이 작품에 대 한 자금이 미국 심장 협회 (16SDG29870005)와 노스 캐롤라이나 주립 대학 연구 및 혁신 씨앗 자금 통해 제공 되었다.

1. 1 일: 셀 및 시 약 준비 참고: 모든 셀 및 시 약 준비 생물 안전 캐비닛 샘플의 오염을 방지 하기 위해 수행 되어야 합니다.
<ol><li>따뜻한 필터링 Dulbecco &#39; s 수정이 글 &#39; s 매체 (DMEM), 소 태아 혈 청 (FBS), L-글루타민, 고 37 ° C 물 욕조에 페니실린/스.</li>
	<li>보완 하 여 준비 신생아 인간 피부 섬유 아 세포 (HDFn) 미디어와 10 %FBS, 1% 페니실린/스, 1 %DMEM 따뜻하게 L-글루타민.</li>
	<li>녹여 냉동 HDFns 및 x 200g에 8 분 분리기 cryopreservation 매체를 제거 하는 유리병. 준비 HDFn 미디어 T-75 문화 플라스 크에 1 x 10 6 셀/mL과 씨앗의 밀도에 셀 resuspend.</li>
	<li>장소 플라스 크 (37 ° C, 5% CO 2) 세포 증식을 허용 하는 인큐베이터에서.</li>
	<li>저장소 HDFn 미디어 4 ° c.</li>
	<li>필요에 따라 프로 및 안티 migratory 시 약 준비.</li>
</ol> 2. 주 3: 회전 타원 체 준비 <ol><li>다음 샘플의 오염을 방지 하기 위해 문화 후드에서 수행.</li>
	<li>셀 도달 80 %confluency 미디어를 발음 하 고 0.25%의 5 mL을 추가 트립 신-EDTA. 완전 세포를 플라스 크 표면에서 분리 하려면 5 분 동안 37 ° C 배양 기에서 저장소 술병.</li>
	<li>중화는 트립 신을 플라스 크를 따뜻하게 미디어의 5 mL을 추가.</li>
	<li>Microcentrifuge 튜브 믹스 Trypan 파랑의 10 μ와 세포 현 탁 액의 10 μ.</li>
	<li>200 x g.에서 8 분에 대 한 원래의 세포 현 탁 액 분리기</li>
	<li>세포 현 탁 액은 centrifuged 되 고, 하는 동안는 hemocytometer를 Trypan 블루 셀 서 스 펜 션의 10 μ를 추가 하 고 셀 수 수행.</li>
	<li>원심 분리, 다음 셀 펠 릿을 dislodging 없는 미디어 발음. 1.25 x 10 5 셀/mL의 농도에서 세포 펠 릿 resuspend.</li>
	<li>10 cm 배양 접시 회전 타원 체 성장 하는 동안 수산화 유지 하기의 밑에 버퍼링 하는 멸 균 인산 염 (PBS)의 5 mL을 추가.</li>
	<li>반전 페 트리 접시의 뚜껑. Petri 접시 뚜껑의 안쪽 표면에 세포 현 탁 액의 몇 20 μ 방울을 추가.</li>
	<li>빨리 뚜껑을 다시 반전 하 고 다시 제자리에 걸려 방울을 꺼내 려 하지 않도록 주의 되 고, 접시의 바닥. 그림 1에서는 성공적으로 형성 된 거 방울.</li>
	<li>신중 하 게 37 ° C 배양 기에서 접시를 놓고 고 교수형에 성장 spheroids 72 h.의 기간에 대 한 문화를 드롭</li>
</ol> 3. 제 6 일: 3D 매트릭스로 Spheroids 포함 <ol><li>다음 샘플의 오염을 방지 하기 위해 문화 후드에서 수행.</li>
	<li>응고 솔루션으로 많은 우물 잘 당 100 μ를 추가할 충분 한 양의 응고 솔루션을 생성 하는 첫번째 섬유 소 층의 형성에 대 한 (우물 당 1 회전 타원 체) 필요 합니다. 혈전 10 X HEPES 버퍼는 10%의 볼륨 (250 mM HEPES, 1500 mM NaCl, 50mm CaCl 2, pH 7.4), 2 mg/mL 인간의 fibrinogen, 및 0.1 U/mL 인간의 알파 트 롬 빈에 의해 구성 되어 있습니다. 응고 볼륨의 나머지는 초순 구성.
	<ol><li>추가 트 롬 빈 마지막 하 고 신속 하 게 솔루션을 추가 48-잘 접시에 원하는 우물 우물에 추가 되 고 이전 polymerizing에서 혈전을 방지 하기 위해.</li>
	</ol></li> <li>부드럽게 흔들어/탭 섬유 소 혈전 혼합물 전체를 잘, 코팅은 되도록 잘 플레이트 그리고 유해를 응고 레이어 수 있도록 1 h에 대 한 보육에 잘 접시 장소. 잘 플레이트 충분히 거품 형성;을 유발 하드 흔들 하지 마십시오 우물의 전체 코팅까지 간단 하 게 필요한 만큼 접시 바위. 더 큰 응고 볼륨 사용 하는 경우이 단계가 필요 하지 않을지도.</li>
	<li>섬유 소 레이어 spheroids 전송.
	<ol><li>제거 잘 플레이트와 교수형에 spheroids를 포함 하는 페 트리 접시는 인큐베이터에서 문화를 삭제 하 고 spheroids 현미경 검사. 다음 문화 후드에 접시를 놓고.</li>
		<li>신중 하 게 액세스할 수 있도록 페 트리 접시의 뚜껑을 거꾸로 매달려 놓기 문화.</li>
		<li>신중 하 게 우물의 바닥 코팅 섬유 소 생산 층을 찔린 하지 않도록 주의 복용 각 잘 중심으로 거꾸로 뚜껑에서 한 방울을 전송 1 mL 주사기에 부착 된 21 G 바늘을 사용 하 여. 효과적으로 드롭 전송, 바늘에 드롭 천천히 당겨. 다시 마자 전체 드롭 니 들; 내부 플런저를 당겨 중지 후퇴는 드롭 너무 멀리 공기 방울, 효과적인 회전 타원 체 전송 또는 후속 이미징 중단 될 수 있습니다 발생할 수 있습니다.</li>
		<li>Spheroids는 모든 원하는 우물으로 옮겼다 제대로 되도록 현미경 잘 판 검사.</li>
	</ol></li> <li>두 번째 섬유 소 층의 형성에 대 한 첫 번째 섬유 소 레이어 (3.2 단계)의 창조에 대 한 위의 같은 준비를 사용 하 여 다른 응고 솔루션을 만듭니다. 신중 하 게 각 포함 하는 회전 타원 체 드롭에 100 μ 플라스틱 및 spheroids는 그대로 하 고 우물의 가장자리에 밀어 안 되도록 다시 현미경 검사.</li>
	<li>인큐베이터에 잘 접시를 반환 하 고 두 번째 레이어 1 헤에 대 한 유해를 허용합니다</li>
</ol> 4. 주 6: 추가 프로 철새 억제 요인 <ol><li>따뜻한 HDFn 미디어 37 ° c.</li>
	<li>오염을 방지 하기 위해 후드에서 다음 단계를 수행 하십시오.</li>
	<li>미디어 프로/안티 migratory 에이전트를 평가의 적절 한 농도 포함 하 여 각 그룹에 대 한 준비.</li>
	<li>인큐베이터와 문화 후드에 장소에서 잘 플레이트 제거.</li>
	<li>제어 회전 타원 체 그룹의 각 음을 표준 미디어의 추가 500 μ, 마이그레이션 저해 회전 타원 체 그룹의 각 음을 억제 미디어의 500 μ 및 마이그레이션 향상 된 회전 타원 체 그룹의 각 음에 프로 철새 미디어의 500 μ.</li>
	<li>인큐베이터에 잘 접시를 반환.</li>
	<li>변경 미디어 모든 48 헤</li>
</ol> 5. 6-9 일: 평가 셀 이동과 확산 미디어 (0 h)와 24 h에 다음의 추가 직후 72 h. 옵션에 대 한 명시 야 현미경을 사용 하 여 <ol><li>이미지 spheroids: 각 시간 지점에서 경우 확인 하려면 z-스택 이미지 걸릴 마이그레이션 영역 외부에 1 차 초점의 비행기에서 발생 됩니다. 우리의 경험에의 하면이 발생 하지 않습니다; 그러나, 이것은 모든 실험의 경우 되도록 유용 하다.</li>
	<li>사용 ImageJ 셀 파생물에 각 잘 각 연속 시간 시점에서 각 회전 타원 체의 셀 테두리를 추적 하 고 사용 하 여 각 회전 타원 체에 대 한 영역에 백분율 증가 분석 하 여 결정 하는 &#34; 측정 &#34; 영역을 구하는 함수.</li>
</ol>

