Name: murine salivary functional assessment via pilocarpine stimulation following fractionated radiation
Uploaded: 2018-05-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation at JoVE.com

מחקר דיווח בפרסום זה נתמך על ידי מחקר ואסטתיים (NIDCR) את נבחרת המכון של שיניים ו של המכון הלאומי לסרטן (NCI) של מכוני הבריאות הלאומיים תחת פרס מספר R56 DE025098, UG3 DE027695 ו F30 CA206296. התוכן הוא אך ורק באחריות המחברים, ואינם מייצגים בהכרח את הנופים הרשמי של מכוני הבריאות הלאומיים. עבודה זו נתמכה גם על ידי 1206219 DMR של ה-NSF וחדשנות IADR את פרס טיפול אוראלי (2016).
ברצוננו להודות מרוימה ערי ד ר אנדרו Hollomon לסיוע שלהם עם אוסף רוק. ברצוננו להודות וונג פיי-לון לסיוע שלו עם ניתוח בלוטת. ברצוננו להודות אינגלס מתיו על עזרתו איור הכנה. ברצוננו להודות ד ר איליין Smolock, אמילי וו על קריאה ביקורתית של כתב היד הזה.

כל ויוו ההליכים המתוארים להלן אושרו על ידי ועדת האוניברסיטה חיה משאבים ב אוניברסיטת רוצ'סטר, רוצ'סטר. NY.
1. הכנה
<ol><li>באמצעות איזון האנליטי, שוקלים 20 מ"ג פילוקרפין. להמיס ב 2 מ ל תמיסת סטרילית צינור microcentrifuge. הערה: כי פילוקרפין רגיש אור ולא מאבד את הפעילות לאורך זמן, פתרון זה צריך להיות מוכן ביום ההזרקה, מוגן מפני אור עד מנוהל.</li>
	<li>באמצעות איזון האנליטי, שוקל ולזהות כל אוסף צינורות, נימים זכוכית. המספר של אוסף צינורות, נימים זכוכית צריך להתאים את מספר עכברים.</li>
</ol>2-מיכשור וציוד
<ol><li>שוקלים C57/BL6 עכברים באמצעות איזון האנליטי.</li>
	<li>באמצעות מזרק 0.5 mL עם 29G x ½" מחט, עזים ומתנגד עכברים עם פתרון סטרילי מלוחים intraperitoneally מוזרק של 100 מ"ג/ק"ג קטמין ו- 10 מ"ג/ק"ג חריגות השירותים הווטרינריים. המשך לשלב הבא כאשר העכבר אינו מגיב לגירויים (דהיינו היעדר רפלקס הנסיגה פדלים), אשר בדרך כלל מתרחשת בתוך 5-10 דקות לאחר ההזרקה.</li>
	<li>לאחר dispensing חומר סיכה על המוליך שקצהו כותנה, בעדינות להחיל על העיניים, מקם את העכבר במצב פרקדן על הבמה. החיה anesthetized חייב להישמר על משטח חם. הערה: כל הפעולות מבוצעות בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>אבטח את האף הגפיים, זנב אל הבמה באמצעות הדבקה.</li>
	<li>נקי, להרטיב את הצוואר עם המחיקה אלכוהול. הערה: זה יעזור למנוע חדירה החתכים הבאים פרווה.</li>
	<li>מרימה את העור בצוואר קו האמצע הגחון עם מלקחיים, לעשות חתך קטן, שטחי באמצעות מספריים ויבתר. להנחות את המספריים לתוך הפתח ופתח לאט את להבי subcutaneously כדי להפריד בין רקמות מטוסים.</li>
	<li>יש לשמור על עור הרים, לחתוך בזהירות כדי 1 ס מ מתחת בפה.</li>
	<li>להזמין שני חתכים לרוחב-ההיבט נחות מעולה של החתך הראשון. באמצעות מלקחיים, בעדינות משקפים משם את העור כדי לאפשר גישה למבנים הראש והצוואר.</li>
	<li>באמצעות המיקרוסקופ ויבתר בהגדלה X 8, להמחיש את בלוטות submandibular (קו האמצע: איור 1).</li>
	<li>בעזרת מלקחיים בסדר, הרם בעדינות את בלוטות לחשוף את השרירים infrahyoid (רצועה) ארבעה המכסים את קנה הנשימה. הימנע קריעה או לשבש את להערכת שמסביב או צינורות excretory.</li>
	<li>אם אוסף רוק מכל עכבר אחד או יותר, חזור על השלבים 2.1-2.10 עם העכבר כל לפני שתמשיך. הערה: הליך זה שניתן לבצע בביטחה על עד 5 עכברים בו-זמנית.</li>
	<li>במספריים ויבתר קטן, להסיר את החלק המדיאלי של השרירים רצועה בעודם שוהים קרוב קו האמצע ככל האפשר. חותכים רק ככל הדרוש להמחיש את קנה הנשימה ולשמור רצועה השרירים מהדרך במהלך ההליך. הימנע חותך כל ספינות בקרבת מקום, כי אם יש דלדול אחסון משני דימום משמעותי, פילוקרפין לא יהיה יעיל וגורם הפרשת.</li>
	<li>משקפים את השרירים רצועה מן קנה הנשימה.</li>
	<li>דמיינו את הקול, קנה הנשימה, בלוטת התריס. ודא קנה הנשימה ברור עודפי רקמת.</li>
	<li>לבצע חתך אופקי לקנה נחות/אחוריים בלוטת התריס באמצעות מספריים ויבתר קטנות. ודא דרכי הנשימה פטנטים וברור של נוזל.</li>
</ol>3. רוק אוסף
<ol><li>הוצא את הקלטת ליד הפה ואת הזווית לנתיחה הבמה כלפי מטה (45°, cranially) כדי לסייע עם זרימת הרוק.</li>
	<li>באמצעות מזרק 0.5 mL עם 29G x ½" מחט, לבצע הזרקה בקרום הבטן של 10 µL/g הגוף משקל פילוקרפין עבור מנה סך של 100 מ"ג/ק"ג.</li>
	<li>להפעיל טיימר. אם מינון עכברים מרובים, להפחית זמן חפיפה ובמהירות ועל ידי יש לי עוזר בו-זמנית להזריק העכברים הנותרים.</li>
	<li>בעזרת מלקחיים רגילה, פתח את הפה לגישה צינור קפילרי.</li>
	<li>פעם חרוז של רוק נצפית בפה, מקום לסוף הפרוקסימלית צינור קפילרי לתוך הנוזל, בקצה הדיסטלי להציב לתוך צינור איסוף ממוקם מתחת לזירה ויבתר (שני צינורות מראש שקל). הערה: בעכברים הנשי C57/BL6 6-10 שבועות של גיל, ריור ברוטו מתרחשת בתוך 2 דקות של הזרקת פילוקרפין.</li>
	<li>אם רוק בניין בפה, אך לא זורם דרך הצינור, reattempt הצעד הקודם. ודא כי הצינור אינם ממוקמים ישירות נגד משטח הרירית, אשר יכול לחסום את הים.</li>
	<li>לאסוף את הרוק עבור סכום כולל של 12 דקות בעקבות גירוי פילוקרפין. להבטיח פיונית יישאר נקי. הערה: נפח מוגבר, הפרשות (הרוק, בדרכי השתן, צואה) תקינים בתקופה זו.</li>
	<li>אם עכברים יש מדוכא רוק פונקציה (למשל., עקב פציעה או התערבות), להעביר את הנוזלים הנותרים מן הפה אל הצינור אוסף באמצעות micropipette P200. אם איסוף של עכברים מרובים, ודא כי טיפים משתנים.</li>
	<li>להקליט את המשקל של רוק שנאספו פלוס צינורות 12 דקות לאחר ההזרקה פילוקרפין.</li>
</ol>4. בלוטת לנתיחה
<ol><li>המתת חסד עכברים מאת CO2 המתת חסד (כפי שמתואר ההנחיות AVMA המתת חסד של בעלי חיים: 2013 מהדורה) ואחריו ניקור חזה, דואגת לשמר את המבנים של הראש והצוואר. מסיבה זו, להימנע נקע בצוואר הרחם כשיטה של המתת חסד.</li>
	<li>הנח את העכבר במצב פרקדן על הבמה. מיקום מחדש של בלוטות באתר המקורי מעל קנה הנשימה (איור 1).</li>
	<li>באמצעות מיקרוסקופ ויבתר תחת הגדלה X 8, להמחיש את בלוטות העיקריים: PG, SMG, סיג. כדי להבחין בין הבלוטות בזמן, לזהות כי פ ג הוא מפוזר, משקר לרוחב SMG, סיג. הערה: אם לנתח את PG, זה צריך להיעשות קודם כי זה לפחות מוגדר וכנראה להיקרע.</li>
	<li>לתפוס את הזנב של PG עם מלקחיים, משיכתו הרחק מבנים המשמשים כבסיס, ולהחיל בעדינות את המתח לפני חיתוך ראש PG עם לנתח מספריים.</li>
	<li>הפרה הקפסולה המקיפים את SMGs באמצעות מלקחיים. הפרד בעדינות את SMG ימינה ושמאלה.</li>
	<li>חינם ההיבט הגבי SMG מרקמות nonglandular מודבקת באמצעות מלקחיים.</li>
	<li>הסר את SMG הצוואר על ידי ציור צינור של וורטון מתוח עם מלקחיים, לחתוך את צינור עם לנתח מספריים.</li>
	<li>בעדינות להפריד את סיג SMG באמצעות מלקחיים. הערה: סיג הוא בהיבט superolateral של SMG.</li>
	<li>באמצעות איזון אנליטית, להקליט SMG משקולות.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Bradley, P., O'Hara, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+of+the+salivary+glands.">Diseases of the salivary glands.</a> Surgery (Oxford). 33 (12), 614-619 (2015).</li><li>Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+enhancement+therapies.">Salivary enhancement therapies.</a> Caries Research. 38 (3), 241-246 (2004).</li><li>Konings, A. W. T., Coppes, R. P., Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+mechanism+of+salivary+gland+radiosensitivity.">On the mechanism of salivary gland radiosensitivity.</a> International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 62 (4), 1187-1194 (2005).</li><li>Burlage, F. R., Coppes, R. P., Meertens, H., Stokman, M. A., Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parotid+and+submandibular/sublingual+salivary+flow+during+high+dose+radiotherapy.">Parotid and submandibular/sublingual salivary flow during high dose radiotherapy.</a> Radiotherapy and Oncology. 61 (3), 271-274 (2001).</li><li>Aure, M. H., Konieczny, S. F., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+gland+homeostasis+is+maintained+through+acinar+cell+self-duplication.">Salivary gland homeostasis is maintained through acinar cell self-duplication.</a> Developmental Cell. 33 (2), 231-237 (2015).</li><li>Aure, M. H., Arany, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+Glands:+Stem+Cells,+Self-duplication,+or+Both?.">Salivary Glands: Stem Cells, Self-duplication, or Both?.</a> Journal of Dental Research. 94 (11), 1502-1507 (2015).</li><li>Ono, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+effects+of+cevimeline+and+pilocarpine+on+salivary+mechanisms,+cardiovascular+response+and+thirst+sensation+in+rats.">Distinct effects of cevimeline and pilocarpine on salivary mechanisms, cardiovascular response and thirst sensation in rats.</a> Archives of Oral Biology. 57 (4), 421-428 (2012).</li><li>Proctor, G. B., Carpenter, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+salivary+gland+function+by+autonomic+nerves.">Regulation of salivary gland function by autonomic nerves.