Name: a mouse model of intestinal partial obstruction
Uploaded: 2018-03-05T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
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Os autores gostaria de agradecer Benjamin J Weigler, DVM, pH.d. e Walt Mandeville, D.V.M. (recursos animais & Campus frequentando veterinário, Universidade de Nevada, Reno) para seus serviços excelentes animais fornecidos para os ratos, bem como seus conselhos sobre procedimentos cirúrgicos.

O seguinte protocolo foi aprovado pelo cuidado institucional do Animal e usar Comité (IACUC) na Universidade de Nevada-Reno (UNR) Animal recursos e cumpre com todas as orientações éticas institucionais relativas à utilização de animais de pesquisa.
1. os animais.
<ol><li>Obter camundongos C57BL/6 de maduro (4-6 semanas de idade) pesando entre 20-30 g casa da colônia de ratos de laboratório em uma instalação centralizada animal em urn Animal Resources.</li>
</ol>2. parcial obstrução cirurgia
Nota: Cirurgias são realizadas em uma sala dedicada para procedimentos cirúrgicos. Todos os instrumentos cirúrgicos são autoclavados antes da cirurgia. Luvas e batas cirúrgicas estéreis devem ser usadas por todo o pessoal na sala cirúrgica em todos os momentos.
<ol><li>Preparação para o mouse cirúrgica<ol>
<li>Verificar o sistema de entrega anestésico para garantir o fornecimento de oxigênio e isoflurano é adequado para o procedimento. Ligue o fornecimento de oxigênio. Ligar o medidor de vazão de gás e ajustá-lo a 500-1000 mL/min. lugar do animal na câmara de indução e selar o topo.</li>
		<li>Ligue o vaporizador de isoflurano para 5% e, em seguida, monitorar o animal até que se torne reclinada. Mude o sistema de entrega de anestésico para o cone de nariz.</li>
		<li>Lave a câmara de indução de qualquer gás residual com oxigênio e, em seguida, desligue a linha de câmara de indução, mantendo a linha do cone de nariz aberto.</li>
		<li>Remover o animal da câmara e cuidadosamente coloque pomada oftálmica nos olhos do animal.</li>
		<li>Coloque o cone de nariz em uma almofada quente pré-aquecido quando gás continua a fluir.</li>
		<li>Altere o fluxo de oxigênio de 100-200 mL/min, com 2-3% de isoflurano. Se o animal começa a se mover, gentlyrestrain o animal com o cone de nariz em até totalmente anestesiados novamente.</li>
		<li>Monitorar a respiração e a resposta à estimulação durante o procedimento e ajustar a porcentagem de isoflurano (2-5%) conforme necessário. Nível de anesthetization animal é monitorado pela falta de reflexo de pitada de dedo do pé antes que a cirurgia é realizada.</li>
		<li>Injete remédios contra a dor (buprenorfina, 1 µ g/g de peso corporal) intraperitonealmente longe do local da incisão.</li>
		<li>Aplique loção de remoção de cabelo sobre o abdome, usando um cotonete limpo. Deixe-o sentar-se loção para 3-5 min no mouse, em seguida retire os cabelos com compressas de gaze e algodão. Repita este passo até que todo o cabelo foi removido do abdômen do mouse.</li>
		<li>Limpe a pele com álcool 70%, usando cotonetes de algodão e gaze. Aplica uma solução swabsticks ou povidone-iodo para limpar o abdômen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cirurgia de obstrução parcial<ol>
<li>Cubra o local cirúrgico usando papel estéril de 25 x 50 cm com um 2.5 x 2.5 cm de abertura no meio para a área de cirurgia. Prenda a cortina para o animal colocando tiras estéril nos limites da abertura e da pele.</li>
		<li>Faça uma incisão abdominal de ~3.0 cm longitudinalmente usando um bisturi de lâmina n º 15, garantindo que apenas a pele é incisada e evitando o corte da camada de musculoperitoneal neste momento.</li>
		<li>Usando pinças e tesouras cirúrgicas, separe com cuidado a pele da camada de musculoperitoneal sem causar qualquer incisão para a camada de musculoperitoneal. Depois que as camadas foram suficientemente separadas (aproximadamente 1 cm x 4 cm), identificar o linea alba na camada musculoperitoneal e corte ~ 2 cm ao longo da linea alba para expor a cavidade intraperitoneal usando microfórceps e a tesoura.</li>
		<li>Cuidadosamente, localizar e identificar o ceco. Lenta e suavemente remova o ceco da cavidade intraperitoneal com microfórceps, trazendo o cólon proximal e íleo com o ceco lá fora para a cortina estéril. Imediatamente, umedeça o tecido intestinal com gaze embebido salina estéril 0,9% e manter o tecido exposto umedecido em todos os momentos, enquanto eles estão fora da cavidade abdominal.</li>
		<li>Localizar e identificar o mesentério entre o íleo e o cólon proximal. Fazer uma incisão (~ 1 cm) paralelo a e logo abaixo, o íleo, no mesentério e evitar cortar qualquer vasculatura.</li>
		<li>Pegue um anel de silicone autoclavado (6 mm de comprimento, diâmetro exterior de 4 mm, diâmetro interior de 3,5 mm). Corte longitudinalmente para abrir o tubo e abra o anel com microfórceps.</li>
		<li>Insira uma extremidade do anel aberto através da incisão no tecido mesentério. Devolver o anel que forma um anel completo, trazendo uma extremidade em contato com o outro, com o íleo, rodeado pelo anel.</li>
		<li>Certifique-se de que o anel de silicone rodeia completamente o íleo, feche o anel com sutura e coloque cuidadosamente o intestino volta na cavidade intraperitoneal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Encerramento de cirurgia<ol>
<li>Realizar uma simples sutura contínua sobre a camada de musculoperitoneal ao longo da linea alba para fechar o musculoperitoneal ferida com uma sutura absorvível. Após a sutura é completa, limpa qualquer sangramento com solução salina 0,9% embebido gaze.</li>
		<li>Para fechar completamente a ferida, com uma sutura de nylon separados, realize uma sutura contínua simples na pele.</li>
		<li>Depois ambas as suturas foram concluídas, limpe a ferida com novo swabstick ou iodo-povidona.</li>
		<li>Intraperitonealmente injete antibióticos (gentamicina, 150 μL por rato com base em 20-30 g de massa corporal).</li>
		<li>Após a conclusão do procedimento, desligue o vaporizador de isoflurano e permitir que o animal de respirar só flui oxigênio até começar ganhando consciência.</li>
		<li>Uma vez que o animal está acordado, coloca o animal em uma área de recuperação separada com apoio térmico até totalmente recuperado.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. pós-operação observação.
<ol><li>Após a conclusão da cirurgia, mova os animais para uma incubadora em uma sala de recuperação onde a temperatura e umidade são regulamentadas. Monitore os animais no pós-operatório a cada 15 minutos para a primeira hora depois a cada 30 min para a segunda hora, enquanto os animais estão na incubadora.</li>
	<li>Tão logo a observação prescrita for concluída, mova os animais para sua própria gaiola individual e monitorá-los diariamente para indicações clínicas de dor18e para garantir que a ferida cirúrgica está curando corretamente sem quaisquer sinais de complicações ( deiscência) presente.</li>
</ol>

