Name: measuring local anaphylaxis in mice
Uploaded: 2014-10-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Local Anaphylaxis in Mice at JoVE.com

The authors would like to acknowledge Dr. Ellen M. Fox for her work regarding this model of local anaphylaxis. This work was supported by the Uniformed Services University of the Health Sciences grant number R073UE.

1. الفئران توعية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد محلول المخزون عن طريق تمييع OVA OVA في برنامج تلفزيوني 1X إلى تركيز النهائي من 20 ملغ / مل. تجميد أسفل مأخوذة في cryovials وتخزينها في -80 درجة مئوية لاستخدامها في المستقبل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقيق واحد أو أكثر aliquots من 20 ملغ / مل الأسهم OVA إلى درجة حرارة الغرفة. تمييع OVA في برنامج تلفزيوني 1X إلى تركيز النهائي من 1 ملغ / مل في أنبوب 5 مل البوليسترين جولة القاع مع قبعة. دوامة لفترة وجيزة لخلط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حين عقد أنبوب البوليسترين التي تحتوي على 1 ملغ / مل OVA على دوامة وضعت في سرعة متوسطة، إضافة حجم مساو من المتجانس تماما Imject الشب (40 ملغ / مل) قطرة قطرة مع الاستمرار في دوامة أنبوب لإنتاج نسبة 1: 1 ل الشب لمستمنع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع غطاء على أنبوب وأنبوب الشريط لدوامة. تحويل دوامة على أدنى الإعداد والسماح OVA بأن يمتص إلى الشب لمدة 30 دقيقة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لا تسمح كمية كبيرة من الوقت لتمرير بين إعداد OVA / الشب وتوعية الفئران. إذا التوعية لا يمكن إتمام مباشرة بعد OVA / الشب preparatأيون، مخزن OVA / الشب في درجة حرارة الغرفة. دوامة لمدة 1 دقيقة قبل استخدام. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل الأنسولين حقنة 1 مل مع OVA / الشب الخليط. سقف الحقنة مع إبرة قياس 27. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضخ 100 ميكرولتر من OVA / الشب في الصفاق من BALB / ج الفئران لجرعة في الماوس من 50 ميكروغرام من OVA و 2 ملغ من الشب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمراقبة سلبية، توعية مجموعة أخرى من الفئران إلى برنامج تلفزيوني. إعداد 1: 1 خليط من الشب وPBS في بنفس الطريقة المذكورة أعلاه، حذف OVA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توعية جميع الفئران (OVA والسيطرة PBS) مرة واحدة في الأسبوع لمدة 3 أسابيع ليصبح المجموع 3 الحقن. بعد الحقن النهائي، انتظر على الأقل 2 أسابيع قبل إجراء فحص الحساسية المفرطة المحلي. </li></ol> 2. المحلية العوار الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جلب OVA محلول المخزون إلى درجة حرارة الغرفة. في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل، وتمييع 20 ملغ / مل الأسهم OVA إلى تركيز النهائي من 5 ملغ / مل مع برنامج تلفزيوني (1: 4 التخفيف من OVA في 1X PBS). دوامة لفترة وجيزة لخلط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران باستخدام RC 2 &lt;/ سوب&gt; القوارض نظام التخدير (أو نظام مماثل تسليم يتبخر). ملء خزان مع isoflurane، وبدوره على تدفق الهواء O 2. مكان الفئران في غرفة تحريض وضبط قرص التحكم الأيزوفلورين إلى 5٪ لبدء التخدير. مرة واحدة يتم تخدير الفئران تماما، يتبين من عدم الحراك، وضبط قرص التحكم الأيزوفلورين إلى 3٪ للحفاظ على التخدير العميق. الغرض من التخدير في هذا الإجراء هو شل الحيوان. الحقن الأذن والذيل الوريد لا تسبب الألم أو الضيق كبيرا للحيوان. ملاحظة: الأيزوفلورين يمكن أن يكون لها آثار سلبية على الجهاز التناسلي البشري. تأكد من استخدام في غرفة جيدة التهوية وإرفاق اسطوانة الكسح إلى غرفة تحريض لتحييد النفايات الغازية. إذا كنت حاملا أثناء