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비디오 기사는 돼지 3일 생존 모델에서 췌장 절제술 및 췌장 동종 이식 기술을 요약하고 방법에 대한 단계별 설명과 불안정하고 섬세한 돼지 내장 해부학을 다루기 위한 수술 요령 및 요령에 중점을 둡니다.
제1형 당뇨병 및 대사 증후군에서 췌장 이식의 유망한 결과에도 불구하고 이 최첨단 기술에 대한 가장 큰 우려는 이식에 적합한 것으로 간주되는 장기의 부족입니다. 높은 혈관 내 저항, 섬세한 실질내 모세혈관 골격 및 장간막 혈관 주위의 복잡한 소엽 해부학은 이 기관을 간 및 신장과 같은 기관에 비해 손상에 더 취약하고 사소한 외상에 덜 관대하게 만듭니다. 꼼꼼한 외과적 해부와 신중한 조직 취급은 췌장 이식의 전체 운동의 초석을 형성합니다. 인체 해부학과 비교할 때 돼지 췌장의 해부학적 구조와 주변 장간막 혈관 및 장기 사이의 형태학적 유사성으로 인해 돼지 모델에서 기술을 시연하면 이를 인간 환경에 가장 정확하게 외삽하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기사는 돼지 3일 생존 모델에서 이 매우 민감한 장기의 이식 성공률을 높이기 위해 따라야 하는 필수 수술 팁과 요령을 간략하게 설명하는 것을 목표로 합니다.
지난 수십 년 동안 수술 전후 관리 전략과 수술 기법이 크게 발전하여 췌장 이식이 말기 신장 질환(일반적으로 신장 이식과 함께)이 있는 당뇨병 치료를 위한 가장 유망한 전략 중 하나로 발전했습니다.1 . 그러나 이식편 췌장염, 허혈 재관류 손상 및 혈관 혈전증과 같은 합병증은 성공적인 결과를 보장하기 위해 극복해야 할 가장 큰 과제로 남아 있으며, 더 손상된 확장 기준 이식편에서 더욱 그렇습니다2. 또한, 췌장 이식편은 조달 과정에서 가장 일반적으로 폐기되는 이식편이며 모든 장기에 대해 이용률이 가장 낮습니다(9%). 따라서 기계 관류는 간, 신장 및 폐 이식에서 달성된 것과 유사한 이식편 이용률을 높이는 것을 목표로 췌장 이식편에 최적의 항상성 환경을 제공하는 것을 목표로 합니다4. 돼지 췌장 해부학은 소엽 구조(3개의 엽으로 구성), 장간막-문맥 축 주변의 확장, 장간막 혈관 변이(40%-50%), 십이지장5의 C 루프를 따라 있는 섬세한 혈관 채널 측면에서 복잡합니다. 이러한 해부학적 특성은 췌장-십이지장 이식편 회수와 수용자 췌장 절제술 모두에서 의원성 췌장 당뇨병 상태, 즉 공복 혈당 수치가 8mmol/L 이상인 외과적으로 유발된 당뇨병 상태를 유도하는 데 도전적인 해부에 기여합니다. 이러한 특징을 바탕으로 이식을 통한 돼지 췌장 절제술은 말기에 대한 최종 치료로 인간에게 수행할 수 있는 기술의 가장 가까운 복제를 제공합니다 당뇨병. 본 기사는 다음과 같은 측면을 다루는 것을 목표로 합니다: (i) 수혜자 췌장 절제술 및 췌장 이식 이식 중 수술 전후 돼지 관리의 개요; (ii) 수혜자 췌장 절제술 및 췌장-십이지장 이식편의 이식에 대한 기술적 단계별 세부 사항 및 (iii) 이식편 및 수혜자 부상을 최소화하기 위한 돼지 모델에서 기증자 및 수혜자 췌장 수술의 팁과 요령.
이 프로토콜은 토론토 종합 연구 기관의 동물 관리위원회로부터 윤리적 승인을 받았습니다. 동물들은 캐나다 온타리오 주 국립 보건원 (NIH)의 국립 의학 연구 협회 (National Society of Medical Research) 및 실험실 동물 관리 가이드 (Guide for the care of laboratory animals)에 따라 인도적 보살핌을 받았습니다. 이 연구에서는 체중이 40-50kg인 15주령의 혈연 관계가 없는 요크셔 수컷 돼지를 사용했습니다.
참고: 연구의 전체 프로토콜은 다음과 같은 주요 단계로 나뉩니다: (i) 장기 회수 및 백테이블 준비; (ii) 수혜자 전체 췌장 절제술 및 (iii) 이식 이식. 기증자와 수혜자의 전체 수술은 1 일 안에 완료됩니다.
1. 기증자 장기 회수 및 백테이블 준비
참고: 장기 적출 방법은 별도의 프로토콜6에 설명되어 있습니다. 그러나 프로토콜은 수술 기술(기증자 수술과 관련된 수술 팁)과 관련된 몇 가지 추가 요점과 함께 여기에 간단히 설명되어 있습니다.