<ol>
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Os autores não têm nada para divulgar.

Temos demonstrado que ratos recebendo a cirurgia intestinal do PO consistentemente e reproducibly desenvolveram hipertrofia intestinal de músculo liso, que imita a obstrução intestinal humana. Cirurgias de obstrução intestinal foram desenvolvidas para animais diferentes, incluindo ratos7ratos10, cobaias,11,13, de12 e gatos cachorro. O modelo do rato de obstrução intestinal tem tempo, custo, tamanho e fenotípicas vantagens sobre outros modelos animais maiores. O desenvolvimento da hipertrofia em camundongos ou ratos leva apenas 10-14 dias10, em comparação com 2-4 semanas em cobaias, cães e gatos11,12,13. O custo para compra e manutenção de ratos também é uma tremenda vantagem financeira quando comparado a outros modelos. Além disso, os ratos são pequeno e fácil de manusear para a cirurgia de PO. Mais importante ainda, ratos recebendo cirurgia PO progressivamente e extensivamente desenvolvem hipertrofia no intestino delgado, enquanto outros animais maiores desenvolvem crescimento menos extenso.
Existem vários fatores-chave a considerar ao tentar produzir hipertrofia confiável através de cirurgia intestinal do PO. Diversos grupos de pesquisa têm usado anéis de vários tamanhos e colocou um anel em vários locais ao longo do intestino para criar obstruções parciais7,9,10,11,12, 13,14. No entanto, um anel de silicone de tamanho ideal deve ser usado para os ratos como um anel maior cria pouca ou nenhuma obstrução no íleo onde hipertrofia apenas parcialmente, ou nunca, desenvolvido (Figura 4A). Por outro lado, quando um anel era muito pequeno, que ele criado perto de bloqueio completo do íleo que induzido por isquemia intestinal e/ou danificar a mucosa causando sepse, levando à morte precoce dentro de uma semana (Figura 4B). Usamos um anel de silicone de um tamanho específico (6 mm de comprimento, diâmetro exterior de 4 mm, diâmetro interior de 3,5 mm) em ratos um mês de idade (Tabela de materiais). Diferentes tamanhos dos anéis devem ser testados e utilizados para ratos de diferentes tamanhos para criar o bloqueio ideal no íleo. Outro fator fundamental é a localização do anel no intestino. O íleo, próximo a válvula ileocecal, é o melhor lugar para colocar o anel para produzir robustamente obstruções parciais. Outras regiões, como o jejuno ou regiões diferentes do íleo longe da válvula ileocecal, tem tido um anel semelhante colocado neles para induzir hipertrofia7. No entanto, devido a superfície serosas do intestino sendo altamente lubrificada pelo líquido peritoneal, um anel colocado nessas partes do intestino facilmente se move por causa da força contrátil do intestino, empurrando o material fecal. Como o anel é empurrado para baixo do comprimento do intestino, corta artérias mesentéricas inervadas para a mioentérico região do intestino, causando hemorragia. Quando um anel é inserido no final do íleo ao lado da válvula ileocecal, é fisicamente impedido de mover-se mais pela natureza volumosa do ceco. O ceco pode ser facilmente localizado e retirado do abdômen na cirurgia, a fim de localizar a região de válvula ileocecal como o ceco se conecta para o íleo e o cólon proximal. O íleo e o cólon ligado no ceco parecem bastante semelhantes e um anel acidentalmente pode ser colocado sobre o cólon proximal ao invés de íleo. Quando um anel foi extraviado no cólon proximal, como também visto no jejuno, o anel foi empurrado para baixo e danificado artérias mesentéricas, causando hemorragias extensas (Figura 4). Para evitar este erro, o íleo deve sempre ser adequadamente localizado e identificado antes que o anel é colocado no lugar. O íleo é executado no meio do ceco, enquanto o cólon é executado em um lado da bolsa ceco.
Este protocolo de cirurgia PO é considerado como uma cirurgia de grande porte para os ratos. Todos os instrumentos cirúrgicos e materiais devem ser esterilizados antes da utilização, e a cirurgia deve ser realizada no ambiente limpo de uma sala de cirurgia dedicado a fim de minimizar a contaminação, que pode levar à infecção e inflamação em ratos. Além disso, uma medicação para a dor deve ser fornecida em ratos após a cirurgia. Optamos por usar uma versão de liberação lenta de buprenorfina, que é eficaz até 7-8 h22. Além disso, após a cirurgia, os ratos têm dificuldade em mastigar e engolir alimentos sólidos. Para cima para pós-cirurgia de 5 dias, os ratos devem ser fornecidos com comida amolecida (dieta sólida com um pouco de água adicionada para amolecer o alimento) e mudou a dieta sólida normal após 5 dias.
Nossa cirurgia intestinal do PO fornece um modelo de hipertrofia na vivo para obstrução intestinal na qual SMC, ICC, e células PDGFRα+ são anormalmente remodeladas. Este modelo de PO é também ideal para compreensão como neurônios entéricos são modificados por PO e como as principais atividades motoras são afetadas no intestino pequeno e grande23. Estas células podem ser dinamicamente remodeladas em condições patológicas, bem como sob condições cultivadas15,16. Observou-se que estas células em ratos SO se comportou um pouco diferente do que ratos normais sem operação (Figura 2 e Figura 3). A maioria dos obstrução intestinal em humanos ocorre por aderências abdominais desenvolvidas após a cirurgia, levando à hipertrofia muscular liso3,4,5,de21. Após a cirurgia de SO, nós também achamos que SMC, ICC e PDGFRα+ células foram ligeiramente hipertróficas no intestino delgado, comparado a não (Figura 3), sugerir que a cirurgia em si pode induzir a hipertrofia do músculo de liso intestinal. Se este for o caso, por cirurgia não é um completo controlo negativo para cirurgia de PO. Não, bem como SO deve ser usado como uma comparação com intestino PO.
Em resumo, encontramos um custo/hora, eficaz, confiável e repetível PO cirúrgico protocolo nos ratos que gera robustamente obstruções intestinais. Durante o desenvolvimento da obstrução, SMC, ICC, PDGFRα+, bem como de células neuronais são dinamicamente remodeladas dentro de várias camadas de tecido e localidades. Este modelo obstrução na vivo oferece novos insights sobre nosso conhecimento de alterações fenotípicas como ocorrem em obstrução intestino a nível celular.

