JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

מחקר זה נועד לאמת את ההשפעה הטיפולית של נקודת הדיקור Shu-Mu Brain-Kidney על אוליגואסטנוספרמיה בחולדות ולחקור את המנגנון הבסיסי שלה דרך ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-אשך (HPT).

Abstract

אוליגואסטנוספרמיה היא גורם שכיח לאי פוריות גברית. ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-אשך (HPT) מווסת את ההתמיינות וההתבגרות של בלוטות המין באמצעות סינתזה ושחרור של הורמוני הרבייה, וממלא תפקיד חיוני בפוריות הגבר. שיבוש יציבות ציר ה-HPT פוגע בייצור הזרע, ומפחית את איכות הזרע. חקירת השפעת הדיקור האלקטרו-סיני על ויסות ציר ה-HPT עשויה לספק תובנות לטיפול באוליגואסתנוספרמיה. חמישים חולדות SD זכרות בנות 8 שבועות חולקו באופן אקראי לקבוצות ריקות, מודל, Shu-Mu מוח-כליה, ללא דיקור ו-L-קרניטין (n = 10 לקבוצה). מלבד הקבוצה הריקה, החולדות קיבלו אדנין תוך קיבה למשך 28 יום כדי לבסס את המודל. לאחר המודל, קבוצת המוח-כליה של שו-מו עברה דיקור חשמלי בנקודות דיקור ייעודיות, בעוד שהקבוצה ללא נקודת דיקור קיבלה טיפול דמה במשך 30 דקות ביום. הקבוצה שקיבלה L-קרניטין קיבלה L-קרניטין (10 מ"ל/ק"ג) דרך הקיבה פעם ביום. הטיפולים נמשכו 28 יום. הוערכו תנאים כלליים, מקדמי איברים ואיכות הזרע. צביעת HE ניתחה מורפולוגיה של רקמות, ו-ELISA זיהתה שינויים בהורמונים בסרום. בהשוואה לקבוצת המודל, הקבוצות Shu-Mu Brain-Kidney ו-L-carnitine הדגימו שיפור משמעותי ברוח, בתזונה וביציאות, עם עלייה במשקל הגוף, בעוד שהקבוצה ללא נקודת דיקור לא הראתה שינוי משמעותי. מקדמי איברי הכליה ירדו באופן משמעותי בקבוצות Shu-Mu Brain-Kidney ו-L-carnitine אך נותרו ללא שינוי בקבוצה ללא נקודת דיקור. מקדמי איברי האשכים לא הראו הבדלים משמעותיים בין קבוצות הטיפול. ספירת הזרע, הצפיפות, ההישרדות ושיעורי התנועתיות השתפרו באופן משמעותי בקבוצות Shu-Mu Brain-Kidney ו-L-carnitine, אך לא בקבוצה ללא נקודת דיקור. צביעת H&E הראתה נזק משופר לכליות ולרקמות האשכים בקבוצות Shu-Mu Brain-Kidney ו-L-carnitine. ELISA חשפה עלייה ברמות T, GnRH ו-INHB וירידה ברמות LH, FSH, E2 ו-PRL בקבוצות אלה (p < 0.001), ללא שינויים משמעותיים בקבוצה ללא נקודת דיקור. ממצאים אלה מצביעים על כך שטיפול בנקודת דיקור מוח-כליה של Shu-Mu משפר את איכות הזרע על ידי ויסות ציר ה-HPT, ומציע טיפול פוטנציאלי לאוליגואסטנוספרמיה.

Introduction

אוליגואסטנוספרמיה, המחולקת ל"אוליגוספרמיה" ו"אסתנוספרמיה", היא אחד הסוגים הנפוצים של אי פוריות גברית, עם שיעור היארעות המהווה כ-75% ממקרי אי פוריות הגבר1. אוליגואסטנוספרמיה מאופיינת בעיקר בירידה בצפיפות הזרע ובתנועתיות באשכים ומתבטאת בעיקר קלינית כהפרעת זרע, ספירת זרע מופחתת ותנועתיות זרע נמוכה 2,3. בשנים האחרונות, שכיחות האוליגואסתנוספרמיה עלתה משנה לשנה4. ללא טיפול יעיל, יהיו לכך השפעות שליליות ארוכות טווח על בריאותם הפיזית והנפשית של המטופלים ואפילו על ההרמוניה המשפחתית5. מחקרים הראו שבעיות גנטיות6, הפרעות אנדוקריניות רבייה7, דלקות בדרכי השתן8 ותרופות כימיות9 יכולות להשפיע על ייצור הזרע והבשלתו, מה שמוביל לירידה באיכות הזרע. כיום, שיפור איכות הזרע הפגום הפך לבעיה מאתגרת בתחום הרפואי.

ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-אשך (HPT) הוא המסלול העיקרי של ויסות הרבייה בגוף, שיכול לווסת את ההתמיינות וההתבגרות של בלוטות המין על ידי גירוי הסינתזה והשחרור של הורמוני רבייה הקשורים להיפותלמוס, בלוטת יותרת המוח והאשכים, וממלא תפקיד חשוב בשמירה על תפקוד רבייה תקין של גברים10. אם היציבות של תפקוד ציר ה-HPT מופרעת, זה יגרום להפרשת האשכים להיות לא מספיקה כדי להגיע לריכוז הפיזיולוגי של טסטוסטרון, וכתוצאה מכך ירידה במספר ובאיכות הזרע באשך11. לכן, הטיפול באוליגואסטנוספרמיה נועד בעיקר לווסת את תפקוד ציר ה-HPT ולהשיג את המטרה של שמירה על איזון ההורמונים האנדוקריניים הקשורים, ובכך להגדיל את מספר הזרע בזרע, לשפר את פעילות הזרע ולשפר את איכות הזרע.

