Vücuttaki yağ depolarının tanımlanması ve dindikleştirilmesi için standart laştırılmış bir metodoloji, ayrık anatomik nişlerdeki adipositlerin karakter ve işlevindeki farklılıkların araştırılması için önemlidir. Bu tekniğin en büyük avantajı, hem yaygın hem de daha az çalışılan kemirgen yağ depolarını tanımlamak ve çıkarmak için güvenilir ve doğru bir yöntem olmasıdır. Interscapular BAT'in tanımlanması ve izolasyonu için, deponun doğal sınırını takip eden ötanazi edilmiş bir farenin ön deri altı dokusunun alt kenarı boyunca yatay olarak kesmek için iris makas kullanın.
Dokunun doğal sınırlarını takip deponun lateral kenarları boyunca iki dikey kesiler olun. Beyaz yağ dokusu nun içine gömülü kelebek şeklindeki interscapular kahverengi yağ dokusunu ortaya çıkarmak için depoyu dikkatlice çevirmek için terlikleri kullanın. Daha sonra BAT'i çevredeki WAT'tan dikkatlice inceleyin.
Yağ dokularını akış analizi için uygun kaplarda saklayın. Posterior subkutan WAT'ın tanımlanması ve izole edilmesi için fareyi supine pozisyonuna yerleştirin ve hayvanın uzuvlarını sabitle. Göğüs kafesinin tabanındaki deriyi kaldırmak ve bir milimetrelik deri kesisi yapmak için forseps kullanın.
Kesiğe iris makasından bir bıçak yerleştirin ve göğüs kafesinin tabanından başlayıp kuyruğun tabanına doğru yükselen 4-5 santimetrelik orta hat deri kesisini yapın. Daha sonra, ilk dikey kesi nin üst kısmında orta hattan yanal olarak uzanan iki bir santimetrelik yatay kesiler yapın. Dikkatle periton boşluğundan deri geri soymak için forceps kullanın, deri ile ilişkili kalması gereken posterior deri altı WAT bulmak için bacak kullanın.
Uzatılmış deriyi sabitle ve kasık boyunca arka bacak ventrally tabanından üçgen inguinal WAT depo tamamen çıkarmak. Visseral WAT depo tanımlama ve izolasyon için, sternum tabanında ince periton boşluğu duvar yukarı kaldırmak ve çadırlı dokuda bir milimetrelik kesi yapmak için forseps kullanın. Kesiğe iris makasından bir bıçak yerleştirin ve periton boşluğunun üstünden rektuma doğru 4-5 santimetre azalan dikey bir kesi yapın.
Dikey kesinin üst ve alt kısmında orta hattan yanal olarak uzanan iki santimetrelik yatay kesiler yapın ve karın boşluğu içeriğini ortaya çıkarmak için periton geri soymak için perseps kullanın. Sonra periton boşluğu içinde bulunan WAT depoları hasat için diseksiyon tavasına uzanmış periton pin. Kimlik ve visseral gonadal WAT izolasyon için, gonadlar bulmak ve ilişkili gonadal WAT kaldırmak için forseps kullanın, sonra dikkatle gonadlardan WAT çıkarmak için iris makas kullanın.
Perirenal depoyu çıkarmak için, böbreği bulun ve böbrek dokusunu kaldırmak için forseps kullanın. Perirenal ve retroperitoneal depolar arasında net bir bölünme görmek ve doğrudan böbrekler ile ilişkili WAT çıkarmak için orta hatta böbrek çekin. Sonra WAT böbrekler üzerinde bulunan adrenal bezleri kaldırın.
Retroperitoneal WAT tanımlama ve izolasyon için, tekrar orta hatta böbrek asansör ve dikkatle posterior periton duvarından retroperitoneal WAT incelemek için iris makas kullanın. Popliteal WAT izole etmek için, diz arkasında popliteal fossa yukarı bakan dikkat alarak diseksiyonu pan karşı patella yerleştirin. Dikkatle ayak için arka bacak tabanından deri kaldırmak için iris makası kullanın.
Gastroknemius kas medial ve lateral kafaları alt sınırında bir kesim yapmak için iris makas kullanın, üçgen popliteal depo ortaya çıkarmak için kas kaldırmak için forseps kullanın. Sonra doğal doku sınırları boyunca depo çıkarmak için iris makas kullanın. Burada fare nin subkutan, kahverengi, visseral ve popliteal depolarının brüt anatomik konumları gösterilmiştir.
Deri altı, kahverengi, visseral, popliteal, kurucu ve düzenlenmiş ilik yağ, kas içi ve infrapatellar yağ depolarının histolojik özellikleri standart Hematoksilin ve Eozin boyama protokolleri ile değerlendirilebilir. Bu protokol kullanılarak izole edilen yağ dokuları histolojik analiz, moleküler çalışmalar, gen ve protein ekspresyonu analizi de dahil olmak üzere çok çeşitli deneysel uç noktalar için kullanılabilir. Çeşitli yağ depolarının tanımlanmasının alan çapında standardizasyonu, hiç şüphesiz moleküler ve metabolik özelliklerini ve bunların hem yerel hem de sistematik patolojik durumlara ayırımsal katkılarını daha iyi anlamamıza yardımcı olacaktır.
