Name: the cutting and floating method for paraffin-embedded tissue for sectioning
Uploaded: 2018-09-05T15:30:00.000+00:00
Duration: 5 min
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Cutting and Floating Method for Paraffin-embedded Tissue for Sectioning at JoVE.com

Bu eser Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin tarafından (Grant No 31400936, 31460260) destek verdi ve doğal Bilim Vakfı, Jiangxi eyaletinin Çin (20171BAB215020). Biz de Nanchang üniversite ve Queen Mary University of London arasındaki ortak program bu eser destek için teşekkür ederiz.

Tüm yöntem tanımlamak burada hayvan bakım ve kullanım Komitesi Nanchang Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. montaj malzemeleri ve Microtome bağlanmak
<ol><li>Parametre (ek Şekil 1) gereksinimleri başına tasarım.</li>
	<li>Akrilik panoları üretimi için yerel bir fabrika için parametre gönderin.</li>
	<li>Tüm parçaları sırayla birleştirin: kloroform 7 ticari akrilik panoları bir tanka bir bölüm kanal ve su ile banyo (Şekil 1) birleştirmek için kullanın. Dikkat: ışık ve oksijen karşılaştığında kloroform toksik maddeler üretir. Cihaz bir duman başlıklı bir araya getirin.</li>
	<li>Borulu elektrikli ısıtma elemanı delikten akrilik Kurulu #1 (Şekil 2A, ok ucu) yükleyin.</li>
	<li>Sıcaklık denetleyicisi yüklemek için küçük bir delik bir elektrikli matkap kullanarak #2 akrilik tahtada oluşturmak ve sıcaklık dedektörü (Şekil 2A, ok) yükleyin. Bir dijital termostat tank (Şekil 2A) yükleyin. Not: Sıcaklık dedektörü su yüzeyinin altında 1 cm olmalıdır.</li>
	<li>Güç erişim sağlamak için gerilim altında 24 V ekipman açmadan önce ayarlayın.</li>
	<li>Microtome bölümü atık tepsisini çıkarın.</li>
	<li>Bölümleri kanal tarafsız silikon dolgu macunu (Şekil 2B) ile microtome bıçak sahibi ile bağlantı. Not: eski bıçak kolayca değiştirilir, böylece herhangi bir nötr silikon dolgu macunu bıçağın üstündeki yukarıda smear değil.</li>
	<li>Kloroform ve tarafsız silikon dolgu macunu zaman kuvvetlendirmek için izin vermek için bir gecede kuru.</li>
	<li>Bıçak bıçak sahibine yükleyin. Su su banyosu (Şekil 2C) dökün. Su yüzeyinin sadece bıçak (Şekil 2B, ok başı) üstündeki dokunmatik gerekir.</li>
</ol>2. parafin kesit
Not: Enkaz kez üst veya alt kenarlarını mum blok ve su yüzeyi üzerinde birikir. Bu enkaz düzenli olarak temizlenmiş olmalıdır.
<ol><li>
Geleneksel parafin10kesit gerçekleştirin.
	<ol>
<li>Parafin gömülü numune üzerinde döner microtome kelepçe ve bıçak bıçak tutucu içinde yerleştirin.</li>
		<li>Çark açmak ve örnek bölüm.</li>
		<li>Parafin kesitli şerit 38,5 ° C sıcak su banyosu için transfer.</li>
		<li>Bölümler mikroskop üzerine su yüzeyinden unfolding sonra slayt alın.</li>
		<li>Slayt 42 ° c fırında gecede kuru.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Geliştirilmiş parafin (Şekil 3) kesit
	<ol>
<li>Ekipman açın.</li>
		<li>Kalorifer sıcaklık algılama anahtarı ile açın ve hedef sıcaklık 40.0 ° c önceden sıcak su 1 h için 38,0 ° C arasında ayarlayın.</li>
		<li>Parafin katıştırma tarafından alınan parafin blok değiştirmek; sonra parafin blok microtome'nın kaset kelepçe üzerinde yerleştirin ve kilitle. Not: Parafin blok üst ve AST sınırları bir ark şekillendirme ve dar bölümleri kanalı ile akış yapamaz hale bölüm şerit önlemek için yatay olarak değiştirilmesi gerekir.</li>
		<li>Hızlı bir şekilde örnek kesme kalın bölümler tarafından yaklaşım.</li>
		<li>Uygun bölümü kalınlığı (10 µm yetişkin fare beyni, Yetişkin fare böbrekler ve embriyo fare beyni, zebra balığı gözler için 4 µm) için ayarlayın. Çark açmak ve bölümleri kanal ve banyo bölümleri otomatik olarak girer.</li>
		<li>Numune yavaş ve düzgün kesme Darbedeki (Şekil 3A) bölüm. Not: çark birkaç dakika durdu sonra değiştirilmiş ilk bölümünün Thethickness. Bölümleri üst üste çizik olduğunda tek kullanımlık bıçaklar değiştirilmelidir.</li>
		<li>Bölümleri bir satırda (Şekil 3B, 3 C) yüzmek için banyo odası deliklere. Not: baş kısmındaki odası duvara yapışır, yüzen tutmak için bir fırça kılavuzu kullanın.</li>
		<li>Bölümler mikroskop slayta uygun. Bölümlerden sonra tamamen su banyosunda ayrı birkaç bölüm cımbız ile açılmak. O zaman Seç onları--dan mikroskop slayta (şekil 3D) su banyosu. Not: Bu bölüm kanal ve su banyosu ön henüz tam olarak gelişeceğini olmayacak gibi bölümler su banyosu, arka çekilmesi gereken.</li>
