Name: a simple device to rapidly prepare whole mounts of the mouse intestine
Uploaded: 2015-10-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 49 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine at JoVE.com

The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.

Çeşitli deneysel prosedürler ve insancıl ötenazi konak kurumları etik komite tarafından uygun düzenleyici kurumlar tarafından onaylanmıştır. Ötenazi normal servikal dislokasyon CO2 boğulmaya kullanılarak elde edilir. 1. Cihaz <ol><li> Makine Bu yazıda tarif edildiği gibi, yüksek yoğunluklu asetil reçinesi katı bloğu üzerinden cihazın tabanına ana bölümü. Her Sonunda çubuklar almaya bu 2,5 mm&#39;lik bahçeleri arasından 3 mm yüksek yükselmiş şeritler ve parça makine oluşturmak (Şekil 2 ve Şekil 3). </li><li> Yuvarlatılmış uçları olan bir 2,4 mm çapında paslanmaz çelikten çubukları sağlayın. NOT: Kapağın ana çerçeve duralumin plakanın dışında işlenmiş oldu. Bitmiş cihazların sınırlı sayıda Dr. Goodlad temin edebilirsiniz. </li></ol> Cihazın 2. <ol><li> Makas kullanarak karın boşluğundan küçük bağırsak ve kolon parçalara ayırve eldivenli parmakları. Bağırsak uzağa çekerek hafifçe kavisli bir forseps ile tutarak tarafından mezenterin çıkarın. </li><li> Soğuk fosfat tamponlu salin (PBS, pH 7.4) bir 10 ya da 20 ml diş uydurma plastik şırınga sığacak böylece daha geniş sonunda aşağı kesilmiş bir Gilson tipi pipet kullanarak ile bağırsakları durulayın. </li><li> Kağıt havlu bir levha üzerine ince bağırsak (SB) dışarı Lay ve uzunluğu (proksimal, orta ve distal - SB1, SB2 ve SB3) üç eşit parçaya bölün makas kullanarak. Çekum çıkarın ve kolon yatıyordu. </li><li> Makasla barsak segmentleri içine birkaç çok küçük kesikler sıvı kaçmak ve bağırsakların üzerindeki kağıt havlu bir sayfa yerleştirin ve yavaşça sıvıyı dışarı sıkmak ve kuru leke hazırlıkları üzerinde bir parmak çalışmasına izin vermek için yapın. </li><li> Bölümleri kaldırın ve daha önce fosfat tamponlu tuzlu su içinde bir çanak içinde ıslatılarak ıslatılmıştır, paslanmaz çelik çubuklar yerleştirin. NOT: bağırsaktayani istenirse içedönük (tersyüz). </li><li> Cihazın tabanına uyacak şekilde boyutuna kartı ya da filtre kağıdı kesme bir parça etiketleyin. Neredeyse tüm çözümleri etkilenmez olarak Kalem, en iyisidir. Otopsi tarih, deneysel kod ve hayvan kimlik numarası önerilmektedir. </li><li> Cihazın taban içine kartı veya filtre kağıdı yerleştirin. Cihazın tabanındaki yuvalara çubukları ve bağırsakları yerleştirin. Bölümlerinin yakın ucu standart bir şekilde yerleştirildiğinden emin olun. Proksimal uçları kart etiketleri yakın olmalıdır. </li><li> Tabanının üzerine cihazın üst parçasını yerleştirin. Uzunlamasına bölümleri kesmek için bir neşter bıçak yönlendirmek için açılı çubuklarını kullanın. NOT: Doku yavaşça ve dikkatlice bıçakla hareket etmez emin olmak için bir parmak ile düzenlenen olup olmadığı olur. </li><li> Cihazın üst parça çıkarın. Dikkatle (onların çubuklar hala) filtre kağıdı ve dokuları çıkarın. NOT: fil altına yerleştirilen sert karta bir parçater kağıt kaldırma yardımcı olacaktır. </li><li> Segmentlerde (PBS batırılmış bir eldivenli parmak ucu ile) Hafif ıslak. Çubuk Rulo, yan gut açmak ve düz yaymak için yan. Doku daha sonra filtre kağıdı uyacaktır. </li><li> Görme herhangi brüt lezyonlar için hazırlıklarını incelemek. </li><li> Sığ bir banyo (ya da sandviç kutusu) içeren fiksatif ile filtre kağıdına yapıştırılmış doku aktarın. NOT: Doku filtre kağıdına yapışır ya da karta sıkıca bağlı kalacaktır sonra. Fiksatif çeşitli hazırlama korumak için de kullanılabilir. Bu Carnoy akışkan iyi hücre çoğalma yöntemleri için ideal bir bağnazlıktır bağırsak hücre proliferasyonu 6 çalışma için kullanılması gerektiğini tavsiye edilir; Bununla birlikte, formalinin ya da diğer uç noktaları gerekli olduğunda diğer pek çok sabitleyici de kullanılabilir. </li><li> Fiksasyon (genellikle 3 saat) sonra,% 70 etanol içinde hazırlıkları aktarın. Gerekene kadar Numuneler daha sonra saklanabilir. Hazırlıklar cBir cepheden çalışılmış ve / veya H &amp; E veya diğer histolojik boyama teknikleri, immünohistokimya ve / ya da in situ hibridizasyon için histolojik numune hazırlanması için kullanılabilir. NOT: Uzun süreli sabitleme immünohistokimyasal reaktivitesi ve / veya in situ hibridizasyon reaktivite azaltabilir. Polipropilen sandviç kutuları hazırlıkları çok sayıda saklamak için idealdir. </li><li> Çeşitli bağırsak segmentlerden sabit dokuların Gerekirse &#39;İsviçre rulo&#39; haline ve yukarıda tarif edilenler de dahil olmak üzere histolojik yöntemler 6 tüm aralığı ile boyanmış olabilir. Bir &#39;İsviçreli rulo&#39; yapmak için bağırsak segmentleri bir entomolojik pim ile emniyete ve balmumu 6 gömmek için işlenen bir kokteyl çubuğu veya bir kürdan etrafında haddelenmiş filtre kağıdından, kaldırılır. </li><li> Gerekirse, anormal kript odakları 7 görselleştirmek için metilen mavisi ile toplu doku leke. </li><li> Sabit hazırlıklarını Puaneğlence. </li></ol>