2. 수상자 췌장 절제술
그림 1: 한 꺼번에 절제된 췌장 절제술 표본. 생체 내에서 문맥을 둘러싼 췌장 조직의 고리에 주목하십시오. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2 : 십이지장 이미지. 보존된 혈관 아케이드(화살촉)가 있는 십이지장의 C 루프를 주변 공장 루프와 비교하고 혼잡에 대해 평가했습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
5가지 췌장 이식 생존 모델의 수술 전후 및 수술 후 최대 3일의 생화학적 매개변수가 아래에 요약되어 있습니다(연대순으로 PTX 1에서 5로 번호가 매겨짐). 총 5건의 췌장 이식 중 모두 3일의 생존 기간 동안 잘 지냈으며, 이는 전반적인 건강 상태와 췌장 손상 및 내분비 기능 검사에서 알 수 있습니다. 아래에 묘사된 결과는 이식편의 정적 냉장 보관 후 췌장 동종 이식에 이어 수용자 췌장 절제술의 3일 생존 모델의 경험을 나타냅니다.
췌장 절제술의 평균 수술 시간은 52분(45-64분)이었습니다. 이것은 뇌사 심장 박동 모델이었기 때문에 기증자에게는 수축기 온난 허혈 단계가 없었습니다. 측면 교합 카바 클램프를 적용한 후 이식편의 재관류까지의 평균 수혜자 온난 허혈 시간은 49.5분(40-55분)이었습니다. 5개의 이식편 모두 연구 프로토콜에 따라 5시간(300분)의 저온 허혈 시간을 가졌습니다. 모든 동물은 하루에 두 번 300mg Syp 사이클로스포린 형태로 면역 억제를 받았습니다.
수술 전후 임상 및 생화학적 매개변수
재관류 후 1시간의 평균 심박수는 135회/분(120-170회/분)이었습니다. 평균 혈압은 37 mmHg (30-55 mmHg)였으며, 일반적으로 고용량의 노르 에피네프린 주입으로 유지되었습니다. 다섯 가지 경우 모두 노르에피네프린을 테이퍼링하고 중단한 후 동물을 다시 우리로 옮길 수 있습니다. 젖산 수치는 재관류 후 3시간 동안 수술실에서 모니터링되었습니다. 추세는 그림 3에 나와 있습니다.
그림 3: 이식편 재관류 후 혈청 젖산 수준. 경향은 재관류의 처음 3시간 동안 측정되었습니다. Y축은 젖산 값(mmol/L 단위)을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
수술 후 임상 및 췌장 손상 생화학적 매개변수
5마리 동물 모두 임상적으로 깨어 있었고, 재관류 후 5-6시간 이내에 사지의 활동적인 움직임과 호흡 패턴에 의해 분명해졌습니다. 그들 모두는 활동적이었고, 경구 사료와 약물을 받아들였으며, 수술 후 1일째 아침까지 소변과 대변을 배출했습니다.
처음 3일 동안의 수술 후 아밀라아제 수치는 그림 4에 요약되어 있습니다.
그림 4: 이식편 재관류 후 혈청 아밀라아제 수준. 이러한 경향은 이식 후 처음 3일 동안 측정되었습니다. Y축은 아밀라아제 수준(U/L)을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
처음 3일 동안의 수술 후 혈청 리파아제 수치는 그림 5에 요약되어 있습니다.
그림 5: 이식편 재관류 후 혈청 리파아제 수준. 이러한 경향은 이식 후 처음 3일 동안 측정되었습니다. Y축은 리파아제 수준(U/L)을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
수술 후 혈청 젖산 탈수소효소(LDH) 수치는 아래 그림 6에 요약되어 있습니다.
그림 6: 이식편 재관류 후 혈청 LDH 수준. 경향은 이식 후 처음 3일 동안 측정되었습니다. Y축은 LDH 수준(U/L)을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
수술 후 포도당 내성 검사
수술 후 3일째에 120분 IV 포도당 내성 검사를 수행했습니다. 50% 포도당을 함유한 50mL 용량을 중심정맥 카테터를 통해 주입하고 시간을 0분으로 기록하였다. 혈액 샘플을 2분, 5분, 10분, 20분, 30분, 60분, 90분 및 120분에 연속적으로 채취하고, 글루코스 수준에 대해 처리하였다. 샘플의 나머지를 8,000 x g 에서 10분 동안 원심분리하고, 상청액을 -80°C에서 3개의 마이크로원심분리 튜브에 저장하였다. 도 7 은 5가지 경우(PTX 1-5)에 대한 내당능 시험의 경향을 나타낸다.
