البحث عنها في هذا المنشور أيده "المعهد الوطني للأسنان" والجمجمة البحوث (NIDCR) ومعهد السرطان الوطني (NCI) من "معاهد الصحة الوطنية في" إطار جائزة عدد R56 DE025098 و UG3 DE027695 و F30 CA206296. المحتوى هي المسؤولة الوحيدة عن المؤلفين ولا تمثل بالضرورة وجهات النظر الرسمية "المعاهد الوطنية للصحة". كما أيد هذا العمل 1206219 هيئة الهجرة واللاجئين في جبهة الخلاص الوطني والابتكار IADR في "منح الرعاية عن طريق الفم" (2016).
ونود أن نشكر الدكتور Eri ماروياما وأندرو هولومون لمساعدتها مع جمع اللعاب. نود أن نشكر "ونغ" Lun بي لمساعدته مع تشريح الغدة. نود أن نشكر اينغلس ماثيو لمساعدته في إعداد الشكل. ونود أن نشكر الدكتور الين سمولوك واميلي وو لقراءة نقدية لهذه المخطوطة.

كافة في فيفو الإجراءات المبينة أدناه بموافقة "اللجنة الجامعة" على "الموارد الحيوانية" في جامعة روتشستر، روتشستر. NY.
1-إعداد
<ol><li>استخدام رصيد التحليلي، تزن 20 ملغ بيلوكاربيني. حله في 2 مل من المحلول الملحي المعقم في أنبوب ميكروسينتريفوجي. ملاحظة: نظراً لأن بيلوكاربيني هي حساسة للضوء، ويفقد النشاط مع مرور الوقت، هذا الحل ينبغي على استعداد اليوم للحقن، ومحمية من الضوء حتى تدار.</li>
	<li>استخدام رصيد التحليلي، وزن وتحديد جميع أنابيب جمع والزجاج الشعيرات الدموية. يجب أن يطابق عدد الشعيرات الزجاجية وأنابيب جمع عدد الفئران.</li>
</ol>2-القصبة الهوائية
<ol><li>وزن فئران C57/BL6 استخدام رصيد التحليلي.</li>
	<li>استخدام المحاقن 0.5 مل مع 29 x ½ "إبرة، تخدير الفئران مع إينترابيريتونيلي حقن المحلول الملحي عقيمة من 100 مغ/كغ xylazine الكيتامين و 10 مغ/كغ. للانتقال إلى الخطوة التالية عند الماوس لم يعد يستجيب للمحفزات (أي غياب منعكس سحب دواسة)، الذي يحدث عادة في غضون 5 إلى 10 دقيقة بعد الحقن.</li>
	<li>بعد الاستغناء عن مواد التشحيم على قضيب القطن ذات الرؤوس، تنطبق على عيون بلطف وضع الماوس في موقف ضعيف في المرحلة. يجب أن يبقى هذا الحيوان أنيسثيتيزيد على السطح الدافئة. ملاحظة: يتم تنفيذ كافة الخطوات في درجة حرارة الغرفة.</li>
	<li>تأمين الآنف وأطرافه، والذيل إلى مرحلة استخدام الشريط الجراحي.</li>
	<li>نظيفة ورطبة الرقبة مع مسح الكحول. ملاحظة: وهذا سيساعد على منع الفراء من دخول شقوق اللاحقة.</li>
	<li>رفع الجلد العنق خط الوسط البطني مع الملقط، جعل قطع صغيرة وسطحية باستخدام مقص تشريح. دليل المقص في فتح وفتح شفرات تحت الجلد لفصل الطائرات الأنسجة ببطء.</li>
	<li>الحفاظ على الجلد التي أثيرت، قص بعناية إلى 1 سم تحت الفم.</li>
	<li>جعل شقوق جانبية اثنين في جوانب أقل شأنا ومتفوقة أول خطوة من نوعها. برفق باستخدام الملقط، تعكس بعيداً الجلد لتمكين الوصول إلى هياكل الرأس والرقبة.</li>
	<li>استخدام مجهر تشريح في 8 X التكبير، تصور في الغدد اللهاة (خط الوسط: الشكل 1).</li>
	<li>استخدام الملقط غرامة، أرفع برفق في الغدد لفضح العضلات إينفراهيويد (حزام) أربعة تغمر القصبة الهوائية. تجنب تمزيق أو إفساد المفرج المحيطة أو القنوات مطرح.</li>
	<li>إذا كان جمع اللعاب من الماوس واحد أو أكثر، كرر الخطوات 2.1-2.10 مع كل الماوس قبل المتابعة. ملاحظة: يمكن تنفيذ هذا الإجراء يكون بأمان على ما يصل إلى 5 الفئران في نفس الوقت.</li>
	<li>مع مقص تشريح الصغيرة، إزالة الجزء الآنسي من عضلات حزام أثناء الإقامة بالقرب من خط الوسط قدر الإمكان. قص إلا قدر الضرورة تصور القصبة الهوائية وإبقاء عضلات حزام من الطريق أثناء الإجراء. تجنب نيكينج أي السفن القريبة لأنه إذا لم يكن هناك نضوب وحدة التخزين الثانوي إلى نزيف كبير، بيلوكاربيني لن تكون فعالة في حفز إفراز.</li>
	<li>وتعكس عضلات حزام بعيداً عن القصبة الهوائية.</li>
	<li>تصور الحنجرة، القصبة الهوائية، والغدة الدرقية. ضمان واضح تغمر أنسجة القصبة الهوائية.</li>
	<li>إجراء شق أفقي في القصبة الهوائية أدنى/الخلفي للغدة الدرقية باستخدام مقص تشريح الصغيرة. تأكد من مجرى الهواء البراءات وواضح من السوائل.</li>
</ol>3-اللعاب جمع
<ol><li>قم بإزالة الشريط قرب مرحلة تشريح الفم وزاوية الهبوط (45°، cranially) للمساعدة في تدفق اللعاب.</li>
	<li>استخدام المحاقن 0.5 مل مع 29 x ½ "إبرة، إجراء حقن داخل 10 ميليلتر/ز الجسم الوزن pilocarpine لمجموع جرعة مقدارها 100 مغ/كغ.</li>
	<li>بدء تشغيل جهاز ضبط وقت. إذا كانت الجرعات الفئران متعددة، خفض المهلة الزمنية التي تتحرك بسرعة، وخلال وجود مساعد في نفس الوقت حقن الفئران المتبقية.</li>
	<li>استخدام الملقط القياسية، فتح الفم للوصول إلى الأنبوبة الشعرية.</li>
	<li>مرة واحدة ويلاحظ حبة لعاب في الفم، وضع نهاية الأنبوب الشعرية الدانية في السائل، مع نهاية القاصي وضعها في أنبوب جمع المتمركزة أدناه مرحلة تشريح (أنابيب كل وزنه مسبقاً). ملاحظة: في فئران C57/BL6 الإناث 6-10 أسابيع عمر، اللعاب الإجمالي يحدث داخل 2 دقيقة لحقن بيلوكاربيني.</li>
	<li>إذا كان بناء في الفم اللعاب، ولكن لا تتدفق من خلال الأنبوب، ريتيمبت الخطوة السابقة. التأكد من أنه لم يتم وضع الأنبوب مباشرة ضد سطح مخاطية، التي يمكن أن تعيق المدخل.</li>
	<li>جمع اللعاب لما مجموعة 12 دقيقة بعد التحفيز بيلوكاربيني. ضمان بقاء ستوما واضحة. ملاحظة: زيادة في حجم المد وافرازات (اللعابية والبول والبراز) طبيعية خلال هذا الوقت.</li>
	<li>إذا كانت الفئران قد الاكتئاب وظيفة اللعاب (مثلاً.، بسبب الإصابات أو التدخل)، نقل السوائل المتبقية من الفم إلى أنبوب جمع استخدام ميكروبيبيتي P200. إذا جمع من الفئران متعددة، تأكد من أن يتم تغيير نصائح.</li>
	<li>تسجيل الوزن تجمع اللعاب بالإضافة إلى أنابيب 12 دقيقة بعد الحقن بيلوكاربيني.</li>
</ol>4. تشريح الغدة
<ol><li>Euthanize الفئران بالقتل الرحيم2 CO (كما هو موضح في المبادئ "التوجيهية وبرايتون" "القتل الرحيم للحيوانات": طبعة عام 2013) تليها thoracotomy، مع الحرص على الحفاظ على الهياكل للرأس والرقبة. ولهذا السبب، تجنب التفكك عنق الرحم كأسلوب للقتل الرحيم.</li>
	<li>ضع الماوس في موقف ضعيف في المرحلة. تغيير موضع الغدد في الموقع الأصلي من خلال القصبة الهوائية (الشكل 1).</li>
	<li>استخدام مجهر تشريح تحت 8 X التكبير، تصور في الغدد الرئيسية: PG و SMG SLG. التمييز بين الغدد خلال التشريح، تحديد أن فريق البرمجة منتشر، الكذب الأفقي إلى SMG و SLG. ملاحظة: إذا كان تشريح في PG، ينبغي أن يتم هذا أولاً لأنها محددة بالاقل والأكثر احتمالاً أن تكون ممزقة.</li>
	<li>فهم ذيل الغرام بالملقط، سحبه بعيداً عن الهياكل الأساسية، وتطبيق بلطف التوتر قبل قطع رأس PG مع تشريح المقص.</li>
	<li>خرق الكبسولة المحيطة جيه استخدام الملقط. فصل SMG اليسرى واليمنى بلطف.</li>
	<li>مجاناً الجانب الظهرية من SMG من الأنسجة نونجلاندولار التقيد بها باستخدام الملقط.</li>
	<li>إزالة إس أم جي من الرقبة بالرسم لاصق في وارتون مشدود مع الملقط وقطع القناة مع تشريح المقص.</li>
	<li>بلطف منفصلاً في SLG SMG استخدام الملقط. ملاحظة: SLG في الجانب سوبيرولاتيرال من إس أم جي.</li>
	<li>باستخدام رصيد تحليلية، تسجيل الأوزان إس أم جي.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Bradley, P., O'Hara, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+of+the+salivary+glands.">Diseases of the salivary glands.</a> Surgery (Oxford). 33 (12), 614-619 (2015).</li><li>Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+enhancement+therapies.">Salivary enhancement therapies.</a> Caries Research. 38 (3), 241-246 (2004).</li><li>Konings, A. W. T., Coppes, R. P., Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+mechanism+of+salivary+gland+radiosensitivity.">On the mechanism of salivary gland radiosensitivity.</a> International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 62 (4), 1187-1194 (2005).</li><li>Burlage, F. R., Coppes, R. P., Meertens, H., Stokman, M. A., Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parotid+and+submandibular/sublingual+salivary+flow+during+high+dose+radiotherapy.">Parotid and submandibular/sublingual salivary flow during high dose radiotherapy.</a> Radiotherapy and Oncology. 61 (3), 271-274 (2001).</li><li>Aure, M. H., Konieczny, S. F., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+gland+homeostasis+is+maintained+through+acinar+cell+self-duplication.">Salivary gland homeostasis is maintained through acinar cell self-duplication.</a> Developmental Cell. 33 (2), 231-237 (2015).</li><li>Aure, M. H., Arany, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+Glands:+Stem+Cells,+Self-duplication,+or+Both?.">Salivary Glands: Stem Cells, Self-duplication, or Both?.</a> Journal of Dental Research. 94 (11), 1502-1507 (2015).</li><li>Ono, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+effects+of+cevimeline+and+pilocarpine+on+salivary+mechanisms,+cardiovascular+response+and+thirst+sensation+in+rats.">Distinct effects of cevimeline and pilocarpine on salivary mechanisms, cardiovascular response and thirst sensation in rats.</a> Archives of Oral Biology. 57 (4), 421-428 (2012).