</a> Auton Neuroscience. 133 (1), 3-18 (2007).</li><li>Nezu, A., Morita, T., Tojyo, Y., Nagai, T., Tanimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+agonistic+effects+of+pilocarpine+on+Ca(2+)+responses+and+salivary+secretion+in+the+submandibular+glands+of+live+animals.">Partial agonistic effects of pilocarpine on Ca(2+) responses and salivary secretion in the submandibular glands of live animals.</a> Experimental Physiology. 100 (6), 640-651 (2015).</li><li>Urita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rebamipide+and+mosapride+enhance+pilocarpine-induced+salivation.">Rebamipide and mosapride enhance pilocarpine-induced salivation.</a> North American Journal of Medical Sciences. 1 (3), 121-124 (2009).</li><li>Arany, S., Benoit, D. S., Dewhurst, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle-mediated+gene+silencing+confers+radioprotection+to+salivary+glands+in+vivo.">Nanoparticle-mediated gene silencing confers radioprotection to salivary glands in vivo.</a> Molecular Therapy. 21 (6), 1182-1194 (2013).</li><li>Kondo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+differences+in+the+acinar+cells+of+the+murine+major+salivary+glands.">Functional differences in the acinar cells of the murine major salivary glands.</a> Journal of Dental Research. 94 (5), 715-721 (2015).</li><li>Evans, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+impairment+of+salivation+in+Na+/K+/2Cl-+cotransporter+(NKCC1)-deficient+mice.">Severe impairment of salivation in Na+/K+/2Cl- cotransporter (NKCC1)-deficient mice.</a> Journal of Biological Chemistry. 275 (35), 26720-26726 (2000).</li><li>Delanian, S., Lefaix, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+radiation-induced+fibroatrophic+process:+therapeutic+perspective+via+the+antioxidant+pathway.">The radiation-induced fibroatrophic process: therapeutic perspective via the antioxidant pathway.</a> Radiotherapy and Oncology. 73 (2), 119-131 (2004).</li><li>Guchelaar, H. J., Vermes, A., Meerwaldt, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-induced+xerostomia:+pathophysiology,+clinical+course+and+supportive+treatment.">Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, clinical course and supportive treatment.</a> Support Care Cancer. 5 (4), 281-288 (1997).</li><li>Lin, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+short-term+&#947;-irradiation+effects+on+mouse+salivary+gland+function+using+a+new+saliva+collection+device.">Measuring short-term &#947;-irradiation effects on mouse salivary gland function using a new saliva collection device.</a> Archives of Oral Biology. 46 (11), 1085-1089 (2001).</li><li>Montenegro, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+differences+between+humans+and+rodents+in+the+ability+to+concentrate+salivary+nitrate:+Implications+for+translational+research.">Profound differences between humans and rodents in the ability to concentrate salivary nitrate: Implications for translational research.</a> Redox biology. 10, 206-210 (2016).</li><li>Choi, J. S., Park, I. S., Kim, S. K., Lim, J. Y., Kim, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+and+Functional+Changes+of+Salivary+Gland+Dysfunction+After+Radioactive+Iodine+Ablation+in+a+Murine+Model.">Morphometric and Functional Changes of Salivary Gland Dysfunction After Radioactive Iodine Ablation in a Murine Model.</a> Thyroid. 23 (11), 1445-1451 (2013).</li><li>Imamura, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+pilocarpine-induced+saliva+secretion+by+adrenergic+agonists+in+ICR+mice.">Inhibition of pilocarpine-induced saliva secretion by adrenergic agonists in ICR mice.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 39 (12), 1038-1043 (2012).</li><li>Ma, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+Secretion+of+Saliva+in+Transgenic+Mice+Lacking+Aquaporin-5+Water+Channels.">Defective Secretion of Saliva in Transgenic Mice Lacking Aquaporin-5 Water Channels.</a> Journal of Biological Chemistry. 274 (29), 20071-20074 (1999).</li><li>Parkes, M. W., Parks, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supersensitivity+of+salivation+in+response+to+pilocarpine+after+withdrawal+of+chronically+administered+hyoscine+in+the+mouse.">Supersensitivity of salivation in response to pilocarpine after withdrawal of chronically administered hyoscine in the mouse.</a> British Journal of Pharmacology. 46 (2), 315-323 (1972).</li><li>Nishiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Up-Regulated+PAR-2-Mediated+Salivary+Secretion+in+Mice+Deficient+in+Muscarinic+Acetylcholine+Receptor+Subtypes.">Up-Regulated PAR-2-Mediated Salivary Secretion in Mice Deficient in Muscarinic Acetylcholine Receptor Subtypes.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 320 (2), 516 (2007).</li><li>Yang, B., Song, Y., Zhao, D., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotype+analysis+of+aquaporin-8+null+mice.">Phenotype analysis of aquaporin-8 null mice.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 288 (5), C1161-C1170 (2005).</li><li>Kamiya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-Ray-Induced+Damage+to+the+Submandibular+Salivary+Glands+in+Mice:+An+Analysis+of+Strain-Specific+Responses.">X-Ray-Induced Damage to the Submandibular Salivary Glands in Mice: An Analysis of Strain-Specific Responses.</a> BioResearch Open Access. 4 (1), 307-318 (2015).</li><li>Patel, R. M., Varma, S., Suragimath, G., Zope, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+and+Comparison+of+Salivary+Calcium,+Phosphorous,+Alkaline+Phosphatase+and+pH+Levels+in+Periodontal+Health+and+Disease:+A+Cross-sectional+Biochemical+Study.">Estimation and Comparison of Salivary Calcium, Phosphorous, Alkaline Phosphatase and pH Levels in Periodontal Health and Disease: A Cross-sectional Biochemical Study.</a> Journal of Clinical and Diagnostic Research. 10 (7), ZC58-ZC61 (2016).</li><li>Droebner, K., Sandner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+the+salivary+secretion+assay+in+F508del+mice--the+murine+equivalent+of+the+human+sweat+test.">Modification of the salivary secretion assay in F508del mice--the murine equivalent of the human sweat test.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 12 (6), 630-637 (2013).</li><li>Lamy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+mouse+whole+saliva+soluble+proteome+induced+by+tannin-enriched+diet.">Changes in mouse whole saliva soluble proteome induced by tannin-enriched diet.</a> Proteome Science. 8 (1), 65 (2010).</li><li>Mahomed, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+mucin+immunohistochemistry+in+salivary+gland+tumors+and+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma.">Recent advances in mucin immunohistochemistry in salivary gland tumors and head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncology. 47 (9), 797-803 (2011).</li><li>Kohlgraf, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+SPLUNC1+in+saliva+with+an+xMAP+particle-based+antibody+capture+and+detection+immunoassay.">Quantitation of SPLUNC1 in saliva with an xMAP particle-based antibody capture and detection immunoassay.</a> Archives of Oral Biology. 57 (2), 197-204 (2012).</li><li>Maimets, M., Bron, R., de Haan, G., van Os, R., Coppes, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+ex+vivo+expansion+and+post-irradiation+regenerative+potential+of+juvenile+and+aged+salivary+gland+stem+cells.">Similar ex vivo expansion and post-irradiation regenerative potential of juvenile and aged salivary gland stem cells.</a> Radiotherapy and Oncology. , (2015).</li><li>Lombaert, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+salivary+gland+function+after+stem+cell+transplantation+in+irradiated+glands.">Rescue of salivary gland function after stem cell transplantation in irradiated glands.</a> PLoS One. 3 (4), e2063 (2008).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

