Name: a simple device to rapidly prepare whole mounts of the mouse intestine
Uploaded: 2015-10-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 49 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine at JoVE.com

The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.

다양한 실험 절차 및 인도적인 안락사는 호스트 기관 윤리위원회의 적절한 규제 기관에 의해 승인됩니다. 안락사는 일반적으로 자궁 경부 전위 다음 이산화탄소 질식을 사용하여 달성된다. 1. 장치 <ol><li> 머신이 논문에 기재된 바와 같이 고밀도 아세틸 수지의 고체 블록의 밖으로부터의베이스 장치의 주요부. 양쪽 끝 부분에있는 봉을하려면 다음 2.5 mm의 숲에서 3mm 높은 상승 스트립, 부품 기계를 만드는 (그림 2와 그림 3 참조). </li><li> 반올림 끝 2.4 mm 직경의 스테인레스 스틸 봉을 확인합니다. 참고 : 뚜껑의 주요 프레임은 두랄루민 플레이트에서 가공했다. 마무리 장치의 제한된 수의 박사 Goodlad에서 사용할 수 있습니다. </li></ol> 장치의 2. <ol><li> 가위를 사용하여 복강에서 소장과 대장을 해부하다그리고 장갑을 낀 손가락. 소장에서 당기고 부드럽게 곡선 집게로 잡고하여 장간막을 제거합니다. </li><li> 차가운 인산염 완충 식염수 (PBS, pH를 7.4)가 10 또는 20 ml의 루어 피팅 플라스틱 주사기에 맞게 할 수 있도록 자사의 넓은 끝에서 삭감했다 길슨 형 피펫 팁을 사용하여와 창자를 씻어. </li><li> 종이 타월의 시트에 소장 (SB)를 배치 및 길이 (근위부, 중간 및 원위부 - SB1, SB2 및 SB3)에서 세 개의 동일한 부분으로 나누어 가위를 사용하여. 맹장을 제거하고 대장을 배치. </li><li> 가위로 장 세그먼트로 몇 가지 아주 작은 상처는 유체 탈출과 내장을 통해 종이 타월 한 장을 놓고 부드럽게 유체를 짜내하여 건조시킨다하기 위해 준비를 통해 손가락을 실행할 수 있도록합니다. </li><li> 섹션을 들어 올려 이전에 인산염 완충 생리 식염수의 비커에 담가 적신 된 스테인레스 스틸 봉을 삽입합니다. 주 : 대장이 될 수 있습니다원하는 경우 전향 된 (뒤집어). </li><li> 장치의 기준에 맞게 크기로 카드 또는 필터 종이 잘라 조각을 레이블. 그것은 거의 모든 솔루션에 의해 영향을받지 같이 연필, 최고입니다. 부검 날짜 코드 및 실험 동물 식별 번호가 제안된다. </li><li> 장치의 기지로 카드 나 종이 필터를 놓습니다. 장치의 자료에있는 슬롯에 막대와 창자를 삽입합니다. 세그먼트의 기단부는 표준화 된 방식으로 배치되어 있는지 확인합니다. 기단부는 카드 라벨 ​​가까이 있어야한다. </li><li> 베이스를 통해 장치의 상단 부분을 놓습니다. 길이 방향 부분을 잘라 메스 블레이드를 안내하는 각도 막대를 사용합니다. 참고 : 조직을 부드럽게하고 신중하게 칼을 움직이지 않도록 손가락으로 유지되는 경우가 있습니다. </li><li> 장치의 상단 부분을 제거합니다. 조심스럽게 (자신의 막대에 계속) 필터 종이와 조직을 제거합니다. 참고 : FIL 아래에 배치 뻣뻣한 카드의 조각터 용지 리프팅에 도움이됩니다. </li><li> 세그먼트 (PBS에 담근 장갑 낀 손가락으로) 약간 젖은. 로드 롤, 사이드 장을 열고 평면을 확산 좌우합니다. 조직은 여과지에 부착한다. </li><li> 시각적으로 어떤 심한 병변에 대한 준비를 검사합니다. </li><li> 얕은 욕조 (또는 샌드 박스)를 함유하는 정착액을 여과지에 부착 된 조직을 옮긴다. 주 : 조직은 여과지에 부착 또는 카드에 단단히 부착 후에 남아. 고정 제의 다양한 제제를 보존하는 데 사용될 수있다. 그것은 Carnoy의 유체가 최고의 세포 증식에 이상적인 방법이다 장내 정착 세포 증식 (6)의 연구에 사용되는 것을 권장; 그러나 포르말린 또는 다른 엔드 포인트가 필요한 경우 다른 많은 고정 제를 사용할 수도있다. </li><li> 고정 (보통 3 시간) 한 후, 70 % 에탄올로 준비를 전송합니다. 요구 될 때까지 샘플을 그 다음에 저장 될 수있다. 준비의 C얼굴 연구 도중 및 / 또는 H &amp; E 염색법 또는 다른 조직 학적 기법, 면역 조직 화학 및 / 또는 계내 혼성화에 대한 조직 학적 샘플의 제조에 사용되는. 주 : 장기간 고정은 면역 반응 및 / 또는 현장 혼성화 반응에를 줄일 수 있습니다. 폴리 프로필렌 샌드위치 박스 제제의 다수의 저장에 적합하다. </li><li> 여러 장 세그먼트에서 고정 조직을 요구하는 경우 &#39;스위스 롤&#39;로 만들어 상술 비롯한 조직 학적 방법 (6)의 전체 범위로 염색 할 수있다. &#39;스위스 롤&#39;을 만들기 위해 장 세그먼트는 곤충학 핀 고정 및 왁스 (6)를 포함에 대해 처리 칵테일 스틱이나 이쑤시개 주위 압연 여과지,에서 제거됩니다. </li><li> 필요한 경우, 비정상적인 토굴의 초점 7을 시각화 메틸렌 블루와 대량 조직을 얼룩. </li><li> 에 고정 준비 점수레저. </li></ol>