		<li>Slaytları gecede 42 ° C fırında yerleştirerek kuru. Slaytları sonra oda sıcaklığında süresiz olarak depolanabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hematoksilen-eozin (HE) geliştirilmiş Yöntem8değerlendirilmesi uğruna boyama kullanın.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Chung, K., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CLARITY+for+mapping+the+nervous+system.">CLARITY for mapping the nervous system.</a> Nature Methods. 10 (6), 508-513 (2013).</li><li>Fujita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+neuron+differentiation+in+the+central+nervous+system+by+tritiated+thymidine+autoradiography.">Analysis of neuron differentiation in the central nervous system by tritiated thymidine autoradiography.</a> Journal of Comparative Neurology. 122 (3), 311-327 (1964).</li><li>Mironov, V., Boland, T., Trusk, T., Forgacs, G., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+printing:+Computer-aided+jet-based+3D+tissue+engineering.">Organ printing: Computer-aided jet-based 3D tissue engineering.</a> Trends in Biotechnology. 21 (4), 157-161 (2003).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryosectioning+tissues.">Cryosectioning tissues.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 3 (8), (2008).</li><li>Viebahn, C., Luttenberg, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+anti-roll+plate+as+a+remedy+for+the+ill-effects+of+electrical+charge+during+cryosectioning.">A modified anti-roll plate as a remedy for the ill-effects of electrical charge during cryosectioning.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 37 (7), 1157-1160 (1989).</li><li>Onozato, M. L., Hammond, S., Merren, M., Yagi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+completely+automated+tissue-sectioning+machine+for+paraffin+blocks.">Evaluation of a completely automated tissue-sectioning machine for paraffin blocks.</a> Journal of Clinical Pathology. 66 (2), 151-154 (2013).</li><li>Sabaliauskas, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+zebrafish+histology.">High-throughput zebrafish histology.</a> Methods. 39 (3), 246-254 (2006).</li><li>Chen, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybrid-Cut:+An+Improved+Sectioning+Method+for+Recalcitrant+Plant+Tissue+Samples.">Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54754 (2016).</li><li>Kucherenko, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin-Embedded+and+Frozen+Sections+of+Drosophila+Adult+Muscles.">Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles.</a> Journal of Visualized Experiments. (46), e2438 (2010).</li><li>Cornell, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin+Embedding+and+Thin+Sectioning+of+Microbial+Colony+Biofilms+for+Microscopic+Analysis.">Paraffin Embedding and Thin Sectioning of Microbial Colony Biofilms for Microscopic Analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), e57196 (2018).</li><li>Whiteland, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+detection+of+T-cell+subsets+and+other+leukocytes+in+paraffin-embedded+rat+and+mouse+tissues+with+monoclonal+antibodies.">Immunohistochemical detection of T-cell subsets and other leukocytes in paraffin-embedded rat and mouse tissues with monoclonal antibodies.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 43 (3), 313-320 (1995).</li><li>Tucker, D. K., Foley, J. F., Bouknight, S. A., Fenton, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sectioning+Mammary+Gland+Whole+Mounts+for+Lesion+Identification.">Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), e55796 (2017).</li><li>Venegas-Pino, D. E., Banko, N., Khan, M. I., Shi, Y., Werstuck, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Analysis+and+Characterization+of+Atherosclerotic+Lesions+in+the+Murine+Aortic+Sinus.">Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus.</a> Journal of Visualized Experiments. (82), e50933 (2013).</li><li>Lau, S. K., Chu, P. G., Weiss, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD163:+A+specific+marker+of+macrophages+in+paraffin-embedded+tissue+samples.">CD163: A specific marker of macrophages in paraffin-embedded tissue samples.</a> American Journal of Clinical Pathology. 122 (5), 794-801 (2004).</li><li>Campbell-Thompson, M. L., Heiple, T., Montgomery, E., Zhang, L., Schneider, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staining+Protocols+for+Human+Pancreatic+Islets.">Staining Protocols for Human Pancreatic Islets.</a> Journal of Visualized Experiments. (63), e4068 (2012).</li></ol>

