Protokolümüz, adolesan öncesi fare yavrularının kardiyotorasik cerrahi için anestezi ve endotrakeal entübasyonları için belgelenmiş ilk yöntemdir. Kardiyotorasik cerrahi için 10 günlük C57 Black Six J fare yavrularının endotrakeal entübasyonunu sağlayan anestezik rejimler, özel ekipmanlar ve özel kullanım uygulamaları geliştirdik ve hayvan ölümlerini en aza indirdik. Yetişkin entübasyonlarında deneyimli bir operatörün, yedi ila sekiz yavrudan oluşan 10 litre üzerinde pratik yaptıktan sonra ergenlik öncesi entübasyonda yeterlilik kazanabileceğini tahmin ediyoruz Prosedürü gösteren, laboratuvarımızdan kıdemli bir personel bilim adamı olan Dr. Jianxin Wu olacaktır.
Deney gününde, makalede açıklandığı gibi 10 günlük yavruların entübasyonu için özel ekipman kurun. Ameliyat için, 21 milimetrelik plastik dişi cazibe kilidi adaptörüne bağlı 19 milimetre uzunluğunda plastik bir borudan oluşan bir kanül kullanın. Cazibe kilidi adaptörü aracılığıyla bir parça bakır tel yerleştirerek kanülün borusunu sertleştirin.
Anestezi uygulanan yavru köpeği bir entübasyon platformuna sabitleyin. Anestezi uygulanan yavrunun entübasyonundan önce, pençe sıkışma refleksi ile anestezi derinliğini kontrol edin. Pençe sıkışma refleksi mevcut olmalı, ancak bilinçli bir hayvanınkinden belirgin şekilde azaltılmalıdır.
Yavrunun dilini küçük forsepslerle tutun ve glottis ve ses tellerini açığa çıkarmak için bir bakır tel parçasından yapılmış bir laringoskop ve esnek bir fiber optik ışık kullanın. Sertleştirilmiş kanülü, cazibe kilit ucu uçtan biraz daha düşük olacak şekilde eğin ve ses telleri ayrılır ayrılmaz kanülü takın ve cazibe kilit adaptörü ağzın hemen dışına çıkana kadar ilerletin. Sonra hemen teli çıkarın.
Entübasyondan sonra anestezi derinliğini, hayvanın kendiliğinden nefes alma kabiliyeti ile değerlendirin. Entübe edilmiş yavruyu 37 santigrat derece olarak ayarlanmış bir ısıtma pedine aktarın. Göğüs hareketini önleyip önlemediğini kontrol etmek için entübasyon kateterini kısaca bloke ederek spontan nefes alan yavrunun başarılı trakeal entübasyonunu onaylayın.
Endotrakeal kanülü bir ventilatöre bağlayın ve dakikada bir litre akış hızında% 100 oksijen verin. Yeniden nefes almayı en aza indirmek için prosedür 15 saniyeden az sürmelidir. Ameliyat için cerrahi anestezi düzlemini indükledikten sonra, göğüs duvarı hareketinin sıklığının ventilatörünkine eşit olduğunu kontrol ederek trakeal entübasyonu onaylayın.
Yavruyu, miyokard enfarktüsü cerrahisi için 10X ve 16X hedefleri olan cerrahi bir mikroskop altına yerleştirin. Cildi dezenfekte ettikten sonra, bir neşter kullanarak göğsün sol lateral duvarındaki üçüncü ve dördüncü kaburga arasında yatay bir cilt kesisi yapın. İnce forseps yardımıyla, interkostal boşluğun künt diseksiyonu ile toraksı açın ve alanı açık tutmak için bir retraktör kullanın.
Sol koroner arter distalini sol atriyal apendikse 9-0 polipropilen monofilament sütür ile bağlayarak miyokard enfarktüsünü indükleyin. Enfarktüs ameliyatının 10 dakikasından sonra cildi 7-0 dikişle kapatın. Kanı% 70 etanol veya salin ile temizleyin ve insizyonu Betadine ile dezenfekte edin.
Hayvanın iyileşmesine izin verin ve spontan solunumun birkaç dakika içinde devam etmesini sağlayın. Daha sonra yavruyu ısıtılmış önceden oksijenlenmiş odaya geri döndürün ve iyileşme sırasında sürekli izleyin. Sağ refleks yeniden kazanıldığında, yavruyu ekstübe edin.