</li><li>Proctor, G. B., Carpenter, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+salivary+gland+function+by+autonomic+nerves.">Regulation of salivary gland function by autonomic nerves.</a> Auton Neuroscience. 133 (1), 3-18 (2007).</li><li>Nezu, A., Morita, T., Tojyo, Y., Nagai, T., Tanimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+agonistic+effects+of+pilocarpine+on+Ca(2+)+responses+and+salivary+secretion+in+the+submandibular+glands+of+live+animals.">Partial agonistic effects of pilocarpine on Ca(2+) responses and salivary secretion in the submandibular glands of live animals.</a> Experimental Physiology. 100 (6), 640-651 (2015).</li><li>Urita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rebamipide+and+mosapride+enhance+pilocarpine-induced+salivation.">Rebamipide and mosapride enhance pilocarpine-induced salivation.</a> North American Journal of Medical Sciences. 1 (3), 121-124 (2009).</li><li>Arany, S., Benoit, D. S., Dewhurst, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle-mediated+gene+silencing+confers+radioprotection+to+salivary+glands+in+vivo.">Nanoparticle-mediated gene silencing confers radioprotection to salivary glands in vivo.</a> Molecular Therapy. 21 (6), 1182-1194 (2013).</li><li>Kondo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+differences+in+the+acinar+cells+of+the+murine+major+salivary+glands.">Functional differences in the acinar cells of the murine major salivary glands.</a> Journal of Dental Research. 94 (5), 715-721 (2015).</li><li>Evans, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+impairment+of+salivation+in+Na+/K+/2Cl-+cotransporter+(NKCC1)-deficient+mice.">Severe impairment of salivation in Na+/K+/2Cl- cotransporter (NKCC1)-deficient mice.</a> Journal of Biological Chemistry. 275 (35), 26720-26726 (2000).</li><li>Delanian, S., Lefaix, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+radiation-induced+fibroatrophic+process:+therapeutic+perspective+via+the+antioxidant+pathway.">The radiation-induced fibroatrophic process: therapeutic perspective via the antioxidant pathway.</a> Radiotherapy and Oncology. 73 (2), 119-131 (2004).</li><li>Guchelaar, H. J., Vermes, A., Meerwaldt, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-induced+xerostomia:+pathophysiology,+clinical+course+and+supportive+treatment.">Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, clinical course and supportive treatment.</a> Support Care Cancer. 5 (4), 281-288 (1997).</li><li>Lin, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+short-term+&#947;-irradiation+effects+on+mouse+salivary+gland+function+using+a+new+saliva+collection+device.">Measuring short-term &#947;-irradiation effects on mouse salivary gland function using a new saliva collection device.</a> Archives of Oral Biology. 46 (11), 1085-1089 (2001).</li><li>Montenegro, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+differences+between+humans+and+rodents+in+the+ability+to+concentrate+salivary+nitrate:+Implications+for+translational+research.">Profound differences between humans and rodents in the ability to concentrate salivary nitrate: Implications for translational research.</a> Redox biology. 10, 206-210 (2016).</li><li>Choi, J. S., Park, I. S., Kim, S. K., Lim, J. Y., Kim, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+and+Functional+Changes+of+Salivary+Gland+Dysfunction+After+Radioactive+Iodine+Ablation+in+a+Murine+Model.">Morphometric and Functional Changes of Salivary Gland Dysfunction After Radioactive Iodine Ablation in a Murine Model.</a> Thyroid. 23 (11), 1445-1451 (2013).</li><li>Imamura, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+pilocarpine-induced+saliva+secretion+by+adrenergic+agonists+in+ICR+mice.">Inhibition of pilocarpine-induced saliva secretion by adrenergic agonists in ICR mice.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 39 (12), 1038-1043 (2012).</li><li>Ma, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+Secretion+of+Saliva+in+Transgenic+Mice+Lacking+Aquaporin-5+Water+Channels.">Defective Secretion of Saliva in Transgenic Mice Lacking Aquaporin-5 Water Channels.</a> Journal of Biological Chemistry. 274 (29), 20071-20074 (1999).</li><li>Parkes, M. W., Parks, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supersensitivity+of+salivation+in+response+to+pilocarpine+after+withdrawal+of+chronically+administered+hyoscine+in+the+mouse.">Supersensitivity of salivation in response to pilocarpine after withdrawal of chronically administered hyoscine in the mouse.</a> British Journal of Pharmacology. 46 (2), 315-323 (1972).</li><li>Nishiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Up-Regulated+PAR-2-Mediated+Salivary+Secretion+in+Mice+Deficient+in+Muscarinic+Acetylcholine+Receptor+Subtypes.">Up-Regulated PAR-2-Mediated Salivary Secretion in Mice Deficient in Muscarinic Acetylcholine Receptor Subtypes.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 320 (2), 516 (2007).</li><li>Yang, B., Song, Y., Zhao, D., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotype+analysis+of+aquaporin-8+null+mice.">Phenotype analysis of aquaporin-8 null mice.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 288 (5), C1161-C1170 (2005).</li><li>Kamiya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-Ray-Induced+Damage+to+the+Submandibular+Salivary+Glands+in+Mice:+An+Analysis+of+Strain-Specific+Responses.">X-Ray-Induced Damage to the Submandibular Salivary Glands in Mice: An Analysis of Strain-Specific Responses.</a> BioResearch Open Access. 4 (1), 307-318 (2015).</li><li>Patel, R. M., Varma, S., Suragimath, G., Zope, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+and+Comparison+of+Salivary+Calcium,+Phosphorous,+Alkaline+Phosphatase+and+pH+Levels+in+Periodontal+Health+and+Disease:+A+Cross-sectional+Biochemical+Study.">Estimation and Comparison of Salivary Calcium, Phosphorous, Alkaline Phosphatase and pH Levels in Periodontal Health and Disease: A Cross-sectional Biochemical Study.</a> Journal of Clinical and Diagnostic Research. 10 (7), ZC58-ZC61 (2016).</li><li>Droebner, K., Sandner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+the+salivary+secretion+assay+in+F508del+mice--the+murine+equivalent+of+the+human+sweat+test.">Modification of the salivary secretion assay in F508del mice--the murine equivalent of the human sweat test.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 12 (6), 630-637 (2013).</li><li>Lamy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+mouse+whole+saliva+soluble+proteome+induced+by+tannin-enriched+diet.">Changes in mouse whole saliva soluble proteome induced by tannin-enriched diet.</a> Proteome Science. 8 (1), 65 (2010).</li><li>Mahomed, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+mucin+immunohistochemistry+in+salivary+gland+tumors+and+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma.">Recent advances in mucin immunohistochemistry in salivary gland tumors and head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncology. 47 (9), 797-803 (2011).</li><li>Kohlgraf, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+SPLUNC1+in+saliva+with+an+xMAP+particle-based+antibody+capture+and+detection+immunoassay.">Quantitation of SPLUNC1 in saliva with an xMAP particle-based antibody capture and detection immunoassay.</a> Archives of Oral Biology. 57 (2), 197-204 (2012).</li><li>Maimets, M., Bron, R., de Haan, G., van Os, R., Coppes, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+ex+vivo+expansion+and+post-irradiation+regenerative+potential+of+juvenile+and+aged+salivary+gland+stem+cells.">Similar ex vivo expansion and post-irradiation regenerative potential of juvenile and aged salivary gland stem cells.</a> Radiotherapy and Oncology. , (2015).</li><li>Lombaert, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+salivary+gland+function+after+stem+cell+transplantation+in+irradiated+glands.">Rescue of salivary gland function after stem cell transplantation in irradiated glands.</a> PLoS One. 3 (4), e2063 (2008).</li></ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