<ol>
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저자는 공개 없다.

이 프로토콜에는 상처 치유에 세포 이동의 시험 체 외에 3D 모델을 통해 소프트웨어 관련에 대 한 수 있습니다. 프로시저의 적절 한 실행에 중요 한 단계는 섬유 spheroids;의 적절 한 개발 준비 하는 동안 셀 농도 2500 셀/드롭의 초기 농도 주고 최적화 되었다 72 h의 인큐베이션 기간 동안 안정적으로 양식 spheroids을 허용. 셀의 수가 부족 사용 하는 경우 spheroids 효과적으로 집계 하지 있습니다 하 고 전송 하 고 섬유 소 층에 포함 되 고 시 떨어져 휴식 수 있습니다. 다른 세포 유형 사용 하는 경우 초기 세포 농도 및 회전 타원 체 시간 숙성 일관 되 고 안정 된 회전 타원 체 형성을 얻기 위하여 조정 될 수 있을 수 있습니다. 섬유 아 세포 보다는 더 느리게 증식 하는 세포 유형에 대 한 훨씬 높은 초기 세포 농도 72 시간 시간 범위 내에서 적절 한 회전 타원 체 형성을 보장 하기 위해 필요할 수 있습니다. 셀 교수형에 남아 있지 해야 문화 문화에 spheroids에 미디어를 변경 하는 무 능력 때문에 72 h 보다 더 드롭. 초기 회전 타원 체 크기에서 차이 때문에 고유의 생물 다양성; 예상 된다 우리가 해결이 변화 가능한 크기 차이 최소화 하기 위해 셀의 일관 된 수로 회전 타원 체 형성을 시작 하 여 정규화 데이터 비교에 대 한 허용 하는 시간이 지남에 따라 성장 하 여.
이 방법의 구현 하기 위한 주요 과제는 교수형에서 spheroids의 전송 응고 매트릭스에 문화를 드롭. 이 프로토콜을 사용 하 여 바늘과 주사기 거꾸로 Petri 접시 뚜껑에서 회전 타원 체 포함 된 물방울을 발음 하지만 핀셋 또는 손질된 팁에 부착 된 micropipettes의 사용과 같은 다른 방법 또한 효과적으로 전송에 적용 되는 교수형에서 spheroids를 드롭. Spheroids 주사기의 플런저를 당겨 안정적으로 옮겨질 수 있다 그는 물방울 그려집니다 바늘으로 천천히 가스 거품은 작은 물방울에 소개 하지 있도록 함으로써 다시는 물방울을 전송 하기 전에 약간. 주사기 플런저 해야만 뽑아 다시 바늘;에 전체 방울을가지고 충분히 다시 당기 어떤 추가 거품을 소개 되며 잘 접시의 우물에는 spheroids의 신뢰할 수 있는 전송 방해. 특수 거 문화 접시 회전 타원 체 문화를 단순화 하기 위해 사용할 수 있습니다 하지만 이렇게 단순히 표준 접시를 사용 하 여 보다 적은 비용 효율적인 수단을 드롭.
상처 치유 vivo에서, 동안 상처 영역을 침범 하는 섬유 아 세포 생산 섬유 소 매트릭스 저하 될 광범위 한 떠들고 프로 테아 제. 이 세포는 이후 새로운 세포 외 기질, 콜라겐, 손상 된 조직을 복구 하기 위해 주로 구성 된 음성 합성. 23 마이그레이션의이 기계 장치는 우리의 방법에 의해 캡처되지 않습니다 시스템의 한계를 나타내는 제어 침략에 대 한 수 있습니다. 또한 주목 해야 한다이 방법 활용 fibroblasts 시간이 지남에 저하 섬유 소 네트워크; 것 프로 테아 제 분 비 됩니다. 따라서, 경우 장기 (&gt; 72 시간) 마이그레이션 연구는 원하는, protease 억제제, aprotinin, 같은 세포 배양에 추가 되어야 한다.
이러한 제한에도 불구 하 고이 메서드를 간단 하 고 비용 효율적인, 재현 방법을 공부 하는 3D 마이그레이션에서 체 외에서세포를 제공 합니다. 동안 일반적으로 사용 되 2D 모델, 여기에 설명 된 3D 모델에서 성장 분석 보다 더 순수 관련 환경을 제공 2D 모델에서 제공 하는 정직 분석 유지 합니다. Spheroids는 단순 관찰법 또는 위상 현미경을 사용 하 여 시각화를 쉽게 하 고, 원하는 경우,이 방법은 쉽게 수정할 수 있습니다 형광 현미경 검사 법에 사용 하기 위해 세포 막과 매트릭스 단백질 붙일 라벨. 이 프로토콜을 만든 신생아 인간 피부 섬유 아 세포 조직 수리/개조에 섬유 아 세포 이동의 역할 때문에의 사용. 원하는 경우, 호 중구, 대 식 세포, keratinocytes 또는 다른 세포 유형 사용 될 수이 분석 결과에서 섬유 소 혈전 구조 변경 상처 치유에 관련 된 다른 세포 유형의 마이그레이션에 미치는 영향을 평가 하기 위해. 3D 자료도 수정할 수 있습니다 수 필요한 경우; 원하는 응용 프로그램에 따라 콜라겐 또는 다른 3D 매트릭스 자료 사용할 수 있습니다 섬유 소 매트릭스 대신 순수 관련 모델을 제공 하기 위하여. 상처 같은 환경에서 장기 세포 이동 공부에 대 한 유용한 모델 keratinocytes 콜라겐 보다는 섬유 아 세포와 섬유 소를 사용 하 여이 프로토콜으로 얻을 수 수 있습니다. 설명 하는 방법 또한 셀 마이그레이션에 더 큰 유연성과 비용 효율성을 허용 하 고 상처 치유 순수 관련 생체 외에서 모델의 구현을 통해 연구 필요 없이 즉시 vivo에서 작업 고전적인 2 차원 생체 외에서 연구를 다음과 같은.