استخدام الأيزوفلورين، وارتداء قناع فلتر الكربون لتقليل التعرض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل 10 ميكرولتر من 5 ملغ / مل OVA إلى حقنة الأنسولين 3/10 سم مكعب توج مع إبرة 31 G. تحميل 3/10 سم مكعب حقنة الأنسولين آخر مع 10 ميكرولترمن 1X PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مجهر تشريح، وضخ 10 ميكرولتر من OVA في الأذن اليمنى من الماوس تخدير لجرعة التحدي من 50 ميكروغرام من OVA. جرعات أخرى، مثل 20 ميكروغرام، هي أيضا مقبولة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحقيق الاستقرار في الأذن للحقن، والتفاف الاسكتلندي (الجانب زجة متابعة) حوالي 15 مل أنبوب مخروطي. تأمين الجانب الظهري من الأذن اليمنى إلى الشريط. إدراج الجانب شطبة إبرة يصل بين الأوراق اثنين من الأذن. حقن ببطء OVA في وسط النسيج الأذن، مع الحرص على عدم ضرب أي الأوعية الدموية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام نفس الطريقة المذكورة أعلاه، وضخ 10 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني في الأذن اليسرى كعنصر تحكم السلبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انتظر 3 دقائق. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال هذا الوقت، ضع الماوس في رادع وعقد ذيل تحت مصباح الحرارة أو في حمام ماء دافئ لمدة 1 دقيقة إلى تمدد الأوعية الدموية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام حقنة 1 مل الأنسولين توج مع إبرة 27 G، حقن ببطء 200 ميكرولتر من 0.5٪ ايفانز الأزرق صبغة في الذيل الخامسعين من الفأرة. تدار الحقن السريع قد تدمر هيكل السفينة قبل كامل 200 ميكرولتر. إذا حدث هذا، محاولة لحقن حجم ما تبقى من الصبغة في الوريد على الجانب الآخر من الذيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الانتظار 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الماوس وإزالة كلتا الأذنين باستخدام ملقط ومقص جراحي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستيلاء على حواف الأذن مع ملقط، والتأكد من أن أي ضغط يطبق على موقع الحقن في مركز الأذن. إزالة أكبر قدر ممكن من أنسجة الأذن ممكن عن طريق خفض بالقرب من، ولكن ليس من خلال سلسلة من التلال الغضروف الحاضر في قاعدة الأذن. كميات صغيرة من الفراء قد تكون موجودة على الأذن استئصاله. هذا لن يؤثر على الفحص. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قسامة 700 ميكرولتر من الفورماميد إلى 1.5 مل أنابيب microcentrifuge. إعداد أنبوب واحد في الأذن (أنبوبين في الماوس). ملاحظة: الفورماميد هو ماسخة، مطفرة، ومصدرا للإزعاج. ارتداء القفازات، وحماية العين، وحماية الوجه. النساء الحوامل يجب توخي الحذر عند التعامل معقد تكون ق الفورماميد سمي جنيني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة إلى آذان الفورماميد، وكأب الأنابيب، واحتضان بين عشية وضحاها في حمام الحرارة الجافة المنصوص إلى 63 درجة مئوية. الأذنين قد لا تزال تظهر اللون الأزرق قليلا بعد الحضانة. ولكن يتم استخراج معظم الصبغة في الفورماميد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 300 ميكرولتر من كل عينة من نسختين إلى 96 لوحة جيدا. تجنب نقل الفراء إذا كان موجودا في العينة. ضمان عدم وجود فقاعات الموجودة في الآبار، لأنها سوف تؤثر على القراءة الامتصاصية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 300 ميكرولتر من الفورماميد، في نسختين، إلى 96 لوحة جيدا. وسوف تستخدم هذه الآبار والفراغات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مطياف لقياس الامتصاصية في 620 نانومتر. آبار الفورماميد طرح من كل قراءة العينة. ملاحظة: تم تنفيذ جميع التجارب في إطار البروتوكولات وافقت عليها اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام جامعة الخدمات الموحدة. </li></ol>

