Name: a mouse model of intestinal partial obstruction
Uploaded: 2018-03-05T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
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저자 벤자민 J Weigler, D.V.M., 박사에 게 감사 하 고 월트 맨 더 빌, 그들의 우수한 동물 서비스에 대 한 D.V.M. (동물 자원 및 캠퍼스 참석 수 의사, 네바다 대학 리노)에 그들의 변호사 뿐만 아니라 쥐 제공 수술 절차입니다.

다음 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 네바다 대학 리노 (UNR) 동물 자원에 의해 승인 되었습니다 고 연구 동물의 사용에 관한 모든 기관 윤리 지침을 준수.
1입니다. 동물입니다.
<ol><li>성숙 (4-6 주 이전) C57BL/6 쥐 20-30 g. 집 UNR 동물 자원에서 중앙된 동물 시설에 실험실 쥐의 식민지 사이 무게를 얻을.</li>
</ol>2. 부분 방해 수술
참고: 수술 수술에 전념 한 방에 수행 됩니다. 모든 수술 기구는 수술 전에 압력가 마로 소독. 수술 실에서 모든 직원에 의해 불 임 수술 가운과 장갑을 항상 착용 되어야 한다.
<ol><li>수술 마우스에 대 한 준비<ol>
<li>산소의 공급을 보장 하기 위해 마 취 전달 시스템을 확인 하 고 isoflurane 절차에 대 한 적절 한입니다. 공급 산소를 켭니다. 가스 유량 계 및 유도 챔버에서 동물 500-1000 mL/분 장소에 그것을 조정 켜고 상단 인감.</li>
		<li>5%, isoflurane 기화 기를 켜고 휴식 될 때까지 동물을 모니터링. 코 콘 마 취 전달 시스템을 전환.</li>
		<li>산소, 어떤 잔류 가스의 유도 챔버를 플러시 다음 해제 유도 챔버 라인 코 콘 라인을 유지 하면서 오픈.</li>
		<li>상공에서 동물을 제거 하 고 신중 하 게 동물의 눈에 안과 연 고를 배치.</li>
		<li>가스 흐름을 계속 하는 때 데워 따뜻한 패드에 원뿔을 놓습니다.</li>
		<li>100-200 mL/min, 2-3 %isoflurane 산소 흐름을 변경 합니다. 동물 이동 하기 시작, gentlyrestrain까지에 코 콘 동물 완전히 취 다시.</li>
		<li>호흡 및 절차 동안 자극에 응답을 모니터링 하 고 필요에 따라 isoflurane (2-5%)의 비율을 조정. 동물 anesthetization 수준의 수술을 수행 하기 전에 발가락 핀치 반사의 부족에 의해 모니터링 됩니다.</li>
		<li>Intraperitoneally 절 개 사이트에서 통증 의학 (buprenorphine, 몸 무게의 1 µ g/g)을 주사.</li>
		<li>깨끗 한 면봉을 사용 하 여 복 부에 머리 제거 로션을 적용 합니다. 로션 앉아 보자 마우스, 3-5 분 후 거 즈 및 면 면봉을 사용 하 여 제거. 모든 머리는 마우스의 복에서 제거 되었습니다 때까지이 단계를 반복 합니다.</li>
		<li>70% 에탄올 거 즈 및 면 면봉을 사용 하 여 피부를 청소. 복 부를 청소 하려면 swabsticks 또는 povidone-요오드 솔루션을 적용 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>부분 장애 수술<ol>
<li>2.5 x 2.5 cm 수술 영역에 대 한 중간에 여 25 x 50 cm 메 마른 종이 사용 하 여 외과 사이트 드러 워 진. 피부와의 경계에 메 마른 스트립을 배치 하 여 동물에 드 레이프를 보안 합니다.</li>
		<li>~3.0 cm 복 부 절 개를 15 블레이드 메스, 피부만 베 고이 이번에 musculoperitoneal 레이어로 절단 방지를 사용 하 여 경도 확인 합니다.</li>
		<li>Using 집게와가 위 수술, 신중 하 게 별도 피부 musculoperitoneal 계층에서 발생 musculoperitoneal 레이어에 어떤 절 개 하지 않고. 레이어 충분히 분리 된 (약 1 c m x 4cm), 후 식별는 교육 musculoperitoneal 레이어는 교육 따라 컷된 ~ 2 cm에 알바 알바 노출 마이크로 집게와가 위를 사용 하 여 복 강.</li>
		<li>신중 하 게 찾아서 맹을 식별 합니다. 천천히 그리고 부드럽게 마이크로-집게, 근 결 및 살 균 드 레이프에 밖에 서 맹와 회장와 복 강에서 맹을 제거 합니다. 즉시 0.9% 멸 균 식 염 수 젖은 거 즈로 장 조직 축 축 하 게 하 고 항상 습 하는 동안 그들은 복 부 구멍의 이상으로 노출된 조직 유지.</li>
		<li>찾아서 회장 및 인접 콜론 사이 mesentery를 식별 합니다. 절 개 (~ 1 cm)는 mesentery에서, 그리고 바로 아래, 회장, 병렬 확인 하 고 모든 맥 관 구조를 절단 하지 않도록.</li>
		<li>압력가 실리콘 링 (길이, 4 m m 외부 직경, 3.5 m m 내부 직경 6 m m)를 가져가 라. 경도 잘라 튜브를 열고 마이크로 집게와 반지를 엽니다.</li>
		<li>Mesentery 조직에는 절 개를 통해 열린된 링의 한쪽 끝을 삽입 합니다. 반지에 의해 포위 하는 회장으로 접촉, 다른 한쪽 끝을 가져와서 완성 된 고리 모양 반지를 반환 합니다.</li>
		<li>실리콘 링 완전히는 회장 주변을 확인 하 고 봉합으로 반지를 닫습니다 신중 하 게 내장 복 강에 다시 배치.</li>
	</ol>
</li>
	<li>수술 폐쇄<ol>
<li>간단한 수행 하는 교육을 따라 musculoperitoneal 레이어에 연속 봉합 알바는 musculoperitoneal을 흡수 되기 쉬운 봉합 된 상처. 봉합 후 깨끗 한 거 즈 배어 0.9% 멸 균 식 염 수와 어떤 출혈.</li>
		<li>완전히 가까운 별도 나일론 봉합, 상처, 피부에 간단한 연속 봉합을 수행 합니다.</li>
		<li>두 봉합 완료 된 후 새로운 swabstick 또는 povidone-요오드 상처 청소.</li>
		<li>Intraperitoneally 주사 항생제 (gentamicin, 20-30 g 몸 무게에 따라 마우스 당 150 μ).</li>
		<li>절차의 완료 후 isoflurane 기화 끄고 식을 얻고 시작 때까지 유일한 흐르는 산소 호흡을 동물 허용.</li>
		<li>일단 동물 깨어, 완전히 복구 될 때까지 열 지원으로 별도 복구 영역으로 동물을 놓습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 작업 후 관찰입니다.
<ol><li>수술의 완료 후 이동 동물 복구 방에 인큐베이터 온도 습도 통제 된다. 동물 들이 인큐베이터에서 동안 두 번째 시간에 대 한 첫 번째 시간 30 분에 다음에 대 한 동물 postoperatively 매 15 분을 모니터링 합니다.</li>
	<li>소정의 관찰 완료 되 자 마자 그들의 자신의 개인 감 금 소 동물 이동 및 통증18, 그리고 합병증 (의 어떤 표시 없이 수술 상처가 제대로 치유 되도록 임상 표시에 대 한 매일 그들을 모니터합니다 dehiscence) 현재.</li>
</ol>