Yazarlar bu aygıt üzerinde bir patente sahip ve hiçbir rakip ilgi bildirin.

Parafin bölüm morfoloji artırmak ve geleneksel parafin kesit sırasında harcanan zaman sorunu çözmek için biz bir geliştirilmiş parafin kesme ve unfolding birleştirir yöntemi kesit oluşturdu. Bu geliştirilmiş Yöntem bir bölüm kanal, bir su banyosu ve sıcaklık algılama anahtarı ile bir ısıtıcı oluşmaktadır basit ekipman kullanır. Bölüm şerit bölüm kanal üzerinden su banyosu girer ve otomatik olarak kesme sırasında yaşanıyor. Bu nedenle, bu yöntem kalite ve verimlilik, Yetişkin fare hipokampus, Yetişkin fare böbrekler, E15.5 fare beyni ve yetişkin zebra balığı gözleri parafin kesit tarafından doğrulandı kesit parafin geliştirir.
Kesit geleneksel parafin sırasında curling bölüm önlemek için birçok ayarlamalar, doku yüzey nemlendirme, balmumu bloğu soğutma, nem oranı artan ve cryosectioning6,7birleştirme gibi yapılmış olan, 8; Ancak, bu ayarlar parafin kesit daha sıkıcı yapın. Sıvı su üzerinde dayanır bir ticari bölümüne transfer sistemi daha başarılı olmuştur. Bu sistem bölümü su yüzeyinin hemen kesmek sonra bağlantı kurar ve elektrik motoru tahrik su akışı bölümleri bıçak sahibinden daha düşük sıcak su banyosu9' a aktarır. Onun mekanizma nedeniyle kesit geliştirilmiş bölüm kalitesinin statik elektrik inhibe etmez. Bu sistem bölümleri bıçak sahibinden su banyosu için el ile aktarma önler, Ayrıca, kolayca zarar hassas bölümler, bu aynı zamanda yüksek kaliteli ince kesitler elde yardımcı olur.
Bizim geliştirilmiş yöntem ile ticari bölümüne transfer sistemi bazı avantajları ile deneyimi üzerinde basit ekipman çizer. İlk olarak, hangi bölgeleri geliştirme laboratuvarları bu yöntemde halka sevdirmek ve ticari bölümüne transfer sistemi tamamlayıcı daha ucuz, cihazıdır. İkinci olarak, ekipman suda statiktir ve asla daha ince kesitler elde edinerek kesitler, rahatsız ediyor. Arka arkaya 2 µm kalınlık gelişmiş yöntemi kullanarak gözünde zebra balığı kesitli ve yüksek kalitede alınan bölümler vardı. Üçüncü olarak, daha büyük bir su banyosu tank açılmak ve aynı anda, iki işleç işbirliği yapmaya izin float için en az 40 bölümleri verir equipment, kullanılır. Bir kişi sürekli doku numune kesebilir ve diğer doğrudan bölümleri balık tutabiliriz. Bu bölümler için açılmak beklerken zamanı azaltır. Bir tek tip kesme darbesiyle ardışık kesme de bölüm kalitesini artırır.
Basit ekipmanlarımız görünümünü ve yapısını iyileştirme gerektirir. Örneğin, güç, bir ısıtıcı ve sıcaklık denetleyicisi gibi bileşenleri bu cihaz daha ayrılmaz ve taşınabilir yapmak için entegre edilebilir. Ayrıca, ticari döner microtomes farklı boyutları vardır. Diğer microtomes için bağlanmak için açı ve yüksekliği bu cihazın ayarlanmalıdır. Diğer moleküler teknikleri ile kombine parafin kesit Nörobiyoloji, doku Morfoloji ve diğer araştırma alanları11,12,13yaygın olarak kullanılır. Büyük olasılıkla, bu yöntem klinik muayene verimliliği14,15 ve diğer biyolojik örnekler burada kullanılan üç doku türlerinin ötesinde artırabilirsiniz.

Morfolojik biyolojik araştırmada önemli bir çalışmadır. Yeni teknoloji hedeflerine doğrudan doğruya--dan tüm doku veya organizmalar1,2,3ince bölüme, numune kesme, boyama tarafından takip gözlemlemek araştırmacılar sağladı rağmen birincil kalır yöntemi fornot tek doku morfoloji aynı zamanda protein dokuda doğrudan hedefleme. Işık mikroskobu üç bölüm türlerini kullanır: Parafin, dondurulmuş ve semithin. Cryosectioning doku antigenicity korumak için ortak ve numune hazırlama basittir, tutulan doku morfoloji yoksul ve ince parça4,5için uygun olsa da. Parafin kesit iyi korunmuş morfoloji sergilenmesi için en sık kullanılan yöntemdir. Numuneler tamamen susuz ve balmumu içinde gömülü olarak, parafin blok süresiz olarak saklanır. Buna ek olarak, parafin kesit biyolojik sonda erişimi daha fazla deneylerde geliştirmek ve hücre katmanı bindirme Z yönünde azaltmak ince kesitler üretir.
Ancak, geleneksel parafin kesit sıkıcı ve Operatör beceri gerektirir. Parafin kesitler fiksasyon, dehidratasyon, gömme, kesme ve yüzen tabi. Önemlisi, Bölüm şeritler bıçaklıklı su banyosu aktarma gerekli ama zor junior operatörleri için. Özellikle kuru hava, Bölüm şeritler statik elektrik nedeniyle kandıracak ve sıcak su yüzeyine açılmak zordur. Bölüm geliştirmek için kalite maruz doku yüzeyi arasında microtome bıçak geçer, onları buzlu suda çeker veya nem microtome yakınındaki bir nemlendirici ile yükselterek mum blok soğutma nemlendirme,6,7 tavsiye edilir . Parafin kesit geliştirmek için yeni yöntemler hibrid parafin katıştırma, cryosectioning8ve ticari bölüm transfer sistemi Yardım9içerir. Her ne kadar bu yöntemler kısmen parafin geliştirmek hız ve kalite, kesit kesit çok daha ağır yapmak ve ticari bölüm aktarma sistemleri pahalıdır.
Bu protokol için bir döner microtome blade sahibine bağlı basit, ucuz ve esnek ekipman adım adım oluşturmak nasıl gösterir. Bu cihaz bir bölüm kanal, bir su banyosu ve bir ısıtıcı bir sıcaklık algılama anahtarı ile oluşur. Kesme sonra bölümleri düzinelerce bölüm kanal akışı ve böylece otomatik olarak elinde tutmasına doğrudan, su banyosu girin. Bu parafin kesit verimliliğini artırır ve bu teknoloji daha uygun hale getirir. Bu yöntem, daha yetişkin fare hipokampal bölümleri, Yetişkin fare böbrek bölümler, embriyonik 15.5 bayat (E15.5) fare beyin bölümleri ve bölümler daha kısa sürede hasat ve morfolojik daha sağlam kaldı yetişkin zebra balığı göz kullanarak. Bu yöntem, Bölüm ayrım kaybı kaçınırken hızlandırılmış parafin kesit gerektiren diğer doku örnekleri için de kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Incubator</td><td>Boekel Scientific</td><td>133000-2</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol&amp;nbsp;</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Xylene&amp;nbsp;</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td><td>1330-20-7</td><td></td></tr><tr><td>Paraplast</td><td>Leica</td><td>39601006</td><td></td></tr><tr><td>Heated Paraffin Embedding Module</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Commercial acrylic board</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trichloromethane</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td><td>67-66-3</td><td></td></tr><tr><td>Tubular electric heating element(12 V 200 W)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Temperature controller(12 V 120 W)</td><td>Mingsuo</td><td>XH-W3002</td><td></td></tr><tr><td>Rotary microtome&amp;nbsp;</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neutral silicone sealant</td><td></td><td></td><td>Link the water channel with the microtome knife holder</td></tr><tr><td>Voltage transformer</td><td>Dearll</td><td>S-250-12</td><td></td></tr><tr><td>Disposable blade</td><td>Accu-Edge</td><td>4689</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Baso Diagnostics Inc.</td><td>BA-4025</td><td></td></tr><tr><td>Eosin&amp;nbsp;</td><td>Baso Diagnostics Inc.</td><td>BA-4025</td><td></td></tr><tr><td>Microslide</td><td>Sail Brand</td><td>7105</td><td></td></tr><tr><td>Neutral balsam</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid</td><td>10004160</td><td></td></tr><tr><td>Coverslip&amp;nbsp;</td><td>Citoglas</td><td>10212424C</td><td></td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hydrochloric acid</td><td>Xilong Chemical</td><td>7647-01-0</td><td></td></tr><tr><td>Water bath for paraffin sections</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HistoCore Arcadia C&amp;nbsp;- Cold Plate</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>paraffin repellent spray&amp;nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>9990420</td><td></td></tr></tbody></table>