בטיפול הקליני באוליגואסתנוספרמיה, הרפואה המודרנית מאמצת בעיקר שיטות כמו ניתוחים ותרופות נוגדות חמצון ומשפרות את תנועתיות הזרע12,13, בעוד שטיפול באלקטרו-אקופונקטורה משלב דיקור סיני מסורתי וביו-חשמל רפואי מודרני. יש לו את היתרונות של היותו מהיר ומדויק, בעל השפעה מרפא ברורה, בעל מעט תגובות שליליות, מגוון רחב של מחלות מתאימות ועלות טיפול נמוכה, ובעל השפעה טיפולית טובה על אוליגואסטנוספרמיה14,15. "הגב הוא יאנג, והבטן היא יין". שילוב נקודות הדיקור של שו-מו משלב את נקודות השו עם נקודות המו, אחת מלפנים ואחת מאחור, יין אחד ויאנג אחד, בעבודה יחד, הידועה גם בשם שיטת שילוב נקודות הדיקור הקדמי-אחורי. הרפואה הסינית המסורתית מאמינה כי הכליה היא שורש המהות הטרום לידתית, והמחלה ממוקמת בכליה. הנקודה הקדמית-מו של הכליה, ג'ינגמן (GB25), ונקודת ה-Back-shu, Shenshu (BL23), נבחרות, שיש לה השפעה של חימום הכליה, סיוע ליאנג וחיפוש יאנג בתוך יין16,17; הכליה אוגרת את המהות ושולטת בייצור מח העצם, המוח הוא ים המח ומקום המפגש של כל היאנג, וטאישי (KI3) היא נקודת המקור של מרידיאן הכליות של כף הרגל, שיכול לווסת ולחזק את הכבד והכליות, להזין יין ולייצר מח עצם18. בשילוב עם Epangsanxian (MS4), הוא מחבר בין הכליה למוח, ומשקף את הרעיון של "שילוב דיקור מוח-כליה של שו-מו" ברפואה הסינית המסורתית19, וההשפעה הטיפולית ברורה יותר מזו של דיקור רגיל.

מחקרי הטיפול הנוכחיים על איכות הזרע מתמקדים בעיקר בשיפור מבנה ותפקוד האשכים, בעוד שמחקר מוגבל נערך על ויסות רמות ההורמונים בסרום ברקמות שונות של ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-אשך (HPT)20. במחקר ראשוני, ריצוף RNA (RNA-Seq) שימש לזיהוי גנים מועמדים ומסלולי ויסות המעורבים בוויסות איכות הזרע ברקמות ההיפותלמוס, יותרת המוח והאשכים של חולדות בריאות וחולדות מודל אוליגוזוספרמיה הנגרמות על ידי אדנין21. בנוסף, בוצעו בדיקות איכות זרע וניתוח היסטולוגי של רקמות האשכים בשתי הקבוצות. ממצאים אלה סיפקו תובנות לגבי המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס איכות הזרע בחולדות אוליגואסטנוספרמיה הנגרמות על ידי אדנין. טיפול בדיקור אלקטרו-סיני עם נקודת דיקור רחוקה-מקורבת יכול לשפר את איכות הזרע בחולדות אוליגואסטנוספרמיה על ידי ויסות ציר ה-HPT, וההשפעה קשורה לתהליך של מתח חמצוני22. עם זאת, לא ידוע אם נקודת הדיקור Shu-Mu Brain-Kidney יכולה לשפר את איכות הזרע של חולדות על ידי ויסות ציר ה-HPT. כדי לחקור עוד יותר את המנגנון הרגולטורי של שיפור איכות הזרע בחולדות אוליגואסטנוספרמיה ושיטות טיפול יעילות, מחקר זה השתמש במודל חולדות המושרה על ידי אדנין של אוליגואסטנוספרמיה ובחר ארבע נקודות דיקור, Epangsanxian, Shenshu, Jingmen ו-Taixi, כדי לחקור את המנגנון הקשור להשפעה הטיפולית של נקודת דיקור מוח-כליה של Shu-Mu על אוליגואסטנוספרמיה בחולדות מההיבט של ציר ה-HPT, מתן בסיס מדעי יותר לטיפול קליני.

Protocol

כל הניסויים בבעלי חיים נבדקו ואושרו על ידי ועדת האתיקה של בעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית נינגשיה (מספר אישור: IACUC-NYLAC-2021-130). המחקר בוצע בהתאם להנחיות ARRIVE 2.0 לניסויים בבעלי חיים ודבק בעקרונות רווחת בעלי החיים המתוארים במדריך ה-NIH לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. מחקר אקראי מבוקר זה בבעלי חיים השתמש בניתוח חד כיווני של שונות ונערך במרכז הניסויים בבעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית נינגשיה ממרץ עד מאי 2023. למחקר זה נעשה שימוש בחולדות SD זכרות בדרגת SPF במשקל 180-220 גרם. פרטי הריאגנטים והציוד המשמשים מפורטים בטבלת החומרים.