상처 치유 하는 것은 부상 다음 조직의 무결성의 복원에 결과 복잡 한 과정 이다. 이 과정은 깨진 hemostasis, 염증, 확산 및 개장 하 고, 포함 하는 4 개의 겹치는 단계로 각 통제 되는 수용 성 신호, 세포-매트릭스 상호 작용 및 세포 세포 커뮤니케이션의 복잡 한 조합에 의해. 1 , 2 이러한 단서의 오케스트레이션 다양 한 상처 치유를 포함 하 여, 중요 한 것은, 셀 마이그레이션에 세포질 응답을 제어 합니다. 3 , 4 셀 이동 셀룰러 고기 그리고 기질 환경 생화학 및 생물 속성에 매우 역동적인 과정 이다. 5 셀 지속적으로 integrin 중재 경로;를 통해 그들의 기질 환경 조사 이 과정에는 다양 한 지형, 감 금, 강성, 등 행렬 속성을 셀 수 있습니다. 2 차원 (2D) 분석 세포 이동의 마이그레이션 lamellipodia 형성 걸 필 라 멘 트 번들의 세대를 통해 첨단에 의해 구동 됩니다 하는 방법을 보여 줍니다. 후행 가장자리에 수축과 수축 구동 actomyosin 함께에서 첨단에 초점 유착의 후속 대형 셀 앞으로 드라이브. 그러나 6 three-dimensional (3D) 셀룰러 이동은 현재 잘 이해 하지,, 최근 연구 결과 3D 마이그레이션이 보다 뚜렷이 보여는 afore 2d에서 메커니즘을 설명 하 고 가능성이 그렇지 메커니즘에 의해 구동 됩니다. 예를 들어, 피치 외최근 연구. 시연, ECM의 속성에 따라 셀 3D 행렬에 lamellipodium 및 lobopodium 마이그레이션 메커니즘을 구동 간에 전환할 수 있습니다. 7 셀 마이그레이션 응답을 치유 하는 상처의 중요 한 구성 요소 이므로 세포 이동의 3D 모델이 상처 치유 하는 동안 다양 한 자극에 생리 적인 응답을 이해 합니다. 상처 치유 과정, 잘 설립 스크래치 분석 결과 포함 하 여 동안 셀 이동의 최신 체 외에 모델 2D 활용 3D 매트릭스에서 마이그레이션에서 크게 다를 2D 표면에 셀 철새 동작 표시 되었습니다, 비록 단층 문화입니다. 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 더 최근 개발 분석 3 차원 매트릭스를 활용 하지만 여전히 따라서 진정으로 셀 환경 세를 정리 하는 능력을 제한 하는 매트릭스, 위에 단층 셀 문화 vivo에서. 15
여기에 설명 된 방법의 목적은 셀 마이그레이션 2D 표면이 아니라 순수 관련 3D 모델에 적용 된 자극과 관련 된 마이그레이션 응답의 더 강력한 이해를 얻기 위해 공부 하. 이 메서드는 셀 이동 활성화 하거나 연관 셀 마이그레이션 경로 억제 하는 요인의 3 차원 섬유 소 응고 매트릭스 내에서 평가 대 한 수 있습니다. 섬유 소 매트릭스 상처 치유;의 초기 단계에서 중요 한 역할 섬유 소 놀이 때문이 방법에 대 한 선정 다음 상해, 섬유 소 혈전 혈액 손실이 줄기 상처 환경에서 형성 되 고 조직 복구 및 리 모델링 하는 동안 초기 세포 침투에 대 한 비 계 역할. 2 , 16 , 17 , 18 , 19 , 20 또한, 섬유 소 임상 수술 실 란 트로 사용 하 고는 밀봉의 구성 세포 마이그레이션 및 궁극적인 결과 치유에 연결 되었습니다. 콕스 외이전 연구. 다양 한 섬유 소 및 섬유 소 실 란 트를 최적화 하기 위해 트 롬 빈 농도의 구성 하는 섬유 소 혈전과 섬유 마이그레이션을 조사. 이러한 연구에서 플라스틱 접시에 섬유 소 혈전에서 셀의 정량 했다. 20 여기 선물이 셀 3D 섬유 소 환경 내에서 이동의 정량화를 허용 하는 방법. 특히이 프로토콜에서 설명 하는 방법을 섬유 소를 사용 하는 동안이 모델은 원하는 대로, 교원 질 또는 다른 3D 매트릭스 같은 대안 매트릭스 재료를 사용 하 여 쉽게 수정할 수 있습니다. 또한, 선물이 구와 spheroids 사용 하 여가 분석이 결과에서 상처 침대로 구와 마이그레이션 기질 합성 및 조직 복구/리 모델링을 파라마운트 중요성 때문에. 그러나, 복구 하는 동안 프로세스 neutrophils 상처 침대, 대 식 세포에 의해 다음에 마이그레이션할 첫 번째 셀 유형입니다. 섬유 아 세포는 다음 상처 치유 과정의 증식 단계 시작 되는 시점에서 초기 부상 후 약 48 시간 상처 환경에 침투 하기 시작 합니다. 19 이 분석 결과 수 있을 쉽게 포함 하도록 수정 호 중구, 대 식 세포, 또는 다른 세포 유형 섬유 소 혈전 구조 변경 이러한 세포 유형의 마이그레이션에 미치는 영향을 평가 하기 위해. 21
이 분석 결과 구현 하려면 먼저, 섬유 회전 타원 체 형성 된다 줄기 세포 배양에 대 한 이전 설명의 수정을 사용 하 여. 22 섬유 회전 타원 체 이후 3D 섬유 소 매트릭스로 전송 되 고 파생물 수 다음 쉽게 모니터링 하 고 몇 일 동안 계량. 이 프로토콜은 계정에 생리 적 시스템의 3 차원 섬유 소 매트릭스 내에서 3D 셀 spheroids를 포함 하 여 따라서 세포 단층 모델 철새 행동을 함께 사용 하 여 2D 성장 표면에 의해 초래 하는 관련성에 한계를 피하, 동안 아직도 매우 제어 체 외에서 환경에서 셀 동작의 평가 대 한 허용.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;Materials&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&#039;s Modified Eagle&#039;s Medium, 4.5 g/L Glucose, w/ Sodium Pyruvate, w/out L-Glutamine</td><td>VWR</td><td>VWRL0148-0500</td><td>DMEM already containing L-glutamine can also be used</td></tr><tr><td>100mm Tissue Culture Dish, Non-Treated, Sterilized, Non-Pyrogenic</td><td>VWR</td><td>10861-594</td><td>Dishes of any size can be used for hanging drop culture&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum from USDA approved countries, heat inactivated, sterile-filtered, cell culture tested</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>12306C-500ML</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Fisher Scientific</td><td>ICN1680149</td><td>Not needed if using DMEM that already contains L-glutamine&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin Solution stabilized, sterile-filtered, with 10,000 units penicillin and 10 mg streptomycin/mL</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Human Dermal Fibroblasts, neonatal</td><td>Thermo Fisher</td><td>C0045C</td><td>Can be replaced with other cell type of interest</td></tr><tr><td>21 G x 1 1/2&#039; needle</td><td>BD&amp;nbsp;</td><td>305167</td><td>22 G x 1 1/2 needles will also work</td></tr><tr><td>1 mL syringe</td><td>VWR</td><td>89174-491</td><td>Syringes of any volume can be used</td></tr><tr><td>Cell Culture Multiwell Plates, Polystyrene, Greiner Bio-One (Individially Wrapped) (48 wells)</td><td>VWR</td><td>82051-004&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Human Fibrinogen - Plasminogen, von Willebrand Factor and Fibronectin Depleted</td><td>Enzyme Research Laboratories</td><td>FIB 3</td><td>Can be replaced with matrix protein of interest</td></tr><tr><td>Human Alpha Thrombin</td><td>Enzyme Research Laboratories</td><td>HT 1002a</td><td>May not be necessary depending on matrix protein of interest</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;&lt;em&gt;Equipment&lt;/em&gt;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSL2 cell culture hood</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cell culture incubator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Inverted microscope with 10X objective</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge compatibile with 15 mL tubes</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