the cutting and floating method for paraffin-embedded tissue for sectioning

Parafin gömülü dokusunun kesit Histoloji ve patoloji yaygın olarak kullanılır. Ancak, yorucu olabilir. Bu yöntem geliştirmek için çeşitli ticari şirketler karmaşık bölümüne transfer sistemleri sıvı su kullanarak tasarladılar. Bu teknoloji basitleştirmek için kesme ve basit bir termostatik odası içinde yüzen bir araya getiren ev yapımı donanımları kullanarak basit bir yöntem oluşturdu; Bu nedenle, bölümleri otomatik olarak su yüzeyine su banyosu girin. Hippocampus yetişkin fare beyni, Yetişkin fare böbrekler, embriyonik fare beyni ve yetişkin zebra balığı gözleri kesin karşılaştırma için geleneksel parafin kesit ve sunulan yöntem kullanarak. İstatistiksel analiz bizim geliştirilmiş Yöntem kurtarmak zaman ve yüksek kalite bölümleri üretilen gösterir. Buna ek olarak, kısa bir süre içinde bütün bir örnek parafin kesit junior operatörleri için kolaydır.

Geliştirilmiş Yöntem sağlam parafin bölümleri sayısı arttı. Yetişkin fare hipokampal doku, Yetişkin fare böbrekler, embriyonik fare beyni ve zebra balığı gözleri bu yeni yöntem test ettik. Su tankı için eklendi ve su sıcaklığı 38,0 ° C ile 40.0 ° c arasında devam edildi Bir seri olarak doku örnekleri hazırladıktan sonra onlar kesitli ve geleneksel kesit için karşılaştırıldığında. Yeni Yöntem bölümü kaybı kaçınılması ve yetişkin fare hipokampus, Yetişkin fare böbrekler, E15.5 fare beyin ve yetişkin zebra balığı gözler (Şekil 4A4 C, 4E, 4 G) olduğu gibi bölümlerde oranı arttı. Sonuç olarak, bizim Yöntem kesit bölüm kaybını önleme ve numune başına daha fazla olduğu gibi bölümler hasat tarafından geliştirilmiş.
Geliştirilmiş yöntem örnek harcanan zaman azaldı. Geleneksel yöntem ve bizim geliştirilmiş Yöntem arasında geçen süre karşılaştırarak, biz bütün serisi (ilk bölümünden bir organ son bölümüne) kesit yetişkin fare hipokampus, Yetişkin fare böbrekler, E15.5 fare beyni ve yetişkin üzerinde gerçekleştirilen zebra balığı gözler. Sonuç geliştirilmiş Yöntem hız tüm test örneklerinde (4B rakam4 D, 4F, 4 H) kesit parafin hızlandırılmış öneririz. Genel olarak, bizim yöntem daha hızlı yüksek kalitede parafin kesit için izin.
Zebra balığı optik retina bölümlerini serisi gözlenen H ve E boyama. Zebra balığı retina optik disk parçası serisi kesit için geliştirilmiş yönteminden hasat bölümler daha iyi daha iyi bütünlüğü yöntemi (Şekil 5A, 5B) kesit geleneksel parafin gelen bu. En hasat bölümler (Şekil 5C, 5 D) kalitesi ile ilgili olarak bu iki yöntem arasında anlamlı bir fark vardı. Zaman zaman, bölümler geleneksel yönteminden hasat kalitesi nispeten düşük (Şekil 5E, 5F).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58288/58288fig1.jpg"> Şekil 1: 7 ticari akrilik panoları bir tanka montaj işlemi. (A)7 akrilik kurulların genel görünümü. (B-G) # 1 kartına tanktan kuruluna #7 kademeli Meclisi. (H) derleme sonra ana tank. (I) genel tank boyutu; tank yüzeyinde koruyucu membran daha fazla yükleme için kaldırıldı. L = 400 mm, L' 220 mm, H = 122 mm, W = 200 mm. = <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/58288/58288fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58288/58288fig2.jpg"> Şekil 2: uygun monte cihazları kullanıma hazır. (A) olduğu gibi ekipman sonra döner microtome bağlı olmak. Ok göstergesi, sıcaklık dedektörü küçük delikten elektrikli matkap tarafından yüklenir. Ok başı, ısıtıcı (borulu elektrikli ısıtma elemanı) kurulu #1 delik aracılığıyla yüklenir. (B) bir, özellik microtome bıçak tutucu ve bölümleri kanal arasındaki bağlantının kesik güçlendirilmiş alanında. Ok başı, bıçak tutucu ve bölümleri kanal tarafsız silikon dolgu macunu ile bağlanır. (C) su ile B aynı döktü ve blade yüklü. (D) C. ok başı kesik alanında yan görünüm, su yüzeyi olduğunu yakın bıçak kenarı. VT: gerilim trafo; WB: su banyosu; DT: dijital termostat; B: bıçak; BH: bıçak tutucu; SC: bölümleri kanal. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/58288/58288fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58288/58288fig3.jpg"> Şekil 3: işlem kesit geliştirilmiş parafin. Sol alt köşede bulunan rakamlar sırasıyla A-D güçlendirilmiş kesikli alanlarında vardır. Ok endikasyonları, ilk bölümü. (, A') Bölüm bölümler kanal hemen ve doğrudan sonra kesme girer. (B, B') Bölümler şerit bölümleri kanal ve su banyosu sınırı geçerse. (C, C') Bu bölümleri su banyosu arka için yüzer ve tamamen gelişeceğini. (D, D') Ne zaman onlar su banyosu arka ulaşmak ve tam olarak gelişeceğini bölümleri mikroskop slayt tarafından are seçmek yukarıya. SC: bölümleri Kanal; WB, su banyosu. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/58288/58288fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58288/58288fig4.jpg"> Şekil 4: verim ve verim oranı önemli ölçüde bütün dizi bölümleri için geliştirilmiş parça Yöntem geliştirilmiş. Verim oranı tüm kesme bölümleri olduğu gibi bölümlerde oranda egale etti. Veri gösterilen ortalama ± SEM ve aynı operatörü tarafından satın aldı. (A, C, E, G) Geliştirilmiş Yöntem engelledi yetişkin fare hipokampüs bölümünde kaybı (91.04 ± %1.429 N = 3, vs 97.63 ± %0.4864 N = 3, p 0.0120 =), Yetişkin fare böbrekler (92.30 ± %0.5689 N = 3, vs 95,99 ± %0.7055 N = 3, p 0.0153 =), E15.5 fare beyin (90.67 %1.549 ±, N = 3 vs %97.01 ± 0.2816, N = 3, p 0.0158 =) ve yetişkin zebra balığı gözler (91.27 ± %0.9734 N 4 vs 96.32 ± %0.7217 N = 4, p = 0.0059 =). (B, D, F, H) Geliştirilmiş Yöntem kaydedilen zaman karşılaştırıldığında yetişkin fare hipokampus için geleneksel yöntemi ile (126,0 ± 3.606 min vs 79.67 ± 1.856 min, N = 3, p = 0,0003), Yetişkin fare böbrekler (66.67 ± 1,764 min vs 41.33 ± 2,186 min, N = 3, p 0.0008 =), E15.5 fare br Ain (99.67 ± 3.480 min vs 52.33 ± 4.333 min, N = 3, p 0.0010 =) ve yetişkin zebra balığı gözler (48.00 ± 2,160 min vs 30,75 ± 1.797 min, N = 4, p 0.0009 =). * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0.005. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/58288/58288fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58288/58288fig5.jpg"> Şekil 5: H ve E gözleri geleneksel yöntemlerle elde ve parafin kesit geliştirilmiş zebra balığı aynı operatör tarafından optik disk bölümünün bütün Serisi Bölüm boyama karşılaştırılır. (A)geleneksel parafin (21 Bölüm) kesit. (B) geliştirilmiş parça (24 bölümleri) alkol. (C) A6 kesikli alanı. (D) B7 kesikli alanı. (E) A17 kesikli alanı. (F) B19 virüsü ile ilişkisi kesik alanı. Yıldız, nispeten düşük kaliteli bölümlerle. Ok uçları, optik disk; Okları, Retina dokularının şiddetli gözyaşı. Ölçek çubuğu = 200 µm (A ve B); Ölçek çubuğu 50 µm (C, D, E, F) =. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/58288/58288fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Ek Şekil 1: Boyut parametreleri 7 ticari akrilik kurulların. İlgili yönetim kurulu kenar uzunluğunu temsil eder. Birimleri: mm. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/58288/supplementary_figure.AI">bu dosyayı indirmek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about The Cutting and Floating Method for Paraffin-embedded Tissue for Sectioning at JoVE.com

The Cutting and Floating Method for Paraffin-embedded Tissue for Sectioning

Kesme ve kesit için doku parafin gömülü için yüzen yöntemi

Burada, parafin kesit geliştirmek için bir protokol mevcut. Bu yöntem kesme ve geleneksel yöntemle gerekli aktarım işlemi önlemek için basit bir termostatik odası kullanarak yüzen birleştirir. Sonuç olarak, verimliliği ve bozulmamış parafin bölüm sayısı büyük ölçüde düzeldi.