אנו מציגים שיטה שקודמים להעריך תפקוד בלוטת הרוק, אשר יכול להיות מיושם ללמוד פציעה בלוטת ו הרפוי. את הנהלים שלנו כולל מיכשור וציוד, אוסף רוק ו בלוטת לנתיחה, שלכל אחד מהם יש יישומים ניסיוני יכול לתמוך לימוד משולב של בלוטת הרוק הביולוגיה. לדוגמה, מיכשור וציוד מאתר שימש לניהול כללי דרכי הנשימה במהלך הליכי הפרעה לחלל הפה.
דיסקציה תקין, החתך והכו אותי נדרשים עבור פילוקרפין המרצת הפרשת רוק-100 מ ג/ק ג. לחלופין, מנה פילוקרפין מופחת יכול למנוע את הצורך מיכשור וציוד, ולכן ניתן להשתמש עבור הערכה האורך של הפרשת רוק16.
בנוסף הקלטה הפרשת הרוק, פרוטוקול זה מספק גם אמצעי מדויק, עקבי כדי לאסוף את הרוק עבור ניתוחים נוספים. מחקרים כאלה כוללות rheology, פרוטאומיקס, פעילות אנזים, רוק osmolarity25,26,27ו-28,גילוי סמן29.
לבסוף, שיטות ניתוח מתוקננת בלוטות הרוק הגדולות יש שירות מעבר אוסף רוק. יש עניין בהבנת התפתחות בלוטת והתגובה לפגיעה. לחקירה יעילה, חשוב לבצע ניתוח עקבי, נקי של בלוטות הרוק הגדולות. נקי, יעיל בלוטת בידוד הוא קריטי עבור תרבויות נגזר מן התאים הראשי הם מכנית, enzymatically הפומבית של בלוטות הרוק הגדולות30,31, ובשביל היסטולוגית ו immunohistochemical ההכנות. יתר על כן, כאשר מכתים חלבונים המופרש בסעיפים רקמת בלוטת, זה קריטי כדי לשקול ולשלוט על דלדול סביר של מוצרים אלה בעקבות אוסף רוק מגורה.
לכימות תפקוד בלוטת הרוק בחקירות של פציעות או התערבות היא טכניקה נסיוני חיוני. בלוטת היסטולוגיה אינפורמטיבי ולא עשוי להפיק תצפיות מפתח, אולם מסקנות בצורה הטובה ביותר הנתמכים על-ידי נתונים ברורים פונקציונלי.