characterizing cell migration within three-dimensional in vitro wound environments

현재, 대부분 체 외에서 모델의 상처 치유, 잘 설립 스크래치 분석 실험 등, 공부 하는 2 차원 표면에 셀 마이그레이션 및 상처 폐쇄를 포함. 그러나,는 vivo에서 상처 치유 장소에에서 생리 적인 환경을 3 차원 보다는 2 차원 이다. 그것은 셀 동작에 크게 차이가 점점 더 분명 되 고 2 차원 3 차원 환경; 대 따라서, 더 순수 관련 생체 외에서 상처 폐쇄에 셀 마이그레이션 동작을 공부에 대 한 모델에 대 한 필요가 있다. 여기 설명 하는 방법을 더 나은 이전 설립된 2 차원 스크래치 분석 실험 보다 생리 상태를 반영 하는 3 차원 모델에서 셀 이동의 연구에 대 한 수 있습니다. 이 모델의 목적은 셀 프로 또는 안티 migratory 요인 존재 섬유 소 매트릭스 내에 포함 된 회전 타원 체 몸에서 셀 이동의 시험을 통해 결과 평가 하는 것입니다. 이 메서드를 사용 하 여 3 차원 매트릭스에서 회전 타원 체 몸에서 세포 파생물 관찰 될 수 있다 고 명시 야 현미경 검사 법 및 회전 타원 체 본문 영역의 분석을 통해 시간이 지남에 쉽게 정량은. 셀 마이그레이션에 프로 철새 및 억제 요인의 효과 또한이 시스템에 평가할 수 있습니다. 연구원 관련 3 차원 상처 행렬에서 체 외에서세포 마이그레이션 분석의 간단한 방법을 제공 합니다, 그리고 에 체 외 의 관련성 증가 셀 학문 vivo에서 동물의 사용 하기 전에 모델입니다.

