이 프로토콜은 높은 재현성과 매우 높은 생존율을 가진 마우스에 있는 가득 차있는 척수 transection를 유도하기 위하여 정밀하고 외과적으로 통제된 상해를 전달합니다. 뼈 부상에 대한 미세 한 드릴의 사용은 주변 조직에 손상을 최소화, 부상과 치료 응답이 더 정확하게 모델링 할 수 있도록. 라미케절제술을 수행하기 위해, 8-10주 된 암컷 C57 블랙 6 마우스에서 페달 반사에 대한 반응의 부족을 확인한 후, 등쪽 척추 위에 수술 부위를 노출시키고 포비도오네 요오드 살균 제비액에 담근 멸균 면봉으로 면도 부위를 살균한다.
메스를 사용하여 T10 척추 수준에서 수직 중간선 절개를 하고 직선 집게를 사용하여 기본 근막에서 피부를 들어 올려 리트랙터 배치를 용이하게 합니다. T11 척추를 통해 T9의 척추를 노출하려면 메스의 무딘 가장자리를 사용하여 피하 조직및 기본 근막에 작은 중간 선 절개를 하고 미세 팁 비 날카로운 집게를 사용하여 해부하고 근막을 반영합니다. 라미네를 노출하려면 메스의 무딘 끝을 사용하여 T11 척추를 통해 T9의 척추를 따라 등쪽 트렁크와 패러가 나는 근육을 분할하고 무딘 미세 팁 집게를 사용하여 근육을 무딘 으로 사용하여 척추의 라미나를 노출시하십시오.
동일한 집게를 사용하여 T10 척추의 횡방향 공정 주위에 작은 포켓을 만들고 생성된 포켓 내의 횡방향 프로세스 아래에 곡면 집게의 프롱을 연결하여 T10 척추 본체를 안정화시합니다. T10 라미네를 따뜻한 식염수로 철저히 헹구고 면 봉면을 사용하여 뼈 표면을 깨끗하게 닦아 근육이나 인대 부착이 양측 표면을 따라 남아 있지 않습니다. 양측 간 라미네를 분해하려면 직경 0.55밀리미터, 7mm 길이 드릴 비트 팁을 사용하여 T9/T10 연골 공간에서 T10/T11 연골 공간으로 수직 경로를 추적하여 드릴 오프를 사용하는 T10 라미네를 따라 두 T10 라미네를 따라 비장 공간을 추적합니다.
경로가 추적되면, 드릴을 켜고 천천히 조심스럽게 T10 척추의 오른쪽 라미나에 수직 트렌치를 만들, 척추를 안정적으로 유지하기 위해 곡선 된 집게를 사용하여. 라미나 왼쪽에 있는 과정을 반복한 후, 따뜻한 식염수로 조직을 관개하여 남은 뼈 조각을 씻어낸다. 한 손으로 척추에 좋은 그립을 유지하는 것은이 단계에 필수적입니다.
또한 드릴을 사용하는 것이 편안하고 자신감을 가지는 것도 중요합니다. 다음으로, 각진 미세 팁 집게를 사용하여 가시 공정을 잡고 양자 드릴링에 의해 분리된 라미네의 전체 등등 세그먼트를 제거합니다. 그런 다음, 절제 창 내에서 척수의 명확한 시각화를 허용하기 위해 필요에 따라 관개 및 면봉.
노출된 코드 내척수손상을 유도하려면, 라미네절제술 창의 중앙에 코드를 슬라이스하기 위해 좁고 둥근 절단 날날을 사용하여 척추의 측면 오목을 쓸어내어 완전한 결부 손상을 유도한다. 편부 부상의 완전성을 확인하려면 무딘 미세 팁 집게를 사용하여 트랜섹션 부위의 나머지 연결을 제거합니다. 혈관 부 부위에서 hemostasis가 달성되면 T10 척추에 곡선 포스프의 그립을 해제하고 좋은 정점을 달성하기 위해 중간선을 따라 해부 된 근육의 가장자리를 함께 가져옵니다.
5/0 폴리글락틴 910 흡수성 봉합사를 사용하여 근육을 레이어에 봉합하여 척추의 자연적인 곡률이 봉합사 라인에서 긴장을 일으키지 않거나 봉합사를 열지 않도록 합니다. 그런 다음 5/0 비 흡수성 실크 봉합사를 사용하여 피하 조직과 피부를 닫고 폐쇄 하기 전에 피부 아래에 출혈, 혈전 또는 파편이 없는 지주니다. 마우스에서 횡부형 척수 손상을 유도하는 이 방법이 재현가능하고 일관된지 여부를 평가하기 위해, 부상당한 척수는 마우스에서 면역조직화학 및 행동 검사에 의해 분석될 수 있다.
성상세포 마커, 글리아 세동 산성 단백질에 대한 면역 라벨링은 손상되지 않은 척수의 경계의 경계를 용이하게합니다. 이 세로 섹션에서, 위치 부상 사이트는 예상대로 코드 그루터기 사이에 시각화 할 수 있습니다. 일관된 크기 결함은 평균 최소 거리 550.4, 플러스 또는 마이너스 17.3 마이크로미터로 트랜섹션 부위에서 유도될 수 있다.
오픈 필드 테스트의 바소 마우스 스케일을 배포하는 행동 데이터는 부상당한 마우스가 부상 후 뒷다리 움직임을 나타내지 않는다는 것을 보여줍니다. 따라서, 프로토콜은 완전하고 신뢰할 수 있는 횡분 형 상해를 생성하여 마비의 자발적인 반전으로 이어지지 않는 부상 수준 이하의 기능 손실을 초래한다. 그것은 잘못 드릴되면 라미네절창을 복구하는 것이 매우 까다로울 수 있기 때문에, 안정적인 손으로 직선으로 드릴조심하십시오.
척수 손상 유도 후, 약물 전달 및 세포 이식을 포함한 다양한 치료 옵션을 적용하여 척수 손상 회복을 개선하는 잠재적 치료법을 식별할 수 있습니다.