<ol>
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저자는 공개 없다.

우리는 지속적으로 그리고 reproducibly 장 포 수술을 받는 쥐 장 평활 근 비 대를 인간의 창 자 방해를 모방 개발 시연. 장 방해 수술 마우스7, 쥐10, 기니 돼지11, 개 고양이12 와13를 포함 하 여 다른 동물에 대 한 개발 되었습니다. 마우스 모델 장 방해의 시간, 비용, 크기, 및 다른 더 큰 동물 모델에 비해 phenotypic 장점이 있다. 쥐 또는 쥐에 비의 개발 10-14 일10, 기니 돼지, 개 및 고양이11,,1213에 2-4 주에 비해 걸립니다. 구매 하 고 마우스는 또한 다른 모델에 비해 엄청난 재정적 우위를 유지에 대 한 비용. 또한, 마우스는 작고 포 수술에 대 한 취급 하기 쉽다. 가장 중요 한 것은, 쥐 점차적으로 광범위 하 게 포 수술 받고 다른 더 큰 동물 개발 덜 광범위 한 성장 하는 동안 작은 창 자에서 비 대를 개발 합니다.
장 포 수술을 통해 안정적인 비를 생성 하려고 할 때 고려해 야 할 몇 가지 주요 요인이 있다. 여러 연구 그룹 다양 한 크기의 링을 사용 하 고 반지를 만드는 부분 장애물7,,910,11,12, 소장을 따라 다양 한 위치에 배치 13,14. 그러나, 가장 적합 한 크기의 실리콘 링 사용 되어야 한다 마우스로 더 큰 반지는 회장에 거의 또는 전혀 막힘 어디 비 부분적 으로만, 또는 적, 개발 (그림 4A). 반대로, 반지는 너무 작고, 회장이 장 허 혈 유발 및 패 혈 증을 일으키는 점 막 손상의 완전 한 막힘 근처 만든 때 이른 죽음 (그림 4B) 1 주일 이내에 선도. 우리는 한 달 된 쥐 (자료 테이블)에 특정 크기 (길이, 4 m m 외부 직경, 3.5 m m 내부 직경 6 m m)의 실리콘 링을 사용합니다. 링의 다른 크기 테스트 하 고는 회장에 최적의 막힘을 만들기 위해 다양 한 크기의 마우스 사용 한다. 또 다른 주요 요소는 소장에 링의 위치입니다. Ileocecal 밸브, 가까운 회장 튼튼하게 부분 장애물을 생성 하기 위하여 반지를 최고의 장소입니다. 공장 등 ileocecal 밸브에서 회장의 다른 지역, 다른 지역의 비슷한 반지 비7을 유도 하기 위하여 그들에 배치 했다. 그러나, 높은 복 막 액체에 의해 윤 활 되 고 내장의 serosal 표면으로 인해 내장의이 부분에 쉽게 배치 하는 반지 배설물 소재를 밀어 내장의 수축 성 힘 때문에 이동 합니다. 로 링 내장의 길이 눌러졌는지, 그것 mesenteric 동맥 출혈을 일으키는 내장의 myenteric 지역으로 innervated 잘라냅니다. 이동에서 막을 물리적으로 반지 ileocecal 밸브 옆 회장의 끝에 삽입 될 때 맹의 부피가 본래 더. 맹 수 수 쉽게 있으며 회장 인접 콜론에 연결 하는 맹으로 ileocecal 밸브 지역 찾을 위해 수술에서 복 부를 꺼내. 회장 및 콜론 맹에 연결 된 아주 유사 하 고 반지는 회장 대신 근 위 결에 실수로 놓일 수 있다. 반지는 공장에도 본 인접 콜론에 잃어버렸던 했다 반지 아래로 밀 렸 다 고 일으키는 광범위 한 출혈 (그림 4C) mesenteric 동맥을 손상. 이 방치를 방지 하는 회장 해야 항상 수 제대로 있으며 반지에 배치 되기 전에 식별. 회장 결 맹 주머니의 한쪽에 실행 되는 동안 맹의 중간에 실행 됩니다.
이 포 수술 프로토콜 마우스에 대 한 주요 수술으로 간주 됩니다. 모든 수술 기구와 재료 사용 하기 전에 소독 해야 하 고 수술 전용된 수술 방 깨끗 한 환경에서 오염, 감염 그리고 염증 쥐에서 이어질 수 있는 최소화 하기 위해 수행 되어야 합니다. 또한, 수술 후 진통제는 마우스 제공 되어야 한다. 우리는 7-8 h22까지 효능 buprenorphine의 느린 릴리스 버전을 사용 하기로 결정 했습니다. 또한, 수술 후, 쥐 있고 어려움 씹는 단단한 음식을 삼 키는. 대 한 최대 5 일 후 수술, 쥐 해야 부드럽게 음식 (고체 다이어트 물 식품을 부드럽게에 추가의 비트와 함께)와 함께 제공 되며 5 일 후 정상 고체 다이어트로 전환.
우리의 장 포 수술 어떤 SMC, ICC, 장 방해에 대 한 vivo에서 비 모델을 제공 하 고 PDGFRα+ 세포는 비정상적으로 리 모델링. 이 포 모델 장 신경 포에 의해 수정 하는 방법 및 주요 모터 활동은23크고 작은 창 자 영향을 어떻게 이해 또한 이상적으로 적합 하다. 이 세포 병 적인 조건 뿐만 아니라 경작된 조건15,16에서 동적으로 모델링 될 수 있습니다. 그래서 쥐에서이 세포 (그림 2 및 그림 3) 작업 없이 정상적인 쥐 보다는 조금 다르게 행동 관찰 합니다. 대부분 장 방해 인간 복 부 유착 수술, 부드러운 근육 비 대3,,45,21로 이어지는 후 개발에 의해 발생 합니다. 등 수술 후, 우리는 또한 발견 하는 SMC, ICC, 및 PDGFRα+ 셀은 작은 창 자에서 약간 hypertrophic (그림 3)에 비해, 장 평활 근 비 대 유도 수 그 수술 자체를 제안. 이 경우 그래서 수술은 하지가 수술에 대 한 완전 한 부정적인 제어. 아니 등 뿐만 아니라 포 소장에 대 한 비교로 사용 해야 합니다.
요약, 우리 쥐 튼튼하게 장 장애물을 생성 하는 비용/시간 효과적, 안정적이 고 반복 가능한 포 수술 프로토콜을 발견 했다. 방해의 개발, SMC, ICC, PDGFRα+, 뿐만 아니라 신경 세포는 동적으로 리 모델링 다양 한 조직 레이어 및 로케일. 이 비보에 방해 모델에서 발생 하는 어떻게 phenotypic 변경의 우리의 지식에 새로운 통찰력을 제공 세포 수준에서 창 자 방해.