نحن نقدم طريقة متعددة الخطوات لتقييم وظيفة الغدة اللعابية، والتي يمكن تطبيقها على دراسة إصابة الغدة والمداواة. ويشمل الإجراء لدينا القصبة الهوائية وجمع اللعاب وتشريح الغدة، كل منها له التطبيقات التجريبية التي يمكن أن تدعم إجراء دراسة متكاملة للبيولوجيا الغدة اللعابية. على سبيل المثال، قد استخدمت مورين القصبة الهوائية للإدارة العامة مجرى الهواء أثناء إجراءات عرقلة تجويف الفم.
تشريح سليم وشق الرغامى مطلوبة من أجل pilocarpine وحفز إفراز اللعاب عند 100 مغ/كغ. بدلاً من ذلك، يمكن تجنب الحاجة إلى القصبة الهوائية جرعة pilocarpine مخفضة والتالي يمكن استخدامها لتقييم طولية ل إفراز اللعاب16.
بالإضافة إلى تسجيل إفراز اللعاب، يوفر هذا البروتوكول أيضا وسيلة دقيقة ومتسقة لجمع اللعاب لإجراء تحاليل إضافية. وتشمل هذه الدراسات ريولوجيا، البروتيوميات ونشاط إنزيم، واللعاب الاسموليه25،،من2627والعلامات البيولوجية اكتشاف28،29.
وأخيراً، أساليب التشريح الموحد الغدد اللعابية الرئيسية لها فائدة بعد جمع اللعاب. وهناك مصلحة في فهم التنمية الغدة واستجابة للإصابة. لإجراء تحقيقات فعالة، من المهم إجراء تشريح متسقة ونظيفة في الغدد اللعابية الرئيسية. تنظيف وعزل كفاءة الغدة أمر حاسم للثقافات المستمدة من الخلايا الأولية التي يتم فصل ميكانيكيا وانزيماتيكالي من30،الغدد اللعابية الرئيسية31، ونسيجية والمناعي الأعمال التحضيرية. وعلاوة على ذلك، عندما تلطيخ للبروتينات يفرز في أقسام أنسجة الغدة، أنها حاسمة للنظر ومراقبة لاحتمال نضوب هذه المنتجات بعد جمع حفز اللعاب.
التحديد الكمي لوظيفة الغدة اللعابية في التحقيقات المتعلقة بالضرر أو التدخل أسلوب تجريبي حيوية. علم الأنسجة الغدة غنية بالمعلومات، ويمكن استخلاص الملاحظات الأساسية، بعد الاستنتاجات التي تدعمها أفضل بيانات وظيفية واضحة.