Sectioning of the paraffin-embedded tissue is widely used in histology and pathology. However, it is tedious. To improve this method, several commercial ...

the-cutting-floating-method-for-paraffin-embedded-tissue-for

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Neuroscience

18.2K Görüntüleme.  Nanchang University. Burada, parafin kesit geliştirmek için bir protokol mevcut. Bu yöntem kesme ve geleneksel yöntemle gerekli aktarım işlemi önlemek için basit bir termostatik odası kullanarak yüzen birleştirir. Sonuç olarak, verimliliği ve bozulmamış parafin bölüm sayısı büyük ölçüde düzeldi.

Video: The Cutting and Floating Method for Paraffin-embedded Tissue for Sectioning

Thin Sectioning of Slice Preparations for Immunohistochemistry

Many investigations in neuroscience, as well as other disciplines, involve studying small, yet macroscopic pieces or sections of tissue that have been preserved, freshly removed, or excised but kept viable, as in slice preparations of brain tissue.  Subsequent microscopic studies of this material can be challenging, as the tissue samples may be difficult to handle.  Demonstrated here is a method for obtaining thin cryostat sections of tissue with a thickness that may range from 0.2-5.0 mm.  We routinely cut 400 micron thick Vibratome brain slices serially into 5-10 micron coronal cryostat sections.  The slices are typically first used for electrophysiology experiments and then require microscopic analysis of the cytoarchitecture of the region from which the recordings were observed.  We have constructed a simple device that allows controlled and reproducible preparation and positioning of the tissue slice.  This device consists of a cylinder 5 cm in length with a diameter of 1.2 cm, which serves as a freezing stage for the slice.  A ring snugly slides over the cylinder providing walls around the slice allowing the tissue to be immersed in freezing compound (e.g., OCT).  This is then quickly frozen with crushed dry ice and the resulting  wafer  can be position easily for cryostat sectioning.  Thin sections can be thaw-mounted onto coated slides to allow further studies to be performed, such as various staining methods, in situ hybridization, or immunohistochemistry, as demonstrated here.

The present method allows reproducible cryostat sectioning of small, difficult-to-manage, tissue pieces, such as biopsies and brain slices. We utilize a simple aluminum freezing stage to facilitate handling of tissue and a standard cryostat to routinely produce 5-10 micron serial sections from 400 micron thick brain slices.

Dilim İmmünohistokimya için hazırlıklar İnce Kesit

Many investigations in neuroscience, as well as other disciplines, involve studying small, yet macroscopic pieces or sections of tissue that have been ...

Biyoloji

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and genetic alterations. Mammary gland whole mounts are an inexpensive method to capture the progression of morphological changes that may arise after exposure. However, in later life, when abnormalities are more prone to develop, sole reliance on this one method may not always provide enough information to make a proper diagnosis of the abnormality. Historically, in chemical test guideline studies, a single mammary gland is removed at necropsy and prepared as a hematoxylin and eosin (H&#38;E)-stained section. The incorporation of contralateral mammary whole-mount collection and analysis decreases the likelihood of a false-negative assessment. Evaluation of the whole mount is limited by the presence of one or two entire mammary glands on a slide, and in some cases, the abnormalities observed in the whole mount are not uniformly represented in the H&#38;E section.&#160; The goal of this study was to develop a protocol for converting coverslipped mammary whole mounts to H&#38;E-stained sections so that lesions that would otherwise have been missed or that are difficult to diagnose can be identified. Here, we detail a method to produce a high-quality, paraffin-embedded H&#38;E section from a mammary gland that was initially prepared as a whole mount. In comparison to a tissue that was intentionally prepared for H&#38;E sectioning, the whole mount requires additional preparation for tissue removal and processing. However, this method is considered inexpensive, as it requires common lab reagents and little additional time. As a result, this method can provide invaluable information on how chemical and environmental exposures alter normal mammary development, as well as display changes that occur because of genetic modifications.

We developed a method to successfully remove, process, section, and stain, for histopathological evaluation, mammary tissue that had originally been fixed on slides as whole mounts. This method may promote the collection and evaluation of mammary gland whole mounts in reproductive and developmental test guideline studies.

Lezyon Tanımlaması için Meme Bandı Bütün Dağılımları

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Kanser Araştırmaları

Paraffin Embedding and Thin Sectioning of Microbial Colony Biofilms for Microscopic Analysis

Sectioning via paraffin embedding is a broadly established technique in eukaryotic systems. Here we provide a method for the fixation, embedding, and sectioning of intact microbial colony biofilms using perfused paraffin wax. To adapt this method for use on colony biofilms, we developed techniques for maintaining each sample on its growth substrate and laminating it with an agar overlayer, and added lysine to the fixative solution. These optimizations improve sample retention and preservation of micromorphological features. Samples prepared in this manner are amenable to thin sectioning and imaging by light, fluorescence, and transmission electron microscopy. We have applied this technique to colony biofilms of Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas synxantha, Bacillus subtilis, and Vibrio cholerae. The high level of detail visible in samples generated by this method, combined with reporter strain engineering or the use of specific dyes, can provide exciting insights into the physiology and development of microbial communities.

We describe fixation, paraffin embedding, and thin sectioning techniques for microbial colony biofilms. In prepared samples, biofilm substructure and reporter expression patterns can be visualized by microscopy.