<ol>
	<li>Kojima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast+cells+and+Bbasophils+are+selectively+activated+in+vitro+and+in+vivo+through+CD200R3+in+an+IgE-independent+manner.">Mast cells and Bbasophils are selectively activated in vitro and in vivo through CD200R3 in an IgE-independent manner.</a> The Journal of Immunology. 179 (10), 7093-7100 (2007).</li><li>Parikh, S. A., Cho, S. H., Oh, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preformed+enzymes+in+mast+cell+granules+and+their+potential+role+in+allergic+rhinitis.">Preformed enzymes in mast cell granules and their potential role in allergic rhinitis.</a> Current Allergy and Asthma Reports. 3 (3), 266-272 (2003).</li><li>Amin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+mast+cells+in+allergic+inflammation.">The role of mast cells in allergic inflammation.</a> Respiratory Medicine. 106 (1), 9-14 (2012).</li><li>Nakaya, M., Takeuchi, N., Kondo, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+localization+of+histamine+receptor+subtypes+in+human+inferior+turbinates.">Immunohistochemical localization of histamine receptor subtypes in human inferior turbinates.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 113 (7), 552-557 (2004).</li><li>Ramsdell, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+Trypan+Blue+to+demonstrate+the+immediate+skin+reaction+in+rabbits+and+guinea+pigs.">The use of Trypan Blue to demonstrate the immediate skin reaction in rabbits and guinea pigs.</a> The Journal of Immunology. 15 (4), 305-311 (1928).</li><li>Chase, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+sensitization+of+animals+with+simple+chemical+compounds:+X.+Antibodies+inducing+immediate-type+skin+reactions.">Studies on the sensitization of animals with simple chemical compounds: X. Antibodies inducing immediate-type skin reactions.</a> The Journal of Experimental Medicine. 86 (6), 489-514 (1947).</li><li>Goose, J., Blair, A. M. J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passive+cutaneous+anaphylaxis+in+the+rat,+induced+with+two+homologous+reagin-like+antibodies+and+its+specific+inhibition+with+disodium+cromoglycate.">Passive cutaneous anaphylaxis in the rat, induced with two homologous reagin-like antibodies and its specific inhibition with disodium cromoglycate.</a> Immunology. 16, 749-760 (1969).</li><li>Ovary, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passive+cutaneous+anaphylaxis+in+the+mouse.">Passive cutaneous anaphylaxis in the mouse.</a> The Journal of Immunology. 81 (4), 355-357 (1958).</li><li>Ovary, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immediate+reactions+in+the+skin+of+experimental+animals+provoked+by+antibody-antigen+interactoin.">Immediate reactions in the skin of experimental animals provoked by antibody-antigen interactoin.</a> Progress in Allergy. 5, 459-508 (1958).</li><li>Akiyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitiative+evaluation+of+passive+cutaneous+anaphylaxis+(PCA)+using+a+hand-held+spectrophotometer.">Quantitiative evaluation of passive cutaneous anaphylaxis (PCA) using a hand-held spectrophotometer.</a> Biological &amp; Pharmaceutical Bulletin. 19 (8), 1112-1114 (1996).</li><li>Teshima, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+spectrophotometric+analysis+of+passive+and+active+ear+cutaneous+anaphylaxis+in+the+mouse.">Simple spectrophotometric analysis of passive and active ear cutaneous anaphylaxis in the mouse.</a> Toxicology Letters. 95 (2), 109-115 (1998).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