وتشمل اضطرابات الغدة اللعابية المتلازمات dysregulated أو إعاقة إفراز مما يؤدي إلى الإفراط في الإنتاج (سيالورهيا) أو قصور الإنتاج (جفاف الفم وهيبوساليفيشن) من اللعاب1. وفي كلتا الحالتين، هناك مصلحة في تحسين فهمنا للبيولوجيا الغدة اللعابية نحو الهدف النهائي للتنمية العلاجية2.
الغدد اللعابية هي أجهزة راديوسينسيتيفي عالية، وغالباً ما تلف أثناء الأشعة سرطان الرأس والرقبة، مما يؤدي إلى جفاف الفم الدائم (جفاف الفم)3،4. خلافا لغيرها من الأنسجة راديوسينسيتيفي، بيد الغدة اللعابية معدل دوران منخفض نسبيا، وهو إليه فقدان الافرازية غير مفهومة5،6. في هذا الإعداد إصابة فريدة من نوعها، تتطلب استراتيجيات التجديد وتصاحبها الأنسجة اللعابية التقييم الوظيفي. تجريبيا، جمع اللعاب مورين أداة قيمة للغاية في تقييم استجابة الغدة للإشعاع والعوامل العلاجية.
نقدم هنا، أسلوب أداء وتحديد كمية إفراز اللعاب حفز استخدام pilocarpine، مؤثر المسكارينيه قوية7. بيلوكاربيني يحفز الجهاز العصبي اللاإرادي للحث على إفراز الغدة،من89. لإكمال هذا الاختبار على نحو ملائم، مطلوب القصبة الهوائية ضمان احتفاظ الماوس مجرى الهواء براءات الاختراع طوال فترة الإجراءات، والحد من مخاطر الاختناق وتطلع من إفرازات المجمعة في تجويف الفم10.
هذا إجراء المحطة طرفية، التي توجت بإزالة الغدد اللعابية الرئيسية الثلاثة: النكفية (PG) واللهاة (SMG)، وتحت اللسان (SLG). للدراسات الفنية، وتسجل الأوزان الغدة وغالباً ما تستخدم لتطبيع اللعاب قياس11،،من1213. بيانات هذا مهم بشكل خاص في دراسات الإشعاع، ضمور الغدة فيه نتيجة المتوقعة14،15
هناك تقلب في الأدب فيما يتعلق بكيفية حفز إفراز اللعاب تتم وذكرت16. على سبيل المثال، بيلوكاربيني جرعات داخل الأدب تمتد على الأقل ثلاثة أوامر من حجم17،18،19،20،21،،من2223. نقدم هنا، بروتوكولا pilocarpine جرعة عالية أمثل بقصد تحسين إمكانية تكرار نتائج في أسلوب التنفيذ، فضلا عن توفير منصة معيارية للتقنيات (القصبة الهوائية وجمع اللعاب وتشريح الغدة) التي يمكن تكييفها حسب هناك حاجة.
بالإضافة إلى بروتوكول المظاهرة، نقوم بتضمين بيانات وظيفية تمثيلية من تدفق اللعاب في 2 أسابيع بعد الإشعاع هورمونات (4 جرعات غراي 6.85) إلى منطقة SMG.