창 자 방해는 소형 또는 대형 내장 내장1통과 음식을 소화, 유체 및 가스 방지에서 부분적 또는 완전 한 막힘. 방해, 때문 방해 좁히는 루멘2장 벽 두껍게 될을 유도 합니다. 장 방해의 결과로 복 부 접착 조직 형성을 일으키는 원인이 되는 복 부 또는 골반 수술 또는 염증 성 장 질환 (크 론 병), 계실 염, 탈 장, volvulus, 준한, GI 무질서에서 발생할 수 있습니다. intussusception, 변 비, 지저분한 impaction, 의사 방해, 암 및 종양3,,45. 이러한 경우 장 장애물은 종종 내장6tunica muscularis의 비 대도 이어질.
루멘의 포 장 팽창, 유도 및 기능 연동7,,89,10, 계속 필요에 응답에서 방해 주위 부드러운 근육 층 두께 증가 11,,1213. 장 포의 동물 모델 부드러운 근육 비 대에 쥐7, 쥐10, 기니 돼지11, 개12, 고양이13 일관 되 게 내에서 유사한 비 대를 개발 하는 연구 개발 된는 장 근육 레이어입니다.
장 포의 마우스 모델 생성 및 창 자 방해에서 vivo에서공부를 가장 비용 효율적인 방법입니다. 작은 창 자 방해는 회장을 둘러싼 배치 수술 실리콘 링을 사용 하 여 마우스에 수행 됩니다. 포 쥐 포 수술8,15후 근육 레이어 두께 (비 대)에서 초기 셀 (증식)의 수 증가 및 증가 보였다. SMC는 기본 플라스틱 셀 hypertrophic 조건14응답에서 평활 근 층 내에서 성장 하지만 ICC 등 다른 세포와 PDGFRα+ 셀 SMC와 밀접 하 게 관련 된, 또한 다시 채워집니다. 우리가 이전에 보고 된 포 쥐 작은 창에 비 개발 어떤 SMC에서 높은 증식7,,1516PDGFRα+ 셀으로 dedifferentiated는. 반대로, ICC 전락 되며 장 obsruction7의 개발 기간 동안 hypertrophied 부드러운 근육 층 내에서 잃었다. 포 모델의 또 다른 주요 장점은 장 신 경계와 전파 neurogenic 모터 패턴에 변화를 유도 하는 능력 이다. 주요 전파 마우스 작은 창 자에서 neurogenic 모터 패턴은 마이그레이션 모터 복잡 한 (MMC), neurogenic 이며 ICC 또는 전기 느린 파도17필요 하지 않습니다. 포 모델 부분 방해에 의해 Mmc와 장 신경 개조 어떻게에 명확한 통찰력을 제공할 수 있습니다.
여기, 우리는 실리콘 링을 사용 하 여 장 포 수술 murine 프로토콜을 제안 합니다. 쥐 포 수술을 안정적으로 수신 소장의 tunica muscularis 비 대 생산. Hypertrophic 근육 내 SMC, ICC, PDGFRα+, 그리고 신경 세포는 극적으로 리 모델링.

<table><tbody><tr><td>Surgical drape</td><td>Medical and veterinary supplies</td><td>SMS40</td><td>40&amp;rdquo;X100 yards</td></tr><tr><td>Underpad, econ, pro plus</td><td>Medical and veterinary supplies</td><td>MSC281224</td><td>17x24&amp;rdquo;</td></tr><tr><td>Iris scissors</td><td>Braintree scientific, Inc</td><td>SC-i-130</td><td></td></tr><tr><td>Iris scissors</td><td>Vantage</td><td>V95-304</td><td></td></tr><tr><td>Dumont electronic &amp;amp; jeweler tweezers</td><td>Dumont</td><td>98-180-3</td><td></td></tr><tr><td>Braided absorbable suture</td><td>Covidien polysorb</td><td>SL-5687G</td><td>5-0, polyglactin</td></tr><tr><td>Nylon non-absorbable mono filament</td><td>AD surgical</td><td>S-N618R13</td><td>6-0, nylon</td></tr><tr><td>Surgical blade</td><td>Dynarex</td><td></td><td>No.15</td></tr><tr><td>Needle holder</td><td>Jacobson microvascular</td><td>36-1342TC</td><td>8.5 inch</td></tr><tr><td>Scalpel handle</td><td>Flinn scientific</td><td>AB1049</td><td></td></tr><tr><td>Microsurgical scissor</td><td>WPI</td><td>503305</td><td></td></tr><tr><td>Petrolatum ophthalmic ointment</td><td>Puralube VET</td><td></td><td>3.5 g</td></tr><tr><td>Fluriso (isoflurane)</td><td>Vetone</td><td>V1 502017</td><td>250 ml</td></tr><tr><td>Steri-strip reinforced skin closure</td><td>3M</td><td>R1547</td><td></td></tr><tr><td>Surgical gloves</td><td>Medline</td><td>MSG2270</td><td></td></tr><tr><td>Ear loop face mask</td><td>The safety zone</td><td>RS700</td><td></td></tr><tr><td>Avant gauze non-woven sponges</td><td>Caring</td><td>PRM25444</td><td></td></tr><tr><td>Surgical cup</td><td>Admiral&amp;nbsp; craft OYC-2</td><td>725-A42</td><td>2.5 oz</td></tr><tr><td>Swabstick</td><td>ChloraPrep</td><td>260103</td><td>2% w/v Chlorhexidine&amp;nbsp; Gluconate (CHG) and 70% v/v Isopropyl Alcohol (IPA)</td></tr><tr><td>Cotton tipped applicator</td><td>Puritan</td><td>806-WC</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Zoo pharm</td><td>BZ8069317</td><td>1 mg/ml</td></tr><tr><td>Gentamycin sulfate</td><td>Vetone</td><td>G-6336-04</td><td>100 mg/ml</td></tr><tr><td>Fast acting gel cream remover</td><td>Veet</td><td>8111002</td><td></td></tr><tr><td>Syringe</td><td>AHS</td><td>AH01T2516</td><td>1 ml with needle</td></tr><tr><td>Silicon ring</td><td>VWR</td><td>60985-720</td><td>6 mm in length, 4 mm exterior diameter, 3.5 mm interior diameter</td></tr><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>The Jackson Laboratory</td><td></td><td>4-6 weeks old</td></tr></tbody></table>