Obstruções intestinais são um bloqueio parcial ou total no intestino pequeno ou grande que impede o alimento digerido, fluidos e gases movendo-se através do intestino1. Devido a obstrução, a obstrução induz as paredes intestinais para tornar-se espessada, estreitamento do lúmen2. Obstrução intestinal pode ocorrer como resultado de cirurgias abdominais ou pélvicas que causam a formação de tecido de aderência abdominal ou de distúrbios GI, tais como doenças inflamatórias intestinais (doença de Crohn), diverticulite, hérnias, Volvo, estenose, intussuscepção, constipação, fecaloma, pseudo-obstrução, cancros e tumores de4,3,5. Obstruções intestinais, nestes casos, muitas vezes, levam para a hipertrofia da túnica muscular do intestino6.
PO do lúmen induz a distensão intestinal e aumenta a espessura da camada de músculo liso ao redor da obstrução em resposta à necessidade de continuar o peristaltismo funcional7,8,9,10, 11,12,13. Modelos animais de PO intestinal foram desenvolvidos para estudar a hipertrofia do músculo liso em ratos7ratos10, cobaias11, cães12e gatos13 que consistentemente desenvolver hipertrofia similar dentro o camadas de músculo intestinal.
Um modelo do rato do PO intestinal é a maneira mais custo-eficaz de gerar e estudar obstruções intestinais na vivo. Obstruções de intestino delgado são realizadas em camundongos, usando um anel de silicone cirurgicamente colocado em torno do íleo. Os ratos PO mostraram um aumento inicial do número de células (hiperplasia) e um aumento na espessura da camada muscular (hipertrofia) após PO cirurgia8,15. SMC são o principais plástico as células que estão crescendo dentro de camadas de músculo liso em resposta a condições hipertrófica14, mas outras células tais como ICC e PDGFRα+ células que estão intimamente associados com o SMC, são também repovoada. Informamos anteriormente que os ratos PO desenvolveram hipertrofia no intestino delgado, no qual SMC são condrossarcoma em células PDGFRα+ que são altamente proliferativas7,15,16. Por outro lado, ICC são degenerou e perdeu dentro das camadas hipertrofiado músculo liso durante o desenvolvimento do obsruction intestinal7. Outro grande benefício do modelo PO é sua capacidade de induzir alterações no sistema nervoso entérico e propagando padrões motor neurogênicos. A grande propagação padrão motor neurogênica no intestino do rato é o migração motor complexo (MMC), que é neurogênica e não requer ICC ou ondas lentas elétrica17. O modelo de PO pode fornecer insights claras sobre como MMCs e nervos entéricos são remodelados pela obstrução parcial.
Aqui, propomos um protocolo murino para intestinal cirurgia de PO, usando um anel de silicone. Ratos recebendo cirurgia PO confiantemente produzem hipertrofia na túnica muscular do intestino delgado. Dentro hipertrófica muscular, SMC, ICC, PDGFRα+e células neuronais são drasticamente remodeladas.

<table><tbody><tr><td>Surgical drape</td><td>Medical and veterinary supplies</td><td>SMS40</td><td>40&amp;rdquo;X100 yards</td></tr><tr><td>Underpad, econ, pro plus</td><td>Medical and veterinary supplies</td><td>MSC281224</td><td>17x24&amp;rdquo;</td></tr><tr><td>Iris scissors</td><td>Braintree scientific, Inc</td><td>SC-i-130</td><td></td></tr><tr><td>Iris scissors</td><td>Vantage</td><td>V95-304</td><td></td></tr><tr><td>Dumont electronic &amp;amp; jeweler tweezers</td><td>Dumont</td><td>98-180-3</td><td></td></tr><tr><td>Braided absorbable suture</td><td>Covidien polysorb</td><td>SL-5687G</td><td>5-0, polyglactin</td></tr><tr><td>Nylon non-absorbable mono filament</td><td>AD surgical</td><td>S-N618R13</td><td>6-0, nylon</td></tr><tr><td>Surgical blade</td><td>Dynarex</td><td></td><td>No.15</td></tr><tr><td>Needle holder</td><td>Jacobson microvascular</td><td>36-1342TC</td><td>8.5 inch</td></tr><tr><td>Scalpel handle</td><td>Flinn scientific</td><td>AB1049</td><td></td></tr><tr><td>Microsurgical scissor</td><td>WPI</td><td>503305</td><td></td></tr><tr><td>Petrolatum ophthalmic ointment</td><td>Puralube VET</td><td></td><td>3.5 g</td></tr><tr><td>Fluriso (isoflurane)</td><td>Vetone</td><td>V1 502017</td><td>250 ml</td></tr><tr><td>Steri-strip reinforced skin closure</td><td>3M</td><td>R1547</td><td></td></tr><tr><td>Surgical gloves</td><td>Medline</td><td>MSG2270</td><td></td></tr><tr><td>Ear loop face mask</td><td>The safety zone</td><td>RS700</td><td></td></tr><tr><td>Avant gauze non-woven sponges</td><td>Caring</td><td>PRM25444</td><td></td></tr><tr><td>Surgical cup</td><td>Admiral&amp;nbsp; craft OYC-2</td><td>725-A42</td><td>2.5 oz</td></tr><tr><td>Swabstick</td><td>ChloraPrep</td><td>260103</td><td>2% w/v Chlorhexidine&amp;nbsp; Gluconate (CHG) and 70% v/v Isopropyl Alcohol (IPA)</td></tr><tr><td>Cotton tipped applicator</td><td>Puritan</td><td>806-WC</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Zoo pharm</td><td>BZ8069317</td><td>1 mg/ml</td></tr><tr><td>Gentamycin sulfate</td><td>Vetone</td><td>G-6336-04</td><td>100 mg/ml</td></tr><tr><td>Fast acting gel cream remover</td><td>Veet</td><td>8111002</td><td></td></tr><tr><td>Syringe</td><td>AHS</td><td>AH01T2516</td><td>1 ml with needle</td></tr><tr><td>Silicon ring</td><td>VWR</td><td>60985-720</td><td>6 mm in length, 4 mm exterior diameter, 3.5 mm interior diameter</td></tr><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>The Jackson Laboratory</td><td></td><td>4-6 weeks old</td></tr></tbody></table>