그림 7: IV 포도당 내성 검사로 평가한 혈청 포도당 수치. 혈청 포도당 수치는 IV 포도당 내성 테스트를 사용하여 0-120분 동안 평가되었고 PTX 1-5 사이에서 비교되었습니다. Y축은 포도당 수준(mmol/L)을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
현재 프로토콜은 돼지 모델에서 췌장 절제술 및 췌장 동종 이식의 기술과 타당성을 입증하기 위해 수행되었습니다. 동물을 이식 후 3일 동안 관찰하여 췌장 절제술 및 동종 이식 기술의 신뢰성을 입증했습니다. 모든 동물을 항생제, 수액, 진통제, 보충 영양 및 면역억제제(즉, 사이클로스포린)의 표준화된 동물 관리 프로토콜을 사용하여 수술 후 3일 동안 모니터링하고 간호했습니다. 그들은 수술 후 3일째(임상적 악화로 인해 요구되는 경우 72시간 또는 그 이전)에 윤리적으로 승인된 인도적 기술에 의해 희생되었습니다. 꼬리, 코퍼스, 머리 및 십이지장에서 생검을 채취하여 조직병리학적 분석을 위해 보냈고, 나머지 절편은 RNA 분리 완충액에 보관하고 나중에 사용하기 위해 급속 냉동(-80°C)했습니다.
췌장 절제술에 의한 돼지 모델에서 의원 성 당뇨병의 유도를 성공적으로 입증하려는 최초의 시도 중 하나는 Chaiba et al. 2011 년 체중 27-33kg의 백인 수컷 돼지 10 마리 코호트에서 발표되었습니다7. 이 그룹은 돼지 모델에서 성공적인 췌장 절제술을 위한 로드맵을 수립하는 해부학적 평면과 랜드마크를 시연했습니다. Prudhomme et al. 2020년, 수컷 서스크로파 돼지 3마리 코호트에서 당뇨병 유도 및 췌장 동종 이식의 타당성을 입증했다8. 당뇨병의 유도는 전체 췌장 절제술 후 3시간 후에 C 펩티드 수준에 의해 평가되었습니다. 요크셔 돼지에서 당뇨병의 의학적 유도는 1993년 Grussner et al.에 의해 성공적으로 입증되었으며, 요크셔 육상 돼지67마리의 코호트에서 사망률은 0%였다 9. 췌장 절제술에 의한 성공적인 당뇨병 유도는 2022년 우리 그룹(Mazilescu et al.)에 의해 동물의 임상적 웰빙에 따라 혈청 포도당 수치를 사용하여 평가되었습니다10. 성공적인 유도가 확립된 후, 우리 그룹은 프로토콜의 후속 단계에서 췌장 절제술 후 췌장 동종 이식을 진행했습니다.
이 연구의 중요한 한계는 동물의 모든 코호트에서 균일한 복제 가능성을 보장하는 것입니다. 이것은 주로 계절성 독감, 동물 군병 등에 걸리기 쉽다는 점에서 돼지 모델의 취약성 때문입니다. 이러한 요인은 수술에 사용되는 기술에 관계없이 결과를 부정적으로 왜곡하는 데 기여할 수 있습니다.
췌장 이식의 결과에 영향을 미치는 요인으로는 일반적인 건강 상태, 심폐 상태, 계절성 감염과 같은 수술 전 상태와 기계 관류 종료 시 이식편 상태, 수술 중 이식편 취급, 재관류 시 혈역학적 변화와 같은 수술 전후 상태가 포함된다11. 외과적 관점에서 볼 때, 생체 내 및 상피내(ex situ ) 이식편 취급을 최소화하는 것은 이 매우 불안정한 이식 모델에서 최소한으로 손상된 이식편의 이식을 보장하는 데 중요한 역할을 한다12. 관류 용액, 투석 용액 및 기계 관류 중 생리학적 매개변수의 조성 변형도 이식 결과를 결정할 수 있으며 현재 그룹에서 평가 중입니다. 기계 관류 이식편에서 성공적인 동종 이식 모델을 구축하면 향후 심장사 후 기증(DCD) 및 췌장 확장 냉장 보관(ECS)과 같은 확장된 기준 이식을 위한 길을 더욱 열 수 있습니다.
저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.
없음.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Belzer UW Cold storage solution | Bridge to life Ltd (Columbia, SC, USA) | 4055 | |
Calcium gluconate (10%) | Fresenius Kabi Canada Ltd (Toronto, ON) | C360019 | |
Composelect (blood collection bags) | Fresenius Kabi Canada Ltd (Toronto, ON) | PQ31555 | |
Heparin (10000 IU/10 ml) | Fresenius Kabi Canada Ltd (Toronto, ON) | C504710 | |
Lactated Ringer's | Baxter (Mississauga, ON, Canada) | JB2324 | |
Percutaneous Sheath Introducer Set with Integral Hemostasis Valve/side Port for use with 7-7.5 Fr Catheters | Arrow International LLC | SI-09880 | |
Sodium bicarbonate (8.4%) | Fresenius Kabi Canada Ltd (Toronto, ON) | C908950 | |
Solu-Medrol | Pfizer Canada Inc. | 52246-14-2 | |
Surgical retreival and transplant instrument set |
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