a mouse model of intestinal partial obstruction

장 장애물, 방해 하거나 차단 연동 운동, 복 부 유착 및 tumorous 종양을 포함 하 여 가장 위장 (GI) 질환에 의해 발생할 수 있습니다. 그러나, 개장 하는 메커니즘 휴대에, 참여 하 고, 창 자 방해는 제대로 이해. 창 자 방해의 여러 동물 모델 개발 되었습니다, 하지만 마우스 모델은 가장 비용/시간 효과적인. 마우스 모델 장 부분 방해 (PO)를 올바르게 수행 하지 경우 높은 사망률의 수술 주입을 사용 합니다. 또한, 쥐가 수술을 받고 적절 한 봉쇄는 사용 되지 않습니다 또는 제대로 배치 하는 경우 비 대를 개발 하기 위해 실패. 여기, 우리는 매우 낮은 사망률과 안정적이 고 재현 장 장애물 포 수술에 대 한 상세한 프로토콜을 설명 합니다. 이 프로토콜을 부분적으로 차단 하는 작은 창 자에서 소화 운동 회장을 둘러싸는 수술 배치 실리콘 반지를 이용 한다. 부분 막힘 소장 소화 운동의 중단으로 인해 열려진 될 게. 내장의 팽창 반지 점차적으로 죽음을 일으키는 원인이 될 때까지 2 주 동안 개발의 구두에 부드러운 근육 비 대를 유도 합니다. 수술 포 마우스 모델 hypertrophic 장 조직 평활 근 세포 (SMC), 중간 셀의 Cajal (ICC), PDGFRα+를 포함 하 여 장 셀의 병 적인 변화를 공부 하는 데 유용의 비보에 모델 제공 및 신경 장 방해의 발달 동안에 세포입니다.