a mouse model of intestinal partial obstruction

Obstruções intestinais, que impedem ou bloqueiam o movimento peristáltico, podem ser causadas por aderências abdominais e mais gastrointestinais (GI) doenças incluindo tumorosa crescimentos. No entanto, o celular que remodela os mecanismos envolvidos na e obstrução intestinal causada por, é mal compreendidas. Foram desenvolvidos vários modelos animais de obstruções intestinais, mas o modelo do mouse é o custo/tempo mais eficaz. Usa o modelo de rato da implantação cirúrgica de uma obstrução intestinal parcial (PO) que tem uma alta taxa de mortalidade, se não é realizada corretamente. Além disso, ratos recebendo cirurgia PO não conseguem desenvolver hipertrofia se um bloqueio adequado não é usado ou não está devidamente colocado. Aqui, descrevemos um protocolo detalhado para cirurgia de PO que produz confiáveis e reprodutíveis obstruções intestinais, com uma taxa de mortalidade muito baixa. Este protocolo utiliza um anel de silicone colocado cirurgicamente que rodeia o íleo que bloqueia parcialmente o movimento digestivo no intestino delgado. O bloqueio parcial faz o intestino se tornam dilatadas devido a parada do movimento digestivo. A dilatação do intestino induz a hipertrofia do músculo liso no lado oral do anel que desenvolve progressivamente mais de 2 semanas até que causa morte. O modelo de mouse PO cirúrgico oferece um modelo in vivo de tecido intestinal hipertrófica útil para estudar as alterações patológicas das células intestinais, incluindo células musculares lisas (SMC), células intersticiais de Cajal (ICC), PDGFRα+e neuronal células durante o desenvolvimento de obstrução intestinal.

Obstrução parcial (PO) foi cirurgicamente induzida em ratos um mês de idade, colocando um anel de silicone ao redor do íleo perto do esfíncter ileocecal. Este anel criado um bloqueio parcial no íleo. Operações Sham (então) também foram realizadas sem um anel na idade/sexo correspondem ratos e estes ratos não apresentaram qualquer sintomas semelhantes aos encontrados em camundongos PO. Os ratos rapidamente recuperaram da cirurgia PO dentro de algumas horas. Eles não mostraram mudanças comportamentais óbvias ou fraqueza na primeira semana, mas depois da primeira semana, eles progressivamente começaram a mostrar sinais de PO: um abdômen distendido e a produção de pelotas de menos e menor fecais. Ratos de PO foram sacrificados em 8 13 dias post-PO cirurgia e junto com os ratos controle de SO. O intestino delgado foi parcialmente preenchido e distendido na cirurgia de 8 dias borne-PO e totalmente preenchido e distendido na cirurgia de post-PO de 13 dias, comparado com o controle-ratos (figura 1A). Formação de sedimento fecal no cólon de 8 e 13 dias post-PO cirurgia os ratos foi reduzida em comparação com ratos SO do controle (figura 1B). Tecido ileal que foi apenas rio acima do anel foi dissecado e o músculo liso foi analisado pela hematoxilina & eosina (H & E) coloração. A camada de músculo liso foi hipertrofiada em cirurgia de 8 dias borne-PO e ainda muito hipertrofiada em cirurgia de post-PO de 13 dias (Figura 2). Observamos também alterações nas células neuronais dentro da túnica muscular em camundongos PO através da utilização de imunoquímica, ICC, PDGFRα+e SMC. Cada célula foi rotulada com marcadores específicos do tipo de célula: MYH11 (SMC), KIT (ICC), PDGFRA (células PDGFRα+ ) e PGP9.5 (células neuronais). SMC são formadas por três camadas de tecido: músculo longitudinal (LM), músculo circular (CM) e a muscularis mucosa (MM) no íleo. SMC foram progressivamente crescendo a taxas rápidas em todas as três camadas para 8 e 13 dias post-PO a cirurgia (Figura 3). Quanto ao CIEC, suas subpopulações localizam-se no plexo profundo muscular (DMP), região mioentérico (MY) e região subserosal (SS). No entanto, ICC-DMP, ICC-MY e ICC-SS foram degenerou dentro das camadas intra/intermuscular (Figura 3). Semelhante ao subpopulações de ICC, subpopulações de células PDGFRα+ (PαC) estão localizadas no DMP, meu e SS. Em camundongos PO, DMP-PαC, meu PαC e PαC-SS foram remodelados dinamicamente dentro das camadas intermuscular dos ratos PO: eles estavam crescendo em cirurgia de 8 dias borne-PO e degenerou em cirurgia de post-PO de 13 dias (Figura 3). Finalmente, Plexo mioentérico (MP), plexo submucosa (SP), neurônios subserosal (SS) e neurônios entéricos (REM) perderam significativamente nas regiões inter/intramuscular de ratos de PO na cirurgia de post-PO dias 8 e 13 (Figura 3).