<table><tbody><tr><td>Pilocarpine hydrochloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6503</td><td>Pilocarpine</td></tr><tr><td>Student Vannas Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>91500-9</td><td>Spring Scissors for Tracheostomy</td></tr><tr><td>Sterile Saline Solution</td><td>Medline</td><td>RDI30296H</td><td>Saline</td></tr><tr><td>Dumont #7 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td><td>Curved Forceps</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td>Straight Forceps</td></tr><tr><td>Standard Pattern Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td>Blunt Forceps</td></tr><tr><td>Fine Scissors- Tungsten Carbide</td><td>Fine Science Tools</td><td>14568-09</td><td>Dissection Scissors</td></tr><tr><td>Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>22362566</td><td>Capillary tubes</td></tr><tr><td>Lubricant Eye Ointment</td><td>Refresh</td><td>N/A</td><td>Refresh Lacri-Lube</td></tr><tr><td>Goat polyclonal anti-Nkcc1</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>SC-21545</td><td>Nkcc1 Antibody</td></tr><tr><td>DAPI (4&#039;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>ver6.0</td><td>Statistical Software</td></tr><tr><td>Cotton tipped applicator</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td>Applicator for eye ointment</td></tr><tr><td>0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2&quot;</td><td>BD</td><td>7629</td><td>Syringe for intraperitoneal injection</td></tr></tbody></table>

murine salivary functional assessment via pilocarpine stimulation following fractionated radiation

ويلاحظ هيبوساليفاتيون عادة في رد فعل المناعة الذاتية سيورغن لمرض أو الإصابة الإشعاع التالية الغدد اللعابية الرئيسية. وفي هذه الحالات، تظل الأسئلة المتعلقة بمنشأ المرض والتدخلات الفعالة. أسلوب أمثل الذي يتيح تقييم وظيفي في الغدد اللعابية لا تقدر بثمن للتحقيق في البيولوجيا إفرازات الغدة والخلل الوظيفي، والمداواة. نقدم هنا، اتباع نهج خطوة بخطوة لأداء pilocarpine وحفز إفراز اللعاب، بما في ذلك القصبة الهوائية وتشريح الغدد اللعابية مورين الرئيسية الثلاثة. ونحن أيضا بالتفصيل تشريح الرأس والعنق مورين المناسبة الوصول إليها من خلال هذه التقنيات. وهذا النهج للتحجيم، مما يسمح للفئران متعددة بحيث تتم معالجتها في وقت واحد، وبالتالي تحسين كفاءة سير العمل. أننا نهدف إلى تحسين إمكانية تكرار نتائج هذه الطرق، كل منها على زيادة التطبيقات في هذا المجال. بالإضافة إلى جمع اللعاب، ونحن نناقش المقاييس للتحديد الكمي وتطبيع القدرة الوظيفية لهذه الأنسجة. ترفق بيانات تمثيلية من الغدد اللهاة مع وظيفة الغدة اللعابية الاكتئاب 2 أسابيع بعد الإشعاع هورمونات (4 جرعات غراي 6.85).

عند أداء pilocarpine جرعة عالية حفزت جمع اللعاب، من المهم الحفاظ على مجرى الهواء لمنع تطلع أو الاختناق من إفرازات في تجويف الفم. ويرد تخطيطي للقصبة الهوائية (الشكل 1). عقب شق القصبة الهوائية، يجب أن تظل ستوما واضحة من الأنسجة والسوائل.
لتعزيز عمل شعري أثناء جمع اللعاب، يجب أن ترحل الفئران رؤوسهم أسفل بزاوية 45 درجة. يمكن تنفيذ هذه الخطوات على > 1 الفأر، على الرغم من أنه لا ينصح بأن يتجاوز 5 الفئران في وقت واحد (الشكل 2). وبمجرد الانتهاء من جمع، من المستحسن أن أنابيب يتم وزنه بسرعة لتجنب الخسائر التبخر.
وعقب جمع اللعاب، هي euthanized الفئران. لا يمكن إجراء خلع عنق الرحم، كما أنها قد تؤدي إلى تلف الهياكل الرأس والرقبة. الفئران التي تعود إلى مرحلة تشريح، وينبغي أن تكون إعادة الغدد عبر القصبة الهوائية، كالموجود في الأصل. يجب أن يبدأ تشريح الغدة (الشكل 3) PG، بسبب موقفها واتساق منتشر على حد سواء. إس أم جي و SLG ثابتة، ويمكن إزالتها بسهولة.
عقب 4 الكسور 6.85 غراي الإشعاع إلى SMG مورين، وظيفة اللعاب يقلل بشكل ملحوظ من 2 أسابيع (الشكل 4). كل مجموع إفراز اللعاب، وتم رسم إفراز تطبيع للغدة من الوزن الرطب. باستخدام أما متري، اللعابية الوظيفية هو تقليص القدرة، كما هو متوقع، في 2 أسابيع بعد التشعيع24.
يمكن أن تكون أنسجة الغدة الثابتة ومقطعة للبقع النسيجي و/أو إيمونوهيستوتشيميستري. توضع وويوزين المصبوغة (H & E) يظهر مشابهة الإجمالي SMG العمارة على حد سواء مع أو بدون بيلوكاربيني التحفيز (الشكل 5). تلطيخ ل Nkcc1، يظهر الناقل غشاء كلوريد صوديوم بوتاسيوم، مورفولوجيا خلية مماثلة بغض النظر عن التحفيز بيلوكاربيني (الشكل 6).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57522/57522fig1.jpg"> الشكل 1 . القصبة الهوائية التخطيطي. (أ) بعد فتح منطقة الرقبة، تصور الهياكل الرئيسية. (ب) لإكمال القصبة الهوائية، بلطف أرفع، ولكن عدم فصل، جيه دون تعطيل الهياكل المجاورة، بما في ذلك إمدادات الدم وتعصيب والقنوات مطرح. قطع عضلات حزام لفضح غضروف الرغامى قبل إجراء شق في القصبة الهوائية. ترك إس أم جي في مكان والقصبة الهوائية يتعرض أثناء إجراء جمع اللعاب كاملة. <a href="/files/ftp_upload/57522/57522fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57522/57522fig2.jpg"> الشكل 2 . جمع اللعاب. في أعقاب التحفيز pilocarpine، زاوية الفئران أسفل وجمع اللعاب عن طريق الأنابيب الشعرية في أنابيب جمع موزون مسبقاً، التي توضع تحت مرحلة تشريح. <a href="/files/ftp_upload/57522/57522fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57522/57522fig3.jpg"> الشكل 3 . الرئيسية تشريح الغدة اللعابية. بمجرد قد تم euthanized الفئران، تغيير موضع وفصل SMG الأيمن والأيسر. عناية منفصلة كل غدة من المحيطة نونجلاندولار الأنسجة والأوعية الدموية. فريق البرمجة بنية منتشر، الأفقي. إس أم جي و SLG وانضم إليهم، ولكن يمكن فصلها بوضوح مع الملقط. <a href="/files/ftp_upload/57522/57522fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57522/57522fig4.jpg"> الشكل 4 . بيانات الممثل إفراز. الأسبوعين التاليين للإشعاع هورمونات (4 جرعات غراي 6.85) إلى إس أم جي، وتم قياس إفراز اللعاب حفزت pilocarpine. ويقال الدالة اللعابية اللعاب مجموع حجم (A) وحجم مجموع اللعاب (ب) تطبيع لمجموع الوزن الرطب SMG. كما هو متوقع، هناك انخفاض كبير في القدرة الوظيفية لاس أم جي (يعني ± التنمية المستدامة * *ف < 0.01 استخدام الاختبار t مزاوج الذيل اثنين). <a href="/files/ftp_upload/57522/57522fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57522/57522fig5.jpg"> الشكل 5 . توضع وتلطيخ SMG ويوزين- وكان حصاد الأنسجة SMG من ماوس بعد التحفيز pilocarpine (100 مغ/كغ، حق) عنصر التحكم، الماوس غير المعالجة SMG (يسار) بالمقارنة. ح & ه تلطيخ يبين هيكل غدة الإجمالي 10 X (حجم أشرطة: 200 ميكرومتر) (أ، ب) و 40 X (حجم أشرطة: 50 ميكرومتر) (ج، د). <a href="/files/ftp_upload/57522/57522fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57522/57522fig6.jpg"> الرقم 6 . Nkcc1 إس أم جي إيمونوهيستوتشيميستري- وكان حصاد الأنسجة SMG من ماوس بعد التحفيز pilocarpine (100 مغ/كغ، حق) عنصر التحكم، الماوس غير المعالجة SMG (يسار) بالمقارنة. هو بروتين غشاء Nkcc1 ويمكن استخدامها لتقييم مورفولوجيا الخلوية. يتم استخدام DAPI كونتيرستين نووية (مقياس أشرطة: 75 ميكرون). <a href="/files/ftp_upload/57522/57522fig6large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation at JoVE.com

Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation

مورين التقييم الوظيفي اللعابية عبر التالي التحفيز Pilocarpine مجزأ الإشعاع

نقدم نهجاً مفصلاً لأداء مجموعة اللعاب، بما في ذلك القصبة الهوائية مورين وعزل الغدد اللعابية الرئيسية الثلاثة.

Hyposalivation is commonly observed in the autoimmune reaction of Sj&#246;gren's syndrome or following radiation injury to the major salivary glands. In ...

murine-salivary-functional-assessment-via-pilocarpine-stimulation

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

11.1K Views.  University of Rochester. نقدم نهجاً مفصلاً لأداء مجموعة اللعاب، بما في ذلك القصبة الهوائية مورين وعزل الغدد اللعابية الرئيسية الثلاثة.

Video: Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation

Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

Severe salivary gland hypofunction is frequently found in patients with Sj&ouml;gren's syndrome and those who receiving therapeutic 
irradiation in their head and neck regions for cancer treatment. Both groups of patients experience symptoms such as xerostomia (dry mouth), dysphagia 
(impaired chewing and swallowing), severe dental caries, altered taste, oro-pharyngeal infections (candidiasis), mucositis, pain and discomfort.
One innovative approach of regenerative medicine for the treatment of salivary gland hypo-function is speculated in RS Redman, E Mezey 
et al. 2009: stem cells can be directly deposited by cannulation into the gland as a potent method in reviving the functions of the impaired organ. Presumably, 
the migrated foreign stem cells will differentiate into glandular cells to function as part of the host salivary gland. Also, this cannulation technique is an 
expedient and effective delivery method for clinical gene transfer application.
Here we illustrate the steps involved in performing the cannulation procedure on the mouse submandibular salivary gland via the Wharton's duct 
(Fig 1). C3H mice (Charles River, Montreal, QC, Canada) are used for this experiment, which have been kept under clean conventional conditions at 
the McGill University animal resource center. All experiments have been approved by the University Animal Care Committee and were in accordance with the 
guidelines of the Canadian Council on Animal Care.
For this experiment, a trypan blue solution is infused into the gland through the opening of the Wharton's duct using a 
insulin syringe with a 29-gauge needle encased inside a polyethylene tube. Subsequently, the mouse is dissected to show that the infusions migrated 
into the gland successfully.

A protocol for the cannulation of the mouse submandibular salivary gland via the Wharton's duct is described. For this experiment, the trypan blue solution is used as a dyer to demonstrate how this technique effectively delivers infusions into the targeted gland, and to suggest the reliability of this new approach as a potential clinical drug/cell therapy for the regeneration of salivary glands.

إقناء ؛ إدخال القنية من الغدة اللعابية تحت الفك السفلي الماوس عبر مجاري الهواء في وارتون

Severe salivary gland hypofunction is frequently found in patients with Sj&ouml;gren's syndrome and those who receiving therapeutic 
irradiation in their ...

Quantifying Cognitive Decrements Caused by Cranial Radiotherapy

With the exception of survival, cognitive impairment stemming from the clinical management of cancer is a major factor dictating therapeutic outcome. For many patients afflicted with CNS and non-CNS malignancies, radiotherapy and chemotherapy offer the best options for disease control. These treatments however come at a cost, and nearly all cancer survivors (~11 million in the US alone as of 2006) incur some risk for developing cognitive dysfunction, with the most severe cases found in patients subjected to cranial radiotherapy (~200,000/yr) for the control of primary and metastatic brain tumors1. Particularly problematic are pediatric cases, whose long-term survival plagued with marked cognitive decrements results in significant socioeconomic burdens2. To date, there are still no satisfactory solutions to this significant clinical problem.
We have addressed this serious health concern using transplanted stem cells to combat radiation-induced cognitive decline in athymic rats subjected to cranial irradiation3. Details of the stereotaxic irradiation and the in vitro culturing and transplantation of human neural stem cells (hNSCs) can be found in our companion paper (Acharya et al., JoVE reference). Following irradiation and transplantation surgery, rats are then assessed for changes in cognition, grafted cell survival and expression of differentiation-specific markers 1 and 4-months after irradiation. To critically evaluate the success or failure of any potential intervention designed to ameliorate radiation-induced cognitive sequelae, a rigorous series of quantitative cognitive tasks must be performed. To accomplish this, we subject our animals to a suite of cognitive testing paradigms including novel place recognition, water maze, elevated plus maze and fear conditioning, in order to quantify hippocampal and non-hippocampal learning and memory. We have demonstrated the utility of these tests for quantifying specific types of cognitive decrements in irradiated animals, and used them to show that animals engrafted with hNSCs exhibit significant improvements in cognitive function3.
The cognitive benefits derived from engrafted human stem cells suggest that similar strategies may one day provide much needed clinical recourse to cancer survivors suffering from impaired cognition. Accordingly, we have provided written and visual documentation of the critical steps used in our cognitive testing paradigms to facilitate the translation of our promising results into the clinic.

Cognitive impairment resulting from the radiotherapeutic management of brain tumors represents a clinically intractable condition that adversely impacts quality of life. The capability to critically evaluate potential interventions for ameliorating radiation-induced cognitive decrements ultimately depends on the capability to undertake rigorous quantitative assessments of cognition.