Parafin gömme ve ince mikrobiyal koloni biyofilmler mikroskobik analizlerin yapıldığı için kesit

Sectioning via paraffin embedding is a broadly established technique in eukaryotic systems. Here we provide a method for the fixation, embedding, and ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Preparation of Non-human Primate Brain Tissue for Pre-embedding Immunohistochemistry and Electron Microscopy

Despite all the technological advances at the light microscopy&#160;level, electron microscopy remains the only tool in neuroscience to examine and characterize ultrastructural and morphological details of neurons, such as synaptic contacts. Good preservation of brain tissue for electron microscopy can be obtained by rigorous cryo-fixation methods, but these techniques are rather costly and limit the use of immunolabeling, which is crucial to understand the connectivity of identified neuronal systems. Freeze-substitution methods have been developed to allow the combination of cryo-fixation with immunolabeling. However, the reproducibility of these methodological approaches usually relies on costly freezing devices. Moreover, achieving reliable results with this technique is very time-consuming and skill-challenging. Hence, the traditional chemically fixed brain, particularly with acrolein fixative, remains a time-efficient and low-cost method to combine electron microscopy with immunohistochemistry. Here, we provide a reliable experimental protocol using chemical acrolein fixation that leads to the preservation of primate brain tissue and is compatible with pre-embedding immunohistochemistry and transmission electron microscopic examination.

Here, we provide an easy, low-cost, and time-efficient protocol to chemically fix primate brain tissue with acrolein fixative, allowing for long-term preservation that is compatible with pre-embedding immunohistochemistry for transmission electron microscopy.

İmmünohistokimya ve elektron mikroskobu Ön gömme için İnsan Olmayan Primat Beyin Dokusu Hazırlanması

Despite all the technological advances at the light microscopy&#160;level, electron microscopy remains the only tool in neuroscience to examine and ...

Nörobilim

Establishment and Analysis of Tumor Slice Explants As a Prerequisite for Diagnostic Testing

Organotypic primary tissue explant cultures, which include precision-cut slices, represent the three-dimensional (3-D) tissue architecture as well as the multicellular interactions of native tissue. Tissue&#160;slices immediately cut from freshly resected tumors preserve spatial aspects of intratumor heterogeneity (ITH), thus making them useful surrogates of in vivo biology. Careful optimization of tissue slice preparation and cultivation conditions is fundamental for the predictive diagnostic potential of tumor slice explants. In this regard, murine models are valuable, as these provide a consistent flow of tumor material to perform replicate and reproducible experiments. This protocol describes the culturing of murine lung tumor-derived tissue slices using a rotating incubation unit, a system that enables intermittent exposure of tissues to oxygen and nutrients. Our previous work showed that the use of rotating incubation units improves the viability of tissue compared to other culture methods, particularly floating slices and stagnant filter supports. Here, we further show that slice thickness influences the viability of cultured slices, suggesting that optimization of slice thickness should be done for different tissue types. Pronounced ITH in relevant oncogenic functions, such as signaling activities, stromal cell infiltration or expression of differentiation markers, necessitates evaluation of adjacent tissue slices for the expression of markers altered by drug treatment or cultivation itself. In summary, this protocol describes the generation of murine lung tumor slices and their culture on a rotating incubation unit and demonstrates how slices should be systematically analyzed for the expression of heterogeneous tissue markers, as a prerequisite prior to drug response studies.

We provide a method for the generation, cultivation and systematic analysis of organotypic slices derived from murine lung tumors. We also describe how to optimize for slice thickness, and how to select drug concentrations to treat tumor slices.

Kuruluş ve tümör dilim analizini Explants tanı testleri için bir önkoşul olarak

Organotypic primary tissue explant cultures, which include precision-cut slices, represent the three-dimensional (3-D) tissue architecture as well as the ...

Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some plant cells have rigid cell walls, tough fibers and crystals (calcium oxalate, silica, etc.), and high water content that often disrupt tissue integrity during plant tissue sectioning.
This study establishes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method. This protocol modifies a paraffin-based sectioning technique and improves the integrity of tissue sections from different plants. Plant tissues were embedded in paraffin before sectioning in a cryostat at -16 &#176;C. Sectioning under low temperature hardened the paraffin blocks, reduced tearing and scratching, and improved tissue integrity significantly. This protocol was successfully applied to calcium oxalate-rich Phalaenopsis orchid tissues as well as recalcitrant tissues such as reproductive organs and leaves of rice, maize, and wheat. In addition, the high quality of tissue sections from Hybrid-Cut could be used in combination with in situ hybridization (ISH) to provide spatial expression patterns of genes of interest. In conclusion, this protocol is particularly useful for recalcitrant plant tissue containing high crystal or silica content. Good quality tissue sections enable morphological and other biological studies.

This protocol describes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method that is useful for recalcitrant plant tissues. Good quality tissue sections enable anatomical studies and other biological studies including in situ hybridization (ISH).

Hibrid-Cut: Dirençli Bir Bitki Doku Örnekleri Bir Geliştirilmiş Kesit Yöntemi

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some ...