부분 방해 (PO) 수술 ileocecal 괄약근 가까운 회장 주위 실리콘 링을 삽입 하 여 1 개월 된 생쥐에서 유도 했다. 이 반지는 회장에 부분적인 방해를 만들었습니다. 가짜 작업 (그래서) 나 이/성별에 반지 없이 수행 했다 쥐와이 쥐가 어떤 증상 포 쥐에서 찾아낸 그들과 유사한를 표시 하지 않았습니다. 마우스는 신속 하 게 몇 시간 포 수술에서 회복. 그들은 명백한 행동 변화 또는 약점 첫 주 내에서 보여주지만, 후 첫 번째 주, 그들은 점차적으로 포의 흔적을 표시 하기 시작 했다: 부풀어 복 부와 더 적은 더 작은 배설물 펠 릿의 생산. 포 쥐 8과 13 일 포스트 포 수술 등 제어 마우스 함께 희생 되었다. 소장 부분적으로 가득 고 8 일 포스트 포 수술에서 불어와 완전히 가득 이었고 그래서 (그림 1A) 마우스를 제어에 비해 13 일 포스트가 수술에 불어. 8과 13 일 포스트 포 수술 쥐의 결에 찌 끼 펠 릿 형성 등 제어 마우스 (그림 1B)에 비해 감소 했다. 그건 그냥 링의 업스트림 ileal 조직 했다 해 부 고 부드러운 근육 되며 & 오신 (H & E) 얼룩 분석 했다. 부드러운 근육 층 8 일 포스트 포 수술에서 hypertrophied 되었고 13 일 포스트 포 수술 (그림 2)에서 훨씬 더 hypertrophied. 우리는 또한 SMC, ICC, PDGFRα+, 및 immunochemistry의 사용을 통해 포 쥐에서 tunica muscularis 내 신경 세포 변화 관찰. 각 셀은 셀 형 특정 마커 분류 되었다: MYH11 (SMC), 키트 (ICC), PDGFRA (PDGFRα+ 세포), 및 PGP9.5 (신경 세포). SMC 조직의 3 개의 층 내에서 발견 된다: 경도 근육 (LM), 원형 근육 (CM), 및 muscularis 거칠어 (MM)는 회장에서. SMC는 점차적으로 8 그리고 13 일 포스트 포 수술 (그림 3)에서 모든 3 개의 층에서 급속 한 속도로 성장 했다. Icc에 관해서는 그들의 모집단 깊은 근육 총 (DMP), myenteric 지역 (내), 그리고 subserosal 지역 (SS)에 있습니다. 그러나, ICC-DMP, ICC 내, 그리고 ICC-SS 내부/질의 레이어 (그림 3)에서 전락 했다. 마찬가지로 ICC 모집단, PDGFRα+ 셀 (PαC)의 모집단 DMP, 내, 및 SS에 있습니다. 포 쥐, PαC-DMP, PαC-내, 그리고 PαC SS 동적으로 리 모델링 했다 포 쥐의 질의 레이어 내의: 그들은 8 일 포스트 포 수술에서 성장 하 고 13 일 포스트 포 수술 (그림 3)에서 퇴 화. 마지막으로, myenteric 총 (MP), submucosal 총 (SP), subserosal 신경 (SS), 그리고 장 모터 신경 (EMN) 크게 8과 13 일 포스트 포 수술 (그림 3)에서 포 쥐의 간/근육 지역에서 분실 되었다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57381/57381fig1v2.jpg"> 그림 1입니다. 장 부분 방해는 수술 마우스 모델에서 유도 된. 포가 수술에 의해 유도 되었다. 한 달 된 쥐 취 했다, 그들의 복 부를 절 개 하 여 열렸다, 실리콘 반지와 배치 되었다 회장, 주변 개통 봉합에 의해 폐쇄 되었습니다. 마우스는 수술 8 ~ 13 일에 대 한 복구 허용 되었다. 나이 고 쥐 운영에 포 쥐로 같은 방식으로 링의 아무 배치 했다를 제외 하 고 그래서 일치 하는 섹스. (A) 총 포를 받았다 쥐에 기 관의 이미지 또는 등 수술. 이미지는 8에서 마우스와 13 일 수술 후 (B) 기 관 A. 소장 상류의 반지에에서 쥐에서 해 부 8과 13 일 포스트 포 수술에서 팽창 했다 및 콜론에 찌 끼 펠 릿은 또한 작은 모두 8과 13 일 포스트 포 수술으로 13 일 게시물-그럼 수술 쥐 때문에 부분적으로 폐쇄성 실리콘 링에 비해. 스케일 바는 0.5 cm. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/57381/57381fig1v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57381/57381fig2.jpg"> 그림 2입니다. 