הפרעות בלוטת הרוק כוללים תסמונות של dysregulated או הפרשת לקוי מוביל עודף (sialorrhea) או underproduction (xerostomia ו- hyposalivation) של רוק1. בשני המקרים, יש אינטרס לשפר את ההבנה שלנו של בלוטת הרוק ביולוגיה לעבר היעד הסופי של התפתחות טיפולית2.
בלוטות הרוק הן איברים מאוד רגיש, פגעו לעיתים קרובות במהלך הקרנות סרטן הראש והצוואר, המוביל הקבוע יובש בפה (xerostomia)3,4. בניגוד לרקמות אחרות רגיש, עם זאת, שיעור תחלופה בלוטת הרוק הוא יחסית נמוך, המנגנון של אובדן הפרשה ממעטים להבין5,6. בהגדרה פגיעה ייחודי, התחדשות רקמות אסטרטגיות המכון להגנת דורשים הערכה תפקודית הרוק. השפעול, אוסף רוק מאתר הוא כלי יקר במיוחד בהערכת התגובה בלוטת קרינה וגם סוכני טיפולית.
כאן, אנו מציגים את שיטת ביצוע וכימות הפרשת רוק מגורה באמצעות פילוקרפין, אגוניסט מוסקריניים חזק7. פילוקרפין מגרה את מערכת העצבים האוטונומית לזירוז בלוטת הפרשה8,9. כדי להשלים את המבחן הזה כראוי, מיכשור וציוד נדרש כדי להבטיח כי העכבר שומרת על דרכי הנשימה פטנטים לאורך כל ההליך, וכדי להפחית את הסיכונים של חנק השאיפה של חלל הפה10. הפרשות במאגר.
זהו הליך מסוף, שהגיעה לשיאה להסרת בלוטות הרוק הגדולות שלושה: את parotid (עמוד), submandibular (SMG) ו את sublingual (. סיג). ללימודים פונקציונלי, בלוטת משקולות נרשמים, משמשים לעתים קרובות כדי לנרמל רוק למדידה11,12,13. המידע הזה חשוב במיוחד במחקרים קרינה, שבתוכה בלוטת ניוון נמצא14,התוצאה הצפויה15
יש השתנות בספרות לגבי איך ממריצים הפרשת רוק מבוצעת ודיווח16. לדוגמה, פילוקרפין מנות בתוך ספרות span לפחות שלושה סדרי גודל17,18,19,20,21,22,23. כאן, אנו מציגים פרוטוקול פילוקרפין במינון גבוה ממוטבת עם כוונה הפארמצבטית משופרת שיטת הביצוע, כמו גם מתן פלטפורמה מודולרית של טכניקות (מיכשור וציוד, אוסף רוק ו ניתוח בלוטת) כי ניתן להתאים כמו הצורך.
בנוסף פרוטוקול הדגמה, אנו כוללים נציג נתונים פונקציונלי של זרימת הרוק-2 שבועות לאחר fractionated קרינה (4 מנות של 6.85 Gy) לאזור SMG.