<ol>
	<li>Goodlad, R. A., Alison, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=+Cancer+Handbook."> Cancer Handbook.</a> , 243-262 (2007).</li><li>Ward, J. M., Treuting, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+intestinal+epithelial+carcinogenesis:+pathology+and+preclinical+models.">Rodent intestinal epithelial carcinogenesis: pathology and preclinical models.</a> Toxicol Pathol. 42, 148-161 (2014).</li><li>Sundberg, J. P., Hogenesch, H., Nikitin, A. Y., Treuting, P. M., Ward, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Training+mouse+pathologists:+ten+years+of+workshops+on+the+Pathology+of+Mouse+Models+of+Human+Disease.">Training mouse pathologists: ten years of workshops on the Pathology of Mouse Models of Human Disease.</a> Toxicol Pathol. 40, 823-825 (2012).</li><li>Wasan, H. S., Novelli, M., Bee, J., Bodmer, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fat+influences+on+polyp+phenotype+in+multiple+intestinal+neoplasia+mice.">Dietary fat influences on polyp phenotype in multiple intestinal neoplasia mice.</a> Proc Natl Acade Sci USA. 94, 3308-3313 (1997).</li><li>Rudling, R., Hassan, A. B., Kitau, J., Mandir, N., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+device+to+rapidly+prepare+whole+mounts+of+murine+intestine.">A simple device to rapidly prepare whole mounts of murine intestine.</a> Cell Prolif. 39, 415-420 (2006).</li><li>Alferez, D., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+best+measure+cell+proliferation+in+samples+from+the+intestine.">To best measure cell proliferation in samples from the intestine.</a> Cell Prolif. 40, 231-240 (2007).</li><li>Park, H. S., Goodlad, R. A., Wright, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+aberrant+crypt+foci+and+colonic+carcinoma+in+dimethylhydrazine-treated+rats+varies+in+a+site-specific+manner+and+depends+on+tumor+histology.">The incidence of aberrant crypt foci and colonic carcinoma in dimethylhydrazine-treated rats varies in a site-specific manner and depends on tumor histology.</a> Cancer Res. 57, 4507-4510 (1997).</li><li>Park, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+epidermal+growth+factor+and+dimethylhydrazine+on+crypt+size,+cell+proliferation,+and+crypt+fission+in+the+rat+colon.+Cell+proliferation+and+crypt+fission+are+controlled+independently.">Effects of epidermal growth factor and dimethylhydrazine on crypt size, cell proliferation, and crypt fission in the rat colon. Cell proliferation and crypt fission are controlled independently.</a> Am J Pathol. 151, 843-852 (1997).</li><li>Femia, A. P., Dolara, P., Caderni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucin-depleted+foci+(MDF)+in+the+colon+of+rats+treated+with+azoxymethane+(AOM)+are+useful+biomarkers+for+colon+carcinogenesis.">Mucin-depleted foci (MDF) in the colon of rats treated with azoxymethane (AOM) are useful biomarkers for colon carcinogenesis.</a> Carcinogenesis. 25, 277-281 (2004).</li><li>Ruehl-Fehlert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1.">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).</li><li>Goodlad, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibiting+vascular+endothelial+growth+factor+receptor-2+signaling+reduces+tumor+burden+in+the+ApcMin/++mouse+model+of+early+intestinal+cancer.">Inhibiting vascular endothelial growth factor receptor-2 signaling reduces tumor burden in the ApcMin/+ mouse model of early intestinal cancer.</a> Carcinogenesis. 27, 2133-2139 (2006).</li><li>Mandir, N., Englyst, H., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistant+carbohydrates+stimulate+cell+proliferation+and+crypt+fission+in+wild-type+mice+and+in+the+Apc(Min/+)+mouse+model+of+intestinal+cancer,+association+with+enhanced+polyp+development.">Resistant carbohydrates stimulate cell proliferation and crypt fission in wild-type mice and in the Apc(Min/+) mouse model of intestinal cancer, association with enhanced polyp development.</a> Br J Nutr. 100, 711-721 (2008).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Iki operatör tam 6 dakika içinde fare otopsi böylece cihaz ölçüde sürecini hızlandırır. Bu bariz brüt lezyonlar ve tartma ve büyük organların sabitlemek için bir görsel kontrol içerecektir. Ayrıca operatörler, durulama kurulayın ve mide, çekum, ince bağırsak ve kolon tartmak ve tüm bağlar hazırlamak için izin verecektir. Basık doku çok hızlı bir şekilde sabit ve dolayısıyla bozulma eserler önlemek olabilir. (Dışında hızı) cihazın önemli avantajlarından biri Cihaz sonra sonraki analiz ve çok daha kolay ölçümü yapar çok daha kaliteli hazırlıkları üretimini üretebilirsiniz olmasıdır. Yüz puanlama En (örneğin polip numarası, çap ve yük hacmi gibi) makroskopik kanserojen ve pre-kanserojen lezyonlar ölçülmesi için idealdir. Preparatların bile doğa üstü &#39;İsviçre rulo&#39; içine yuvarlanan ve böylece mikro p o histolojik analiz kesit için ideal hale getirirolyp &#39;sayısı da ölçülebilir. Aberant kript odağı ve diğer ön-neoplastik lezyonlar, tüm bağlar ile görselleştirilebilir. Çeşitli kolit modellerinde inflamatuar değişiklikler aynı zamanda tüm bağlar ile gözlenebilir. Ayrıca bağırsağın değişik bölgelerinde bu olayların niceliksel ve mekansal konumu tespit edilebilir. Tekniğin sınırlandırılması cihazının kullanımı özellikle neşter ile doku puanlama, bazı maharet gerektirir. Çoğu operatör birkaç dakika uygulama kısa bir süre sonra tekniği hakim olabilir. Preparatlar sadece birkaç dakika alır, ancak anında korunması gerekiyorsa, küçük numuneler daha sonra tespit veya dondurulmuş ve her zamanki gibi hazırlanan doku kalan alınabilir.

