拉米内切手术和脊髓窗口植入小鼠

这种方法能够检查完整的中枢神经系统内的体内蛋白质动力学，以解决神经科学和免疫学中的问题。该程序的主要优点是出色的运动稳定性，用于图像采集、手术时间短暂、操作员对气态麻醉的暴露减少以及廉价的可定制背板。这种方法的视觉演示是至关重要的，因为很难在不损害紧密基础的神经系统组织在手术的拉明切除术步骤期间切除骨骼。

在开始该过程之前，请使用 3D 计算机辅助设计软件为指示的尺寸创建模型。因此，我们有一个对象，这是三维对象，这是我们可以开始。然后，我能做的就是，我们可以把设置，为打印版本。

因此，如果我打开"编辑"，进入高级，打开一个窗口，使我能够查看所有这些设置。将喷嘴温度设置为 205 摄氏度，将床温设置为 45 摄氏度，将 3D 打印机的打印速度设置为 45 毫米/秒。使用 0.4 毫米热 ent 喷嘴和 0.2 毫米层高度打印背板。

然后目视地评估打印的背板的结构完整性。严重结构故障表示打印缺陷。当背板准备好时，将一只8到12周大的麻醉小鼠的头部放在手术限制器耳架之间的热垫上，并在动物的眼睛上涂抹软膏。

在确认对手趾捏没有反应后，使用11号刀片在下胸上腰椎区域进行1.5厘米的胸腔中线切口，将皮肤与胸腔分离。使用钳子剥回皮肤下剩余的透明结缔组织，以暴露表面的肌肉。用泡沫手术矛和目标椎骨的剩余更深的肌肉取代肌肉。

要为后板创建一个座位，请从胸腔 11 的后部和胸板 13 的前部清除肌肉。必要时使用钳子从肌腱上去除剩余的肌肉。当所有的肌肉被切除时，用钳子小心地切开肌腱，直到获得足够的空间来可视化和操纵脊髓。

确认椎间空间的杜拉母体、半透明层骨、骨下的中央表面血管以及前辐射动脉清晰可见。用温暖的人工脑脊髓液将区域弄湿，并使用与脊髓长轴平行的直线笔触将层骨变薄。用钳子轻轻抓住表面的旋转过程，抬起椎骨。

骨头应该很容易地抬起。使用四号钳清除任何骨片，控制任何出血与手术矛和温和的稳定压力，如有必要。然后用温暖的人工脑脊髓液冲洗组织。

对于盖玻璃植入，轻轻涂抹三毫米硅酸盐盖玻璃到外露的电线。使用小铲子将 39 摄氏度加热 2% 的 agarose 涂抹到玻璃边缘，并允许毛细管作用在盖玻璃表面下绘制 agarose。将组织粘合剂涂抹在胸椎11级和13级椎骨的完好相邻椎骨的外露骨关节工艺上。

在相邻肌腱和横向过程周围环中应用额外的组织粘合剂。接下来，使用新的铲子将与助剂混合的牙科水泥涂在组织粘合层上，并在盖玻璃窗为中心的手术场上放置一个背板。应用多层牙科水泥可产生更强的背板附着力，但请务必在牙科水泥开始干燥之前快速放置背板。

在允许牙科水泥固化 10 分钟后，用额外的粘合剂填充后处的内部底座和底部。将牙科水泥涂在薄层中有助于降低水泥扩散到盖玻璃和红糖的风险，从而危及整个协议。当牙科水泥干燥后，将分叉背板支架涂抹到车窗上的适当位置，然后将背板拧入背板支架。

然后将盐水涂抹到后板上以测试泄漏。然后，动物和手术平台可以转移到两光子显微镜的光学台，通过盖玻璃窗进行成像。在这个具有代表性的实验中，EGFP阳性的克劳丁-5在血管丛中荧光标记的紧密结内被可视化。

Z 投影中紧密结结构的清晰划分表明，在成功进行拉明切除术、窗口放置和背板植入后，可产生最小的 XY 图像位移。在尝试此程序时，重要的是要记住，这种显微手术是困难的，可能需要一段时间来掌握。然而，一旦掌握，这个手术可以在大约30分钟内进行。

按照这个程序，其他方法，如两光显微镜和体内成像，可以执行，以回答有关神经血管重塑和其他疾病过程涉及脊髓的其他问题。