<table><tbody><tr><td>Pilocarpine hydrochloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6503</td><td>Pilocarpine</td></tr><tr><td>Student Vannas Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>91500-9</td><td>Spring Scissors for Tracheostomy</td></tr><tr><td>Sterile Saline Solution</td><td>Medline</td><td>RDI30296H</td><td>Saline</td></tr><tr><td>Dumont #7 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td><td>Curved Forceps</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td>Straight Forceps</td></tr><tr><td>Standard Pattern Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td>Blunt Forceps</td></tr><tr><td>Fine Scissors- Tungsten Carbide</td><td>Fine Science Tools</td><td>14568-09</td><td>Dissection Scissors</td></tr><tr><td>Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>22362566</td><td>Capillary tubes</td></tr><tr><td>Lubricant Eye Ointment</td><td>Refresh</td><td>N/A</td><td>Refresh Lacri-Lube</td></tr><tr><td>Goat polyclonal anti-Nkcc1</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>SC-21545</td><td>Nkcc1 Antibody</td></tr><tr><td>DAPI (4&#039;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>ver6.0</td><td>Statistical Software</td></tr><tr><td>Cotton tipped applicator</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td>Applicator for eye ointment</td></tr><tr><td>0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2&quot;</td><td>BD</td><td>7629</td><td>Syringe for intraperitoneal injection</td></tr></tbody></table>

murine salivary functional assessment via pilocarpine stimulation following fractionated radiation

Hyposalivation הוא ציין כלל התגובה אוטואימונית של תסמונת סיוגרן או הקרנות הבאה, לפגיעה בלוטות הרוק הגדולות. במקרים אלה, נותרו שאלות לגבי המחלה פתוגנזה והתערבויות יעיל. שיטת אופטימיזציה המאפשר הערכה תפקודית של בלוטות הרוק לא יסולא בפז עבור חוקרים בלוטה אקסוקרינית ביולוגיה, תפקוד, הרפוי. כאן, אנו מציגים גישה צעד אחר צעד כדי ביצוע פילוקרפין המרצת הפרשת הרוק, כולל מיכשור וציוד את הקרע של שלוש הגדולות מאתר בלוטות הרוק. אנחנו גם פירוט המתאימה מאתר הראש והצוואר האנטומיה גישה במהלך הטכניקות הללו. גישה זו היא מדרגית, המאפשרות מספר עכברים יעובדו בעת ובעונה אחת, ובכך שיפור היעילות של תהליך עבודה. אנו שואפים לשפר את הפארמצבטית בשיטות אלה, שלכל אחד מהם יש נוספת יישומים בתוך השדה. בנוסף אוסף רוק, נדון מדדי לכימות, נורמליזציה קיבולת תפקודית של רקמות אלה. נציג נתונים כלולים מ בבלוטות submandibular עם תפקוד בלוטת הרוק מדוכא 2 שבועות בעקבות קרינה fractionated (4 מנות של 6.85 Gy).

אחרי ביצוע במינון גבוה פילוקרפין גירוי אוסף רוק, זה חשוב לשמור על האוויר כדי למנוע שאיפה או חנק מן הפרשות בחלל הפה. תיאור סכמטי של מיכשור וציוד מסופק (איור 1). בעקבות החתך בקנה הנשימה, פיונית חייבת להישאר ברורה של רקמות ונוזלים.
כדי לשפר נימיות במהלך אוסף רוק, שנמצאת עכברים עם הראש כלפי מטה בזווית של 45°. ניתן לבצע את הפעולות הבאות ב- > 1 עכבר, למרות שאין זה מומלץ לחרוג 5 עכברים בבת אחת (איור 2). עם סיום איסוף, מומלץ כי צינורות להישקל במהירות כדי למנוע הפסדים אויר.
מסע בעקבות רוק, עכברים מורדמים. נקע בצוואר הרחם לא לבצע, כמו זה עלול לגרום נזק למבנים הראש והצוואר. עכברים מוחזרות אל הבמה ויבתר, הבלוטות צריך למקם מעל קנה הנשימה, כמו במקור ממוקם. ניתוח בלוטת (איור 3) צריכים להתחיל עמוד, בשל הן שלה עמדה עקביות ' מאטום לשקוף '. SMG של סיג המשרד, ניתן להסיר בקלות.
בעקבות 4 שברים של 6.85 קרינה Gy SMG מאתר, פונקציה הרוק פוחתת באופן משמעותי על ידי 2 שבועות (איור 4). שניהם סה כ הפרשת הרוק, הפרשת מנורמל משקל רטוב בלוטת שורטטו. שימוש בכל מדד, קיבולת תפקודית הרוק מופחת, כצפוי, ב 2 שבועות בעקבות הקרנה24.
בלוטה יכול להיות קבוע, המחולקת למקטעים עבור כתמים היסטולוגית ו/או אימונוהיסטוכימיה. Hematoxylin ואאוזין מכתימים (H & E) מראה דומה ברוטו SMG אדריכלות הן עם או בלי פילוקרפין גירוי (איור 5). צביעת עבור Nkcc1, נהג נתרן-אשלגן-כלוריד ממברנה, מראה דומה מורפולוגיה תאים ללא התחשבות פילוקרפין גירוי (איור 6).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57522/57522fig1.jpg"> איור 1 . מיכשור וציוד סכמטי. (א) לאחר פתיחת באזור הצוואר, דמיינו את המבנים העיקריים. (B) כדי להשלים עם מיכשור וציוד, בעדינות הרם, אך לא ניתוק, SMGs מבלי להפריע מבנים הסמוכים, כולל אספקת דם, העצבוב של צינוריות excretory. חותכים את השרירים רצועה כדי לחשוף את הסחוס והכו אותי לפני ביצוע חתך לתוך קנה הנשימה. השאר SMG במקום ואת קנה הנשימה נחשף במהלך הליך אוסף רוק כולו. <a href="/files/ftp_upload/57522/57522fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57522/57522fig2.jpg"> איור 2 . אוסף רוק. בעקבות גירוי פילוקרפין, זווית עכברים כלפי מטה ולאסוף רוק דרך צינורות קפילר לתוך צינורות אוסף שנשקל מראש, אשר ממוקמים מתחת לזירה לנתיחה. <a href="/files/ftp_upload/57522/57522fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57522/57522fig3.jpg"> איור 3 . רס ן בלוטת הרוק לנתיחה. ברגע שיש כבר מורדמים עכברים, למקם מחדש ולהפריד את SMG ימינה ושמאלה. הפרד בזהירות את כל בלוטת שבסביבה רקמות nonglandular וכלי הדם. פ ג הוא מבנה מפוזר, לרוחב. SMG של סיג הם חברו, אך ניתן להפריד נקיה עם מלקחיים. <a href="/files/ftp_upload/57522/57522fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57522/57522fig4.jpg"> איור 4 . הפרשת נציג נתונים. שבועיים לאחר fractionated קרינה (4 מנות של 6.85 Gy) SMG, הפרשת רוק מגורה פילוקרפין נמדדה. הפונקציה הרוק הוא דיווח כמו רוק סה כ נפח (א) ו רוק סה כ נפח (ב) מנורמל ל סה כ משקל רטוב SMG. כצפוי, יש ירידה משמעותית יכולת תפקודית SMG (זאת אומרת ± SD * *p < 0.01 באמצעות דו-זנבית אינטראקצית-t-test). <a href="/files/ftp_upload/57522/57522fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57522/57522fig5.jpg"> איור 5 . Hematoxylin ואאוזין SMG מכתים. רקמות SMG הייתה שנקטפו עכבר לאחר גירוי פילוקרפין (100 מ"ג/ק"ג, מימין) לעומת שליטה, עכבר שאינו מטופל SMG (משמאל). צביעת המטוקסילין מציג מבנה בלוטת ברוטו 10 X (גודל ברים: 200 מיקרומטר) (A, B) ו- 40 X (גודל ברים: 50 מיקרומטר) (C, D). <a href="/files/ftp_upload/57522/57522fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57522/57522fig6.jpg"> איור 6 . אימונוהיסטוכימיה SMG Nkcc1. רקמות SMG הייתה שנקטפו עכבר לאחר גירוי פילוקרפין (100 מ"ג/ק"ג, מימין) לעומת שליטה, עכבר שאינו מטופל SMG (משמאל). Nkcc1 הוא חלבון ממברנה והוא יכול לשמש כדי להעריך מורפולוגיה הסלולר. דאפי משמשת counterstain הגרעין (גודל ברים: 75 מיקרומטר). <a href="/files/ftp_upload/57522/57522fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation at JoVE.com

Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation

מאתר הערכה תפקודית הרוק באמצעות בעקבות גירוי פילוקרפין Fractionated קרינה

אנו מציגים גישה מפורטת לביצוע אוסף רוק, כולל מיכשור וציוד מאתר את ניתוקה של שלושה בלוטות הרוק הגדולות.

Hyposalivation is commonly observed in the autoimmune reaction of Sj&#246;gren's syndrome or following radiation injury to the major salivary glands. In ...

murine-salivary-functional-assessment-via-pilocarpine-stimulation

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

11.1K Views.  University of Rochester. אנו מציגים גישה מפורטת לביצוע אוסף רוק, כולל מיכשור וציוד מאתר את ניתוקה של שלושה בלוטות הרוק הגדולות.

Video: Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation

Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

Severe salivary gland hypofunction is frequently found in patients with Sj&ouml;gren's syndrome and those who receiving therapeutic 
irradiation in their head and neck regions for cancer treatment. Both groups of patients experience symptoms such as xerostomia (dry mouth), dysphagia 
(impaired chewing and swallowing), severe dental caries, altered taste, oro-pharyngeal infections (candidiasis), mucositis, pain and discomfort.
One innovative approach of regenerative medicine for the treatment of salivary gland hypo-function is speculated in RS Redman, E Mezey 
et al. 2009: stem cells can be directly deposited by cannulation into the gland as a potent method in reviving the functions of the impaired organ. Presumably, 
the migrated foreign stem cells will differentiate into glandular cells to function as part of the host salivary gland. Also, this cannulation technique is an 
expedient and effective delivery method for clinical gene transfer application.
Here we illustrate the steps involved in performing the cannulation procedure on the mouse submandibular salivary gland via the Wharton's duct 
(Fig 1). C3H mice (Charles River, Montreal, QC, Canada) are used for this experiment, which have been kept under clean conventional conditions at 
the McGill University animal resource center. All experiments have been approved by the University Animal Care Committee and were in accordance with the 
guidelines of the Canadian Council on Animal Care.
For this experiment, a trypan blue solution is infused into the gland through the opening of the Wharton's duct using a 
insulin syringe with a 29-gauge needle encased inside a polyethylene tube. Subsequently, the mouse is dissected to show that the infusions migrated 
into the gland successfully.

A protocol for the cannulation of the mouse submandibular salivary gland via the Wharton's duct is described. For this experiment, the trypan blue solution is used as a dyer to demonstrate how this technique effectively delivers infusions into the targeted gland, and to suggest the reliability of this new approach as a potential clinical drug/cell therapy for the regeneration of salivary glands.

Cannulation של בלוטת הרוק באמצעות עכבר Submandibular Duct של וורטון

Severe salivary gland hypofunction is frequently found in patients with Sj&ouml;gren's syndrome and those who receiving therapeutic 
irradiation in their ...

A Murine Model of Muscle Training by Neuromuscular Electrical Stimulation

Neuromuscular electrical stimulation (NMES) is a common clinical modality that is widely used to restore1, maintain2 or enhance3-5 muscle functional capacity. Transcutaneous surface stimulation of skeletal muscle involves a current flow between a cathode and an anode, thereby inducing excitement of the motor unit and the surrounding muscle fibers. 
NMES is an attractive modality to evaluate skeletal muscle adaptive responses for several reasons. First, it provides a reproducible experimental model in which physiological adaptations, such as myofiber hypertophy and muscle strengthening6, angiogenesis7-9, growth factor secretion9-11, and muscle precursor cell activation12 are well documented. Such physiological responses may be carefully titrated using different parameters of stimulation (for Cochrane review, see 13). In addition, NMES recruits motor units non-selectively, and in a spatially fixed and temporally synchronous manner14, offering the advantage of exerting a treatment effect on all fibers, regardless of fiber type. Although there are specified contraindications to NMES in clinical populations, including peripheral venous disorders or malignancy, for example, NMES is safe and feasible, even for those who are ill and/or bedridden and for populations in which rigorous exercise may be challenging. 
Here, we demonstrate the protocol for adapting commercially available electrodes and performing a NMES protocol using a murine model. This animal model has the advantage of utilizing a clinically available device and providing instant feedback regarding positioning of the electrode to elicit the desired muscle contractile effect. For the purpose of this manuscript, we will describe the protocol for muscle stimulation of the anterior compartment muscles of a mouse hindlimb.

A murine model of neuromuscular electrical stimulation (NMES), a safe and inexpensive clinical modality, to the anterior compartment muscles is described. This model has the advantage of modifying a readily available clinical device for the purpose of eliciting targeted and specific muscle contractions in mice.

דגם Murine של אימון שרירים באמצעות גירוי חשמלי neuromuscular

Neuromuscular electrical stimulation (NMES) is a common clinical modality that is widely used to restore1, maintain2 or enhance3-5 muscle functional ...