Fare ve genetiği değiştirilmiş fare 1-3 değişik patolojiler özellikle kanser ve gastrointestinal sistemde inflamasyona ilişkisi çalışma için paha biçilmez bir modeldir. Bu genellikle ince bağırsakta ve / veya kolon bütün bağlar hazırlık gerektirir. Bütün bağlar hazırlanması ofset makas hassas çifti ile yapılabilir ancak fare 4 başına yaklaşık 20 dakika sürebilir. Bu farelerin önemli miktarda gerektirir karşılaştırmalı çalışmalar, çok pratik değildir (istatistiksel analize grup konu başına 10 demek). Buna ek olarak, geçen süre doku bozulması riskini arttırır. Bu sorunu hafifletmek için bir girişimde çeşitli kesim hazırlık yardımlarının deneme yol açtı. İlk kesim bahçeleri ile, metal plakalar, bir dizi dayalı, ancak plakalar doku gizlenmiş ve kesme kontrol etmek ve böylece zor oldu. Bir Bayağıbiz sonra yarım kalem şekli bir neşter (Şekil 1) için iyi bir rehber yapmak nasıl görebiliyordu l altı taraflı kalem nihayet, kesme cihazı için ilham kaynağı oldu. Bu dört kesim kılavuzları 5 ile bir çerçeve için bir tasarım sonuçlandı. Şekil 4&#39;te hazırlıkları makas hazırlama ve cihaz hazırlığı arasındaki farkı göstermek olarak bu cihazın etkinliği dramatik oldu. Orijinal cihazların üstleri metal birkaç parçaya, ancak daha sonra olanlardan inşa edilmiştir ve güncel model Duralüminyum sağlam bir parça dışarı işlenmiş oldu. Baz yüksek kalite yüksek yoğunluklu reçine dışarı işlenmiş oldu. Cihaz büyük ölçüde hızlandırır ve geniş bir uygulama yelpazesi var hazırlıklar, kalite ve tutarlılığını artırır fare bağırsak bütün bağlar hazırlanması için büyük bir kullanım olduğunu kanıtlamıştır.