1. הקמת מודלים של בעלי חיים ונהלי טיפול

  1. חיות ניסוי וקבוצות
    1. השג חמישים חולדות SD זכרות בנות 8 שבועות בדרגת SPF במשקל 180-220 גרם.
    2. מאכלסים את כל החולדות בתנאים סטנדרטיים, שומרים על טמפרטורת חדר של 22-25 מעלות צלזיוס, לחות של 50%-60%, ומספקים גישה חופשית להזנת מכרסמים ומים סטנדרטיים.
    3. לאחר שבוע אחד של הסתגלות, חלקו את החולדות באופן אקראי לקבוצה ריקה (B) (n = 10) ולקבוצת מידול (n = 40) באמצעות שיטת טבלת מספרים אקראית. תן מי מלח רגילים לקבוצה הריקה ואדנין לקבוצת הדוגמנות על ידי גבאז' דרך הפה.
    4. לאחר 28 ימים, חלקו באופן אקראי את קבוצת המודלים לקבוצת מודל (M), קבוצת Shu-Mu מוח-כליה (S), קבוצה ללא נקודת דיקור (N) וקבוצת L-קרניטין (L) (n = 10 לקבוצה). השאירו את קבוצת המודל ללא טיפול.
      1. ליישם התערבות בדיקור אלקטרו-סיני בשיטת התאמת נקודת דיקור מוח-כליה Shu-Mu לקבוצת Shu-Mu מוח-כליה. מתן טיפול ללא נקודת דיקור לקבוצה ללא נקודת דיקור ונוזל אוראלי L-קרניטין על ידי הגדלה לקבוצת L-קרניטין. טפלו בכל הקבוצות ברציפות במשך 28 יום.
  2. בניית דגם
    הערה: מחקרים הראו כי מינונים גבוהים של אדנין יכולים להשפיע על תפקוד האשכים בחולדות, מה שמוביל להפרשה לא תקינה של הורמוני מין, הפרעה ביציבות התפקודית של ציר ה-HPT וירידה באיכות הזרע23. לכן, אדנין משמש בדרך כלל לביסוס מודלים של אי פוריות של בעלי חיים זכרים.
    1. מתן תמיסת מלח רגילה (1 מ"ל/100 גרם משקל גוף) לקבוצה הריקה ואדנין (20 מ"ג/100 גרם משקל גוף) לקבוצת המודל על ידי גבאז' דרך הפה (איור 1A).
    2. הקפידו על תסיסה מתמשכת במהלך הגאווג' כדי למנוע משקעי אדנין וחסימה של מחט הגאווג'. יש לתת את הטיפול פעם ביום למשך 28 יום.
  3. 1.3 הליך טיפול
    1. קבוצת Shu-Mu מוח-כליה
      1. התחל התערבות ביום הראשון לאחר הדוגמנות. בצע דיקור סיני עם מחטי דיקור סטריליות חד פעמיות בנקודות דו-צדדיות. לאחר תיקון החולדה, יש לחשוף ולחטא את אתר הדיקור.
      2. תקן את העור של אתר הדיקור ביד שמאל ונקב במהירות את נקודת הדיקור עם מחט הדיקור הסטרילית החד פעמית ביד ימין. חבר ממריץ חשמלי. החל גלים מתרחבים בתדר דיקור חשמלי של 2 הרץ, עוצמת גירוי של 1.5 mA ורעד קל של השריר המקומי.
      3. בצעו טיפול בדיקור חשמלי במשך 30 דקות בכל פעם, פעם ביום, במשך 28 ימים רצופים (איור 1B).
        הערה: בחר נקודות דיקור בחולדות תוך התייחסות למדע הדיקור הניסיוני והמוקסה של יונג טאנג, נספח II, "נקודות דיקור נפוצות בחיות ניסוי", בשילוב עם שיטת בחירת נקודות אנטומיות השוואתית19. נבחרו הנקודות הבאות: (1) Epangsanxian (MS4): ממוקם 3 מ"מ מתחת ו-4 מ"מ מחוץ לנקודת Touwei. פעולה: דקירה 1-2 מ"מ ישר; (2) Shenshu (BL23): ממוקם באזור עמוד השדרה, משני צידי התהליך הקוצני התחתון של החוליה המותנית השנייה, 6 מ"מ ליד קו הגב החציוני. פעולה: דקירה 6 מ"מ ישר; (3) ג'ינגמן (GB25): ממוקם על המותניים הצדדיות, בקצה החופשי של הצלע ה-13 בצד התחתון. פעולה: דקירה 1-2 מ"מ ישר; (4) Taixi (KI3): ממוקם בצד הפנימי של כף הרגל, בשקע בין הנקודה הגבוהה של הקרסול המדיאלי לקצה האחורי של גיד אכילס. פעולה: דקירה 3 מ"מ ישר.
    2. קבוצה ללא דיקור
      1. בחרו והפעילו נקודות דיקור 1, 2 ו-3 באותו אופן כמו קבוצת המוח-כליה של שו-מו (איור 1B).
        הערה: מכיוון שנקודות הדיקור אינן עוקבות אחר העיקרון של בחירת נקודות לאורך המרידיאנים, ועל פי תיאוריית הרפואה הסינית המסורתית (TCM) ותצפית קלינית ארוכת טווח, לשלוש נקודות הדיקור הללו יש השפעה טיפולית מועטה על חולים עם אוליגואסטנוזוספרמיה24. (1) ללא נקודת דיקור 1: ממוקם בנקודת האמצע של הקו בין קצה המרפק לבית השחי בצד הפנימי של המרפק. פעולה: דקירה 1-2 מ"מ ישר; (2) שאינו דיקור 2: ממוקם בנקודת האמצע בין האפיקונדיל המדיאלי של עצם הזרוע לשורש כף היד של האולנה, בשוליים האולנרים. פעולה: דקירה 1-2 מ"מ ישר; (3) ללא נקודת דיקור 3: ממוקם בצומת של שריר הדלתא הקדמי ושריר הזרוע הדו-ראשי בזרוע הפנימית. פעולה: דקירה 1-2 מ"מ ישר.
    3. קבוצת L-קרניטין
      1. מתן נוזל פומי לבוקרניטין דרך הפה במינון של 10 מ"ל/ק"ג משקל גוף, פעם ביום, במשך 28 ימים רצופים (איור 1A).
  4. המתת חסד
    1. לאחר הטיפול, אפשר לכל החולדות לצום במשך 24 שעות, להרדים אותן על ידי הזרקה תוך-צפקית של 2% נתרן פנטוברביטל (40 מ"ג/ק"ג משקל גוף, בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי המוסד), ולאסוף דם מקודקוד הלב באמצעות מחט חד פעמית לאיסוף דם תוך ורידי21,24.
    2. לאחר המוות בעריפת ראש, הסר צד אחד של האפידידימיס כדי למדוד את איכות הזרע. קצרו את רקמות הכליה והאשכים, שקלו ורשמו אותם, וקבעו אותם בקיבוע פרפורמלדהיד בטמפרטורת החדר למשך 48 שעות לפני הטמעתם בפרפין24.

2. מדדי תצפית

  1. התבוננות כללית: התבוננו במצב הנפשי, בתזונה וביציאות של החולדות, ועקבו אחר משקל גופן מדי יום.
  2. מקדמי איברים: לאחר המוות, הסר בזהירות את השומן פני השטח ורקמת החיבור הן מרקמות הכליה והן מרקמות האשכים, שטוף במי מלח רגילים, יבש בנייר פילטר, שקל על איזון ורשום את המדידות לחישוב מקדמי האיברים. מקדם איברים (%) = (משקל איבר [g] / משקל גוף [g]) x 100%.
  3. איכות זרע
    1. לאחר הסרת עודפי שומן, הסר והניח צד אחד של האפידידימיס מכל חולדה באמבט מים בטמפרטורה קבועה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. לאחר מכן, חותכים, מסננים, נושפים בעדינות ומערבבים היטב את הדגימה.
    2. קח מנה של 10 מיקרוליטר מתרחיף הזרע המדולל והפיל אותו על קצה זכוכית הכיסוי של לוחית ספירה מחוממת מראש, מה שמאפשר לתרחיף הזרע לחלחל אוטומטית לתוך תא הספירה.
    3. מדוד את ספירת הזרע, הצפיפות, שיעור ההישרדות ושיעור התנועתיות באמצעות מערכת CASA (ניתוח זרע בעזרת מחשב)21.
  4. צביעת המטוקסילין ואאוזין (H&E)
    הערה: לפרטים על ההליך, עיין ב-Yang, N. et al.21.
    1. שוטפים את הרקמות הקבועות במים זורמים, מייבשים ומטמיעים אותן.
    2. חותכים חתיכות פרפין (בעובי 5 מיקרומטר) בעזרת מיקרוטום ואופים בחום של 65 מעלות למשך 4 שעות.
    3. הסירו שעווה מהחלקים והחזירו להם לחות במים.
    4. מכתימים את החלקים בתמיסת מכתים המטוקסילין למשך 3 דקות, ואז שוטפים במים זורמים.
    5. ייבשו את החלקים עם 95% אתנול למשך דקה, ואז הכתמו בתמיסת אאוזין למשך 2 דקות.
    6. לאחר איטום השקופיות, בצע סריקה באמצעות סורק שקופיות, ואסוף ונתח את התמונות.
  5. בדיקת אימונוסורבנט מקושרת לאנזים (ELISA)
    הערה: לפרטים על ההליך, עיין ב-Yang, N. et al.21.
    1. להכנת הסרום, הוסף חומרים סטנדרטיים וסרום בריכוזים המתאימים לבארות החומרים הסטנדרטיות ולבארות הדגימה שיש למדוד, ולאחר מכן הוספת המגיב המסומן באנזים.
    2. בצע שלבי דגירה, כביסה, פיתוח צבע וסיום.
    3. קבע את הספיגה באורך גל של 450 ננומטר באמצעות מכשיר המסומן באנזים, וחשב את רמות הביטוי של טסטוסטרון (T), הורמון משחרר גונדוטרופין (GnRH), אינהיבין B (INHB), הורמון לוטניזציה (LH), הורמון מגרה זקיק (FSH), אסטרדיול (E2) ופרולקטין (PRL).