회전 타원 체 문화 구와 마이그레이션 체 외에 프로 및 안티 철새 에이전트의 효과 평가에 이용 될 수 있다 3D 구와 spheroids 72 h (그림 1)의 기간에 걸려 드롭 문화를 통해 형성 될 수 있습니다. 문화 기간에 따라 spheroids 응고 매트릭스에 포함 하 고 명시 야 현미경 검사 법 (그림 2)를 사용 하 여 몇 군데. Spheroids (흰색 테두리에 묶여 지역으로는 그림에 표시 된)의 초기 영역 ImageJ를 사용 하 여 결정 되었고, 회전 타원 체 시체에서 후속 셀 파생물의 정도 결정 하는 기준점으로 사용. spheroids에 대 한 초기 평균 지역 측정 104 μ m2 ± 1.1 x 104 μ m2 에 대 한 제어 spheroids, 104 μ m2 ± 1.1 x 104 μ m2 프로 철새에 대 한 x 4.4 x 4.3 결정 했다 spheroids, 그리고 4.5 104 ± 7.7 x 103 μ m2 에 대 한 안티 철새 spheroids x. 미디어 프로 또는 안티 migratory 요소를 포함 하는 회전 타원 체를 포함 하는 혈전에 추가 되었습니다 하 고 초기 회전 타원 체 몸에서 세포 파생물은 최종 이미지 원본 미디어 (그림 3) 추가 된 후 72 h를 찍은 모든 24 h를 몇 군데.
완료 되 면 실험, 회전 타원 체 성장 시간이 지남에 ImageJ를 사용 하 여 계산 하는 각 샘플에 대 한 회전 타원 체 영역에서 변화를 분석 했다. 그림 3에서 보듯이 각 시간 지점에서 셀 클러스터의 바깥쪽 가장자리 세포 파생물의 시간-관련 결정을 사용 되었다. 우리가 기대 하는 그림 3 에 표시 된 밖으로의 초점 명소는 세포 파편, 고 우리 우리의 정량화에 이것을 포함 하지 않습니다. 전체 크기 이미지 보기 회전 타원 체 몸;에서 신흥 명확 하 고, 연속 셀 테두리 추적 결과 결정할 때이 테두리입니다. T에서 원래 회전 타원 체 본문 영역을 기준으로 셀 파생물 영역을 정상화 하 여 세포 파생물 계량은 = 0 h 및 다음 원래 회전 타원 체 영역의 백분율 성장을 표현. 72 h 동안 셀 파생물의 정량화 spheroids 프로 철새 에이전트에 노출에 노출 하는 spheroids에 비해 원래 회전 타원 체 몸에서 마이그레이션의 크게 증가 정도 전시할 계시는 마이그레이션 억제 에이전트와 제어 spheroids 표준 미디어에 노출 (p &#60; 0.0001, 그림 4). 반대로, 반대로 철새 에이전트에 노출 하는 spheroids 마이그레이션 원본 회전 타원 체 본문 spheroids 제어에 비해 거리의 크게 감소 정도 전시 (p &#60; 0.0001).
비교를 위해, 우리는 스크래치 분석 결과 (그림 5)의 예를 제공. 이 분석 결과 시드 fibroblasts 24 잘 접시 2 mg/mL fibrinogen 코팅에 500, 000 셀/c m2 에 의해 수행 되었다. 섬유 아 세포 성장 하룻밤 허용 되었다. 잘 표면 했다 다음 피 펫 팁, 긁 히 고 셀 마이그레이션 스크래치 영역으로 24 시간 이상 촬영 했다. 이 분석 결과;에 제한이 있다 그림 5A에 제시 하는 대표적인 이미지 에서처럼 흠집 재현성이 있으며 경우에 따라 경계는 명확 하 게 delineated 없습니다. 그러나, 프로 및 안티 migratory 요인 존재 전체 마이그레이션 동향은 그 전술 변화와 마이그레이션 모드의 차이도 불구 하 고 3D 회전 타원 체 분석 결과 동일 합니다. 마이그레이션 속도 빠른 3D 회전 타원 체 분석 결과에 비해 2D 스크래치 분석 결과에 주목 한다. 폐쇄 프로 철새 에이전트의 가장 빠른 이었고 교양 프로 철새 에이전트 존재 하는 모든 샘플 완전히 24 시간 이내에 폐쇄 했다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56099/56099fig1.jpg"> 
그림 1 : 교수형에 인간 피부 섬유 아 세포 문화 드롭. 셀은 교수형에 남아 72 h 회전 타원 체 형성을 유도 하는 것에 대 한 문화를 드롭. 상단 (A) 및 (B) 측면도 교수형의 문화를 드롭 되 게 됩니다. (C) 회로도 매달려 드롭에서 회전 타원 체의 모습을 묘사 검은 선 접시의 상단, 핑크 구 미디어를 나타냅니다 나타내고 보라색 구체 대표는 회전 타원 체 내의 셀. <a href="//ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56099/56099fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56099/56099fig2.jpg"> 
그림 2 : 섬유 소 매트릭스에서 초기 삽입 후 회전 타원 체 모양 (t = 0 h 미디어의 추가 후) 10 배 확대에서 명시 야 현미경을 사용 하 여 몇 군데. (A, D) 제어 회전 타원 체; (B, E) 회전 타원 체 미디어;에 반대로 철새 에이전트에 노출 (C, F) 회전 타원 체 미디어 프로 철새 에이전트에 노출. 이미지 (D-F)로 표시 되 고 (A-C) 없이 화이트 라인 파생물 영역을 결정 하는 데 사용 하는 테두리를 나타냅니다. <a href="//ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56099/56099fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56099/56099fig3.jpg"> 
그림 3 : 회전 타원 체 모양을 72 h 10 배 확대에서 명시 야 현미경을 사용 하 여 몇 군데 후. (A, D) 제어 회전 타원 체; (B, E) 회전 타원 체 미디어;에 반대로 철새 에이전트에 노출 (C, F) 회전 타원 체 미디어 프로 철새 에이전트에 노출. 이미지 (D-F)로 표시 되 고 (A-C) 없이 화이트 라인 파생물 영역을 결정 하는 데 사용 하는 테두리를 나타냅니다. <a href="//ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56099/56099fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56099/56099fig4.jpg"> 
그림 4 : 회전 타원 체 성장 이상 72 h. 프로-철새 및 안티 철새 에이전트 미디어에 크게 영향을 표시 됩니다.구와 마이그레이션 및 3D 환경에서 확산 N = 3/그룹; * 나타냅니다 p &#60; 0.0001. 오차 막대는 표준 편차를 나타냅니다. <a href="//ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56099/56099fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56099/56099fig5.jpg"> 
그림 5 : 표준 2D 스크래치 분석 결과 비교. (A) 표준 스크래치 분석 결과 24 시간 동안에 세포 이동의 대표 이미지. 섬유 아 세포 미디어 프로 또는 안티 migratory 요인, 조건에서 재배 하 고 스크래치 폐쇄에 차이가 시간이 지남에 계량 했다. (B) 섬유 아 세포 성장 제어, 프로-철새, 또는 반대로 철새 미디어에 대 한 시간이 지남에 % 폐쇄. 마이그레이션 3D 회전 타원 체 분석 결과 대이 2D 분석 결과의 모드에 차이가 있지만, 전반적인 마이그레이션 동향 일관성 유지. N = 3/그룹; * 나타냅니다 p &#60; 0.05. 오차 막대는 표준 편차를 나타냅니다. <a href="//ecsource-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/56099/56099fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments

이 프로토콜의 목표 3 차원 섬유 소 매트릭스 내에서 셀 마이그레이션에 프로 및 안티 migratory 요인의 효과 평가 하는 것입니다.

환경 상처 3 차원 생체 외에서 내 셀 마이그레이션 특성화

Currently, most in vitro models of wound healing, such as well-established scratch assays, involve studying cell migration and wound closure on ...

characterizing-cell-migration-within-three-dimensional-vitro-wound

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments

7.6K 조회수.  North Carolina State University and The University of North Carolina - Chapel Hill. 이 프로토콜의 목표 3 차원 섬유 소 매트릭스 내에서 셀 마이그레이션에 프로 및 안티 migratory 요인의 효과 평가 하는 것입니다.

비디오: Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments

Evaluation of the Cell Invasion and Migration Process: A Comparison of the Video Microscope-based Scratch Wound Assay and the Boyden Chamber Assay

The invasion and migration abilities of tumor cells are main contributors to cancer progression and recurrence. Many studies have explored the migration and invasion abilities to understand how cancer cells disseminate, with the aim of developing new treatment strategies. Analysis of the cellular and molecular basis of these abilities has led to the characterization of cell mobility and the physicochemical properties of the cytoskeleton and cellular microenvironment. For many years, the Boyden chamber assay and the scratch wound assay have been the standard techniques to study cell invasion and migration. However, these two techniques have limitations. The Boyden chamber assay is difficult and time consuming, and the scratch wound assay has low reproducibility. Development of modern technologies, especially in microscopy, has increased the reproducibility of the scratch wound assay. Using powerful analysis systems, an &#34;in-incubator&#34; video microscope can be used to provide automatic and real-time analysis of cell migration and invasion. The aim of this paper is to report and compare the two assays used to study cell invasion and migration: the Boyden chamber assay and an optimized in vitro video microscope-based scratch wound assay.

This study reports two different methods for the analysis of cell invasion and migration: the Boyden chamber assay and the in vitro video microscope-based wound-healing assay. The protocols for these two experiments are described, and their benefits and disadvantages are compared.

셀 침공 및 마이그레이션 프로세스의 평가: 비디오 현미경-기반 스크래치의 비교 분석 결과 및 Boyden 챔버 분석 결과 상처

The invasion and migration abilities of tumor cells are main contributors to cancer progression and recurrence. Many studies have explored the migration ...

연구

암 연구학

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. Traditional 3D assays such as the Boyden Chamber require that cells are displaced from the original culture location and moved to a new environment. Not only does this disrupt the cellular processes that are intrinsic to the microenvironment, but it often results in a loss of cells. These problems are especially challenging when dealing with cells that are either rare, or extremely sensitive to their microenvironment. Here, we describe the development of a 3D invasion assay that avoids both concerns. In this assay, cells are plated within a small well and an ECM matrix containing a chemoattractant is laid atop the cells. This requires no cell displacement, and allows the cells to invade upwards into the matrix. In this assay, cell invasion as well as cell morphology can be assessed within the collagen gel. Using this assay, we characterize the invasive capacity of rare and sensitive cells; the hybrid cells resulting from fusion between breast cancer cells MCF7 and mesenchymal/multipotent stem/stroma cells (MSCs).

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

This protocol describes an inverted vertical invasion assay that could be used to quantify the migration and invasion capabilities of cells in a three-dimensional setting while preserving the cell microenvironment. This assay is suitable for rare and/or sensitive cells.