<table><tbody><tr><td>Delrin</td><td>Ryan Plastics, Earls Barton, UK</td><td></td><td>High-density acetal resin similar material would suffice</td></tr><tr><td>Duralumin plate</td><td>Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK</td><td></td><td>Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Finished device(s) ready for use</td><td>Contact Dr Goodlad&amp;nbsp; r.goodlad@imperial.ac.uk</td><td></td><td>Contact&amp;nbsp; r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details</td></tr></tbody></table>

a simple device to rapidly prepare whole mounts of the mouse intestine

Bir sonraki analiz veya ölçülmesi için farenin ince bağırsak ve kolon tüm bağlar hazırlanması zaman alıcı ve zor olabilir. Biz hızla elle elde edilebilir olanı üstün ve aynı kalitede bütün montaj hazırlıkları hazırlamak için kesmek için basit bir cihazın kullanımını ve &#39;roll&#39; fare bağırsakları açıklar. Cihaz 4 paslanmaz çelik çubuklar ve bir kesme kılavuzu hareket eden bir üst tutan bir taban ihtiva eder. Çubuklar, ince bağırsakta [üçe ayrılır] ve kolon lümeni içine yerleştirilir. Çubuklar ve numuneler daha sonra, cihazın tabanından tutma yuvalarına filtre kağıdı ya da bir marka kartı üzerine yerleştirilir. Cihazın üst sonra konumlandırılmış ve kesim kılavuzu olarak hizmet vermektedir. Üst kısmın merkezinde iki açılı bölümler bir bıçak ya da bistüri rehberlik etmek için kullanılan ve çubukların üstünde uzunlamasına bağırsak kesilir. Bağırsak bölümleri kesilmiş, sonra, en çıkarılır ve kart, TissUE ve çubuklar yavaşça cihazından çıkartılmış ve tezgah üzerine yerleştirilir. Çubuklar yavaşça dümdüz ve filtre kağıdı veya kartın yatan parça üzerine bağırsak segmentleri sopa yanlara alınır. Son preparat, daha sonra tetkik veya sabit ve sonraki analiz için saklanır. Preparatlar normal veya genetiği değiştirilmiş fare modelleri bağırsak değişikliklerin incelenmesi için paha biçilmezdir. Preparasyonlar iltihabı (kolit), hasar, kanser öncesi lezyonlara etkileri çalışmasında ve miktar tayini için kullanılmıştır (aberant kript odağı (ACFs) ve odaklar (MDFs) tüketilmiş musin) ve polipler veya tümörler.