3. ניתוח סטטיסטי

  1. לנתח את נתוני הניסוי באמצעות תוכנות סטטיסטיות, ולהציג את התוצאות של כל קבוצה כממוצע ± סטיית תקן (ממוצע ± SD).
  2. השתמש ב-ANOVA חד-כיווני כדי להשוות ממוצעי מדגם בין מספר קבוצות העומדות בהנחות הנורמליות וההומוגניות של השונות.
  3. השתמש במבחן t להשוואה בין שתי קבוצות, ובמבחנים לא פרמטריים לנתונים שאינם עומדים בהנחות לעיל.
  4. קחו בחשבון הבדלים מובהקים סטטיסטית כאשר p < 0.05.

תוצאות

הערכת מודל

לאחר הדוגמנות, התבונן בחולדות לעייפות, יציבה כפופה, גפיים קרות, חוסר רצון לאכול, ירידה במשקל, נפח שתן מוגבר, צואה רכה ותסמינים אחרים, אשר בדרך כלל מתיישבים עם תסמונת מחסור בכליות-יאנג.

לאחר הדיסקציה, שימו לב שהכליות קשות, לבנות וכבדות יותר. צביעת H&E מגלה כי רקמות הכליה והאשכים של חולדות המודל ניזוקו קשות, עם צורות גלומרולריות לא סדירות, דלקת אינטרסטיציאלית של צינורית הכליה, ומספר רב של תאי אפיתל העוברים ניוון ואף פיברוזיס. צינורות זרע נוספים באשכים מנוונים ומעוותים, עם תאים זרעניים לא מסודרים או אפילו חסרים (איור 2), מה שמעיד על הקמת מודל מוצלח.

מצב כללי של חולדות

בקבוצה הריקה, החולדות הפגינו מצב רוח טוב, תגובות רגישות, שיער מבריק ואכילה ועשיית צרכים רגילים. לאחר הדיסקציה, הכליות שלהם נראו חומות-אדמדמות ורכות. בקבוצת המודל, החולדות הראו עייפות, גב כפוף, גוף קר, אובדן תיאבון, ירידה במשקל (p < 0.001), השתנה מוגברת וצואה רכה. אחרי הדיסקציה, הכליות שלהם היו קשות, ונצפה מראה של "כליה לבנה גדולה" (איור 2A). בהשוואה לקבוצת המודל, התסמינים הנ"ל השתפרו משמעותית בקבוצת Shu-Mu מוח-כליה, לא השתפרו משמעותית בקבוצה ללא דיקור, וגם השתפרו משמעותית בקבוצת L-קרניטין. השוואת מסת הגוף בין הקבוצות מוצגת באיור 3.

מקדמי איברי הכליה והאשכים

כפי שמוצג באיור 4, בהשוואה לקבוצה הריקה, מקדמי איברי הכליה של חולדות בקבוצת המודל עלו באופן משמעותי (p < 0.01), בעוד שלא נמצא הבדל משמעותי במקדמי איברי האשכים הדו-צדדיים (p > 0.05), מה שמצביע על כך שאיכות שני האשכים ירדה לאחר המודל. בהשוואה לקבוצת המודל, מקדמי איברי הכליה בקבוצות Shu-Mu Brain-Kidney ו-L-carnitine ירדו באופן משמעותי (p < 0.05), אך לא נמצא הבדל משמעותי בקבוצה ללא נקודת דיקור (p > 0.05). לא נמצא הבדל מובהק במקדמי איברי האשכים הדו-צדדיים בין קבוצות Shu-Mu Brain-Dogney, L-carnitine ו-non-acupoint בהשוואה לקבוצת המודל (p > 0.05), מה שמצביע על כך שמסת האשכים הדו-צדדית עלתה בקבוצות Shu-Mu Brain-Kidney ו-L-carnitine, בעוד שלא נצפה שינוי משמעותי בקבוצה ללא נקודת דיקור.

ניתוח איכות זרע

כפי שמוצג באיור 5, בהשוואה לקבוצה הריקה, ספירת הזרע, הצפיפות, שיעור ההישרדות ושיעור התנועתיות ירדו משמעותית בקבוצת המודל (p < 0.001). בהשוואה לקבוצת המודל, ספירת הזרע, צפיפות הזרע, שיעור ההישרדות ושיעור התנועתיות עלו באופן משמעותי בקבוצות Shu-Mu Brain-Kidney ו-L-carnitine (p < 0.001), אך לא נמצא הבדל משמעותי בקבוצה ללא נקודת דיקור.

שינויים מורפולוגיים בכליה

כפי שמוצג באיור 6, רקמת הכליה של חולדות בקבוצה הריקה הייתה בעלת מבנה שלם וצורה נורמלית. הגלומרולי היו עגולים ומלאים, קשורים היטב לקפסולות הכליה, וצינורות הכליה היו סדירים ומסודרים בקפידה. בהשוואה לקבוצה הריקה, קבוצת המודל הראתה פגיעה חמורה ברקמת הכליה, מורפולוגיה גלומרולרית לא סדירה, ניוון, הפחתה, דלקת אינטרסטיציאלית חמורה של צינורית הכליה, ניוון של תאי אפיתל רבים ופיברוזיס חמור. בהשוואה לקבוצת המודל, מידת הנזק לרקמת הכליה השתפרה משמעותית בקבוצות Shu-Mu Brain-Kidney ו-L-carnitine, עם צורות גלומרולריות סדירות יותר, הפרדה קלה מקפסולות הכליה, דנטורציה של כמה תאי אפיתל צינוריים, וחדירה קלה של תאי ביניים של צינורית כליה ופיברוזיס. בהשוואה לקבוצת המודל, מידת הפגיעה ברקמת הכליה הייתה פחות ברורה בקבוצה ללא נקודת דיקור, עם צורות גלומרולריות סדירות יותר, הפרדה מקפסולות הכליה, יותר דנטורציה והפרעה של תאי אפיתל צינוריים כלייתיים, חדירת תאים דלקתיים מתונה סביב הגלומרולי ובאינטרסטיטיום צינורית הכליה, ויותר פיברוזיס.

