Este estudo descreve um método personalizável para criar um modelo de função miocárdica em Miro por ligadura precisa da artéria coronária descendente anterior através de micromanipulação. Esse protocolo reduz a duração do procedimento, garante o tamanho controlável do infarto e melhora a sobrevida do camundongo. Use um OT retangular com uma almofada de aquecimento pré-aquecida a 37 graus Celsius durante todo o procedimento cirúrgico.
Antes do procedimento, desinfete a prancha com luz ultravioleta e álcool 70%. Comece colocando o mouse no TO em posição supina com gaze sob a cabeça para evitar superaquecimento dos olhos. Aplique pomada oftálmica nos olhos para evitar que eles sequem.
Use um creme de remoção de pelos no tórax e massageie uniformemente com um cotonete estéril por um minuto. Limpe o excesso de pelos com gaze. Use iodopovidona seguido de álcool a 70% para limpar a área e cubra o tórax com gaze.
Use uma sutura de 4-O sob os incisivos superiores e fixe-a ao ponto de ancoragem para manter a boca levemente aberta e facilitar a canulação. Puxe a cauda para manter o corpo reto e prenda-a ao TO usando fita adesiva. Fixe os quatro membros com fita adesiva e aperte-os nos pontos de ancoragem.
Não estique demais os membros anteriores para evitar comprometimento respiratório. Use pinças para abrir a mandíbula e levantar a língua. Em seguida, use um iluminador para visualizar a garganta e a glote.
Insira suavemente uma cânula de calibre 22 com uma agulha truncada romba através da boca na traqueia, cerca de um centímetro abaixo da garganta. Use uma das mãos para segurar a língua e mova-a ligeiramente para cima com pinças rombas. Simultaneamente, use a outra mão para inserir suavemente o tubo na traqueia.
Tenha cuidado para não inserir o tubo no esôfago. Retire cuidadosamente a agulha. Antes de se conectar ao ventilador, verifique a intubação colocando o tubo na água para a formação de bolhas.
Conecte o tubo endotraqueal a um ventilador regulado para 120 por minuto e o volume corrente ajustado para 250 microlitros. Verificar a intubação verificando a expansibilidade torácica bilateral simétrica. Em seguida, corrija a conexão com o OT com fita adesiva para evitar que ele caia.
Coloque eletrodos de ECG nas patas e conecte-os ao gravador de ECG. Monitorar a eletrofisiologia cardíaca durante todo o procedimento. Retire a gaze no tórax.
Desinfetar a área da incisão usando três ciclos de esfoliação com álcool a 70%. Para reduzir a contaminação do sítio cirúrgico, cubra o rato com um pano cirúrgico estéril com um orifício sobre o campo cirúrgico. Depois de fazer uma incisão oblíqua da pele com bisturi, exponha as costelas realizando uma dissecção romba dos tecidos subcutâneos.
Tenha cuidado para não ferir os vasos, costelas e pulmões. Use aplicadores de algodão estéreis para estancar o sangramento. Identifique o terceiro espaço intercostal e faça uma incisão de cerca de seis a oito milímetros.
Em seguida, abra a cavidade torácica realizando a dissecção romba dos tecidos no espaço intercostal. Tenha cuidado para não lesionar a artéria torácica interna. Percorrer o espaço intercostal usando pinças.
Insira afastadores caseiros pré-esterilizados na caixa torácica e puxe para trás para espalhar a incisão para aproximadamente seis milímetros de largura. Fixe os afastadores ao TO com elásticos. Remova cuidadosamente os tecidos circundantes para expor o coração completamente.
Puxe o pericárdio suavemente com pinças curvas sem ferir o coração. Use um microscópio dissecante e direcione uma luz focalizada e apropriada para visualização da LAD. Pressione suavemente o local abaixo da posição de ligadura escolhida para ampliar temporariamente a LAD e, em seguida, verifique novamente a LAD.
Sob um microscópio dissecante, use uma agulha cônica para passar um 8-0 ligadura de seda por baixo da LAD. Certifique-se de que a agulha não é profunda o suficiente para entrar no ventrículo esquerdo e não muito rasa para evitar danificar a LAD. Amarre a ligadura com um nó duplo solto.
Coloque um tubo PE-10 de dois a três milímetros em uma alça paralela à artéria. Aperte a alça de ligadura suavemente até que fique ao redor da artéria e da tubulação. Em seguida, prenda o laço com um nó deslizante.
Tome cuidado para não danificar a parede miocárdica com pressão de aperto excessiva. A coloração da palidez na parede anterior do ventrículo esquerdo após a ligadura confirma a cessação do fluxo sanguíneo na DA. Se for necessária a ligadura permanente, proceda conforme descrito no texto manuscrito.
Retire os afastadores da incisão. Em seguida, feche a ferida temporariamente com uma braçadeira de buldogue. Certifique-se de que o rato continua ligado ao ventilador.
Quando o período de isquemia terminar, remova a pinça do buldogue e insira os afastadores para abrir a incisão e expor o coração e o local da ligadura. Desamarre o nó deslizante e remova a tubulação PE-10. A mudança da coloração pálida para rosa-avermelhada confirma a restauração do fluxo sanguíneo.
Simultaneamente, para detectar reperfusão, observe o ECG para uma possível dissolução do supradesnivelamento do segmento ST. Deixe o 8-0 ligadura in situ se realizar coloração subsequente de azul de Evans e TTC. Caso contrário, remova a sutura nesta etapa.
Retire os afastadores e feche a incisão suturando a terceira e quarta costelas com fio de seda 4-O. Tenha cuidado para não ferir o pulmão. Pressione o tórax suavemente enquanto amarra os nós de sutura para empurrar para fora qualquer ar que possa estar preso na cavidade torácica.
Feche as camadas musculares com pontos contínuos de seda de 4-O. As imagens padrão do processo experimental foram adquiridas desde intubação endotraqueal, incisão na pele, toracotomia, identificação da DA e ligadura até a reperfusão. As imagens representativas do ECG verificaram isquemia e reperfusão miocárdica com elevação significativa do segmento ST após a ligadura.
E a dissolução da elevação do segmento ST após o nó deslizante foi desatada. Antes da toracotomia, é muito importante manter a via aérea aberta, e o mais importante é certificar-se de que a DAE esteja firmemente ligada e evitar danos. Esse procedimento será seguido de ecocardiograma para avaliação da função cardíaca, bem como de CTT para avaliação da lesão miocárdica.