위쪽으로 이동: 간단 하 고 유연한 생체 외에서 3 차원 침공 분석 실험 프로토콜

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor metastasis. In this assay, cells are grown to form a confluent monolayer and a mechanical wound is created by scratching with a device. Then the migration rate of the cells towards the denuded area can be monitored by imaging. Our 8-channel mechanical wounder is designed to tackle most of the problems associated with the cell migration assay. Firstly, our wounder can be easily sterilized by autoclaving or with common disinfectants. Secondly, the individual adjustable pins allow even contact with the cell culture plate so that sharp and reproducible wounds can be created. Thirdly, the guiding bars on both sides of the wounder ensure consistent wounding position in each well. The use of disposable plastic pipette tips for wounding can further provide better handling of the wounder as well as to minimize cross-contamination. In conclusion, our cell wounder can provide researchers with a user friendly and reproducible device for performing the cell migration assay using the standard 96-well culture plate.

Here, we present a protocol to perform a semi-high throughput cell migration assay on a 96-well cell culture plate. This protocol is a fast, simple and economical method to create consistent scratch wounds on a cell monolayer.

96 웰 플레이트에 세포 마이그레이션 / 상처 치유를 수행하기위한 장치

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

발생학

Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic development, wound healing, and immune responses. However, cell migration is also a key mechanism in cancer enabling these cancer cells to detach from the primary tumor to start metastatic spreading. Within the past years various cell migration assays have been developed to analyze the migratory behavior of different cell types. Because the locomotory behavior of cells markedly differs between a two-dimensional (2D) and three-dimensional (3D) environment it can be assumed that the analysis of the migration of cells that are embedded within a 3D environment would yield in more significant cell migration data. The advantage of the described 3D collagen matrix migration assay is that cells are embedded within a physiological 3D network of collagen fibers representing the major component of the extracellular matrix. Due to time-lapse video microscopy real cell migration is measured allowing the determination of several migration parameters as well as their alterations in response to pro-migratory factors or inhibitors. Various cell types could be analyzed using this technique, including lymphocytes/leukocytes, stem cells, and tumor cells. Likewise, also cell clusters or spheroids could be embedded within the collagen matrix concomitant with analysis of the emigration of single cells from the cell cluster/ spheroid into the collagen lattice. We conclude that the 3D collagen matrix migration assay is a versatile method to analyze the migration of cells within a physiological-like 3D environment.

Cell migration is a biological phenomenon that is involved in a plethora of physiological, such as wound healing and immune responses, and pathophysiological processes, like cancer. The 3D-collagen matrix migration assay is a versatile tool to analyze the migratory properties of different cell types within in a 3D physiological-like environment.

세 가지 차원 콜라겐 매트릭스 내에서 세포의 이동 분석

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic ...

생체공학

Concentric Gel System to Study the Biophysical Role of Matrix Microenvironment on 3D Cell Migration

The ability of cells to migrate is crucial in a wide variety of cell functions throughout life&#160;from embryonic development and wound healing&#160;to tumor and cancer metastasis. Despite intense research efforts, the basic biochemical and biophysical principles of cell migration are still not fully understood, especially in the physiologically relevant three-dimensional (3D) microenvironments. Here, we describe an in vitro assay designed to allow quantitative examination of 3D cell migration behaviors. The method exploits the cell&#8217;s mechanosensing ability and propensity to migrate into previously unoccupied extracellular matrix (ECM). We use the invasion of highly invasive breast cancer cells, MDA-MB-231, in collagen gels as a model system. The spread of cell population and the migration dynamics of individual cells over weeks of culture can be monitored using live-cell imaging and analyzed to extract spatiotemporally-resolved data. Furthermore, the method is easily adaptable for diverse extracellular matrices, thus offering a simple yet powerful way to investigate the role of biophysical factors in the microenvironment on cell migration.

The mechanical properties and microstructure of the extracellular matrix strongly affect 3D migration of cells. An in vitro method to study the spatiotemporal cell migration behavior in biophysically variable environments, at both population and individual cell levels, is described.

동심 젤 시스템은 3 차원 세포의 이동에 매트릭스 미세 환경의 생물 물리학 역할을 연구하는

The ability of cells to migrate is crucial in a wide variety of cell functions throughout life&#160;from embryonic development and wound healing&#160;to ...

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

The aim of this work is to show a novel method to evaluate the ability of some immunomodulatory molecules, such as antimicrobial peptides (AMPs), to stimulate cell migration. Importantly, cell migration is a rate-limiting event during the wound-healing process to re-establish the integrity and normal function of tissue layers after injury. The advantage of this method over the classical assay, which is based on a manually made scratch in a cell monolayer, is the usage of special silicone culture inserts providing two compartments to create a cell-free pseudo-wound field with a well-defined width (500 &#956;m). In addition, due to an automated image analysis platform, it is possible to rapidly obtain quantitative data on the speed of wound closure and cell migration. More precisely, the effect of two frog-skin AMPs on the migration of bronchial epithelial cells will be shown. Furthermore, pretreatment of these cells with specific inhibitors will provide information on the molecular mechanisms underlying such events.

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

Here, we present a protocol to evaluate the effect of peptides on the migration of bronchial epithelial cells. This method allows for the rapid and highly reproducible obtainment of quantitative data on the speed of cell migration and wound closure.

상처 치유 분석 결과 셀 마이그레이션 평가 하는 새로운 체 외에

The aim of this work is to show a novel method to evaluate the ability of some immunomodulatory molecules, such as antimicrobial peptides (AMPs), to ...

면역학 및 감염병학

Microscopy Based Methods for the Assessment of Epithelial Cell Migration During In Vitro Wound Healing

Cell migration is a mandatory aspect for wound healing. Creating artificial wounds on research animal models often results in costly and complicated experimental procedures, while potentially lacking in precision. In vitro culture of epithelial cell lines provides a suitable platform for researching the cell migratory behavior in wound healing and the impact of treatments on these cells. The physiology of epithelial cells is often studied in non-confluent conditions; however, this approach may not resemble natural wound healing conditions. Disrupting the epithelium integrity by mechanical means generates a realistic model, but may impede the application of molecular techniques. Consequently, microscopy based techniques are optimal for studying epithelial cell migration in vitro. Here we detail two specific methods, the artificial wound scratch assay and the artificial migration front assay, that can obtain quantitative and qualitative data, respectively, on the migratory performance of epithelial cells.