שינויים מורפולוגיים של האשכים

כפי שמוצג באיור 7, לאשכים של חולדות בקבוצה הריקה היה מבנה רקמה שלם, מורפולוגיה תקינה, צינורות זרע מסודרים ותאי זרע רגילים. בהשוואה לקבוצה הריקה, נזק לרקמת האשכים היה חמור בקבוצת המודל, עם יותר ניוון ועיוות של צינורות הזרע, ותאי זרע לא מסודרים או אפילו חסרים. בהשוואה לקבוצת המודל, מידת הנזק לרקמת האשכים השתפרה משמעותית בקבוצות Shu-Mu Brain-Kidney ו-L-carnitine, כאשר רוב צינורות הזרע מסודרים בצורה מסודרת ותאי זרע מסודרים באופן קבוע. בהשוואה לקבוצת המודל, מידת הנזק לרקמת האשכים לא פחתה משמעותית בקבוצה ללא נקודת דיקור, כאשר חלק מצינורות הזרע הפגינו ניוון ועיוות, נמק תאים, ואקואולים ותאי זרע לא מסודרים ונעדרים.

השוואה בין רמות ההורמונים בסרום

כפי שמוצג באיור 8, בהשוואה לקבוצה הריקה, רמות הטסטוסטרון (T), ההורמון המשחרר גונדוטרופין (GnRH) ואינהיבין B (INHB) בסרום ירדו בקבוצת המודל (p < 0.001), בעוד שהורמון לוטניזציה (LH), הורמון מגרה זקיק (FSH), אסטרדיול (E2) ופרולקטין (PRL) עלו (p < 0.001). בהשוואה לקבוצת המודל, T, GnRH ו-INHB עלו בקבוצות Shu-Mu Brain-Kidney ו-L-carnitine (p < 0.001), בעוד שרמות LH, FSH, E2 ו-PRL ירדו (p < 0.001), אך לא נמצא הבדל משמעותי בקבוצה ללא נקודת דיקור.

figure-results-5740
איור 1: שיטות ניסוי. (A) הליך גבאז' אוראלי. (B) שיטת טיפול שכוללת אלקטרו-אקופונקטורה. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-6194
איור 2: אימות מודל. (A) מראה הכליה לפני ואחרי הדוגמנות. (B) רקמת כליה תקינה. (C) רקמת כליה לאחר מידול (צביעת HE, 200x, סרגל קנה מידה: 100 מיקרומטר). (D) רקמת אשך תקינה. (E) רקמת אשך לאחר מידול (צביעת HE, פי 100, סרגל קנה מידה: 200 מיקרומטר). אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-6855
תרשים 3: השוואה של מסת הגוף בין קבוצות. B: קבוצה ריקה, M: קבוצת מודל, S: קבוצת מוח-כליה Shu-Mu, N: קבוצה ללא דיקור, L: קבוצת L-קרניטין. הנתונים מוצגים כממוצע ± סטיית תקן (n = 3). ap < 0.05, bp < 0.01, cp < 0.001, nsp > 0.05. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-7494
איור 4: השוואה בין מקדמי איברי הכליה והאשכים בין קבוצות. (A) מקדמי איברי הכליה השמאליים. (B) מקדמי איבר הכליה הימני. (C) מקדמי איבר האשך השמאלי. (D) מקדמי איבר האשך הימני. B: קבוצה ריקה, M: קבוצת מודל, S: קבוצת מוח-כליה Shu-Mu, N: קבוצה ללא דיקור, L: קבוצת L-קרניטין. מקדם איברים (%) = משקל איברים (גרם) / משקל גוף (גרם) × 100%. הנתונים מוצגים כממוצע ± סטיית תקן (n = 3). ap < 0.05, bp < 0.01, cp < 0.001, nsp > 0.05. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-8394
איור 5: השוואה של איכות הזרע בין קבוצות. (A) ספירת זרע. (B) צפיפות זרע. (ג) שיעור הישרדות הזרע. (ד) יחס פעילות הזרע. B: קבוצה ריקה, M: קבוצת מודל, S: קבוצת מוח-כליה Shu-Mu, N: קבוצה ללא דיקור, L: קבוצת L-קרניטין. שיעור הישרדות הזרע (%) = ספירת זרע ניידת / ספירת זרע כוללת × 100%. הנתונים מוצגים כממוצע ± סטיית תקן (n = 3). ap < 0.05, bp < 0.01, cp < 0.001, nsp > 0.05. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-9245
איור 6: שינויים מורפולוגיים בכליה בכל קבוצה. (צביעת HE, 200×, סרגל קנה מידה: 100 מיקרומטר). חיצים שחורים מצביעים על גלומרולי, חיצים ירוקים מצביעים על צינורות כליה, חיצים צהובים מצביעים על תאים דלקתיים וחצים כחולים מצביעים על פיברוזיס. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-9814
איור 7: שינויים מורפולוגיים באשכים בכל קבוצה. (צביעת HE, 100×, סרגל קנה מידה: 200 מיקרומטר). חיצים שחורים מצביעים על צינורות זרע נורמליים, חיצים ירוקים מצביעים על נמק, וחצים כחולים מצביעים על ריקים. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-10347
איור 8: השוואה בין רמות הורמוני הסרום בין הקבוצות. (A) רמות טסטוסטרון (T) בסרום. (B) רמות GnRH בסרום. (C) רמות LH בסרום. (D) רמות FSH בסרום. (E) רמות E2 בסרום. (F) רמות INHB בסרום. (G) רמות PRL בסרום. B: קבוצה ריקה, M: קבוצת מודל, S: קבוצת מוח-כליה Shu-Mu, N: קבוצה ללא דיקור, L: קבוצת L-קרניטין. הנתונים מוצגים כממוצע ± סטיית תקן (n = 3). ap < 0.05, bp < 0.01, cp < 0.001, nsp > 0.05. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

