Um Lungenerkrankungen bei Mäusen zu modellieren, werden experimentelle Wirkstoffe oft über intratracheale Injektion verabreicht. Dieser Ansatz kann jedoch nicht selektiv auf eine Lunge abzielen, und die Verteilung kann zwischen der Lunge asymmetrisch sein. Indem wir eine einzelne Lunge in einer anästhesierten Maus konnieren, können wir einseitig experimentelle Wirkstoffe verabreichen.
Mit Der Modifikation kann dieser Ansatz bilateral verwendet werden, wodurch die Symmetrie der Ablagerung in beiden Lungen verbessert wird. Kathetervorbereitung einschließlich Polieren, leichte Winkelung und Etikettierung ist das Schlüsselelement für den Erfolg. Natürlich ist diese Technik auch in der Praxis notwendig.
Demonstriert wird das Verfahren von Sumei Liao, einem professionellen wissenschaftlichen Mitarbeiter aus meinem Labor. Nachdem Sie einen Mangel an Reaktion auf Zehenkneifen bestätigt haben, setzen Sie eine anästhesierte, acht bis zehn Wochen alte, C57-Black/6 Maus von den Schneidezähnen auf einer drapierten Nahtlinie in einer supine Ausrichtung aus. Sichern Sie die Maus mit zwei bis drei Hakenstücken, und schleifen Sie das Band, um eine Einschränkung der Belüftung zu vermeiden, und schalten Sie eine Lichtemittierungsdiode-Faseroptiker ein.
Positionieren Sie den Bediener hinter der Plattform, dorsal zur Maus. Richten Sie den Schwanenhals des Leuchters zwei bis drei Zentimeter von der Maus entfernt aus, so dass er den Kehlkopfbereich durch die Haut beleuchtet. Mit sterilen Zangen in der dominanten Hand, ziehen Sie die Zunge aus der Mundhöhle.
Verwenden Sie die nicht dominante Hand und den sterilen Depressivum, um die Wurzel der Zunge abzuflachen, um den Oropharynx weit zu belichten. Nach dem Lösen der Zange verwenden Sie die dominante Hand, um den verlängerten Katheter über die Mundhöhle in die Luftröhre zu intubieren. Bestätigen Sie die Platzierung, indem Sie beobachten, ob sich die Blase in der Spritze mit jedem Atemzug nach oben und unten bewegt.
Zur selektiven Lobar-Kanulation der distalen rechten Lunge drehen Sie nach intratrachealer Intubation die Kunststoffplatte um 30 Grad und führen die Nabe des Katheters parallel zur Mausmittellinie zur entsprechenden gewichtsbasierten Tiefe, wie in der Tabelle angegeben. Mit einer Gel-Ladespitze 20 Mikroliter 0,3%Evans blauer Farbstoff in den Katheter liefern, gefolgt von ein bis zwei 100-Mikroliter-Aliquots Luft durch Glastropfen. Ziehen Sie dann den Katheter ab und halten Sie die Maus 30 Sekunden lang in Position, bevor Sie das Tier auf eine wärmende Decke legen, mit Überwachung bis zur vollständigen Genesung.
Für eine selektive Lobar-Kanulation der distalen linken Lunge drehen Sie nach intratrachealer Intubation das Kunststoffbrett minus 74 Grad und rücken den Katheter sanft in den linken Hauptstammbronchus vor, während sie einen moderaten Druck um 90 Grad nach unten und in Richtung Buchende ausüben. Nach der Cannulation der linken unteren Lungensegmente drehen Sie die Kunststoffplatte minus 30 Grad und liefern 40 Mikroliter 0,3% Evans blauer Farbstoff mit einer Gel-Ladespitze. Dann liefern Sie ein bis zwei 100-300-Mikroliter-Aliquots Luft über Glastropfen und ziehen Sie den Katheter zurück, damit sich die Maus erholen kann, wie gezeigt.
Für die richtige gesamte Lungenadministration, nach intratrachealer Intubation, drehen Sie die Kunststoffplatte um 30 Grad und führen Sie den Katheter parallel zur Mausmittellinie, bis zu Tiefen, die für die rechtsseitige distale Lobar-Kanulation notwendig sind. Bestätigen Sie das Erscheinungsbild des Tachypnoe-Zeichens, und drehen Sie die Maus minus 74 Grad, um die Schwerkraftunterstützung für die Agentenlieferung zu aktivieren. Ziehen Sie den Katheter in eine Position, die dem Start des rechten Mainstem Bronchus entspricht, und stellen Sie sicher, dass die Abschrägung des Katheters nach unten zeigt.
Liefern Sie 30 Mikroliter 0,3%Evans blauer Farbstoff in die rechte Lunge, gefolgt von ein bis zwei 100-bis 300-Mikroliter-Aliquots Luft. Ziehen Sie dann den Katheter ab, und lassen Sie die Maus wiederherstellen. Für die linke gesamte Lungenadministration, nach intratrachealer Cannulation, drehen Sie die Kunststoffplatte minus 74 Grad, und schieben Sie den Katheter sanft in den linken Hauptstamm Bronchus, während Sie bescheidenen Druck sowohl 90 Grad nach unten als auch in Richtung Buchende setzen.
Bestätigen Sie das No-Tachypnoe-Zeichen, und drehen Sie die Maus um 86 Grad, um Schwerkraftunterstützung bei der Agentenverwaltung zu ermöglichen. Ziehen Sie den Katheter auf den linken Hauptstamm bronchus, und drehen Sie die Abschrägung des Katheters nach unten. Liefern Sie 30 Mikroliter 0,3%Evans blauer Farbstoff mit einer Gel-Ladespitze in die linke Lunge, gefolgt von ein bis zwei 100-bis 300-Mikroliter-Aliquots Luft.
Ziehen Sie dann den Katheter ab, damit sich die Maus erholen kann, wie gezeigt. Die bilaterale Abgabe von FITC-Dextran durch intratracheale und symmetrische intrabronchiale Verabreichung führt zu asymmetrischer Lungenparenchymal-FITC-Fluoreszenz mit größeren relativen Konzentrationen in der linken Lunge. Dies deutet darauf hin, dass die asymmetrische Lungenabgabe von Versuchsmitteln nach intratrachealer Verabreichung nicht eine Folge der asymmetrischen Darstellung dieser Wirkstoffe zu jedem Mainstammbronchus ist, sondern dass die gleiche Hauptstammabgabe durch Unterschiede in Lungengewicht und Masse verdünnt wird.
Die dosisbereinigte intrabronchiale Verabreichung verbessert die Symmetrie der Verabreichung von Lungenparenchymalen. Trotz dieser Korrektur wird jedoch innerhalb der verschiedenen Lappen der rechten Lunge immer noch eine anhaltende Heterogenität beobachtet. 21 Tage nach der intratrachealen Bleomycin-induzierten fibrotischen Lungenverletzung wird eine Entzündung vorwiegend in der linken Lunge beobachtet, wobei weniger Verletzungen in der rechten Lunge zu verzeichnen sind.
Umgekehrt führt die dosisbereinigte intrabronchiale Bleomycin-Verabreichung zu einer leicht verminderten Verletzung der linken Lunge und einer erhöhten Verletzung der rechten Lunge, wobei die größte Verletzung in der Mitte und überlegenen Lappen zu erkennen ist. Vergessen Sie nicht, während der gesamten Lungenadministration den Katheter zurückzuziehen und die Abschrägung des Katheters mit dem Gesicht nach unten zu pflegen.