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57381/57381fig1v2.jpg"> Figura 1. Obstrução intestinal parcial cirurgicamente induzido em um modelo do rato. PO foi induzido pela cirurgia de PO. Ratos de um mês de idade foram anestesiados, seu abdômen foi aberto por uma incisão, um anel de silicone foi colocado em torno do íleo e a abertura foi fechada por sutura. Ratos que se submeteram à cirurgia foram autorizados a recuperar por 8 ou 13 dias. Idade e sexo correspondido para que ratos foram operados da mesma forma como ratos PO só que não havia nenhuma colocação de um anel. (A) imagens do trato GI em ratos submetidos a PO de efectivação ou SO cirurgia. Imagens são de ratos em 8 e 13 dias depois da cirurgia (B) digestivo dissecado de ratos em r. intestino contra a corrente do anel foi distendido na cirurgia de post-PO dias 8 e 13 e pelotas fecais no cólon foram também menores em ambos os 8 e 13 dias post-PO cirurgia como comparado aos ratos de 13 dias post-SO cirurgia devido o anel de silicone parcialmente obstrutiva. Barras de escala são 0,5 cm. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/57381/57381fig1v2large.jpg" target="_blank">clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57381/57381fig2.jpg"> Figura 2. Camada de músculo liso mudou no modelo cirúrgico rato. Representante H & E mancha de ileais seções transversais do PO intestinal, então e ratos sem operação (n). Músculo liso (SM) e mucosa (Mu) camadas são mais grossas em camundongos PO na cirurgia de post-PO dias 8 e 13 do que aqueles em SO e não ratos. Barras de escala são 50 µm. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/57381/57381fig2large.jpg" target="_blank">clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57381/57381fig3.jpg"> Figura 3. Dinâmica celular remodelação na hipertrofia do músculo liso induzida por obstrução intestinal parcial. Representante laser confocal Digitalizando imagens de hipertróficas ileais seções transversais, de PO, então e não ratos. Immunohistochemically KIT (ICC), de coloração (vermelho) de MYH11 (SMC), com anticorpos PDGFRA (células PDGFRα+ ) ou PGP9.5 (NC; células neuronais), co manchado com DAPI (azul). SMC na muscularis mucosa (MM), músculo circular (CM) e camadas musculares longitudinais (LM), assim como as células PDGFRα+ no plexo profundo muscular (DMP), região mioentérico (MY) e região subserosal (SS) estavam crescendo em íleo hipertrófica em 8 e 13 dias post-PO cirurgia ao ICC em DMP, meu e SS, mioentérico plexo (MP), plexo submucosa (SP), subserosal NC (SS) e neurônios entéricos (REM) foram degenerou. Barras de escala são 50 µm. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/57381/57381fig3large.jpg" target="_blank">clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57381/57381fig4.jpg"> Figura 4. Resultados de anéis de silicone que são demasiado grandes, demasiado pequenos ou extraviado no cólon. (A) não hipertrofia do músculo liso que se desenvolve no íleo se o anel é grande demais para causar obstrução. O anel feito pouca ou nenhuma obstrução do íleo. (B) isquemia Intestinal se desenvolve no íleo se o anel é muito pequeno. O anel feito um bloqueio quase completo do íleo, que pode danificar o tecido e levar a morte precoce antes de que desenvolve hipertrofia. (C) hipertrofia do músculo liso desenvolvido no cólon devido a um anel equivocado. O anel no cólon foi movido para baixo pelo conteúdo lumenal (fezes), que danificou a vasculatura do mesentério e causou a hemorragia maciça no cólon. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/57381/57381fig4large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