Collecting Saliva and Measuring Salivary Cortisol and Alpha-amylase in Frail Community Residing Older Adults via Family Caregivers

Salivary measures have emerged in bio-behavioral research that are easy-to-collect, minimally invasive, and relatively inexpensive biologic markers of stress. This article we present the steps for collection and analysis of two salivary assays in research with frail, community residing older adults-salivary cortisol and salivary alpha amylase. The field of salivary bioscience is rapidly advancing and the purpose of this presentation is to provide an update on the developments for investigators interested in integrating these measures into research on aging. Strategies are presented for instructing family caregivers in collecting saliva in the home, and for conducting laboratory analyses of salivary analytes that have demonstrated feasibility, high compliance, and yield quality specimens. The protocol for sample collection includes: (1) consistent use of collection materials; (2) standardized methods that promote adherence and minimize subject burden; and (3) procedures for controlling certain confounding agents. We also provide strategies for laboratory analyses include: (1) saliva handling and processing; (2) salivary cortisol and salivary alpha amylase assay procedures; and (3) analytic considerations.

We demonstrate: (1) procedures for collection of salivary samples in cognitive impaired older adults by family caregivers in the home setting, (2) procedures for measuring stress activity via salivary cortisol and alpha amylase, and (3) representative profiles. Protocols that allow researchers to study stress-linked processes advance our understanding of biological sensitivity and susceptibility.

Salivary measures have emerged in bio-behavioral research  that are easy-to-collect, minimally invasive, and relatively inexpensive  biologic markers of ...

Myocardial Infarction and Functional Outcome Assessment in Pigs

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One important prerequisite is a good understanding of all safety and efficacy aspects obtained in a large animal model that validly reflect the human scenario of myocardial infarction (MI). Pigs are widely used in this regard since their cardiac size, hemodynamics, and coronary anatomy are close to that of humans. Here, we present an effective protocol for using the porcine MI model using a closed-chest coronary balloon occlusion of the left anterior descending artery (LAD), followed by reperfusion. This approach is based on 90 min of myocardial ischemia, inducing large left ventricle infarction of the anterior, septal and inferoseptal walls. Furthermore, we present protocols for various measures of outcome that provide a wide range of information on the heart, such as cardiac systolic and diastolic function, hemodynamics, coronary flow velocity, microvascular resistance, and infarct size. This protocol can be easily tailored to meet study specific requirements for the validation of novel cardioregenerative biologics at different stages (i.e. directly after the acute ischemic insult, in the subacute setting or even in the chronic MI once scar formation has been completed). This model therefore provides a useful translational tool to study MI, subsequent adverse remodeling, and the potential of novel cardioregenerative agents.

This protocol describes the porcine myocardial infarction (MI) model using a 90 min closed-chest coronary balloon occlusion of the left anterior descending artery (LAD), followed by reperfusion. Furthermore, the protocol for several outcome parameters, such as cardiac function, hemodynamics, microvascular resistance, and infarct size, are also presented.

אוטם שריר לב והערכת תוצאה תפקודית בחזירים

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of saliva into the oral cavity. Serous and mucous acinar cells are the protein and mucous producing factories of the gland respectively, and represent the origin of saliva production. Once synthesised, the various enzymatic and other proteinaceous components of saliva are secreted through a series of ductal cells bearing epithelial-type morphology, until the eventual expulsion of the saliva through one major duct into the cavity of the mouth. The composition of saliva is also modified by the ductal cells during this process.
In the manifestation of diseases such as Sj&ouml;gren's syndrome, and in some clinical situations such as radiotherapy treatment for head and neck cancers, saliva production by the glands is dramatically reduced 1,2. The resulting xerostomia, a subjective feeling of dry mouth, affects not only the ability of the patient to swallow and speak, but also encourages the development of dental caries and can be socially debilitating for the sufferer.
The restoration of saliva production in the above-mentioned clinical conditions therefore represents an unmet clinical need, and as such several studies have demonstrated the regenerative capacity of the salivary glands 3-5. Further to the isolation of stem cell-like populations of cells from various tissues within the mouse and human bodies 6-8, we have shown using the described method that stem cells isolated from mouse salivary glands can be used to rescue saliva production in irradiated salivary glands 9,10. This discovery paves the way for the development of stem cell-based therapies for the treatment of xerostomic conditions in humans, and also for the exploration of the salivary gland as a microenvironment containing cells with multipotent self-renewing capabilities.

An optimized protocol for the isolation of stem cells from the mouse salivary gland is described. The method employs enzymatic and mechanical digestion, and permits isolation of salispheres containing cells with characteristics of stem cells.

בידוד של בלוטת הרוק עכבר תאים גזע

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Biology

Retroductal Nanoparticle Injection to the Murine Submandibular Gland

Two common goals of salivary gland therapeutics are prevention and cure of tissue dysfunction following either autoimmune or radiation injury. By locally delivering bioactive compounds to the salivary glands, greater tissue concentrations can be safely achieved versus systemic administration. Furthermore, off target tissue effects from extra-glandular accumulation of material can be dramatically reduced. In this regard, retroductal injection is a widely used method for investigating both salivary gland biology and pathophysiology. Retroductal administration of growth factors, primary cells, adenoviral vectors, and small molecule drugs has been shown to support gland function in the setting of injury. We have previously shown the efficacy of a retroductally injected nanoparticle-siRNA strategy to maintain gland function following irradiation. Here, a highly effective and reproducible method to administer nanomaterials to the murine submandibular gland through Wharton's duct is detailed (Figure 1). We describe accessing the oral cavity and outline the steps necessary to cannulate Wharton's duct, with further observations serving as quality checks throughout the procedure.

Local drug delivery to the submandibular glands is of interest in understanding salivary gland biology and for the development of novel therapeutics. We present an updated and detailed retroductal injection protocol, designed to improve delivery accuracy and experimental reproducibility. The application presented herein is the delivery of polymeric nanoparticles.

ננו-חלקיק Retroductal הזרקה אל בלוטת Submandibular מאתר

Two common goals of salivary gland therapeutics are prevention and cure of tissue dysfunction following either autoimmune or radiation injury. By locally ...