وتستخدم علامات عديدة من أمراض الحساسية لتقييم قوة استجابات حساسية التالية التحدي حساسية، بما في ذلك التغيرات في مستويات تعميم الهستامين، إنتاج السيتوكينات الاستجابة Th2، وتجنيد خلية في السائل القصبات في وضع التحدي مجرى الهواء. في حين رصد التغيرات في هذه المعايير ال?...

وبوساطة النوع الأول من فرط الحساسية الناجمة عن مستضد عبر ربط إيج على سطح الخلايا البدينة والخلايا القاعدية. وهذا يؤدي إلى تحبب الخلوية والإفراج عن وسطاء فعال في الأوعية وproinflammatory مثل الهستامين، تريبتاز، وعامل تنشيط الصفائح الدموية 2. وعقب صدور سطاء بريفورميد خلال تحبب الخلايا البدينة توليف والافراج عن البروستاجلاندين و leukotrienes، التي تزيد من نفاذية الأوعية الدموية 3. وتحدث هذه الاستجابة السريرية الأولية بسرعة ويشار إليه على أنه &quot;رد فعل فوري&quot;. في الجلد، استجابة الانتفاخ و-مضيئة مرئيا بسهولة في غضون دقائق من التحدي مستضد. اعتمادا على جرعة من التحدي، فمن الممكن لمراقبة &quot;رد مرحلة متأخرة&quot; بعد بضع ساعة. ويرجع ذلك إلى وذمة موضعية والتوظيف الكريات البيض في الأنسجة 2 أواخر مرحلة التورم. الهستامين، يعتبر عموما أن يكون الوسيط الرئيسي يشاركون فياستجابات حساسية مباشرة، يعمل على مستقبلات الهستامين أعرب 1 (HR1) على السفن ومستقبلات الهستامين 2 (HR2) أعرب على العضلات الملساء. التأثير المشترك يزيد من تدفق الدم ونفاذية الأوعية الدموية في موقع الالتهاب 4. وقد وضعت مجموعة متنوعة من نماذج حيوانية من الحساسية وذلك لدراسة الآليات التي تشارك في الالتهاب التحسسي، بما في ذلك نماذج من الربو التحسسي، الحساسية المفرطة النظامية، والحساسية المفرطة المحلية. وقد استخدمت إدارة صبغة عن طريق الوريد لقياس استجابات حساسية موضعية في نماذج حيوانية لمدة قرن تقريبا، مع المنشورات التي تصف هذه التقنية التي يعود تاريخها إلى 1920s 5. كانت الأرانب والخنازير الغينية على نماذج حيوانية الأولى المستخدمة لاختبار تفاعلات فرط الحساسية المباشرة، وعثر الردود الأكثر حساسية عموما في الأذن 5،6. تم التحقق من صحة الفحص في وقت لاحق للاستخدام في الجرذان والفئران 7 8. تاريخيا،وقد استخدمت مجموعة متنوعة من الأساليب التجريبية، بما في ذلك حقن مستضد قبل حقن الصبغة، حقن الصبغة قبل حقن المستضد، وحقن صبغة في وقت واحد والمستضد. إدارة صبغة عن طريق الوريد كوسيلة لقياس استجابات حساسية هي فحص تنوعا لأنها يمكن أن تستخدم لقياس نشطة، سلبية، وعكس ردود فعل سلبية 5،9. وقد استخدمت الأصباغ العديدة لتقييم استجابات حساسية، بما في ذلك التريبان الأزرق، Pontamine السماء الزرقاء، ايفانز الأزرق، الأزرق غايغي 536، والهند الحبر 5،6،9. هناك حل من 0.5٪ ايفانز الأزرق حاليا الصبغة القياسية المستخدمة لقياس استجابات حساسية في الجلد. الاستجابة إلى التحدي الحساسية هي عابرة. يتم التوصل إلى الحد الأقصى لكثافة الداخل 10 - 15 دقيقة من حقن الصبغة، وأي رد فعل مرئيا إذا كانت تدار صبغة أكثر من 30 دقيقة بعد التحدي، بغض النظر عن أنواع الحيوانات المستخدمة 9. كان الكمي لصبغ تسرب الأصليلاي الحصول عليها عن طريق قياس حجم الانتفاخ كما يدل على ذلك صبغة زرقاء 7-9. بالإضافة إلى ذلك، تهم الخلايا البدينة degranulated يمكن كميا بواسطة استئصال أنسجة الجلد من موقع رد الفعل وتلطيخ مع طولويدين الأزرق 7. وكثيرا ما يستخدم تحبب الخلايا البدينة كعلامة للالجلدي، استجابات حساسية إيج بوساطة، والخلايا البدينة هي خلية السكان المحليين الرئيسي معربا عن تقارب عالية إيج مستقبلات FcεRI. تم تطوير تقنيات طيفية لقياس تسرب الصبغة في الأنسجة الجلدية الحساسية المفرطة للالسلبي (PCA) في الفئران والفأر 10 11 في عام 1990. وقد تم تكييف البروتوكول الحساسية المفرطة فحص المحلية التالية من كوجيما وآخرون. 1، ويستخدم ألبومين البيض بيض الدجاج (OVA) كما مستضد لانتزاع استجابات حساسية. ومع ذلك، مستضدات أخرى من OVA قد تستخدم اذا شئت. ثم يستخدم الفحص ايفانز الأزرق صبغ لرصد التغيرات في الأوعية الدموية permeabilitذ التي تحدث بسبب الصاري خلية إيج عبر ربط وإطلاق الهستامين.

<table><tbody><tr><td>BALB/c Mice</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>651</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.4</td><td>Quality Biologic</td><td>114-058-101</td><td></td></tr><tr><td>Ovalbumin</td><td>Sigma</td><td>A5503-10G</td><td></td></tr><tr><td>Imject Alum</td><td>Thermo Scientific</td><td>77161</td><td>Mix thoroughly before use</td></tr><tr><td>Evans Blue Dye</td><td>Sigma</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>Formamide</td><td>Sigma</td><td>295876</td><td>99%+ Spectrophotometric grade</td></tr><tr><td>Isoflurane, USP</td><td>Phoenix</td><td>NDC 57319-474-06</td><td></td></tr><tr><td>1cc Insulin syringes</td><td>BD</td><td>329654</td><td></td></tr><tr><td>3/10 cc Insulin syringe with 31 G needle</td><td>Terumo</td><td>NDC 100861</td><td></td></tr><tr><td>27 G Needles</td><td>BD</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>F.S.T.</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>Surgical scissors</td><td>F.S.T.</td><td>14070-12</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Polystyrene round-bottom tubes</td><td>BD Falcon</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml Microcentrifuge tubes</td><td>Medical Supply Partners</td><td>15-1151</td><td></td></tr><tr><td>15 ml Conical tubes</td><td>BD Falcon</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>Flat-bottom 96 well plate</td><td>Costar</td><td>3590</td><td></td></tr><tr><td>Scotch tape</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RC&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt; Rodent Anesthesia System</td><td>VetEquip</td><td>922100</td><td></td></tr><tr><td>Vortex Genie 2</td><td>Scientific Industries</td><td>SI-0236</td><td>Model G560 with 3 inch platform</td></tr></tbody></table>