부드러운 근육 층 외과 마우스 모델에서 변경. 대표 H & E에서 장 포, ileal 횡단면의 그래서 얼룩 그리고 아무 작업 (NO) 쥐. 부드러운 근육 (SM) 및 점 막 (Mu) 레이어는 so에서 들과 아무 마우스 보다 8과 13 일 포스트 포 수술에서 포 쥐에 두꺼운. 스케일 바는 50 µ m. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/57381/57381fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57381/57381fig3.jpg"> 그림 3입니다. 장 부분 방해에 의해 유도 된 동적 셀룰러 리 모델링 부드러운 근육 비 대에. 그래서 hypertrophic ileal 횡단면, 포에서 이미지를 스캔 하는 대표적인 confocal 레이저 고 아니 쥐. Immunohistochemically 키트 (ICC), (빨간색)의 MYH11 (SMC), 항 체와 얼룩 PDGFRA (PDGFRα+ 세포) 또는 PGP9.5 (NC; 신경 세포), 공동 스테인드 DAPI (파란색)와 함께. 점 막 muscularis (MM), 원형 근육 (CM), 및 경도 근육 (LM) 레이어, SMC 뿐만 아니라 깊은 근육 총 (DMP), myenteric (내), 지역과 subserosal 지역 (SS) PDGFRα+ 셀 8과 13 일 포스트 포에 비 대 회장에서 성장 했다 DMP, 내, 그리고 SS, myenteric 총 (MP), submucosal 총 (SP), subserosal NC (SS), 및 장 모터 신경 (EMN) ICC 동안 수술 전락 했다. 스케일 바는 50 µ m. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/57381/57381fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57381/57381fig4.jpg"> 그림 4입니다. 결과 너무 큰, 너무 작은 또는 콜론 잘못 실리콘 링입니다. (A) 링이 너무 커서 방해를 일으킬 수 없는 부드러운 근육 비 대는 회장에서 개발. 반지는 회장의 아무 막힘을 거의 만든. (B) 장 허 혈에서에서 발전 한다는 회장 반지가 너무 작은 경우. 반지는 조직을 손상 하 고 비 대를 개발 하기 전에 조기 사망으로 이어질 수 있는 회장의 거의 완전 한 방해를 했다. (C) 평활 근 비 대는 콜론 잃어버렸던된 반지 때문에 개발. 결에 반지 lumenal 콘텐츠 (배설물), mesentery 맥 관 구조를 손상 하 고 콜론에서 대규모 출혈 발생에 의해 옮겨 졌다. <a href="//cloudflare-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/57381/57381fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

창 자 방해는 심한 복 부 통증, 메스꺼움, 구 토, 그리고 대변의 통과 방지 하면 내장의 부분적 또는 완전 한 막힘. 쥐에서 장 부분 obsructions를 만들기 위한이 절차는 병 적인 세포 성장 및 소장에서 죽음을 기본 메커니즘을 공부에서 신뢰할 수 있는.

장 부분 방해의 마우스 모델

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

a-mouse-model-of-intestinal-partial-obstruction

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Biology

21.0K 조회수.  University of Nevada, Reno School of Medicine. 창 자 방해는 심한 복 부 통증, 메스꺼움, 구 토, 그리고 대변의 통과 방지 하면 내장의 부분적 또는 완전 한 막힘. 쥐에서 장 부분 obsructions를 만들기 위한이 절차는 병 적인 세포 성장 및 소장에서 죽음을 기본 메커니즘을 공부에서 신뢰할 수 있는.

