11.20 : כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים: סוגי גלאים

תפקיד הגלאים בכרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC) הוא לנתח את המומסים כפי שהם יוצאים מעמודת הכרומטוגרפיה. הגלאי מזהה את תכונת המומס ומייצר אותות חשמליים תואמים, אשר מומרות לגרף קריא של תגובת הגלאי ביחס לזמן האילוץ, הנקרא כרומטוגרמה, במחשב. קיימים מספר סוגים של גלאים ב-HPLC, לכל אחד מהם יתרונות ומגבלות בהתאם לתכונות המנותחות ולדרישות הרגישות. חשוב לציין שאין שיטת גילוי יחידה ב-HPLC שיכולה לזהות את כל המומסים. מסיבה זו, מערכות HPLC עשויות לכלול שניים או יותר גלאים באותו ניסוי כדי לשפר את דיוק וזיהוי הרגישות. בין הגלאים הנפוצים ניתן למצוא גלאים ספקטרופוטומטריים, גלאי שבירת קרן (RID), גלאים אלקטרוכימיים, גלאי ספקטרומטריית מסה, גלאי Fourier-transform infrared (FTIR), פיזור אור וגלאי פוטואיוניזציה.

גלאים ספקטרופוטומטריים כוללים גלאי UV-Visible (UVD) וגלאי פלואורסצנטי (FLD). גלאי UV-Visible מודדים את כמות האור הנספגת על ידי המומס באורך גל מסוים בנוכחות פאזה ניידת שאינה סופגת. הם נמצאים בשימוש רחב בגלל פשטותם, אמינותם והרגישות הגבוהה שלהם. הם מתאימים ביותר לגילוי תרכובות עם מערכות קישור כפול מצומדות או ארומטיות. גלאים פלורסצנטיים מודדים את הפלואורסצנציה הנפלטת מהמומס כאשר הוא מוקרן באור באורך גל מסוים. הם רגישים ביותר ובעלי סלקטיביות גבוהה, מה שהופך אותם למתאימים לגילוי תרכובות בעלות תכונות פלואורסצנטיות. גלאים אלה משמשים בעיקר לניתוח תרופות, מזהמי סביבה, מוצרים פטרוכימיים ומוצרים טבעיים.

גלאי שבירת קרן (RID) מודדים את ההבדל באינדקס השבירה בין הפאזה הניידת למומס כאשר הוא עובר דרך הגלאי. הם מגיבים כמעט לכל המומסים, אך יש להם מגבלות מסוימות. הם רגישים לשינויים בלחץ ובטמפרטורה, בעלי רגישות נמוכה ואינם יכולים לזהות כמויות עקבות של מומסים. הם משמשים לרוב לניתוח תרכובות שאינן כרומופוריות או פלואורסצנטיות, כמו סוכרים, ליפידים ופולימרים.

גלאים אלקטרוכימיים (ECD) מודדים את התכונות החשמליות של המומס, כגון פוטנציאל חמצון או חיזור. גלאים אלו מבוססים על שיטות כמו אמפרומטריה, וולטמטריה, קולומטריה וקונדוקטומטריה. הם נפוצים לניתוח תרכובות שפעילות מבחינה אלקטרוכימית, כמו מוליכים עצביים, חומצות אמינו וקוטלי מזיקים.

גלאי ספקטרומטריית מסה (MS) מזהים ומכמתים את המומסים על בסיס יחס המסה-מטען שלהם. הם רגישים וספציפיים מאוד, מה שהופך אותם למתאימים לגילוי כמויות עקבות של מומסים. עם זאת, הבעיה עם גלאים אלה היא שהם דורשים דגימות בפאזה גזית, ויש לאדות את הממס. ספקטרומטרי מסה משמשים לניתוח תערובות מורכבות, כמו חלבונים, פפטידים ומטבוליטים. גלאים נוספים כוללים FTIR, פיזור אור וגלאי פוטואיוניזציה.