measuring local anaphylaxis in mice

استجابات حساسية هي نتيجة لتنشيط الخلايا البدينة والخلايا القاعدية، وإطلاق سراح لاحق من فعال في الأوعية والوسطاء proinflammatory. التعرض لمسببات الحساسية في الأفراد الحساسين يمكن أن يؤدي إلى الأعراض السريرية التي تختلف من حمامي طفيف إلى الحساسية المفرطة التي تهدد الحياة. في المختبر، وقد تم تطوير نماذج حيوانية مختلفة لفهم آليات القيادة استجابات حساسية. هنا، نحن تصف طريقة مفصلة لقياس التغيرات في نفاذية الأوعية الدموية لقياس استجابات حساسية موضعية. وذكرت وفحص الحساسية المفرطة المحلي أولا في 1920s، وقد تم تكييفها من تقنية نشرته كوجيما وآخرون. في عام 2007 1. في هذا الاختبار، يتم الطعن الفئران توعيتهم OVA في الأذن اليسرى مع السيارة وفي الأذن اليمنى مع OVA. ويلي ذلك حقنة في الوريد من ايفانز الأزرق صباغة. عشرة دقيقة بعد حقن ايفانز الأزرق، والموت الرحيم للحيوان والصبغة التي extravasated فيالى الاسماع يستخرج بين عشية وضحاها في الفورماميد. ثم يتم كميا امتصاص الصبغة المستخرجة مع طيفي. هذه الطريقة النتائج بشكل موثوق في مظهر البصرية وقابل للقياس للاستجابة تحسسية المحلية.

والحيوانات التي خضعت للفحص بنجاح يكون الجلد والعيون التي تظهر باللون الأزرق. يجب توعية PBS الحيوانات لا تتفاعل إما برنامج تلفزيوني أو OVA التحدي، ينبغي أن تظل بالتالي كلتا الأذنين الأبيض (الشكل 1A). في الحيوانات OVA توعية، الأذن تلقي التحدي PBS (يسار) وينبغي أن تكون...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Local Anaphylaxis in Mice at JoVE.com

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

استجابات حساسية، والتي تتميز تنشيط الخلايا البدينة والخلايا القاعدية، ويقودها الربط عبر ال IgE وإطلاق وسطاء proinflammatory. ويمكن تحقيق التقييم الكمي للاستجابات حساسية باستخدام ايفانز الأزرق صبغ لرصد التغيرات في نفاذية الأوعية الدموية بعد التحدي حساسية.

قياس الحساسية المفرطة المحلية في الفئران

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

19.2K Views.  Uniformed Services University of the Health Sciences.  استجابات حساسية، والتي تتميز تنشيط الخلايا البدينة والخلايا القاعدية، ويقودها الربط عبر ال IgE وإطلاق وسطاء proinflammatory. ويمكن تحقيق التقييم الكمي للاستجابات حساسية باستخدام ايفانز الأزرق صبغ لرصد التغيرات في نفاذية الأوعية الدموية بعد التح...

Video: Measuring Local Anaphylaxis in Mice

Murine Model of Allergen Induced Asthma

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, with the prevalence increasing.2 As with other diseases, animal models of allergic airway disease greatly facilitate understanding of the underlying pathophysiology, help identify potential therapeutic targets, and allow preclinical testing of possible new therapies. Models of allergic airway disease have been developed in several animal species, but murine models are particularly attractive due to the low cost, ready availability, and well-characterized immune systems of these animals.3 Availability of a variety of transgenic strains further increases the attractiveness of these models.4 Here we describe two murine models of allergic airway disease, both employing ovalbumin as the antigen. Following initial sensitization by intraperitoneal injection, one model delivers the antigen challenge by nebulization, the other by intratracheal delivery. These two models offer complementary advantages, with each mimicking the major features of human asthma.5
The major features of acute asthma include an exaggerated airway response to stimuli such as methacholine (airway hyperresponsiveness; AHR) and eosinophil-rich airway inflammation. These are also prominent effects of allergen challenge in our murine models,5,6 and we describe techniques for measuring them and thus evaluating the effects of experimental manipulation. Specifically, we describe both invasive7 and non-invasive8 techniques for measuring airway hyperresponsiveness as well as methods for assessing infiltration of inflammatory cells into the airways and the lung. Airway inflammatory cells are collected by bronchoalveolar lavage while lung histopathology is used to assess markers of inflammation throughout the organ. These techniques provide powerful tools for studying asthma in ways that would not be possible in humans.

Experimental mouse models of allergic asthma offer new possibilities for studying disease pathogenesis and developing new therapeutics. These models are well suited to measuring factors governing the allergic immune response, airway inflammation, and pulmonary pathophysiology.