Polipler (Şekil 4) doku aydınlatmak yan soğuk bir ışık kaynağı olan bir stereomikroskop altında tespit etmek kolaydır. Bir polip puanlama sonra ele alınabilir ve farklı operatörler anlaşmaya ulaşabilir sırayla gözlenen zaman kalem işaretleri ile kart işaretlemek için yararlıdır. Doku ayrıca [metilen mavisi ile] tanımlamak için lekeli toplu olabilir anormal kript odaklar 8 veya üzeri ya da trans yanması ile gelen aydınlatma ile tüketilmiş odaklar (MDFs) 9 müsin (Şekil 5). Lezyonların konumu da bir konumsal bazda 8 gol yapılabilir. Bu bir ilk bilinen çeşitli boyutlarda birkaç ızgaraları germek ve bir asetat levha üzerine baskı, sonra bir bilgisayar çizim paketinde 10 kare bir ızgara hazırlamak, bu birkaç kez kopyalama ve ihtiyacı yapmak için Intaglio bir yararlıdır [(Şekil 6) ve Bu] yapmak için nispeten basit bir program. Bir sonra l uyan bir kılavuz bulabilirsiniz<html> bölümün ength ve ilgi olaylarını puan için kullanabilirsiniz. Bir kez, attı parçası veya dokunun her ileri analiz için çıkarılabilir veya bütün bölümleri histolojik kesit bir &#39;İsviçre rulo&#39; içine çekilebilir. Bu prosedür teknik zorlu 10 olarak tarif edilmiş olmasına rağmen hazırlıkların bile düz ve doğa bu prosedür çok daha basit hale getirir. Makro hazırlık &#39;makro polip&#39; ve &#39;mikro polipler&#39; 11,12 (Şekil 7) puan kullanılan İsviçreli rulo puan için kullanılabilir. <img alt="figür 1" src="/files/ftp_upload/53042/53042fig1.jpg" /> Cihazın ilham bir kalem geldi nasıl Şekil 1.. Bir kesim kılavuzu olarak hareket etmek yarım kalem şeklini kullanarak fikrine Biyolojik Servis ünitesi kurşun Tartışmalar.53042 / 53042fig1large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/53042/53042fig2.jpg" /> Şekil orijinal cihazın 2. Fotoğraf. Orjinal cihaz elle hazırlanan metal birkaç adet, inşa edildi. (A) aygıtı toplandı. (B) cihazın üst. Konumunda çubuklar göstermek için kaldırıldı <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53042/53042fig2large.jpg" target="_blank">Lütfen Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53042/53042fig3.jpg" /> Yeniden tasarlanan cihazın Şekil 3. Fotoğraf. (A) kapağın ana çerçeve duralumin plakanın dışında işlenir. (B) (siyah görülen) bazBir kanal oturan 4 çıkarılabilir çubuklarına sahip olan, yüksek yoğunluklu bir asetil bir katı reçine blok yapılmıştır. . Kapak (A) taban (B) üzerine yerleştirilir: baz (siyah) üzerine yerleştirilen bir filtre kağıdı (beyaz) (C) cihazın son görünüşüdür gösterilmiştir. Santimetre Ölçüler gösterilir. Çubuklar yuvarlatılmış uçları olan çapı 2,4 mm idi. Daha fazla bilgi için referans 5&#39;e bakınız. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53042/53042fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/53042/53042fig4.jpg" /> Ile yapılan Şekil 4. Gut hazırlık makas ve cihazı kullanarak ofset. (A) bağırsak ofset makas kullanılarak hazırladı. (B) bağırsak kesici gut boyunca bile eni gösteren ve hazırlanan bağırsakları<html> sayım yapan doku daha iyi tanıtımı, ve çok daha kolay polip gözlem. Hücre Çoğalması 6 Şekil 3&#39;ten Modifiye. Ünite ile Ölçek çubuğu gösterilir. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53042/53042fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/53042/53042fig5.jpg" /> Şekil 5. aberant kript odağı metilen mavisi ile lekelendirilmiştir kolon bütün montaj görülen. Bütün kolon dökme oklarla gösterilmiştir aberant kript odağı tespit etmek metilen mavisi ile boyanmıştır monte edin. Ünite ile Ölçek çubuğu gösterilir. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53042/53042fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <html> Dosyaları / ftp_upload / 53042 / 53042fig6.jpg &quot;/&gt; Şekil 6. pozisyonel puanlama için asetat sayfaları için şablon. 10 kareler ızgara Çeşitli boyutlarda asetat kağıtlara basılır. Kesim bağırsak bölümünün uzunluğu uyan ızgara üzerinde yatırılır ve ilgi olaylar her karede lezyonların sayım numarası gibi puanlanır. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53042/53042fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 7," src="/files/ftp_upload/53042/53042fig7.jpg" /> Şekil H &amp; E lekeli fare ince bağırsağın 7. İsviçreli rulo. Gösterilen küçük bağırsak İsviçreli rulo iyi bağırsak tümör oluşumunun in vivo model özelliği, bir Apc (Min / +) fare olduğunu. Oklar temsilci adenomlar gösterir. Ünite ile Ölçek çubuğu gösterilir.42 / 53042fig7large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine at JoVE.com

A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

The use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

Basit Aygıt Hızla Fare Bağırsak Tüm Mounts Hazırlanır

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

a-simple-device-to-rapidly-prepare-whole-mounts-of-the-mouse-intestine

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

19.5K Görüntüleme.  National Institutes of Health. The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