قياس المعرفي التناقصات التي تحدثها العلاج الإشعاعي القحف

With the exception of survival, cognitive impairment stemming from the clinical management of cancer is a major factor dictating therapeutic outcome. For ...

Functional Interrogation of Adult Hypothalamic Neurogenesis with Focal Radiological Inhibition

The functional characterization of adult-born neurons remains a significant challenge. Approaches to inhibit adult neurogenesis via invasive viral delivery or transgenic animals have potential confounds that make interpretation of results from these studies difficult. New radiological tools are emerging, however, that allow one to noninvasively investigate the function of select groups of adult-born neurons through accurate and precise anatomical targeting in small animals. Focal ionizing radiation inhibits the birth and differentiation of new neurons, and allows targeting of specific neural progenitor regions. In order to illuminate the potential functional role that adult hypothalamic neurogenesis plays in the regulation of physiological processes, we developed a noninvasive focal irradiation technique to selectively inhibit the birth of adult-born neurons in the hypothalamic median eminence. We describe a method for Computer tomography-guided focal irradiation (CFIR) delivery to enable precise and accurate anatomical targeting in small animals. CFIR uses three-dimensional volumetric image guidance for localization and targeting of the radiation dose, minimizes radiation exposure to nontargeted brain regions, and allows for conformal dose distribution with sharp beam boundaries. This protocol allows one to ask questions regarding the function of adult-born neurons, but also opens areas to questions in areas of radiobiology, tumor biology, and immunology. These radiological tools will facilitate the translation of discoveries at the bench to the bedside.

The function of adult-born mammalian neurons remains an active area of investigation. Ionizing radiation inhibits the birth of new neurons. Using computer tomography-guided focal irradiation (CFIR), three-dimensional anatomical targeting of specific neural progenitor populations can now be used to assess the functional role of adult neurogenesis.

الاستجواب وظيفية من الكبار طائية تكوين الخلايا العصبية مع البؤري الإشعاعية تثبيط

The functional characterization of adult-born neurons remains a significant challenge. Approaches to inhibit adult neurogenesis via invasive viral ...

Neuroscience

Assessment of Memory Function in Pilocarpine-induced Epileptic Mice

Cognitive impairment is one of the most common comorbidities in temporal lobe epilepsy. To recapitulate epilepsy-associated cognitive decline in an animal model of epilepsy, we generated pilocarpine-treated chronic epileptic mice. We present a protocol for three different behavioral tests using these epileptic mice: novel object location (NL), novel object recognition (NO), and pattern separation (PS) tests to evaluate learning and memory for places, objects, and contexts, respectively. We explain how to set the behavioral apparatus and provide experimental procedures for the NL, NO, and PS tests following an open field test that measures the animals&#8217; basal locomotor activities. We also describe the technical advantages of the NL, NO, and PS tests with respect to other behavioral tests for assessing memory function in epileptic mice. Finally, we discuss possible causes and solutions for epileptic mice failing to make 30 s of good contact with the objects during the familiarization sessions, which is a critical step for successful memory tests. Thus, this protocol provides detailed information about how to assess epilepsy-associated memory impairments using mice. The NL, NO, and PS tests are simple, efficient assays that are appropriate for the evaluation of different kinds of memory in epileptic mice.

This article presents experimental procedures for assessing memory impairments in pilocarpine-induced epileptic mice. This protocol can be used to study the pathophysiologic mechanisms of epilepsy-associated cognitive decline, which is one of the most common comorbidities in epilepsy.

تقييم وظيفة الذاكرة في الفئران الصرع التي يسببها بيلوكاربين

Cognitive impairment is one of the most common comorbidities in temporal lobe epilepsy. To recapitulate epilepsy-associated cognitive decline in an animal ...

Behavior

Adapting Human Videofluoroscopic Swallow Study Methods to Detect and Characterize Dysphagia in Murine Disease Models

This study adapted human videofluoroscopic swallowing study (VFSS) methods for use with murine disease models for the purpose of facilitating translational dysphagia research. Successful outcomes are dependent upon three critical components: test chambers that permit self-feeding while standing unrestrained in a confined space, recipes that mask the aversive taste/odor of commercially-available oral contrast agents, and a step-by-step test protocol that permits quantification of swallow physiology. Elimination of one or more of these components will have a detrimental impact on the study results. Moreover, the energy level capability of the fluoroscopy system will determine which swallow parameters can be investigated. Most research centers have high energy fluoroscopes designed for use with people and larger animals, which results in exceptionally poor image quality when testing mice and other small rodents. Despite this limitation, we have identified seven VFSS parameters that are consistently quantifiable in mice when using a high energy fluoroscope in combination with the new murine VFSS protocol. We recently obtained a low energy fluoroscopy system with exceptionally high imaging resolution and magnification capabilities that was designed for use with mice and other small rodents. Preliminary work using this new system, in combination with the new murine VFSS protocol, has identified 13 swallow parameters that are consistently quantifiable in mice, which is nearly double the number obtained using conventional (i.e., high energy) fluoroscopes. Identification of additional swallow parameters is expected as we optimize the capabilities of this new system. Results thus far demonstrate the utility of using a low energy fluoroscopy system to detect and quantify subtle changes in swallow physiology that may otherwise be overlooked when using high energy fluoroscopes to investigate murine disease models.

This study successfully adapted human videofluoroscopic swallowing study (VFSS) methods for use with murine disease models for the purpose of facilitating translational dysphagia research.

التكيف Videofluoroscopic طرق دراسة السنونو الإنسان لكشف وتوصيف عسر البلع في نماذج الفئران الأمراض

This study adapted human videofluoroscopic swallowing study (VFSS) methods for use with murine disease models for the purpose of facilitating ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of saliva into the oral cavity. Serous and mucous acinar cells are the protein and mucous producing factories of the gland respectively, and represent the origin of saliva production. Once synthesised, the various enzymatic and other proteinaceous components of saliva are secreted through a series of ductal cells bearing epithelial-type morphology, until the eventual expulsion of the saliva through one major duct into the cavity of the mouth. The composition of saliva is also modified by the ductal cells during this process.
In the manifestation of diseases such as Sj&ouml;gren's syndrome, and in some clinical situations such as radiotherapy treatment for head and neck cancers, saliva production by the glands is dramatically reduced 1,2. The resulting xerostomia, a subjective feeling of dry mouth, affects not only the ability of the patient to swallow and speak, but also encourages the development of dental caries and can be socially debilitating for the sufferer.
The restoration of saliva production in the above-mentioned clinical conditions therefore represents an unmet clinical need, and as such several studies have demonstrated the regenerative capacity of the salivary glands 3-5. Further to the isolation of stem cell-like populations of cells from various tissues within the mouse and human bodies 6-8, we have shown using the described method that stem cells isolated from mouse salivary glands can be used to rescue saliva production in irradiated salivary glands 9,10. This discovery paves the way for the development of stem cell-based therapies for the treatment of xerostomic conditions in humans, and also for the exploration of the salivary gland as a microenvironment containing cells with multipotent self-renewing capabilities.