비디오: A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the complex cellular and molecular of intestinal pathology. Although the tunica mucosa is often the organ of interest in many inflammatory diseases, recent works demonstrated that the muscularis externa (ME) is also a highly immunocompetent organ that harbours a dense network of resident immunocytes.1,2 These works were performed within the standardized model of intestinal manipulation (IM) that leads to inflammation of the bowel wall, mainly limited to the ME. Clinically this inflammation leads to prolonged intestinal dysmotility, known as postoperative ileus (POI) which is a frequent and unavoidable complication after abdominal surgery.3 The inflammation is characterized by liberation of proinflammatory mediators such as IL-64 or IL-1&beta; or inhibitory neurotransmitters like nitric oxide (NO).5 Subsequently, tremendous numbers of immunocytes extravasate into the ME, dominated by polymorphonuclear neutrophils (PMN) and monocytes and finally maintain POI.2 Lasting for days, this intestinal paralysis leads to an increased risk of aspiration, bacterial translocation and infectious complications up to sepsis and multi organ failure and causes a high economic burden.6
In this manuscript we demonstrate the standardized model of IM and in vivo assessment of gastrointestinal transit (GIT) and colonic transit. Furthermore we demonstrate a method for separation of the ME from the tunica mucosa followed by immunological analysis, which is crucial to distinguish between the inflammatory responses in these both highly immunoactive bowel wall compartments. All analyses are easily transferable to any other research models, affecting gastrointestinal function.

Postoperative ileus (POI) is a complication of abdominal surgery leading to increased morbidity and a prolonged hospital stay. Because prophylactic or therapeutic strategies are lacking intensified research is necessary. Therefore we established a standardized and feasible mouse model to investigate the pathophysiology of POI and to study potential therapeutic options.

장 조작의 표준화 된 모델의 분석 : 쥐의 장 운동성 및 내장 벽의 염증의 기능 평가

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

연구

의학

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

Murine 원심 인공, C57BL/6 마우스에 전환 Colitis의 새로운 모델

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water while preventing passage of luminal bacteria and exogenous substances. A breach of this layer results in increased permeability to luminal contents and recruitment of immune cells, both of which are hallmarks of pathologic states in the gut including inflammatory bowel disease (IBD). 
Mechanisms regulating epithelial barrier function and transepithelial migration (TEpM) of polymorphonuclear neutrophils (PMN) are incompletely understood due to the lack of experimental in vivo methods allowing quantitative analyses. Here, we describe a robust murine experimental model that employs an exteriorized intestinal segment of either ileum or proximal colon. The exteriorized intestinal loop (iLoop) is fully vascularized and offers physiological advantages over ex vivo chamber-based approaches commonly used to study permeability and PMN migration across epithelial cell monolayers.
We demonstrate two applications of this model in detail: (1) quantitative measurement of intestinal permeability through detection of fluorescence-labeled dextrans in serum after intraluminal injection, (2) quantitative assessment of migrated PMN across the intestinal epithelium into the gut lumen after intraluminal introduction of chemoattractants. We demonstrate feasibility of this model and provide results utilizing the iLoop in mice lacking the epithelial tight junction-associated protein JAM-A compared to controls. JAM-A has been shown to regulate epithelial barrier function as well as PMN TEpM during inflammatory responses. Our results using the iLoop confirm previous studies and highlight the importance of JAM-A in regulation of intestinal permeability and PMN TEpM in vivo during homeostasis and disease. 
The iLoop model provides a highly standardized method for reproducible in vivo studies of intestinal homeostasis and inflammation and will significantly enhance understanding of intestinal barrier function and mucosal inflammation in diseases such as IBD.

Dysregulated intestinal epithelial barrier function and immune responses are hallmarks of inflammatory bowel disease that remain poorly investigated due to a lack of physiological models. Here, we describe a mouse intestinal loop model that employs a well-vascularized and exteriorized bowel segment to study mucosal permeability and leukocyte recruitment in vivo.

표준화된 장 루프 모델을 사용하여 마우스에서 장 투과성 및 호중구 환전 이동의 기능 평가

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water ...

면역학 및 감염병학

Creation of Colonic Anastomosis in Mice

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of colonic surgeries and can occur in up to 26% of surgical anastomoses, with mortality being up to 39% for patients with such a leak. Currently, there remains a paucity of data detailing the cellular mechanisms of anastomotic healing. Devising preventative strategies and treatment modalities for anastomotic leak could be greatly potentiated by a better understanding of appropriate anastomotic healing.
A murine model is ideal as previous studies have shown that the murine anastomosis is the most clinically similar to the human case as compared with other animal models. We offer an easily reproducible murine model of colonic anastomosis in mice that will allow for further illustration of anastomotic healing.

Anastomotic leak or breakdown after surgery is a major cause of postoperative morbidity and mortality. Our surgery for creating a colonic anastomosis is a reliable and reproducible method for studying the healing mechanisms of anastomoses.

쥐에 있는 저 승 문 합의 창조

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of ...

<meta charset="utf8"></head><body>장 조작을 통한 수술 후 장폐색(Postoperative Ileus)을 연구하기 위한 쥐 모델(Murine Model for Study Postative Ileus through Intestinal Manipulation)

Postoperative Ileus Murine Model

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI is a consequence of mechanical damage during surgery, resulting in disruption of motility in the gastrointestinal tract. The mechanisms of POI are related to aberrant neuronal sensitivity, impaired epithelial barrier function, and increased local inflammation. However, the details remain enigmatic. Therefore, experimental murine models are crucial for elucidating the pathophysiology and mechanism of POI injury and for the development of novel therapies.
Here, we introduce a murine model of POI generated via intestinal manipulation (IM) that is similar to clinical surgery; this is achieved by mechanical damage to the small intestine by massaging the abdomen 1-3 times with a cotton swab. IM delayed gastrointestinal transit 24 h after surgery, as assessed by FITC-dextran gavage and fluorescence detection of the segmental digestive tract. Moreover, tissue swelling of the submucosa and immune cell infiltration were investigated by hematoxylin and eosin staining and flow cytometry. Proper pressure of the IM and a hyperemic effect on the intestine are critical for the procedure. This murine model of POI can be utilized to study the mechanisms of intestinal damage and recovery after abdominal surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>수술 후 장폐색 쥐 모델

We describe a murine model of postoperative ileus generated via intestinal manipulation. Gastrointestinal transit function, pathologic changes, and immune cell activation were assessed 24 h after surgery.

수술 후 장폐색 쥐 모델

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI ...

Single-Anastomosis Duodeno-Ileal Bypass with Sleeve Gastrectomy Model in Mice

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes mellitus, dyslipidemia, non-alcoholic steatohepatitis, cardiovascular events, and cancers) through restrictive and malabsorptive mechanisms. Understanding the mechanisms by which these procedures allow such improvements often require their transposition into animals, especially in mice, because of the ease of generating genetically modified animals. Recently, the single-anastomosis duodeno-ileal bypass with sleeve gastrectomy (SADI-S) has emerged as a procedure that uses both restrictive and malabsorptive effects, which is being used as an alternative to gastric bypass in case of major obesity. Thus far, this procedure has been associated with strong metabolic improvements, which has led to a marked increase in its use in daily clinical practice. However, the mechanisms underlying these metabolic effects have been poorly studied as a result of a lack of animal models. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice, with a special focus on perioperative management. The description and use of this new rodent model will be helpful for the scientific community to better understand the molecular, metabolic, and structural changes induced by the SADI-S and to better define the surgical indications for clinical practice.

Single-anastomosis duodeno-ileal bypass (SADI-S) is an emerging bariatric procedure with important metabolic effects. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice.

생쥐의 단일 문합 십이지장-회장 우회술(Single-Anastomosis Duodeno-Ileal Bypass with Sleeve Gastrectomy Model in Mice)

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes ...

Partial Bile Duct Ligation in the Mouse: A Controlled Model of Localized Obstructive Cholestasis

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile duct proliferation. However, long-term experiments can lead to increased morbidity and mortality. In select mouse strains with underlying liver disease, meaningful comparisons can be made even with ligation of a single lobe of the liver, which can reduce animal losses and expenses. Here, we describe partial bile duct ligation (pBDL) in the mouse, in which only the left hepatic bile duct is ligated, causing biliary obstruction in the left lobe but not the remaining lobes. With careful microsurgical technique, pBDL experiments can be cost-effective, since the unligated lobe serves as an internal control to the ligated lobes, when subjected to the same conditions in the same animal. Unlike cBDL, a separate sham-operated control group is not necessary. pBDL is highly useful to directly compare localized versus systemic effects of cholestasis and other retained bile components. pBDL can also be repurposed as a novel method to investigate mechanisms related to medications and cell migration.

Here, we present partial bile duct ligation as a surgical model of liver injury and regeneration in rodents.

마우스에 부분적 담 관 결 찰: 지역화 된 폐쇄성 Cholestasis의 제어 모델

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile ...

생물학

Rodent Model of Intestinal Ischemia-Reperfusion Injury via Occlusion of the Superior Mesenteric Artery

Intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) is associated with a myriad of conditions in both veterinary and human medicine. Intestinal IRI conditions, such as gastric dilatation volvulus (GDV), mesenteric torsion, and colic, are observed in animals such as dogs and horses. An initial interruption of blood flow causes tissues to become ischemic. Although necessary to salvage viable tissue, subsequent reperfusion can induce further injury. The main mechanism responsible for IRI is free radical formation upon reperfusion and reintroduction of oxygen into damaged tissue, but there are many other components involved. The resulting local and systemic effects often impart a poor prognosis. 
Intestinal IRI has been the subject of extensive research over the past 50 years. An in vivo rodent model in which the base of the superior mesenteric artery (SMA) is temporarily ligated is currently the most common method used to study intestinal IRI. Here, we describe a model of intestinal IRI utilizing isoflurane anesthesia in 21% O2 medical air that yields reproducible injury, as demonstrated by consistent histopathology of the small intestines. Tissue injury was also assessed in the colon, liver, and kidneys.

We describe how to generate a widely used surgical model of intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) in rodents. The procedure involves occlusion of the superior mesenteric artery followed by the restoration of blood flow. This model is useful for studies investigating occlusive causes of intestinal IRI in both veterinary and human medicine.

상장간막 동맥의 폐색을 통한 장 허혈-재관류 손상의 설치류 모델

Intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) is associated with a myriad of conditions in both veterinary and human medicine. Intestinal IRI conditions, ...

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