Yavruyu ev kafesi yataklarıyla hafifçe ovalayın. Yavruyu sıcak tutun ve solunumun düzenli olduğunu ve yavrunun kendiliğinden hareket edebildiğini kontrol edin. Barajı kafese geri döndürün.
Daha sonra anesteziden tamamen iyileştiklerinde tüm yavruları iade edin. Barajı ve yavruları gece boyunca 37 santigrat derece olarak ayarlanmış bir ısıtma pedine yerleştirilmiş bir kafeste barındırın. Ameliyat sonrası üçüncü günde, anestezi uygulanan yavruyu kuyruğu bantlayarak bir ısıtma pedi üzerinde sırtüstü pozisyonda sabitleyin.
Kesici dişlerin üzerine bir iplik yerleştirin ve yavruyu bir pozisyona bantlayın ve kafayı bir burun konisine uzatın. Cildi% 70 etanol ile dezenfekte edin. İnce makas kullanarak, trakea boyunca sağ ortak karotis arter üzerinde deride bir santimetrelik bir kesi yapın ve makalede tarif edildiği gibi kalp durmasına neden olduktan sonra bir dakika boyunca 0.2 mililitre heparinize salin uygulamak için 26 gauge iğneye bağlı tek bir lümen polietilen tüp kullanarak maruz kalan damarı kanüle edin, sağ juguler veni önceki insizyonla diseke edin ve transekte edin.
Enfarktüssüz uzak miyokardı boyamak için kalbi 0.2 mililitre PBS ve daha sonra 0.1 mililitre% 0.2 Alcian Blue ile perfüze edin. Kanın, PBS'nin ve daha sonra Juguler ven yoluyla Alcian Blue'nun yıkanmasıyla kanıtlanan başarılı perfüzyonu kontrol edin. Tamamlandığında, toraksı açın ve kalbi serbest bırakmak için çevredeki bağ dokusunu ve damarları diseke ederek kalbi eksize edin.
Kalbi PBS'de durulayın, ardından atriyumu çıkarın ve 10X öznel kullanarak cerrahi mikroskop üzerine monte edilmiş bir kamera ile kalbi fotoğraflayın. Ön deneylerde, anestezi rejimi 10 günlük yavrular için optimize edildi. Kg başına 50 miligram Ketamin, kg başına altı miligram Ksilazin ve kg atropin başına 0.18 miligram dozu, 5.5 ila 7.30 gram ağırlığındaki kendiliğinden nefes alan yavruların endotrakeal entübasyonunu sağlamak için yeterli anestezi derinliği ile sonuçlandı.
Daha hafif yavrular daha yüksek anestezi dozunu tolere edemediğinden, dozu kg ketamin başına 30 miligrama, kg ksilazin başına dört miligrama ve kg atropin başına 0.12 miligrama düşürmek, 4.50 ila 5.49 gram ağırlığındaki yavruların entübasyonunu sağladı. Buna karşılık, ketamin dozajının kg başına 20 miligrama düşürülmesi, 3.15 ila 4.49 gram ağırlığındaki yavruların entübasyonunu sağlamıştır. Tablo ayrıca ameliyata devam eden entübe edilmiş yavruların sayısını ve yüzdesini de göstermektedir.
Daha düşük vücut ağırlığına sahip yavruların entübe edilmesi daha ağır yavrulardan daha zordu ve daha fazla girişim gerektiriyordu, bu da yavruların en yüksek ağırlık grubundan daha az hayatta kalma yüzdesine neden oldu. Ayrıca, en yüksek ağırlık grubundan entübe edilen yavruların daha büyük bir kısmı, düşük ve orta kilolu gruba göre miyokard enfarktüsü ameliyatına devam etti. Miyokard enfarktüsü ameliyatından iki gün sonra sağkalım, farklı ağırlık grupları arasında% 86 ila% 92 arasında tutarlıydı Anestezi derinliği entübasyon ve sağkalım için kritik öneme sahiptir.
Anestezi çok hafifse, entübasyon zordur. Çok derinse, yavrular entübasyon sırasında veya sonrasında kendiliğinden nefes almayı durduracaktır. Anestezi entübasyon protokolümüz, ergenlik öncesi farelerde kardiyak göğüs cerrahisi gerektiren modellerin oluşturulmasına izin verecek ve örneğin bu dönemde akciğerler, yemek borusu ve kalp üzerinde çalışmalara izin verecektir.