Discussion

ברפואה הסינית המסורתית, ה"כליה" מורכבת מ"הכליה הפנימית", המתייחסת לתפקודי מערכת השתן ברפואה המודרנית, ו"הכליה החיצונית", המתייחסת לציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-בלוטת המין ואיברי הרבייה החיצוניים האנטומיים25. שלפוחיות הזרע הזכריות שייכות ל"כליה החיצונית", ומרכיביהן כוללים את האשכים, האפידידימידים, שלפוחיות הזרע וכו'26. הרפואה הסינית המסורתית מחשיבה את המהות כבסיס החומרי של גוף האדם, ו"תמצית הכליות" כוללת את "המהות הטרום-לידתית" שעוברת בירושה מההורים ואת "המהות שלאחר הלידה" המיוצרת על ידי התמרת המים ותמצית הדגנים של הטחול והקיבה, המשמשת להזנת חמשת הקרביים וששת המעיים. ביניהם, המהות הטרום-לידתית היא החומר המקורי המרכיב את העובר ומהווה את יסוד החיים; המהות שלאחר הלידה מעשירה את המהות של חמשת הקרביים וששת המעיים, והחלק הנותר מאוחסן בכליה. השניים תלויים זה בזה ומשולבים באופן הדוק בכליה ליצירת "תמצית כליות". אם תמצית הכליות אינה מספקת, כלומר אם שלפוחיות הזרע אינן יכולות להיות מלאות, זה יוביל ל"אוליגוספרמיה"; אם ניתן לפרוק את מהות הרבייה באופן נורמלי, כלומר אם שלפוחיות הזרע יכולות לבצע את תפקידיהן של ייצור, אחסון ושחרור זרע, זו תוצאה של התיאום ההדדי של טבעו העפיצות של יין הכליה וטבעו המעורר של יאנג הכליה. אם יאנג הכליות חסר וחלש, התפקוד העפיצות מוגזם, בעוד שהתפקוד המעורר אינו מספיק, וכתוצאה מכך תמצית קרה ו"אסתנוספרמיה". לכן, הביטויים של אוליגואסטנוספרמיה תואמים לסוגי תסמונת הרפואה הסינית המסורתית של "מחסור בתמצית הכליות ומחסור יאנג בכליות". בניסוי זה, כל החולדות המודליות ענו בעצם על הביטויים של אוליגואסטנוספרמיה מסוג מחסור בכליות-יאנג, והטיפול צריך להתמקד ב"חיזוק הכליה, סיוע ליאנג, מילוי תמצית והזנת המח". השילוב של אפנגסאן-שיאן, שנשו, ג'ינגמן וטאישי עבור נקודת הדיקור של המוח-כליה של שו-מו יכול לתאם יין ויאנג ולחבר בין הכליה למוח, ובסופו של דבר להשיג את המטרה של "איזון יין-יאנג".

הזרע מווסת על ידי הפעילות האנדוקרינית של ציר ה-HPT, והוויסות של ציר ה-HPT תלוי בעיקר בהורמונים ובגנים קולטנים קשורים המתבטאים בהיפותלמוס, בלוטת יותרת המוח והאשכים27, הנשלטים בעיקר על ידי שחרור פועם של GnRH מההיפותלמוס. זה מגרה את יותרת המוח הקדמית להפריש LH, FSH ו-PRL11. ביניהם, GnRH הוא הרגולטור הקריטי ביותר של ציר ה-HPT, ורמתו יכולה לשקף בעקיפין את מצב ציר ה-HPT ואת יכולת האשכים לייצר זרע28. LH מתווך את שחרור ה-T מתאי סטרומה באשכים, והופעת הזרע תלויה בגירוי של T. אם הפרשת T אינה מספקת, מספר הזרע ואיכותו יפחתו29. FSH נקשר לקולטנים על פני השטח של תאי סרטולי ופועל יחד עם T כדי לקדם את התפשטות הזרעונים ולייצר INHB לשמירה על ספרמטוגנזה30. INHB, גליקופרוטאין המסונתז בתאי סרטולי באשכים ובתאי נבט, הוא מווסת חשוב של בלוטת המין הזכרית, אשר יכול, בתורו, להפעיל את בלוטת יותרת המוח כדי לייצר FSH, ולקיים אינטראקציה עם FSH כדי לווסת במשותף את ציר ה-HPT 31,32,33. עם זאת, PRL הוא גורם חשוב המשפיע על תנועתיות הזרע34. PRL מוגזם יכול לעכב את הפרשת ציר בלוטת המין, ובכך לעכב את הזרע35. E2 מופרש על ידי בלוטות המין והמוח ויש לו אפקט משוב שלילי על LH ו-FSH36. רמות E2 גבוהות יפגעו בתאי סרטולי ובתאי ביניים באשכים, יגרמו לסטיאטוזיס של רקמת החיבור הסובבת ויכווצו את קוטר צינורות הזרע הזכריים, וכתוצאה מכך יפגעו בפוריות של חולים37. נמצא כי רמות הסרום של FSH ו-LH בחולדות אוליגסטנוספרמיה שהושרו על ידי Tripterygium wilfordii עלו משמעותית לאחר המודל. לאחר 60 יום של טיפול בגלולת קילין, רמות שני ההורמונים הללו ירדו באופן משמעותי בהשוואה לקבוצת המודל38, מה שהיה עקבי עם תוצאות מחקר זה. מחקרים אחרים הראו כי תפקוד לקוי של ציר HPT מתרחש בחולדות עם תסמונת חסר כליות-יאנג הנגרמת על ידי אדנין, ורמות הפרשת הורמוני המין הקשורות משתנות גם הן39.

במחקר זה, בהשוואה לקבוצה הריקה, החולדות בקבוצת המודל היו בדרך כלל במצב גרוע, ואיכות הזרע ירדה באופן משמעותי (עמ ' < 0.001). צביעת H&E הראתה נזק חמור לרקמת הכליות והאשכים, מה שמצביע על כך שחולדות מווסתות אדנין עמדו בקריטריונים של אוליגונאסטנוספרמיה. בהשוואה לקבוצת המודל, התנאים הנ"ל השתפרו באופן משמעותי בקבוצות Shu-Mu Brain-Kidney ו-L-carnitine (p < 0.05), בעוד שהשיפור לא היה משמעותי בקבוצה ללא נקודת דיקור, מה שמצביע על כך שאיכות הזרע והמורפולוגיה והמבנה של האיברים השתפרו בקבוצות Shu-Mu Brain-Kidney ו-L-carnitine. בהשוואה לקבוצה הריקה, T, GnRH ו-INHB ירדו (p <-0.001) בקבוצת המודל, מה שמצביע על כך שהיכולת להפריש T, GnRH ו-INHB ירדה בחולדות אוליגואסטנוספרמיה לאחר מידול מוצלח. LH, FSH, E2 ו-PRL עלו כולם (p < 0.001), מה שמצביע על כך שהפרשת LH, FSH, E2 ו-PRL גדלה לאחר מודלים מוצלחים, מה שהוביל להיחלשות תפקוד הזרע של האשכים. בהשוואה לקבוצת המודל, T, GnRH ו-INHB עלו (p < 0.001), בעוד שרמות ההפרשה של LH, FSH, E2 ו-PRL ירדו (p < 0.001) בקבוצות Shu-Mu Brain-Kidney ו-L-carnitine, אך לא נמצא הבדל משמעותי בקבוצה ללא נקודת דיקור. זה ממחיש שגם דיקור חשמלי וגם L-קרניטין יכולים לווסת את רמות ההורמונים של ציר ה-HPT בחולדות ולהשפיע לטובה על שיפור האוליגונאסטנוספרמיה בחולדות.

