azul de Evan para o parênquima cerebral ocorreu imediatamente após a lesão, com sua concentração atingindo o pico de uma hora.

A concentração do corante diminuiu gradualmente após um e três dias. O acúmulo máximo de micróglia positiva para IBA1 e astrócitos positivos para GFAP ocorreu cinco e três dias após a lesão, respectivamente, com sua presença diminuindo em sete dias. As citocinas inflamatórias, incluindo o fator de necrose tumoral alfa, a interleucina seis e a interleucina um beta, mostraram pico de expressão de mRNA um dia após a lesão, enquanto o fator de crescimento transformador beta um atingiu o pico três dias após a lesão.