An optimized protocol for the isolation of stem cells from the mouse salivary gland is described. The method employs enzymatic and mechanical digestion, and permits isolation of salispheres containing cells with characteristics of stem cells.

عزل الخلايا الجذعية ماوس اللعابية الغدة

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Biology

Retroductal Nanoparticle Injection to the Murine Submandibular Gland

Two common goals of salivary gland therapeutics are prevention and cure of tissue dysfunction following either autoimmune or radiation injury. By locally delivering bioactive compounds to the salivary glands, greater tissue concentrations can be safely achieved versus systemic administration. Furthermore, off target tissue effects from extra-glandular accumulation of material can be dramatically reduced. In this regard, retroductal injection is a widely used method for investigating both salivary gland biology and pathophysiology. Retroductal administration of growth factors, primary cells, adenoviral vectors, and small molecule drugs has been shown to support gland function in the setting of injury. We have previously shown the efficacy of a retroductally injected nanoparticle-siRNA strategy to maintain gland function following irradiation. Here, a highly effective and reproducible method to administer nanomaterials to the murine submandibular gland through Wharton's duct is detailed (Figure 1). We describe accessing the oral cavity and outline the steps necessary to cannulate Wharton's duct, with further observations serving as quality checks throughout the procedure.

Local drug delivery to the submandibular glands is of interest in understanding salivary gland biology and for the development of novel therapeutics. We present an updated and detailed retroductal injection protocol, designed to improve delivery accuracy and experimental reproducibility. The application presented herein is the delivery of polymeric nanoparticles.

حقن نانوحبيبات ريترودوكتال للغدة اللهاة مورين

Two common goals of salivary gland therapeutics are prevention and cure of tissue dysfunction following either autoimmune or radiation injury. By locally ...

Bioengineering

Retroductal Submandibular Gland Instillation and Localized Fractionated Irradiation in a Rat Model of Salivary Hypofunction

Normal tissues that lie within the portals of radiation are inadvertently damaged. Salivary glands are often injured during head and neck radiotherapy. Irreparable cell damage results in a chronic loss of salivary function that impairs basic oral activities, and increases the risk of oral infections and dental caries. Salivary hypofunction and its complications gravely impact a patient's comfort. Current symptomatic management of the condition is ineffective, and newer therapies to assuage the condition are needed. 
Salivary glands are exocrine glands, which expel their secretions into the mouth via excretory ducts. Cannulation of these ducts provides direct access to the glands. Retroductal delivery of a contrast agent to major salivary glands is a routine out-patient procedure for diagnostic imaging. Using a similar procedure, localized treatment of the glands is feasible. However, performing this technique in preclinical studies with small animals poses unique challenges. In this study we describe the technique of retroductal administration in rat submandibular glands, a procedure that was refined in Dr. Bruce Baum's laboratory (NIH)1, and lay out a procedure for local gland irradiation.

Salivary gland hypofunction, a major adverse effect of head and neck radiotherapy diminishes a patient's quality of life. The demonstration of efficacy of new therapies in animal models is a prerequisite before clinical transition. This protocol describes retroductal administration and local irradiation of rat submandibular glands.

Retroductal تحت الفك السفلي الغدة تقطير والمترجمة مجزأ تشعيع في نموذج الفأر من اللعابية Hypofunction

Normal tissues that lie within the portals of radiation are inadvertently damaged. Salivary glands are often injured during head and neck radiotherapy. ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced saliva production. Similarly, saliva production is severely compromised in patients receiving radiation treatment for head and neck cancers. Rodent models, developed to mimic these clinical conditions, facilitate an understanding of the disease pathogenesis and allow for the development of new therapeutic strategies. Therefore, the ability to accurately, reproducibly, and repeatedly measure salivary gland function in animal models is critical. Building on procedures previously described in the literature, a method was developed that meets these criteria and was used to evaluate salivary gland function in mice. An additional advantage of this new method is that it is easily mastered, and has little inter-operator variation. Salivary gland function is evaluated as the amount (weight or volume) or rate (mL/min) of saliva produced in response to pilocarpine stimulation. The collected saliva is a good source for the analyses of protein content, immunoglobulin concentrations, and other biomolecules.

Salivary gland hypofunction is a frequent consequence of autoimmune disease and radiation therapy. Reproducible evaluation of salivary gland function in mouse models of these diseases is a technical challenge. Here, a simple method for accurate and reproducible measurement of saliva production in mice is described.

طريقة لقياس وظيفة الغدة اللعابية في الفئران

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Immunology and Infection

Radiation Treatment of Organotypic Cultures from Submandibular and Parotid Salivary Glands Models Key In Vivo Characteristics

Hyposalivation and xerostomia create chronic oral complications that decrease the quality of life in head and neck cancer patients who are treated with radiotherapy. Experimental approaches to understanding mechanisms of salivary gland dysfunction and restoration have focused on in vivo models, which are handicapped by an inability to systematically screen therapeutic candidates and efficiencies in transfection capability to manipulate specific genes. The purpose of this salivary gland organotypic culture protocol is to evaluate maximal time of culture viability and characterize cellular changes following ex vivo radiation treatment. We utilized immunofluorescent staining and confocal microscopy to determine when specific cell populations and markers are present during a 30-day culture period. In addition, cellular markers previously reported in in vivo radiation models are evaluated in cultures that are irradiated ex vivo. Moving forward, this method is an attractive platform for rapid ex vivo assessment of murine and human salivary gland tissue responses to therapeutic agents that improve salivary function.

Using three-dimensional organotypic cultures to visualize morphology and functional markers of salivary glands may provide novel insights into the mechanisms of tissue damage following radiation. Described here is a protocol to section, culture, irradiate, stain, and image 50&#8211;90 &#956;m thick salivary gland sections prior to and following exposure to ionizing radiation.

العلاج الإشعاعي للثقافات العضوية من فك ونكفي نماذج الغدد اللعابية الرئيسية في خصائص فيفو

Hyposalivation and xerostomia create chronic oral complications that decrease the quality of life in head and neck cancer patients who are treated with ...