Video: A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

Tissue Engineering of the Intestine in a Murine Model

Tissue-engineered small intestine (TESI) has successfully been used to rescue Lewis rats after massive small bowel resection, resulting in return to preoperative weights within 40 days.1 In humans, massive small bowel resection can result in short bowel syndrome, a functional malabsorptive state that confers significant morbidity, mortality, and healthcare costs including parenteral nutrition dependence, liver failure and cirrhosis, and the need for multivisceral organ transplantation.2 In this paper, we describe and document our protocol for creating tissue-engineered intestine in a mouse model with a multicellular organoid units-on-scaffold approach. Organoid units are multicellular aggregates derived from the intestine that contain both mucosal and mesenchymal elements,3 the relationship between which preserves the intestinal stem cell niche.4 In ongoing and future research, the transition of our technique into the mouse will allow for investigation of the processes involved during TESI formation by utilizing the transgenic tools available in this species.5The availability of immunocompromised mouse strains will also permit us to apply the technique to human intestinal tissue and optimize the formation of human TESI as a mouse xenograft before its transition into humans. Our method employs good manufacturing practice (GMP) reagents and materials that have already been approved for use in human patients, and therefore offers a significant advantage over approaches that rely upon decellularized animal tissues. The ultimate goal of this method is its translation to humans as a regenerative medicine therapeutic strategy for short bowel syndrome.

This article and the accompanying video present our protocol for generating tissue-engineered intestine in the mouse, using an organoid units-on-scaffold approach.

Bir fare modelinde Bağırsak Doku Mühendisliği

Tissue-engineered small intestine (TESI) has successfully been used to rescue Lewis rats after massive small bowel resection, resulting in return to ...

Biyomühendislik

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the complex cellular and molecular of intestinal pathology. Although the tunica mucosa is often the organ of interest in many inflammatory diseases, recent works demonstrated that the muscularis externa (ME) is also a highly immunocompetent organ that harbours a dense network of resident immunocytes.1,2 These works were performed within the standardized model of intestinal manipulation (IM) that leads to inflammation of the bowel wall, mainly limited to the ME. Clinically this inflammation leads to prolonged intestinal dysmotility, known as postoperative ileus (POI) which is a frequent and unavoidable complication after abdominal surgery.3 The inflammation is characterized by liberation of proinflammatory mediators such as IL-64 or IL-1&beta; or inhibitory neurotransmitters like nitric oxide (NO).5 Subsequently, tremendous numbers of immunocytes extravasate into the ME, dominated by polymorphonuclear neutrophils (PMN) and monocytes and finally maintain POI.2 Lasting for days, this intestinal paralysis leads to an increased risk of aspiration, bacterial translocation and infectious complications up to sepsis and multi organ failure and causes a high economic burden.6
In this manuscript we demonstrate the standardized model of IM and in vivo assessment of gastrointestinal transit (GIT) and colonic transit. Furthermore we demonstrate a method for separation of the ME from the tunica mucosa followed by immunological analysis, which is crucial to distinguish between the inflammatory responses in these both highly immunoactive bowel wall compartments. All analyses are easily transferable to any other research models, affecting gastrointestinal function.

Postoperative ileus (POI) is a complication of abdominal surgery leading to increased morbidity and a prolonged hospital stay. Because prophylactic or therapeutic strategies are lacking intensified research is necessary. Therefore we established a standardized and feasible mouse model to investigate the pathophysiology of POI and to study potential therapeutic options.

Bağırsak Manipülasyon bir Standart Model Analizleri: Kemirgenler Barsak Motilite ve Gut Duvar İnflamasyon İşlevsel Değerlendirilmesi

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

Tıp

The Ex Vivo Culture and Pattern Recognition Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organoids

Primary intestinal organoids are a valuable model system that has the potential to significantly impact the field of mucosal immunology. However, the complexities of the organoid growth characteristics carry significant caveats for the investigator. Specifically, the growth patterns of each individual organoid are highly variable and create a heterogeneous population of epithelial cells in culture. With such caveats, common tissue culture practices cannot be simply applied to the organoid system due to the complexity of the cellular structure. Counting and plating based solely on cell number, which is common for individually separated cells, such as cell lines, is not a reliable method for organoids unless some normalization technique is applied. Normalizing to total protein content is made complex due to the resident protein matrix. These characteristics in terms of cell number, shape and cell type should be taken into consideration when evaluating secreted contents from the organoid mass. This protocol has been generated to outline a simple procedure to culture and treat small intestinal organoids with microbial pathogens and pathogen associated molecular patterns (PAMPs). It also emphasizes the normalization techniques that should be applied when protein analysis are conducted after such a challenge.