Bioengineering

Retroductal Submandibular Gland Instillation and Localized Fractionated Irradiation in a Rat Model of Salivary Hypofunction

Normal tissues that lie within the portals of radiation are inadvertently damaged. Salivary glands are often injured during head and neck radiotherapy. Irreparable cell damage results in a chronic loss of salivary function that impairs basic oral activities, and increases the risk of oral infections and dental caries. Salivary hypofunction and its complications gravely impact a patient's comfort. Current symptomatic management of the condition is ineffective, and newer therapies to assuage the condition are needed. 
Salivary glands are exocrine glands, which expel their secretions into the mouth via excretory ducts. Cannulation of these ducts provides direct access to the glands. Retroductal delivery of a contrast agent to major salivary glands is a routine out-patient procedure for diagnostic imaging. Using a similar procedure, localized treatment of the glands is feasible. However, performing this technique in preclinical studies with small animals poses unique challenges. In this study we describe the technique of retroductal administration in rat submandibular glands, a procedure that was refined in Dr. Bruce Baum's laboratory (NIH)1, and lay out a procedure for local gland irradiation.

Salivary gland hypofunction, a major adverse effect of head and neck radiotherapy diminishes a patient's quality of life. The demonstration of efficacy of new therapies in animal models is a prerequisite before clinical transition. This protocol describes retroductal administration and local irradiation of rat submandibular glands.

Retroductal submandibular בלוטת החדרה ונקודות מופרדות הקרנה במודל עכברים של הרוק hypofunction

Normal tissues that lie within the portals of radiation are inadvertently damaged. Salivary glands are often injured during head and neck radiotherapy. ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced saliva production. Similarly, saliva production is severely compromised in patients receiving radiation treatment for head and neck cancers. Rodent models, developed to mimic these clinical conditions, facilitate an understanding of the disease pathogenesis and allow for the development of new therapeutic strategies. Therefore, the ability to accurately, reproducibly, and repeatedly measure salivary gland function in animal models is critical. Building on procedures previously described in the literature, a method was developed that meets these criteria and was used to evaluate salivary gland function in mice. An additional advantage of this new method is that it is easily mastered, and has little inter-operator variation. Salivary gland function is evaluated as the amount (weight or volume) or rate (mL/min) of saliva produced in response to pilocarpine stimulation. The collected saliva is a good source for the analyses of protein content, immunoglobulin concentrations, and other biomolecules.

Salivary gland hypofunction is a frequent consequence of autoimmune disease and radiation therapy. Reproducible evaluation of salivary gland function in mouse models of these diseases is a technical challenge. Here, a simple method for accurate and reproducible measurement of saliva production in mice is described.

שיטת המדידה של תפקוד בלוטת הרוק בעכברים

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Immunology and Infection

Radiation Treatment of Organotypic Cultures from Submandibular and Parotid Salivary Glands Models Key In Vivo Characteristics

Hyposalivation and xerostomia create chronic oral complications that decrease the quality of life in head and neck cancer patients who are treated with radiotherapy. Experimental approaches to understanding mechanisms of salivary gland dysfunction and restoration have focused on in vivo models, which are handicapped by an inability to systematically screen therapeutic candidates and efficiencies in transfection capability to manipulate specific genes. The purpose of this salivary gland organotypic culture protocol is to evaluate maximal time of culture viability and characterize cellular changes following ex vivo radiation treatment. We utilized immunofluorescent staining and confocal microscopy to determine when specific cell populations and markers are present during a 30-day culture period. In addition, cellular markers previously reported in in vivo radiation models are evaluated in cultures that are irradiated ex vivo. Moving forward, this method is an attractive platform for rapid ex vivo assessment of murine and human salivary gland tissue responses to therapeutic agents that improve salivary function.

Using three-dimensional organotypic cultures to visualize morphology and functional markers of salivary glands may provide novel insights into the mechanisms of tissue damage following radiation. Described here is a protocol to section, culture, irradiate, stain, and image 50&#8211;90 &#956;m thick salivary gland sections prior to and following exposure to ionizing radiation.

הטיפול בקרינה של תרבויות אורגנוטימית מתוך הלסת התחתונה ובלוטות הרוק פרודה מודלים מפתח Vivo מאפיינים

Hyposalivation and xerostomia create chronic oral complications that decrease the quality of life in head and neck cancer patients who are treated with ...

הדמיה חיה בזמן אמת של התחדשות בלוטה תת-לסתית של עכבר

Interrogating Cell-Cell Interactions in the Salivary Gland via Ex Vivo Live Cell Imaging

Salivary gland regeneration is a complex process involving intricate interactions among various cell types. Recent studies have shed light on the pivotal role played by macrophages in driving the regenerative response. However, our understanding of this critical role has primarily relied on static views obtained from fixed tissue biopsies. To overcome this limitation and gain insights into these interactions in real time, this study outlines a comprehensive protocol for culturing salivary gland tissue ex vivo and capturing live images of cell migration.
The protocol involves several key steps: First, mouse submandibular salivary gland tissue is carefully sliced using a vibratome and then cultured at an air-liquid interface. These slices can be intentionally injured, for instance, through exposure to radiation, to induce cellular damage and trigger the regenerative response. To track specific cells of interest, they can be endogenously labeled, such as by utilizing salivary gland tissue collected from genetically modified mice where a particular protein is marked with green fluorescent protein (GFP). Alternatively, fluorescently-conjugated antibodies can be employed to stain cells expressing specific cell surface markers of interest. Once prepared, the salivary gland slices are subjected to live imaging using a high-content confocal imaging system over a duration of 12 h, with images captured at 15 min intervals. The resulting images are then compiled to create a movie, which can subsequently be analyzed to extract valuable cell behavior parameters. This innovative method provides researchers with a powerful tool to investigate and better understand macrophage interactions within the salivary gland following injury, thereby advancing our knowledge of the regenerative processes at play in this dynamic biological context.

מחבר זרקור: חקר אינטראקציות מקרופאג'-אפיתל בין תאים בהתחדשות בלוטת הרוק לאחר פציעה 

Immunofluorescent imaging is constrained by the ability to observe complex, time-dependent biological processes in just a single snapshot in time. This study outlines a live-imaging approach conducted on precision-cut mouse submandibular gland slices. This approach allows for the real-time observation of cell-cell interactions during homeostasis and the processes of regeneration and repair.

חקירת אינטראקציות תאים-תאים בבלוטת הרוק באמצעות Ex Vivo Live Cell Imaging

Salivary gland regeneration is a complex process involving intricate interactions among various cell types. Recent studies have shed light on the pivotal ...