O objetivo geral deste procedimento é imitar a condição humana da restenose após a terapia de revascularização em camundongos para estudar os mecanismos moleculares envolvidos na resposta à lesão. As principais vantagens dessas técnicas são que ela é altamente reprodutível e facilmente realizada, permitindo que o pesquisador com experiência mínima aplique o método em pequenos modelos animais. Demonstrando o procedimento será Adelina Curaj, pós-doutora do meu laboratório.
Para induzir hiperlipidemia, alimente de seis a oito semanas de idade de 18 a 20 gramas Apoe knockout ratos uma dieta aterogênica uma semana antes do procedimento cirúrgico e até a análise da placa aterosclerótica. No dia da cirurgia, após confirmar a falta de resposta ao aperto do dedo do pé, raspe o rato anestesiado na região do pescoço ventral e desinfete a pele exposta com Betadine. Faça uma incisão cutânea de um centímetro na região mediana do pescoço sobre a traqueia e separe os dois corpos de gordura para obter uma visão completa da região traqueal.
Usando um retrátil para manter a camada muscular aberta, exponha a artéria carótida e use fórceps curvos afiados para separar a artéria do nervo vago e da veia jugular até que a área de bifurcação da artéria carótida interna e externa seja visível. Livremente, coloque uma sutura de seda de sete centímetros de comprimento 0-5 sob a artéria carótida proximal ao arco aórtico, seguido por uma sutura de seda de 1,5 centímetros de comprimento de 1,5 centímetros de comprimento ao redor da artéria carótida externa perto do ponto de bifurcação, e uma vagamente colocada de 1,5 centímetro de comprimento 0-7 laço de sutura de seda o mais distal possível da bifurcação. Coloque outra sutura de seda aberta de 1,5 centímetros de comprimento sob a artéria carótida interna.
Em seguida, posicione o animal com a cabeça na posição das seis horas. Imediatamente, feche firmemente as alças de sutura na artéria carótida interna e a sutura distal na artéria carótida externa. Use fórceps hemostat para puxar as extremidades da sutura 0-5 para parar o fluxo sanguíneo através da artéria carótida comum.
Utilizando uma tesoura pequena, faça uma pequena arteriotomia de metade do diâmetro do vaso distal até a artéria carótida externa entre as duas alças e insira um fio-guia flexível polido com uma gota de cloreto de sódio de 0,9% na artéria carótida comum através da incisão. Para evitar erupções arteriais durante a incisão Y, use um fio-guia cuidadosamente polido. Obtenha a denudação endotelial passando o fio ao longo do vaso enquanto gira três vezes, em seguida, feche firmemente o laço proximal na artéria carótida externa e corte as suturas ao redor das artérias carótidas comuns e internas para restaurar o fluxo sanguíneo.
Em seguida, remova os retráteis e devolva a camada muscular e os dois corpos de gordura para a posição fisiológica. Feche a pele com clipes metálicos, em seguida, deixe o mouse se recuperar no lado esquerdo sob uma luz infravermelha com monitoramento até que ele esteja totalmente reclinável. A formação de neointima pode ser avaliada usando manchas de Movat.
O tamanho total da placa, que pode variar entre 70.000 e 100.000 mícrons ao quadrado, dependendo da habilidade do cirurgião, pode então ser calculado para cada amostra usando o software apropriado. A placa desenvolvida se assemelha à restenose instantânea, que consiste predominantemente em células musculares suaves proliferadas e migradas do meio. O teor de células musculares lisas representa aproximadamente 30 a 40% da placa, enquanto os macrófagos encontrados dentro da neointima do vaso ferido compõem de 15 a 25% do número total de células.
A reendotelialização normalmente atinge de 80 a 90% após três semanas e deve ser quase concluída após quatro semanas. Para acompanhar o crescimento da placa durante seu desenvolvimento, a análise pode ser repetida em vários pontos de tempo após a lesão do fio, dependendo da questão experimental. Uma vez dominada, essa técnica pode ser completada em 15 minutos se for executada corretamente.
Ao tentar esse procedimento, é importante lembrar que a área cirúrgica deve ser constantemente hidratada para evitar a secagem e facilitar a manipulação do fio.