Microscopy Based Methods for the Assessment of Epithelial Cell Migration During  In Vitro Wound Healing

This manuscript describes how incision-like lesions made on cultured epithelial cell monolayers conveniently model wound healing in vitro, allowing for imaging by confocal or laser scanning microscopy, and which can provide high-quality quantitative and qualitative data for studying both cell behavior and the mechanisms involved in migration.

현미경 기반 방법을 생체 외에서 상처 치유 중 상피 세포 이동의 평가 대 한

Cell migration is a mandatory aspect for wound healing. Creating artificial wounds on research animal models often results in costly and complicated ...

의학

In vitro Cell Migration and Invasion Assays

Migration is a key property of live cells and critical for normal development, immune response, and disease processes such as cancer metastasis and inflammation. Methods to examine cell migration are very useful and important for a wide range of biomedical research such as cancer biology, immunology, vascular biology, cell biology and developmental biology. Here we use tumor cell migration and invasion as an example and describe two related assays to illustrate the commonly used, easily accessible methods to measure these processes. The first method is the cell culture wound closure assay in which a scratch is generated on a confluent cell monolayer. The speed of wound closure and cell migration can be quantified by taking snapshot pictures with a regular inverted microscope at several time intervals. More detailed cell migratory behavior can be documented using the time-lapse microscopy system. The second method described in this paper is the transwell cell migration and invasion assay that measures the capacity of cell motility and invasiveness toward a chemo-attractant gradient. It is our goal to describe these methods in a highly accessible manner so that the procedures can be successfully performed in research laboratories even just with basic cell biology setup.

In vitro Cell Migration and Invasion Assays

Commonly used, highly accessible methods for examining cell migration and invasion in vitro are described. The first method is the cell wound closure assay that measures cell motility. The second method is the transwell migration and invasion assay that assesses the chemotactic and invasive capacity of cells.

체외 세포 이동 및 내습 분석 실험에서

Migration is a key property of live cells and critical for normal development, immune response, and disease processes such as cancer metastasis and ...

생물학

Scratch Migration Assay and Dorsal Skinfold Chamber for In Vitro and In Vivo Analysis of Wound Healing

Impaired cutaneous wound healing is a major concern for patients suffering from diabetes and for elderly people, and there is a need for an effective treatment. Appropriate in vitro and in vivo approaches are essential for the identification of new target molecules for drug treatments to improve the skin wound healing process. We identified the &#946;3 subunit of voltage-gated calcium channels (Cav&#946;3) as a potential target molecule to influence the wound healing in two independent assays, i.e., the in vitro scratch migration assay and the in vivo dorsal skinfold chamber model. Primary mouse embryonic fibroblasts (MEFs) acutely isolated from wild-type (WT) and Cav&#946;3-deficient mice (Cav&#946;3 KO) or fibroblasts acutely isolated from WT mice treated with siRNA to down-regulate the expression of the Cacnb3 gene, encoding Cav&#946;3, were used. A scratch was applied on a confluent cell monolayer and the gap closure was followed by taking microscopic images at defined time points until complete repopulation of the gap by the migrating cells. These images were analyzed, and the cell migration rate was determined for each condition. In an in vivo assay, we implanted a dorsal skinfold chamber on WT and Cav&#946;3 KO mice, applied a defined circular wound of 2 mm diameter, covered the wound with a glass coverslip to protect it from infections and desiccation, and monitored the macroscopic wound closure over time. Wound closure was significantly faster in Cacnb3-gene-deficient mice. Because the results of the in vivo and the in vitro assays correlate well, the in vitro assay may be useful for the high-throughput screening before validating the in vitro hits by the in vivo wound healing model. What we have shown here for wild-type and Cav&#946;3-deficient mice or cells might also be applicable for specific molecules other than Cav&#946;3.

Here, we present a protocol for an in vitro scratch assay using primary fibroblasts and for an in vivo skin wound healing assay in mice. Both assays are straightforward methods to assess in vitro and in vivo wound healing.

스크래치 마이그레이션 분석 및 등갈 피부 접기 챔버 에서 생체 외 및 상처 치유의 생체 내 분석

Impaired cutaneous wound healing is a major concern for patients suffering from diabetes and for elderly people, and there is a need for an effective ...

Quantifying Three-Dimensional Cell Migration Within and Into Granular Hydrogel Biomaterials

Granular hydrogel scaffolds hold significant potential in regenerative medicine, functioning either as carriers for cell delivery or as interfaces for tissue integration. This article introduces two novel approaches for quantifying cell migration within and into granular hydrogels, highlighting the distinct applications of these scaffolds. First, a cell monolayer interface assay that simulates tissue growth into granular hydrogels for integration purposes is presented. Second, a spheroid-based assay is described, designed to track cell movement within the hydrogel matrix, specifically suited for applications involving cell delivery. Both methods enable precise and controlled measurements of cell migration, providing a comprehensive toolkit for researchers utilizing granular hydrogel scaffolds. The motivation for these methods stems from the need for tailored control over cell migration within the scaffold to align with specific applications. By optimizing and standardizing these quantification techniques, researchers can iteratively refine granular hydrogel properties, ensuring their effectiveness in diverse regenerative medicine contexts. This robust set of quantitative tools offers new opportunities to enhance granular hydrogel scaffolds, advancing their use in both cell delivery and tissue integration applications.

A protocol for the quantitative evaluation of 3D cell migration within and into the interface of granular hydrogels is presented here.

Quantifying three-dimensional cell migration within and into granulular hydrogel biomaterials(과립 하이드로겔 생체 물질로의 3차원 세포 이동 정량화)

Granular hydrogel scaffolds hold significant potential in regenerative medicine, functioning either as carriers for cell delivery or as interfaces for ...