The Ex Vivo Culture and Pattern Recognition Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organoids

Here, a protocol to harvest, maintain, and treat mouse small intestinal organoids with pathogen associated molecular patterns (PAMPs) and Listeria monocytogenes is described, as well as emphasis on gene expression and proper normalization techniques for protein.

<em&gt; Ex Vivo</emFare Bağırsak Organoids ve&gt; Kültür ve Desen Tanıma Reseptör Uyarım

Primary intestinal organoids are a valuable model system that has the potential to significantly impact the field of mucosal immunology. However, the ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Video Imaging and Spatiotemporal Maps to Analyze Gastrointestinal Motility in Mice

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central nervous system. Changes in ENS function are a major cause of GI symptoms and disease and may contribute to GI symptoms reported in neuropsychiatric disorders including autism. It is well established that isolated colon segments generate spontaneous, rhythmic contractions known as Colonic Migrating Motor Complexes (CMMCs). A procedure to analyze the enteric neural regulation of CMMCs in ex vivo preparations of mouse colon is described. The colon is dissected from the animal and flushed to remove fecal content prior to being cannulated in an organ bath. Data is acquired via a video camera positioned above the organ bath and converted to high-resolution spatiotemporal maps via an in-house software package. Using this technique, baseline contractile patterns and pharmacological effects on ENS function in colon segments can be compared over 3-4 hr. In addition, propagation length and speed of CMMCs can be recorded as well as changes in gut diameter and contraction frequency. This technique is useful for characterizing gastrointestinal motility patterns in transgenic mouse models (and in other species including rat and guinea pig). In this way, pharmacologically induced changes in CMMCs are recorded in wild type mice and in the Neuroligin-3R451C mouse model of autism. Furthermore, this technique can be applied to other regions of the GI tract including the duodenum, jejunum and ileum and at different developmental ages in mice.

This article describes a video imaging technique and high-resolution spatiotemporal mapping to identify changes in the neural regulation of colonic motility in adult mice. Subtle effects on gastrointestinal (GI) function can be detected using this approach in isolated tissue preparations to advance our understanding of GI disease.

Video Görüntüleme ve Spatiotemporal Haritalar Fare Gastrointestinal Motilite Analiz

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central ...

Nörobilim

Creation of Colonic Anastomosis in Mice

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of colonic surgeries and can occur in up to 26% of surgical anastomoses, with mortality being up to 39% for patients with such a leak. Currently, there remains a paucity of data detailing the cellular mechanisms of anastomotic healing. Devising preventative strategies and treatment modalities for anastomotic leak could be greatly potentiated by a better understanding of appropriate anastomotic healing.
A murine model is ideal as previous studies have shown that the murine anastomosis is the most clinically similar to the human case as compared with other animal models. We offer an easily reproducible murine model of colonic anastomosis in mice that will allow for further illustration of anastomotic healing.

Anastomotic leak or breakdown after surgery is a major cause of postoperative morbidity and mortality. Our surgery for creating a colonic anastomosis is a reliable and reproducible method for studying the healing mechanisms of anastomoses.

Farelerde kolon anastomoz oluşturulması

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of ...

Studying Murine Small Bowel Mechanosensing of Luminal Particulates

Gastrointestinal (GI) motility is critical for normal digestion and absorption. In the small bowel, which absorbs nutrients, motility optimizes digestion and absorption. For this reason, some of the motility patterns in the small bowel include segmentation for mixing of luminal contents and peristalsis for their propulsion. Physical properties of luminal contents modulate the patterns of small bowel motility. The mechanical stimulation of GI mechanosensory circuits by transiting luminal contents and underlying gut motility initiate and modulate complex GI motor patterns. Yet, the mechanosensory mechanisms that drive this process remain poorly understood. This is primarily due to a lack of tools to dissect how the small bowel handles materials of different physical properties. To study how the small bowel handles particulates of varying sizes, we have modified an established in vivo method to determine small bowel transit. We gavage live mice with fluorescent liquid or tiny fluorescent beads. After 30 minutes, we dissect out the bowels to image the distribution of fluorescent contents across the entirety of the GI tract. In addition to high-resolution measurements of the geometric center, we use variable size binning and spectral analysis to determine how different materials affect small bowel transit. We have explored how a recently discovered "gut touch" mechanism affects small bowel motility using this approach.

