Una metodologia standardizzata per identificare e sezionare i depositi adiposi in tutto il corpo è fondamentale per lo studio delle differenze nel carattere e nella funzione degli adipociti all'interno di nicchie anatomiche discrete. Il principale vantaggio di questa tecnica è che è un metodo affidabile e accurato per identificare ed eccitare depositi di adiposi di roditori comuni e meno studiati. Per l'identificazione e l'isolamento della BAT interscapulare, utilizzare le forbici dell'iride per tagliare orizzontalmente lungo il bordo inferiore del tessuto sottocutaneo anteriore di un topo eutanasiato seguendo il bordo naturale del deposito.
Effettuare due incisioni verticali lungo i bordi laterali del deposito seguendo i bordi naturali del tessuto. Utilizzare le forcelle per capovolgere attentamente il deposito per rivelare il tessuto adiposo marrone interscapulare a forma di farfalla incorporato nel tessuto adiposo bianco. Quindi sezionare attentamente il BAT lontano dalla WAT circostante.
Conservare i tessuti adiposi in contenitori appropriati per l'analisi a valle. Per l'identificazione e l'isolamento della WAT sottocutanea posteriore, posizionare il mouse in posizione supina e fissare gli arti dell'animale. Utilizzare le flessioni per sollevare la pelle alla base dello sterno e fare un'incisione cutanea di un millimetro.
Inserire una lama delle forbici dell'iride nel taglio e fare un'incisione della pelle della linea mediana da quattro a cinque centimetri a partire dalla base dello sterno e salendo alla base della coda. Successivamente, fare due incisioni orizzontali di un centimetro nella parte superiore dell'incisione verticale iniziale che si estende lateralmente dalla linea mediana. Utilizzare le forcep per sbucciare con cura la pelle dalla cavità peritoneale, utilizzare la gamba per localizzare la WAT sottocutanea posteriore che dovrebbe rimanere associata alla pelle.
Pin la pelle tesa e asportare completamente il deposito triangolare inguinale WAT dalla base dell'arto posteriore ventralmente attraverso l'inguine. Per l'identificazione e l'isolamento del deposito WAT viscerale, utilizzare le pinze per sollevare la sottile parete della cavità peritoneale alla base dello sterno e fare un'incisione di un millimetro nel tessuto tendato. Inserire una lama delle forbici dell'iride nel taglio e fare un'incisione verticale discendente da quattro a cinque centimetri dalla parte superiore della cavità peritoneale al retto.
Fare due incisioni orizzontali di un centimetro nella parte superiore e inferiore dell'incisione verticale che si estende lateralmente dalla linea mediana e utilizzare le forcep per sbucciare il peritoneo per esporre il contenuto della cavità addominale. Quindi inchiodare il peritoneo teso alla padella di dissezione per raccogliere i depositi WAT contenuti all'interno della cavità peritoneale. Per l'identificazione e l'isolamento della WAT gonadale viscerale, individuare le gonadi e utilizzare le pinze per sollevare la WAT gonadale associata, quindi utilizzare le forbici dell'iride per asportare con cura il WAT dalle gonadi.
Per asportare il deposito perirenale, localizzare il rene e utilizzare le forcelle per sollevare il tessuto renale. Tirare il rene verso la linea mediana per vedere una chiara divisione tra i depositi perirenali e retroperitoneali e asportare la WAT direttamente associata ai reni. Quindi rimuovere le ghiandole surrenali situate sopra i reni dalla WAT.
Per l'identificazione e l'isolamento wat retroperitoneale, sollevare nuovamente il rene alla linea mediana e utilizzare le forbici dell'iride per sezionare attentamente il WAT retroperitoneale dalla parete peritoneale posteriore. Per isolare la WAT poplitea, posizionare la rotula contro la padella di dissezione facendo attenzione che la fossa poplitea nella parte posteriore del ginocchio sia rivolta verso l'alto. Utilizzare le forbici dell'iride per rimuovere con cura la pelle dalla base dell'arto posteriore al piede.
Usa le forbici dell'iride per fare un taglio al bordo inferiore delle teste mediali e laterale del muscolo gastrocnemio, usa le forcep per sollevare il muscolo per rivelare il deposito pompite triangolare. Quindi usa le forbici dell'iride per asportare il deposito lungo i bordi dei tessuti naturali. Qui vengono mostrate le posizioni anatomiche lorde dei depositi sottocutanei, marroni, viscerali e poplitei del topo.
Le caratteristiche istologiche dei depositi di adiposo subcutaneo, marrone, viscerale, popliteale, costitutivo e regolato del midollo, intramuscolari e infrapatellari possono essere valutate mediante protocolli standard di colorazione ematossilina ed eosina. I tessuti adiposi isolati usando questo protocollo possono essere utilizzati per un'ampia varietà di endpoint sperimentali tra cui analisi istologiche, studi molecolari e analisi dell'espressione genica e proteica. La standardizzazione sul campo dell'identificazione di diversi depositi di adiposi ci aiuterà senza dubbio a comprendere meglio le loro caratteristiche molecolari e metaboliche e i loro contributi differenziali agli stati patologici locali e sistematici.