L-קרניטין הוא נוגד חמצון טבעי ביונקים שיכול להשתתף בחילוף החומרים של אנרגיית התא ולהפחית את הנזק נוגד החמצון של זרע40. מחקרים רבים הוכיחו כי L-קרניטין יכול לשפר משמעותית את תנועתיות, מורפולוגיה וריכוז הזרע תוך העלאת רמת ההורמונים הקשורים לציר HPT41. בניסוי זה, L-קרניטין שימש כקבוצת ביקורת חיובית לתרופות כדי להשוות לקבוצת Shu-Mu מוח-כליה. נתוני הניסוי לא הראו הבדל משמעותי בהשוואה בין מדדים שונים בין שתי הקבוצות, ואימתו כי לדיקור חשמלי ב"אפנגסנשיאן, שנשו, ג'ינגמן וטאישי" הייתה השפעה טובה על חולדות אוליגואסטנוספרמיה. יתר על כן, דיקור סיני יכול לתאם את היין והיאנג של הקרביים ולשפר את הצ'י הבריא של הגוף כדי להתנגד לצ'י פתוגני, מה שהופך אותו לבטוח, יעיל ופחות רעיל עם פחות תופעות לוואי. דיקור אלקטרו יכול לשפר את האפקט המרפא יותר מאשר דיקור רגיל ולספק טיפול בטוח ויעיל לניהול קליני של אוליגואסטנוספרמיה. מאחר שהחולדות בקבוצה ללא נקודת דיקור לא עקבו אחר העיקרון של בחירת נקודות לאורך המרידיאנים, נתוני ניסוי שונים היו שונים באופן משמעותי מאלה בקבוצת המוח-כליה של שו-מו, ואימתו את משמעות התאימות של ארבע הנקודות, "אפנגסאן-שיאן, שנשו, ג'ינגמן וטאי-שי".

לסיכום, דיקור חשמלי בארבע הנקודות, "Epangsanxian, Shenshu, Jingmen ו-Taixi", יכול לשפר את תפקוד ציר ה-HPT בחולדות על ידי ויסות רמת ההורמונים הקשורים, ובכך לשפר את איכות הזרע בחולדות ובסופו של דבר להשיג את המטרה של טיפול באוליגואסתנוספרמיה. הוא מספק טיפול בטוח ויעיל נוסף לניהול קליני של אוליגונאסטנוספרמיה.

עם זאת, בשל היעדר טכנולוגיה ומימון, מחקר זה הוגבל לחקר רמות הורמוני הסרום על ציר ה-HPT, ושיטות הזיהוי היו מוגבלות. בניסויים עתידיים, נשקול להשתמש באמצעים שונים, כגון כרומטוגרפיה, כדי לאמת עוד יותר את השינויים ברמות ההורמונים ולהשתמש בטרנסקריפטומיקה או מטבולומיקה כדי לבצע מחקרים נוספים על ויסות ציר ה-HPT על ידי אלקטרו-אקופונקטורה ברמת הגן ומעבר לכך.

Disclosures

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgements

מחקר זה נתמך על ידי פרויקט המחקר והפיתוח המרכזי של האזור האוטונומי נינגשיה הוי (2021BEG02041), הערכה מבוססת ראיות ומחקר קליני על תאימות נקודות דיקור של טיפול בדיקור סיני המווסת את "ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-אשך" בטיפול בהפרעות בתפקוד הרבייה הגברית, מוביל הפרויקט: Huisheng Ma; פרויקט בניית משמעת מהשורה הראשונה לשנת 2024 (ZY0019110305), מוביל הפרויקט: Huisheng Ma; האקדמיה הסינית למדעי הרפואה הסינית (YZ-202128), מוביל הפרויקט: Huisheng Ma.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
AdenineBeijing Solarbio Science & Technology Co. Ltd.A8330
CASA computer-assisted semen analysis systemNanning Songjing Tianlun Biotechnology Co., Ltd.VICOS-SPERM
CentrifugeSartoriusA-14C
Differentiation fluidShanghai Biyuntian Biotechnology Co., LtdC0163M
Disposable sterile acupuncture needlesHanyi brand0.25mm*13mm
Drying machineLeicaHI1220
Electrical stimulatorHua Tuo BrandSDZ-II
Electronic balanceHangzhou Youheng Weighing Equipment Co., LtdHLD-6002
ELISA kitShanghai Jianglai Biotechnology Co. LTDJL13251?JL11473?JL11525?JL12505?JL13256?JL12201
Enzyme-labeled instrumentRaytoRT-6100
Eosin staining solutionZhuhai Beso Biotechnology Co. LTDBA-4024
Hematoxylin staining solutionZhuhai Beso Biotechnology Co. LTDBA-4041
Levocarnitine oral liquidNortheast Pharmaceutical Group Shenyang First Pharmaceutical Co. LTD.H19990372
MicrotomeLeicaRM2255
Neutral balsamBeijing Zhongshan Jinqiao Biotechnology Co., LtdZli-9555
Paraffin embedding machineLeicaHistoCore Arcadia H
SD rat, 8-week-old, Male, 180-220 g144 Animal Center of Ningxia Medical University
Slide scannerLeicaAperio LV1
Vortex oscillatorHaimen Qilin Bell Instrument Manufacturing Co., LtdQL-902