Pancreatic Islet Embedding for Paraffin Sections

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a mixed cell population in a structured architecture that impacts function, and human islets are widely variable in cell type composition. Current frequently used methods to study cultured islets include molecular studies performed on whole islets, lumping disparate islet cell types together, or microscopy or molecular studies on dispersed islet cells, disrupting islet architecture. For in vivo islet studies, paraffin-embedded pancreas sectioning is a powerful technique to assess cell-specific outcomes in the native pancreatic environment. Studying post-culture islets by paraffin sectioning would offer several advantages: detection of multiple outcomes on the same islets (potentially even the exact-same islets, using serial sections), cell-type-specific measurements, and maintaining native islet cell-cell and cell-substratum interactions both during experimental exposure and for analysis. However, existing techniques for embedding isolated islets post-culture are inefficient, time consuming, prone to loss of material, and generally produce sections with inadequate islet numbers to be useful for quantifying outcomes. Clinical pathology laboratory cell block preparation facilities are inaccessible and impractical for basic research laboratories. We have developed an improved, simplified bench-top method that generates sections with robust yield and distribution of islets. Fixed islets are resuspended in warm histological agarose gel and pipetted into a flat disc on a standard glass slide, such that the islets are distributed in a plane. After standard dehydration and embedding, multiple (10+) 4 - 5 &#181;m sections can be cut from the same islet block. Using this method, histological&#160;and immunofluorescent analyses can be performed on mouse, rat, and human islets. This is an effective, inexpensive, time-saving approach to assess cell-type-specific, intact-architecture outcomes from cultured islets.

Ex vivo pancreatic islet studies are important for diabetes research. Existing techniques to study cultured islets in their native 3-dimensional architecture are time consuming, inefficient, and infrequently used. This work describes a new, simple, and efficient method for generating high-quality paraffin sections of whole cultured islets.

Pankreas adacık parafin kesitler için katıştırma

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a ...

Microscopy Techniques for Interpreting Fungal Colonization in Mycoheterotrophic Plants Tissues and Symbiotic Germination of Seeds

Structural botany is an indispensable perspective to fully understand the ecology, physiology, development, and evolution of plants. When researching mycoheterotrophic plants (i.e., plants that obtain carbon from fungi), remarkable aspects of their structural adaptations, the patterns of tissue colonization by fungi, and the morphoanatomy of subterranean organs can enlighten their developmental strategies and their relationships with hyphae, the source of nutrients. Another important role of symbiotic fungi is related to the germination of orchid seeds; all Orchidaceae species are mycoheterotrophic during germination and seedling stage (initial mycoheterotrophy), even the ones that photosynthesize in adult stages. Due to the lack of nutritional reserves in orchid seeds, fungal symbionts are essential to provide substrates and enable germination. Analyzing germination stages by structural perspectives can also answer important questions regarding the fungi interaction with the seeds. Different imaging techniques can be applied to unveil fungi endophytes in plant tissues, as are proposed in this article. Freehand and thin sections of plant organs can be stained and then observed using light microscopy. A fluorochrome conjugated to wheat germ agglutinin can be applied to the fungi and co-incubated with Calcofluor White to highlight plant cell walls in confocal microscopy. In addition, the methodologies of scanning and transmission electron microscopy are detailed for mycoheterotrophic orchids, and the possibilities of applying such protocols in related plants is explored. Symbiotic germination of orchid seeds (i.e., in the presence of mycorrhizal fungi) is described in the protocol in detail, along with possibilities of preparing the structures obtained from different stages of germination for analyses with light, confocal, and electron microscopy.

This protocol aims to provide detailed procedures for collecting, fixing, and maintaining mycoheterotrophic plant samples, applying different microscopy techniques such as scanning and transmission electron microscopy, light, confocal, and fluorescence microscopy to study fungal colonization in plants tissues and seeds germinated with mycorrhizal fungi.

Mikoheterotrofik Bitki Dokularında Mantar Kolonizasyonunu Yorumlamak ve Tohumların Simbiyotik Çimlenmesi için Mikroskopi Teknikleri

Structural botany is an indispensable perspective to fully understand the ecology, physiology, development, and evolution of plants. When researching ...

Optimized Thin Endometrium Mouse Model with Low Mortality and Minimal Adhesions

Establishing a Mouse Model of Thin Endometrium

Thin endometrium (TE) has been widely recognized as a critical cause of infertility. However, the pathogenesis of TE remains unclear, and satisfactory treatment options are still urgently needed. Several animal models of TE have been developed, but the mouse model involving abdominal surgery and injection of 95% ethanol presents a formidable challenge due to the high mortality rate and risk of intrauterine adhesions if not performed correctly. Here, we describe a detailed protocol that produces reliable and reproducible TE with a very low mortality rate and minimal intrauterine adhesions by injecting 95% ethanol into the mouse uterus with varying infusion times. The results showed that all of the mice successfully developed TE with infusion times ranging from 1-3 min, characterized by a typical reduction in endometrial thickness and the number of glands, as well as excessive endometrial fibrosis. These findings suggest that this mouse model is suitable for studying thin endometrium and can serve as a platform for developing future TE treatments.

This article describes a detailed protocol for producing a reliable and reproducible thin endometrium with a very low mortality rate and minimal intrauterine adhesions by injecting 95% ethanol into the mouse uterus within 1-3 min.

Thin endometrium (TE) has been widely recognized as a critical cause of infertility. However, the pathogenesis of TE remains unclear, and satisfactory ...

Formalin-Fixed Paraffin Embedded (FFPE) Tissue Preservation: A Method for Studying Tissue Morphology

Source: Nagaraj A.S., et al., <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/v/58569/establishment-analysis-tumor-slice-explants-as-prerequisite-for">Establishment and Analysis of Tumor Slice Explants As a Prerequisite for Diagnostic Testing.</a> J. Vis. Exp. (2018)
The following video describes how to preserve morphology of a tissue with formalin fixation and paraffin embedding.