الفئران نموذج من الربو المستحثة مسببات الحساسية

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention

One desirable endpoint of general anesthesia is the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is less straightforward than it is in human patients. A widely used behavioral surrogate for hypnosis in rodents is the loss of righting reflex (LORR), or the point at which the animal no longer responds to their innate instinct to avoid the vulnerability of dorsal recumbency. We have developed a system to assess LORR in 24 mice simultaneously while carefully controlling for potential confounds, including temperature fluctuations and varying gas flows. These chambers permit reliable assessment of anesthetic sensitivity as measured by latency to return of the righting reflex (RORR) following a fixed anesthetic exposure. Alternatively, using stepwise increases (or decreases) in anesthetic concentration, the chambers also enable determination of a population's sensitivity to induction (or emergence) as measured by EC50 and Hill slope. Finally, the controlled environmental chambers described here can be adapted for a variety of alternative uses, including inhaled delivery of other drugs, toxicology studies, and simultaneous real-time monitoring of vital signs.

Loss of the righting reflex has long served as a standard behavioral surrogate for unconsciousness, also called hypnosis, in laboratory animals. Alterations in volatile anesthetic sensitivity caused by pharmacological interventions can be detected with a carefully controlled high-throughput assessment system, which may be adapted for delivery of any inhaled therapeutic.

تقييم التغيرات في المتطايرة العام التخدير حساسية من الفئران بعد التدخل الدوائي المحلي أو الجهازية

One desirable endpoint of general anesthesia is  the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is  less ...

Medicine

Measuring Changes in Tactile Sensitivity in the Hind Paw of Mice Using an Electronic von Frey Apparatus

Measuring inflammation-induced changes in thresholds of hind paw withdrawal from mechanical pressure is a useful technique to assess changes in pain perception in rodents. Withdrawal thresholds can be measured first at baseline and then following drug, venom, injury, allergen,&#160;or otherwise evoked inflammation by applying an accurate force on very specific areas of the skin. An electronic von Frey apparatus allows precise assessment of mouse hind paw withdrawal thresholds that are not limited by the available filament sizes in contrast to classical von Frey measurements. The ease and rapidity of measurements allow for incorporation of assessment of tactile sensitivity outcomes in diverse models of rapid-onset inflammatory and neuropathic pain as multiple measurements can be taken within a short time period. Experimental measurements for individual rodent subjects can be internally controlled against individual baseline responses and exclusion criteria easily established to standardize baseline responses within and across experimental groups. Thus, measurements using an electronic von Frey apparatus represent a useful modification of the well-established classical von Frey filament-based assays for rodent mechanical allodynia that may also be applied to other nonhuman mammalian models.

Electronic von Frey measurements are an effective and improved alternative to classical von Frey filaments, as they allow rapid and precise measurement of changes in rodent mechanical withdrawal thresholds to continuously applied pressure stimuli before and after an inflammatory event.

Measuring inflammation-induced changes in thresholds of hind paw withdrawal from mechanical pressure is a useful technique to assess changes in pain ...

Neuroscience

A Reversible, Non-invasive Method for Airway Resistance Measurements and Bronchoalveolar Lavage Fluid Sampling in Mice

Airway hyperreactivity (AHR) measurements and bronchoalveolar lavage (BAL) fluid sampling are essential to experimental asthma models, but repeated procedures to obtain such measurements in the same animal are generally not feasible.  Here, we demonstrate protocols for obtaining from mice repeated measurements of AHR and bronchoalveolar lavage fluid samples.  Mice were challenged intranasally seven times over 14 days with a potent allergen or sham treated.  Prior to the initial challenge, and within 24 hours following each intranasal challenge, the same animals were anesthetized, orally intubated and mechanically ventilated.  AHR, assessed by comparing dose response curves of respiratory system resistance (RRS) induced by increasing intravenous doses of acetylcholine (Ach) chloride between sham and allergen-challenged animals, were determined.  Afterwards, and via the same intubation, the left lung was lavaged so that differential enumeration of airway cells could be performed.  These studies reveal that repeated measurements of AHR and BAL fluid collection are possible from the same animals and that maximal airway hyperresponsiveness and airway eosinophilia are achieved within 7-10 days of initiating allergen challenge.  This novel technique significantly reduces the number of mice required for longitudinal experimentation and is applicable to diverse rodent species, disease models and airway physiology instruments.  

Repeated measurements of rodent respiratory physiology and sampling of airway inflammatory cells are desirable, but generally not feasible. Here we describe a repeatable method for orally intubating mice that permits repeated measurements of airway hyperreactivity and sampling of airway inflammatory cells.

A عكسية ، غير الغازية طريقة لقياس مقاومة مجرى الهواء وأخذ عينات السوائل غسل القصبات في الفئران

Airway hyperreactivity (AHR) measurements and bronchoalveolar lavage (BAL) fluid sampling are essential to experimental asthma models, but repeated ...