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A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Obstruções intestinais são um bloqueio parcial ou total do intestino que pode causar dor abdominal, náuseas, vômitos e impedindo a passagem das fezes. Este procedimento para criar obsructions parcial intestinal em camundongos é confiável em estudar os mecanismos subjacentes do crescimento celular patológica e morte no intestino.

Um modelo do rato de obstrução Intestinal parcial

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

a-mouse-model-of-intestinal-partial-obstruction

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Biology

21.0K visualizações.  University of Nevada, Reno School of Medicine. Obstruções intestinais são um bloqueio parcial ou total do intestino que pode causar dor abdominal, náuseas, vômitos e impedindo a passagem das fezes. Este procedimento para criar obsructions parcial intestinal em camundongos é confiável em estudar os mecanismos subjacentes do crescimento celular patológica e morte no intestino.

Vídeo: A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the complex cellular and molecular of intestinal pathology. Although the tunica mucosa is often the organ of interest in many inflammatory diseases, recent works demonstrated that the muscularis externa (ME) is also a highly immunocompetent organ that harbours a dense network of resident immunocytes.1,2 These works were performed within the standardized model of intestinal manipulation (IM) that leads to inflammation of the bowel wall, mainly limited to the ME. Clinically this inflammation leads to prolonged intestinal dysmotility, known as postoperative ileus (POI) which is a frequent and unavoidable complication after abdominal surgery.3 The inflammation is characterized by liberation of proinflammatory mediators such as IL-64 or IL-1&beta; or inhibitory neurotransmitters like nitric oxide (NO).5 Subsequently, tremendous numbers of immunocytes extravasate into the ME, dominated by polymorphonuclear neutrophils (PMN) and monocytes and finally maintain POI.2 Lasting for days, this intestinal paralysis leads to an increased risk of aspiration, bacterial translocation and infectious complications up to sepsis and multi organ failure and causes a high economic burden.6
In this manuscript we demonstrate the standardized model of IM and in vivo assessment of gastrointestinal transit (GIT) and colonic transit. Furthermore we demonstrate a method for separation of the ME from the tunica mucosa followed by immunological analysis, which is crucial to distinguish between the inflammatory responses in these both highly immunoactive bowel wall compartments. All analyses are easily transferable to any other research models, affecting gastrointestinal function.