References

  1. Punab, M., et al. Causes of male infertility: A 9-year prospective monocentre study on 1737 patients with reduced total sperm counts. Hum Reprod. 32 (1), 18-31 (2017).
  2. Nordkap, L., Joensen, U. N., Blomberg Jensen, M., Jørgensen, N. Regional differences and temporal trends in male reproductive health disorders: Semen quality may be a sensitive marker of environmental exposures. Mol Cell Endocrinol. 355 (2), 221-230 (2012).
  3. Daneshmandpour, Y., et al. MicroRNAs association with azoospermia, oligospermia, asthenozoospermia, and teratozoospermia: A systematic review. J Assist Reprod Genet. 37 (4), 763-775 (2020).
  4. Cipriani, S., et al. Trend of change of sperm count and concentration over the last two decades: A systematic review and meta-regression analysis. Andrology. 11 (6), 997-1008 (2023).
  5. Agarwal, A., et al. Male infertility. Lancet. 397 (10271), 319-333 (2021).
  6. Jensen, C. F. S., Fode, M., Østergren, P. B., Sønksen, J. A refined view on the association between y-chromosome microdeletions and sperm concentration. Eur Urol. 76 (5), 637-638 (2019).
  7. Pivonello, R., et al. Metabolic disorders and male hypogonadotropic hypogonadism. Front Endocrinol (Lausanne). 10, 345(2019).
  8. Guiton, R., Drevet, J. R. Viruses, bacteria and parasites: Infection of the male genital tract and fertility. Basic Clin Androl. 33 (1), 19(2023).
  9. Beeder, L. A., Samplaski, M. K. Effect of antidepressant medications on semen parameters and male fertility. Int J Urol. 27 (1), 39-46 (2020).
  10. Babalola, A. A., et al. Attenuation of doxorubicin-induced hypothalamic-pituitary-testicular axis dysfunction by diphenyl diselenide involves suppression of hormonal deficits, oxido-inflammatory stress and caspase 3 activity in rats. J Trace Elem Med Biol. 79, 127254(2023).
  11. Yang, Y., et al. Nickel chloride induces spermatogenesis disorder by testicular damage and hypothalamic-pituitary-testis axis disruption in mice. Ecotoxicol Environ Saf. 225, 112718(2021).
  12. Alahmar, A. T., Naemi, R. Predictors of pregnancy and time to pregnancy in infertile men with idiopathic oligoasthenospermia pre- and post-coenzyme q10 therapy. Andrologia. 54 (5), e14385(2022).
  13. Seiler, F., Kneissl, P., Hamann, C., Jünemann, K. P., Osmonov, D. Laparoscopic varicocelectomy in male infertility: Improvement of seminal parameters and effects on spermatogenesis. Wien Klin Wochenschr. 134 (1-2), 51-55 (2022).
  14. Cui, T. W., et al. Effect of electroacupuncture on spermatogenesis in rats with oligozoospermia of insufficiency of shen (kidney) essence syndrome. Chin J Integr Med. 25 (4), 292-297 (2019).
  15. Wang, Z., et al. Efficacy and safety of nonpharmacological strategies for the treatment of oligoasthenospermia: A systematic review and bayesian network meta-analysis. Eur J Med Res. 28 (1), 6(2023).
  16. Chuang, H. -N., et al. Effect of injecting adipose stem cells combined with platelet-rich fibrin released at Shenshu acupoint (BL23) on acute kidney injury in rabbits. Front Pharmacol. , 16(2025).
  17. Fu, C., et al. Acupuncture improves peri-menopausal insomnia: A randomized controlled trial. Sleep. 40 (11), (2017).
  18. Li, C. R., et al. Effects of acupuncture at taixi acupoint (ki3) on kidney proteome. Am J Chin Med. 39 (4), 687-692 (2011).
  19. Ma, L. Acupuncture treatment of kidney deficiency and essence deficiency based on the theory of kidney storing essence' clinical study of oligoasthenospermia. , (2023).
  20. Sheng, W., Xu, W., Hu, H., Xiao, D., He, Q. Effects of tortoise-shell glue on rat oligoasthenospermia model. Chin Med J (Engl). 135 (6), 732-734 (2022).
  21. Yang, N., et al. Transcriptomic analysis of the HPT axis in a model of oligoasthenozoospermia induced by adenine in rats. Exp Mol Pathol. 141, 104948(2025).
  22. Hongyu, L., et al. Assessment of electroacupuncture therapy with distant-approximal acupoints based on the HPT axis in rats with oligoasthenospermia through transcriptomic analysis. Reprod Sci. , (2025).
  23. Adachi, Y., et al. Influence of adenine-induced chronic renal failure on testicular function in the rat. Andrologia. 30 (2), 115-118 (1998).
  24. Zhao, Z., et al. Regulatory mechanism of electroacupuncture on hypothalamic-pituitary-testicular axis in oligospermic rats. Chin J Tissue Eng Res. 29 (26), 5563-5571 (2025).
  25. Chen, Y., Han, Z., Sun, Z., Huang, F. Analysis of male reproduction based on the "inner kidney and outer kidney" theory advanced by nation-famous Chinese medicine Professor XU Fu-song. Nat J Androl. 30 (02), 163-166 (2024).
  26. Ma, D., et al. Biological basis of premature ejaculation based on Theory of "Brain-heart-kidney-semen Chamber" Axis. Ch J Exp Tradit Med Formul. 30 (10), 203-209 (2024).
  27. Qi, L., et al. Toxic effects of ketamine on reproductive system via disrupting hypothalamic-pituitary-testicular axis. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 21 (8), 1967-1973 (2017).
  28. Ryan, G. E., et al. Androgen receptor positively regulates gonadotropin-releasing hormone receptor in pituitary gonadotropes. Mol Cell Endocrinol. 530, 111286(2021).
  29. Jasuja, R., et al. Modulation of circulating free testosterone fraction by testosterone, dihydrotestosterone, and estradiol during testosterone replacement therapy. Andrology. 13 (3), 439-436 (2024).
  30. Dimmick, H., Kumar, T. R. Follicle-stimulating hormone. Trends Endocrinol Metab. 35 (9), 848-849 (2024).
  31. Negri, F., et al. The importance of discordant follicle stimulating hormone and inhibin b levels in primary infertile men: Findings from a cross-sectional study. World J Mens Health. 43 (1), 134-141 (2025).
  32. Li, J., et al. Development of a nomogram to predict fertilisation rate of infertile males with borderline semen by using semen parameters combined with AMH and INHB. Andrologia. 53 (9), e14182(2021).
  33. Liu, L., et al. Relationship between semen parameters, serum INHB, and insl-3 levels, and the degree of varicocele. Clinics (Sao Paulo). 79, 100339(2024).
  34. Akhigbe, R. E., Hamed, M. A., Odetayo, A. F. Haart and anti-koch's impair sexual competence, sperm quality, and offspring quality when used singly and in combination in male Wistar rats. Andrologia. 53 (2), e13951(2021).
  35. Liu, Y., Wang, G., Zhang, F., Dai, L. Correlation between serum levels of reproductive hormones and testicular spermatogenic function in men with azoospermia. Andrologia. 54 (10), e14182(2022).
  36. Russell, N., Grossmann, M. Mechanisms in endocrinology: Estradiol as a male hormone. Eur J Endocrinol. 181 (1), R23-R43 (2019).
  37. Leavy, M., et al. Effects of elevated β-estradiol levels on the functional morphology of the testis - new insights. Sci Rep. 7, 39931(2017).
  38. Jiao, W., et al. Improvement of qilin pills on male reproductive function in tripterygium glycoside-induced oligoasthenospermia in rats. Andrologia. 53 (4), e13923(2021).
  39. Zeng, Y., et al. Effects of Haima Duobian pill in a rat model of kidney yang deficiency syndrome. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 6696234(2021).
  40. Kooshesh, L., Nateghian, Z., Aliabadi, E. Evaluation of l-carnitine potential in improvement of male fertility. J Reprod Infertil. 24 (2), 69-84 (2023).
  41. Ma, L., Sun, Y. Comparison of l-carnitine vs. Coq10 and vitamin E for idiopathic male infertility: A randomized controlled trial. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 26 (13), 4698-4704 (2022).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE219

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved