Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы имитировать состояние человека ререноза после реваскуляризации терапии у мышей для изучения молекулярных механизмов, участвующих в ответ травмы. Основными преимуществами этих методов является то, что он очень воспроизводится и легко выполняется, что позволяет исследователю с даже минимальным опытом применять метод в малых животных моделей. Демонстрация процедуры будет Аделина Curaj, postdoc для моей лаборатории.
Чтобы вызвать гиперлипидемию, кормить от шести до восьми недель от 18 до 20 граммов Apoe нокаут мышей атерогенной диеты за неделю до хирургической процедуры и до атеросклеротической бляшки анализа. В день операции, подтвердив отсутствие реакции на щепотку ноша, побрить анестезированной мыши в области брюшной шеи и дезинфицировать обезвленную кожу бетадином. Сделайте один сантиметровый разрез кожи в средней области шеи над трахеей и разделте два жировых тела, чтобы получить полное представление о области трахеи.
Используя один ретрактор, чтобы держать мышечный слой открытым, подвергать сонной артерии и использовать острые изогнутые миппы, чтобы отделить артерию от блуждающего нерва и яремной вены до бифуркации области внутренней и внешней сонной артерии видна. Свободно, поместите семь сантиметров длиной 0-5 шелковый шов под сонной артерии проксимальной аортальной арки, а затем один свободно размещены 1,5 сантиметра длиной 0-7 шелковый шов вокруг внешней сонной артерии близко к точке бифуркации, и один свободно размещены 1,5 сантиметра длиной 0-7 шелковый шов, как дистальной от бифуркации возможно. Поместите еще один открытый 1,5 сантиметр длиной 0-7 шелковый шов под внутренней сонной артерией.
Затем распоить животное с головой в положении «шесть часов». Немедленно плотно закройте швовые петли на внутренней сонной артерии и дистальный шов на внешней сонной артерии. Используйте гемостатические типсы, чтобы тянуть на концах 0-5 шва, чтобы остановить кровоток через общую сонную артерию.
Используя небольшие ножницы, сделать небольшую артериотомию половины диаметра сосуда дистальной внешней сонной артерии между двумя петлями и вставить 14-дюймовый алкоголь полированной гибкой направляющий смоченной с каплей 0,9% хлорида натрия в общую соонную артерию через разрез. Чтобы избежать артериального извержения во время Y-разреза, используйте тщательно отполированный направляющий провод. Получить эндотелиальной денудации, проходя провода вдоль судна во время вращения три раза, а затем плотно закрыть проксимальную петлю на внешней сонной артерии и сократить швы вокруг общих и внутренних сонных артерий для восстановления кровотока.
Затем удалите ретракторы и верните мышечный слой и два жировых тела в физиологическое положение. Закройте кожу металлическими зажимами, а затем позвольте мыши восстановиться на левой стороне под инфракрасным светом с мониторингом, пока она полностью не откинется. Формирование неоинтимы можно оценить с помощью окрашивания Movat.
Общий размер бляшки, который может варьироваться от 70 000 до 100 000 микрон в квадрате, в зависимости от мастерства хирурга, может быть рассчитан для каждого образца с помощью соответствующего программного обеспечения. Разработанный налет напоминает мгновенный ререноз, который в основном состоит из размножавшихся и мигрировавших гладких мышечных клеток из среды. Гладкое содержание мышечных клеток составляет примерно от 30 до 40% от налета, в то время как макрофаги, найденные в неоинтиме травмированного сосуда, составляют от 15 до 25% от общего числа клеток.
Повторное эндотелиализация обычно достигает 80-90% через три недели и должна быть почти завершена через четыре недели. Чтобы отслеживать рост бляшки во время ее развития, анализ может быть повторен в нескольких точках времени после повреждения провода в зависимости от экспериментального вопроса. После освоения, этот метод может быть завершен в течение 15 минут, если он выполняется должным образом.
При попытке этой процедуры, важно помнить, что хирургическая область должна быть постоянно гидратированных для предотвращения высыхания и сделать проволоки манипуляции легче.