Postoperative ileus (POI) is a complication of abdominal surgery leading to increased morbidity and a prolonged hospital stay. Because prophylactic or therapeutic strategies are lacking intensified research is necessary. Therefore we established a standardized and feasible mouse model to investigate the pathophysiology of POI and to study potential therapeutic options.

Avaliação Funcional da motilidade intestinal e inflamação da parede do intestino em Roedores: Análises em um modelo padronizado de Manipulação Intestinal

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

Medicina

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

Murino colostomia Distal, um novo modelo de colite de diversão em camundongos C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water while preventing passage of luminal bacteria and exogenous substances. A breach of this layer results in increased permeability to luminal contents and recruitment of immune cells, both of which are hallmarks of pathologic states in the gut including inflammatory bowel disease (IBD). 
Mechanisms regulating epithelial barrier function and transepithelial migration (TEpM) of polymorphonuclear neutrophils (PMN) are incompletely understood due to the lack of experimental in vivo methods allowing quantitative analyses. Here, we describe a robust murine experimental model that employs an exteriorized intestinal segment of either ileum or proximal colon. The exteriorized intestinal loop (iLoop) is fully vascularized and offers physiological advantages over ex vivo chamber-based approaches commonly used to study permeability and PMN migration across epithelial cell monolayers.
We demonstrate two applications of this model in detail: (1) quantitative measurement of intestinal permeability through detection of fluorescence-labeled dextrans in serum after intraluminal injection, (2) quantitative assessment of migrated PMN across the intestinal epithelium into the gut lumen after intraluminal introduction of chemoattractants. We demonstrate feasibility of this model and provide results utilizing the iLoop in mice lacking the epithelial tight junction-associated protein JAM-A compared to controls. JAM-A has been shown to regulate epithelial barrier function as well as PMN TEpM during inflammatory responses. Our results using the iLoop confirm previous studies and highlight the importance of JAM-A in regulation of intestinal permeability and PMN TEpM in vivo during homeostasis and disease. 
The iLoop model provides a highly standardized method for reproducible in vivo studies of intestinal homeostasis and inflammation and will significantly enhance understanding of intestinal barrier function and mucosal inflammation in diseases such as IBD.

Dysregulated intestinal epithelial barrier function and immune responses are hallmarks of inflammatory bowel disease that remain poorly investigated due to a lack of physiological models. Here, we describe a mouse intestinal loop model that employs a well-vascularized and exteriorized bowel segment to study mucosal permeability and leukocyte recruitment in vivo.

Avaliação Funcional da Permeabilidade Intestinal e Migração Transepitelial de Neutrófilo em Camundongos usando um Modelo de Laço Intestinal Padronizado

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water ...

Imunologia e Infecção

Creation of Colonic Anastomosis in Mice

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of colonic surgeries and can occur in up to 26% of surgical anastomoses, with mortality being up to 39% for patients with such a leak. Currently, there remains a paucity of data detailing the cellular mechanisms of anastomotic healing. Devising preventative strategies and treatment modalities for anastomotic leak could be greatly potentiated by a better understanding of appropriate anastomotic healing.
A murine model is ideal as previous studies have shown that the murine anastomosis is the most clinically similar to the human case as compared with other animal models. We offer an easily reproducible murine model of colonic anastomosis in mice that will allow for further illustration of anastomotic healing.

Anastomotic leak or breakdown after surgery is a major cause of postoperative morbidity and mortality. Our surgery for creating a colonic anastomosis is a reliable and reproducible method for studying the healing mechanisms of anastomoses.

Criação de uma anastomose colônica em ratos

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of ...

<meta charset="utf8"></head><body>Modelo Murino para Estudo do Íleo Secundário Pós-Operatório por Manipulação Intestinal

Postoperative Ileus Murine Model

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI is a consequence of mechanical damage during surgery, resulting in disruption of motility in the gastrointestinal tract. The mechanisms of POI are related to aberrant neuronal sensitivity, impaired epithelial barrier function, and increased local inflammation. However, the details remain enigmatic. Therefore, experimental murine models are crucial for elucidating the pathophysiology and mechanism of POI injury and for the development of novel therapies.
Here, we introduce a murine model of POI generated via intestinal manipulation (IM) that is similar to clinical surgery; this is achieved by mechanical damage to the small intestine by massaging the abdomen 1-3 times with a cotton swab. IM delayed gastrointestinal transit 24 h after surgery, as assessed by FITC-dextran gavage and fluorescence detection of the segmental digestive tract. Moreover, tissue swelling of the submucosa and immune cell infiltration were investigated by hematoxylin and eosin staining and flow cytometry. Proper pressure of the IM and a hyperemic effect on the intestine are critical for the procedure. This murine model of POI can be utilized to study the mechanisms of intestinal damage and recovery after abdominal surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>Modelo Murino de Íleo Pós-Operatório

We describe a murine model of postoperative ileus generated via intestinal manipulation. Gastrointestinal transit function, pathologic changes, and immune cell activation were assessed 24 h after surgery.