To study how the small bowel handles particulates of varying sizes, we have modified an established in vivo method to determine small bowel transit.

Luminal Partiküllerin Murine İnce Bağırsak Mekanosenizasyonunun İncelenmesi

Gastrointestinal (GI) motility is critical for normal digestion and absorption. In the small bowel, which absorbs nutrients, motility optimizes digestion ...

Whole Cell Electrophysiology of Primary Cultured Murine Enterochromaffin Cells

Enterochromaffin (EC) cells in the gastrointestinal (GI) epithelium constitute the largest subpopulation of enteroendocrine cells. As specialized sensory cells, EC cells sense luminal stimuli and convert them into serotonin (5-hyroxytryptamine, 5-HT) release events. However, the electrophysiology of these cells is poorly understood because they are difficult to culture and to identify. The method presented in this paper outlines primary EC cell cultures optimized for single cell electrophysiology. This protocol utilizes a transgenic cyan fluorescent protein (CFP) reporter to identify mouse EC cells in mixed primary cultures, advancing the approach to obtaining high-quality recordings of whole cell electrophysiology in voltage- and current-clamp modes.

Enterochromaffin (EC) cells comprise a small subset of gastrointestinal epithelial cells. EC cells are electrically excitable and release serotonin, yet difficulties in culturing and identifying EC cells have limited physiological studies. The method presented here establishes a primary culture model amenable to examination of single EC cells by electrophysiology.

Tüm cep telefonu Elektrofizyoloji birincil kültürlü fare Enterochromaffin hücre

Enterochromaffin (EC) cells in the gastrointestinal (GI) epithelium constitute the largest subpopulation of enteroendocrine cells. As specialized sensory ...

Biyoloji

Imaging Fixture Supported Mouse Liver Staging for Multiphoton Microscopy Based Vascular Visualization: A Stabilization Device-assisted Imaging Technique to Obtain Multi-dimensional Images of Blood Vessels in Mouse Liver

Source: Rongrong, W. et al. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/video/60932" target="_blank">Multiphoton Microscopic Observation of Vessels in Mouse Liver Tissue</a>. J. Vis. Exp. (2021)
This video describes an imaging procedure to observe and study intravascular dynamics of a mouse liver tissue using multiphoton microscopy following stabilization of the organ. Multiphoton microscopy enables the imaging of biological tissue at high spatial resolution in vivo.

Multifoton Mikroskobu Tabanlı Vasküler Görselleştirme için Görüntüleme Fikstürü Destekli Fare Karaciğeri Evrelemesi: Fare Karaciğerinde Kan Damarlarının Çok Boyutlu Görüntülerini Elde Etmek İçin Stabilizasyon Cihazı Destekli Bir Görüntüleme Tekniği

Source: Rongrong, W. et al. Multiphoton Microscopic Observation of Vessels in Mouse Liver Tissue. J. Vis. Exp. (2021)
This video describes an imaging ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Kemirgen Modelleri

Yetişkin

Whole Mount Preparation of Mouse Intestine: Using a Simple Gut-incising Device to Prepare Whole Mount

Source: Yoneda, M. et al. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/video/53042" target="_blank">A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine.</a> J. Vis. Exp. (2015)
In this video, we demonstrate whole mount preparation of the mouse intestine using a simple gut-incising device. The resulting mounts are of superior and uniform quality and can be used for histological analyses.

Fare bağırsağının tüm montaj hazırlığı: tüm montajı hazırlamak için basit bir bağırsak kesme cihazı kullanma

Source: Yoneda, M. et al. A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine. J. Vis. Exp. (2015)
In this video, we demonstrate whole ...

Kanser Araştırmaları

Gastrointestinal Kanser

Analizler ve teknikler

Generation of Mouse Proximal Colon Loop Model: A Surgical Procedure to Generate Proximal Colon Loop and Measure Intestinal Permeability by Detection of Fluorescent Markers in Serum Following Intraluminal Injection

Source: Boerner, K. et al. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/v/62093">Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model.</a> J. Vis. Exp. (2021).
In this video, we describe a surgical procedure to generate mouse proximal colon loop or pcLoop segment followed by intraluminal injection of fluorescent markers into the segment to study the intestinal epithelial permeability.

Fare Proksimal Kolon Döngü Modelinin Oluşturulması: İntraluminal Enjeksiyonu Takiben Serumda Floresan İşaretleyicilerin Saptanmasıyla Proksimal Kolon Halkası Oluşturmak ve Bağırsak Geçirgenliğini Ölçmek İçin Cerrahi Bir Prosedür