Japon Ensefaliti Aşılı Çocuklarda Lenfositlerin Tespiti için Akış Sitometreleri Arasında Laboratuvarlar Arasında Transferin Standardizasyonu

Akış sitometresinin standardizasyon yöntemi, laboratuvar sonuçlarının karşılıklı akreditasyonu için uygulanabilir bir yaklaşım sağlar ve sonuçların birden fazla merkezdeki araştırma projeleriyle tutarlılığını sağlar. Zaman tüketimini en aza indirgeme yönteminin yürütülmesi kolaydır, otomatikleştirmek için donatılmıştır, şablonu analiz eder ve veri analizi gereksinimini önemli ölçüde azaltabilir. Sitometre A yazılımında, aktarma laboratuvarından, sitometre düğmesine tıklayarak ve görünüm yapılandırmalarını seçerek yeni bir yapılandırma oluşturmaya başlayın.

Konfigürasyon listesinde temel konfigürasyonlar klasörüne sağ tıklayın, yeni klasörü seçin ve yeniden adlandırın. Ardından, temel yapılandırmayı sağ tıklatıp kopyalayarak yeni bir yapılandırma oluşturun. Yeni klasörü sağ tıklayın ve yeni yapılandırmayı yeniden adlandırmadan önce temel yapılandırmayı yapıştırın, Standartlaştırılmış yöntem aktarımı"Parametreler listesinden FETC gibi parametre adını uygun dedektör 530/30'a sürükleyin, ayrıca yeni yapılandırmaya ek parametreleri düzenleyin.

Aktarımı yapan laboratuvarda denemeyi standartlaştırmak için, bu sitometre A kurulumunu kullanarak bir performans kontrolü çalıştırın ve Sitometre A'nın iyi performans gösterdiğini doğrulamak için boncukları izleyin. Yazılım tarayıcı penceresinde sitometre A ayarlarına sağ tıklayın ve uygulama ayarlarını seçerek bir çalışma sayfası oluşturun. Ardından, ileri saçılma alanının veya FSC'nin ve yan saçılma alanının veya SSC'nin ve tüm floresan parametrelerinin fotoğraf çarpan tüpünü veya PMT voltajlarını ayarlamak için lekesiz bir örnek kullanın.

Deneme sitometresi ayarlarına sağ tıklayıp uygulama ayarlarını seçerek uygulama ayarlarını kaydedin. Ücret kontrollerini otomatik olarak eklemek için, telafi denetimleri oluştur'u seçmeden önce deneme düğmesine tıklayın ve ücret ayarları menüsünü seçin. Tüm kompanzasyon kontrol boncukları için verileri kaydedin.

İşiniz bittiğinde, denemeye tıklayın ve kompanzasyon kurulumunu seçin, tek hücreli lekeli kontroller için verileri kaydetmeden önce telafiyi otomatik olarak hesaplayın. R7-18'in telafi değerini %15 APC'ye değiştirmek için CD45 RAA APC'yi, APC H7'nin telafi değerini %14 BB700'e değiştirmek için CD19 BB700'ü ve APC H7'nin ücret değerini %60 R7-18'e değiştirmek için CD8 R7-18'i kullanın. CST boncukları için verileri kaydettikten sonra, CST parlak boncukları için hedef değer şablonunun genel bir çalışma sayfasını oluşturun, bir kez bittiğinde, örnekleri akış sitometre dizisinde çalıştırın ve 25.000 lenfosit toplayın.

Örnekler için analiz şablonunun genel bir çalışma sayfasını oluşturun ve deneysel şablonu sitometre A.CD-ROM'u kullanarak deneysel şablonu dışa aktarın. Deneysel şablonu test laboratuvarındaki sitometre B'ye aktarmak için, sitometre B'nin iyi performans gösterdiğini doğrulamak için CST boncuklarını kullanarak bir performans kontrolü yapın. Deneysel şablonu sitometre A'dan içe aktarın ve şablonu kullanarak B sitometresi için bir deney oluşturun.

Aynı sayıda CST boncuğu kullanılarak, her floresan kanalı için floresan parametre voltajları önceki MFI cihazıyla eşleşecek şekilde ayarlanır. Gerekirse, lekesiz numuneyi kullanarak FSC voltajını ayarlayın. Deneysel sitometre ayarlarına sağ tıklayın ve uygulama ayarlarını kaydetmek için uygulama ayarlarını seçin.

Ardından, CD45 RA APC kullanarak R7-18 telafi değerini %15 APC olarak değiştirin. APC H7'nin telafi değerini %24 BB700 olarak değiştirmek için CD19 BB700 kullanın. APC H7'nin telafi değerini %60 R7-18 olarak değiştirmek için CD8 R7-18'i kullanın.

Telafi değeri modifikasyonundan sonra, örnekleri B akış sitometresinde çalıştırın ve 25.000 lenfosit toplayın. Sitometre kurulumu ve takibi için hedef değer şablonunun genel bir çalışma sayfasında veya CST parlak boncuklarda, 10 floresan kanalının histogram grafikleri elde edildi, histogram kapıları içinde medyan gösterilerek her parametre için hedef değer görüntülendi. cihaz standardizasyonundan sonra A ve B sitometresi kullanılarak elde edilen numunenin nokta grafikleri, otomatik bir analiz şablonu kullanarak farklı cihazlar arasındaki verilerin tutarlılığını göstermiştir.

Altı numuneden elde edilen sonuçlar iki farklı cihaz modelinde karşılaştırıldığında anlamlı bir fark gözlenmedi. Standartlaştırılmış yöntem kullanılarak farklı aletlerden elde edilen 15 lenfoid alt setin sonuçları oldukça karşılaştırılabilir veriler elde etmiştir. Aynı konfigürasyon adı, şablonun oluşturulması ve güvenlik boncuklarının ekoteknoloji değerlerinin farklı enstrümanlarda yapılması bu protokoldeki kritik adımlardır.