Biology

Antigenic Liposomes for Generation of Disease-specific Antibodies

Antibody responses provide critical protective immunity to a wide array of pathogens. There remains a high interest in generating robust antibodies for vaccination as well as understand how pathogenic antibody responses develop in allergies and autoimmune disease. Generating robust antigen-specific antibody responses is not always trivial. In mouse models, it often requires multiple rounds of immunizations with adjuvant that leads to a great deal of variability in the levels of induced antibodies. One example is in mouse models of peanut allergies where more robust and reproducible models that minimize mouse numbers and the use of adjuvant would be beneficial. Presented here is a highly reproducible mouse model of peanut allergy anaphylaxis. This new model relies on two key factors: (1) antigen-specific splenocytes are adoptively transferred from a peanut-sensitized mouse into a na&#239;ve recipient mouse, normalizing the number of antigen-specific memory B- and T-cells across a large number of mice; and (2) recipient mice are subsequently boosted with a strong multivalent immunogen in the form of liposomal nanoparticles displaying the major peanut allergen (Ara h 2). The major advantage of this model is its reproducibility, which ultimately lowers the number of animals used in each study, while minimizing the number of animals receiving multiple injections of adjuvant. The modular assembly of these immunogenic liposomes provides relatively facile adaptability to other allergic or autoimmune models that involve pathogenic antibodies.

Described is the preparation of antigenic liposomal nanoparticles and their use in stimulating B-cell activation in vitro and in vivo. Consistent and robust antibody responses led to the development of a new peanut allergy model. The protocol for generating antigenic liposomes can be extended to different antigens and immunization models.

الدهنية مولده لتوليد الأجسام المضادة الخاصة بالمرض

Antibody responses provide critical protective immunity to a wide array of pathogens. There remains a high interest in generating robust antibodies for ...

Mouse Body Temperature Measurement Using Infrared Thermometer During Passive Systemic Anaphylaxis and Food Allergy Evaluation

Mouse body temperature measurement is of paramount importance for investigating allergies and anaphylactic symptoms. Rectal probes for temperature readings is common, and they have been proven to be accurate and invaluable in this regard. However, this method of temperature measurement requires the mice to be anesthetized in order to insert the probe without injury to the animal. This limits the ability to observe other phenotypes of the mouse simultaneously. In order to investigate other phenotypes while measuring temperatures, rectal probes are not ideal, and another method is desired. Here, we introduce a noninvasive method of temperature measurement that foregoes the requirement for mouse anesthesia while maintaining equal reliability to rectal probes in measuring body temperature. We use an infrared thermometer that detects body surface temperatures at ranges between 2 and 150 mm. This method of body temperature measurement is successful in reliably replicating temperature change trends during passive system anaphylaxis experiments in mice. We show that body surface temperatures are about 2.0 &#176;C lower than rectal probe measurements, but the degree of temperature drop follows the same trend. Furthermore, we use the same technique to observe mice in a food allergy model to evaluate temperature and activity levels simultaneously.

Here we present a new method to accurately measure body temperature differences in passive systemic anaphylaxis (PSA) and food allergy mouse models using an infrared thermometer. This procedure has been accurately duplicated in previous PSA results.

قياس درجة حرارة الجسم الماوس استخدام الأشعة تحت الحمراء الحرارة خلال تاق الجهازية السلبي وتقييم الحساسية الغذائية

Mouse body temperature measurement is of paramount importance for investigating allergies and anaphylactic symptoms. Rectal probes for temperature ...

Cheek Injection Model for Simultaneous Measurement of Pain and Itch-related Behaviors

Itch was defined as &#34;an unpleasant cutaneous sensation that provokes a desire to scratch&#34;&#160;by Rothman in 1941. In mouse models, scratch bouts are typically counted to evaluate itch induced by pruritogens. However, previous reports have shown that algesic substances also induce scratching behaviors in a mouse neck injection model, which is the most common test used for scratching behaviors. This finding makes it difficult to study itch in mice. &#160;In contrast, capsaicin, a common algogen, reduced scratching behaviors in some neck injection experiments. Therefore, the effect of pain on scratching behaviors remains unclear. It is thus necessary to develop a method to concurrently investigate itch and pain sensation using behavioral tests. Here, a cheek injection model is introduced which can be used to simultaneously measure pain- and itch-related behaviors. In this model, pruritogens induce scratching behaviors while algesic substances induce wiping behaviors. Using this model, lysophosphatidic acid (LPA), an itch mediator found in cholestatic patients with itch, is shown to exclusively induce itch but not pain. However, in mouse models, LPA has been reported to be both a pruritogen and an algogen. Investigation into the effects of LPA in a mouse cheek injection model showed that LPA only induced scratching, but not wiping behaviors. This indicates that LPA acts as a pruritogen similarly in mice and humans, and demonstrates the utility of a cheek injection model for itch research.

Typically, the mouse neck injection model is used for evaluate pruritogen-induced scratch behaviors. However, the model provides information only on itch, not pain. Here, a cheek injection model is introduced in mice which can be used to simultaneously measure pain and itch-related behaviors.