Modelo Murino de Íleo Pós-Operatório

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI ...

Single-Anastomosis Duodeno-Ileal Bypass with Sleeve Gastrectomy Model in Mice

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes mellitus, dyslipidemia, non-alcoholic steatohepatitis, cardiovascular events, and cancers) through restrictive and malabsorptive mechanisms. Understanding the mechanisms by which these procedures allow such improvements often require their transposition into animals, especially in mice, because of the ease of generating genetically modified animals. Recently, the single-anastomosis duodeno-ileal bypass with sleeve gastrectomy (SADI-S) has emerged as a procedure that uses both restrictive and malabsorptive effects, which is being used as an alternative to gastric bypass in case of major obesity. Thus far, this procedure has been associated with strong metabolic improvements, which has led to a marked increase in its use in daily clinical practice. However, the mechanisms underlying these metabolic effects have been poorly studied as a result of a lack of animal models. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice, with a special focus on perioperative management. The description and use of this new rodent model will be helpful for the scientific community to better understand the molecular, metabolic, and structural changes induced by the SADI-S and to better define the surgical indications for clinical practice.

Single-anastomosis duodeno-ileal bypass (SADI-S) is an emerging bariatric procedure with important metabolic effects. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice.

Modelo de Bypass Duodeno-Ileal de Anastomose Única com Gastrectomia Vertical em Camundongos

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes ...

Partial Bile Duct Ligation in the Mouse: A Controlled Model of Localized Obstructive Cholestasis

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile duct proliferation. However, long-term experiments can lead to increased morbidity and mortality. In select mouse strains with underlying liver disease, meaningful comparisons can be made even with ligation of a single lobe of the liver, which can reduce animal losses and expenses. Here, we describe partial bile duct ligation (pBDL) in the mouse, in which only the left hepatic bile duct is ligated, causing biliary obstruction in the left lobe but not the remaining lobes. With careful microsurgical technique, pBDL experiments can be cost-effective, since the unligated lobe serves as an internal control to the ligated lobes, when subjected to the same conditions in the same animal. Unlike cBDL, a separate sham-operated control group is not necessary. pBDL is highly useful to directly compare localized versus systemic effects of cholestasis and other retained bile components. pBDL can also be repurposed as a novel method to investigate mechanisms related to medications and cell migration.

Here, we present partial bile duct ligation as a surgical model of liver injury and regeneration in rodents.

Ligadura do colédoco parcial no Mouse: um modelo controlado da colestase obstrutiva localizada

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile ...

Biologia

Rodent Model of Intestinal Ischemia-Reperfusion Injury via Occlusion of the Superior Mesenteric Artery

Intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) is associated with a myriad of conditions in both veterinary and human medicine. Intestinal IRI conditions, such as gastric dilatation volvulus (GDV), mesenteric torsion, and colic, are observed in animals such as dogs and horses. An initial interruption of blood flow causes tissues to become ischemic. Although necessary to salvage viable tissue, subsequent reperfusion can induce further injury. The main mechanism responsible for IRI is free radical formation upon reperfusion and reintroduction of oxygen into damaged tissue, but there are many other components involved. The resulting local and systemic effects often impart a poor prognosis. 
Intestinal IRI has been the subject of extensive research over the past 50 years. An in vivo rodent model in which the base of the superior mesenteric artery (SMA) is temporarily ligated is currently the most common method used to study intestinal IRI. Here, we describe a model of intestinal IRI utilizing isoflurane anesthesia in 21% O2 medical air that yields reproducible injury, as demonstrated by consistent histopathology of the small intestines. Tissue injury was also assessed in the colon, liver, and kidneys.

We describe how to generate a widely used surgical model of intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) in rodents. The procedure involves occlusion of the superior mesenteric artery followed by the restoration of blood flow. This model is useful for studies investigating occlusive causes of intestinal IRI in both veterinary and human medicine.

Modelo de lesão de isquemia-reperfusão intestinal por roedores via oclusão da artéria mesentérica superior

Intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) is associated with a myriad of conditions in both veterinary and human medicine. Intestinal IRI conditions, ...

Um modelo do rato de obstrução Intestinal parcial

Resumo

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Avaliação Funcional da Permeabilidade Intestinal e Migração Transepitelial de Neutrófilo em Camundongos usando um Modelo de Laço Intestinal Padronizado

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Modelo Murino de Íleo Pós-Operatório

Modelo Murino de Íleo Pós-Operatório

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Ligadura do colédoco parcial no Mouse: um modelo controlado da colestase obstrutiva localizada

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