نموذج حقن الخد للقياس المتزامن للألم والسلوكيات المتعلقة بالحكة

Itch was defined as &#34;an unpleasant cutaneous sensation that provokes a desire to scratch&#34;&#160;by Rothman in 1941. In mouse models, scratch bouts ...

Analysis of Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor-Producing T Helper Cells in a Mouse Model of Contact Hypersensitivity

Parallel to traditional Th1/Th2/Th17/Treg lineages, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-producing T helper (Th-GM) cells have been identified as a distinct subset of T helper cells (GM-CSF+ IFN-&#947;- IL-17A- IL-22- effector CD4+ T cells) in human and mice. Contact hypersensitivity (CHS) is considered an excellent animal model for allergic contact dermatitis (ACD) in human, manifesting an intact T cell-mediated immune response. To provide a standardized and comprehensive assay to analyze the Th-GM cell subset in the T cell-dependent immune response in vivo, a murine CHS model was induced by sensitization/challenge with a reactive, low-molecular-weight, organic hapten, 2,4-dinitrofluorobenzene (DNFB). The Th-GM subset in effector CD4+ T cells generated upon immunization with the hapten was analyzed by flow cytometry. We found that Th-GM was mainly expanded in lesions and draining lymph nodes in the DNFB-induced CHS mouse model. This method can be applied to further study the biology of Th-GM cells and pharmacological research of therapeutic strategies centered on GM-CSF in various conditions, such as ACD.

Here, we present a simple and standardized method of analyzing the granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-producing T helper subset in vivo.

Parallel to traditional Th1/Th2/Th17/Treg lineages, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-producing T helper (Th-GM) cells have been identified ...

Contact Hypersensitivity as a Murine Model of Allergic Contact Dermatitis

Contact hypersensitivity (CHS) is an experimental model of allergic contact dermatitis (ACD) that can be studied in mice. This study aims to present an objective laboratory method that may help to study the CHS reaction in mice, which can be measured and quantified by various tests. To induce CHS, on day "0", mice were sensitized on a previously shaved spot by abdominal skin painting with the hapten 2,4,6-trinitrochlorobenzene (TNCB) in an acetone-ethanol mixture, whereas negative control mice were sham sensitized with vehicle alone-acetone-ethanol mixture. On day "4", the baseline ear thickness was measured with a micrometer prior to the elicitation of CHS (challenge) by painting both ears with diluted TNCB both in the test and control groups. After 24 h, the ear swelling was measured with a micrometer. CHS is an example of a T cell-mediated immune response that causes swelling in inflamed tissue, peaking 24 h after the skin challenge with the same hapten. An increase in ear edema correlated with augmented ear weight, myeloperoxidase (MPO) activity, pro-inflammatory cytokine concentration in the ear extracts, increased thickening of the edematous dermis in the histological examination, and ear vascular permeability. There was also an increase in the concentration of TNP-specific IgG1 antibodies in the sera of the test group when compared with the control mice. Additionally, CHS can be successfully transferred with the CHS-effector cells obtained from donors previously sensitized with TNCB. The CHS-effector cells were administered intravenously into na&#239;ve recipient mice, which were subsequently challenged with the same diluted hapten. Ear swelling was measured with a micrometer 24 h later.

Contact hypersensitivity (CHS) is a murine experimental model of allergic contact dermatitis (ACD). CHS is based on sensitization with reactive hapten by painting the shaved skin of the chest and abdomen, with a subsequent ear skin challenge with a diluted hapten, causing a swelling reaction that is assessed in various ways.

فرط الحساسية التماسية كنموذج مورين لالتهاب الجلد التماسي التحسسي

Contact hypersensitivity (CHS) is an experimental model of allergic contact dermatitis (ACD) that can be studied in mice. This study aims to present an ...

A Mouse Ear Model for Allergic Contact Dermatitis Evaluation

Skin is the human body&#39;s first line of defense and one of the most exposed organs to environmental chemicals. Allergic contact dermatitis (ACD) is a common skin disease that manifests as a local rash, redness, and skin lesions. The occurrence and development of ACD are influenced by both genetic and environmental factors. Although many scholars have constructed a series of models of ACD in recent years, the experimental protocols of these models are all different, which makes it difficult for readers to establish them well. Therefore, a stable and efficient animal model is of great significance to further study the pathogenesis of atopic dermatitis. In this study, we detail a modeling method using 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) to induce ACD-like symptoms in the ears of mice and describe several methods for assessing the severity of dermatitis during modeling. This experimental protocol has been successfully applied in some experiments and has a certain promotional role in the field of ACD research.

Here, we describe the methods for inducing allergic contact dermatitis in mouse ears by 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) and how to evaluate the severity of allergic contact dermatitis.

نموذج أذن الفأر لتقييم التهاب الجلد التماسي التحسسي

Skin is the human body&#39;s first line of defense and one of the most exposed organs to environmental chemicals. Allergic contact dermatitis (ACD) is a ...