<ol>
	<li>Goodlad, R. A., Alison, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=+Cancer+Handbook."> Cancer Handbook.</a> , 243-262 (2007).</li><li>Ward, J. M., Treuting, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+intestinal+epithelial+carcinogenesis:+pathology+and+preclinical+models.">Rodent intestinal epithelial carcinogenesis: pathology and preclinical models.</a> Toxicol Pathol. 42, 148-161 (2014).</li><li>Sundberg, J. P., Hogenesch, H., Nikitin, A. Y., Treuting, P. M., Ward, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Training+mouse+pathologists:+ten+years+of+workshops+on+the+Pathology+of+Mouse+Models+of+Human+Disease.">Training mouse pathologists: ten years of workshops on the Pathology of Mouse Models of Human Disease.</a> Toxicol Pathol. 40, 823-825 (2012).</li><li>Wasan, H. S., Novelli, M., Bee, J., Bodmer, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fat+influences+on+polyp+phenotype+in+multiple+intestinal+neoplasia+mice.">Dietary fat influences on polyp phenotype in multiple intestinal neoplasia mice.</a> Proc Natl Acade Sci USA. 94, 3308-3313 (1997).</li><li>Rudling, R., Hassan, A. B., Kitau, J., Mandir, N., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+device+to+rapidly+prepare+whole+mounts+of+murine+intestine.">A simple device to rapidly prepare whole mounts of murine intestine.</a> Cell Prolif. 39, 415-420 (2006).</li><li>Alferez, D., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+best+measure+cell+proliferation+in+samples+from+the+intestine.">To best measure cell proliferation in samples from the intestine.</a> Cell Prolif. 40, 231-240 (2007).</li><li>Park, H. S., Goodlad, R. A., Wright, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+aberrant+crypt+foci+and+colonic+carcinoma+in+dimethylhydrazine-treated+rats+varies+in+a+site-specific+manner+and+depends+on+tumor+histology.">The incidence of aberrant crypt foci and colonic carcinoma in dimethylhydrazine-treated rats varies in a site-specific manner and depends on tumor histology.</a> Cancer Res. 57, 4507-4510 (1997).</li><li>Park, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+epidermal+growth+factor+and+dimethylhydrazine+on+crypt+size,+cell+proliferation,+and+crypt+fission+in+the+rat+colon.+Cell+proliferation+and+crypt+fission+are+controlled+independently.">Effects of epidermal growth factor and dimethylhydrazine on crypt size, cell proliferation, and crypt fission in the rat colon. Cell proliferation and crypt fission are controlled independently.</a> Am J Pathol. 151, 843-852 (1997).</li><li>Femia, A. P., Dolara, P., Caderni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucin-depleted+foci+(MDF)+in+the+colon+of+rats+treated+with+azoxymethane+(AOM)+are+useful+biomarkers+for+colon+carcinogenesis.">Mucin-depleted foci (MDF) in the colon of rats treated with azoxymethane (AOM) are useful biomarkers for colon carcinogenesis.</a> Carcinogenesis. 25, 277-281 (2004).</li><li>Ruehl-Fehlert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1.">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).</li><li>Goodlad, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibiting+vascular+endothelial+growth+factor+receptor-2+signaling+reduces+tumor+burden+in+the+ApcMin/++mouse+model+of+early+intestinal+cancer.">Inhibiting vascular endothelial growth factor receptor-2 signaling reduces tumor burden in the ApcMin/+ mouse model of early intestinal cancer.</a> Carcinogenesis. 27, 2133-2139 (2006).</li><li>Mandir, N., Englyst, H., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistant+carbohydrates+stimulate+cell+proliferation+and+crypt+fission+in+wild-type+mice+and+in+the+Apc(Min/+)+mouse+model+of+intestinal+cancer,+association+with+enhanced+polyp+development.">Resistant carbohydrates stimulate cell proliferation and crypt fission in wild-type mice and in the Apc(Min/+) mouse model of intestinal cancer, association with enhanced polyp development.</a> Br J Nutr. 100, 711-721 (2008).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

두 사업자가 완전히 6 분내 마우스를 해부 할 수 있도록 장치는 크게 프로세스 속도. 이것은 분명 심한 병변과 무게와 주요 장기를 고정하기위한 육안 검사가 포함됩니다. 또한 운영자, 린스 오점과 위, 맹장, 소장 및 대장의 무게를 전체 마운트를 준비 할 수 있습니다. 평평 조직은 매우 빠르게 고정 따라서 저하 아티팩트를 방지 할 수 있습니다. (분리 속도에서) 장치의 주요 이점 중 하나는 디바이스가 후속 분석 및 정량화를 훨씬 용이하게 훨씬 더 나은 품질의 제제의 제조를 생성 할 수 있다는 것이다. 얼굴 득점하기 Ko (예 : 용종 번호, 직경 부담 볼륨 등) 거시적 발암 및 사전 발암 성 병변을 정량화하기에 이상적입니다. 준비도 자연 나중에 &#39;스위스 롤&#39;로 압연 등 &#39;마이크로 P의 조직 학적 분석을 절편에 이상적olyp &#39;번호도 정량화 할 수있다. 비정상적인 토굴 초점과 다른 생물 전 병변은 전체 마운트를 이용하여 가시화 될 수있다. 다양한 대장염 모델에서 염증은 또한 전체 마운트를 사용하여 관찰 될 수있다. 또한 장내의 상이한 영역에서 이러한 이벤트의 양적 및 공간적 위치가 결정될 수있다. 기술의 제한은 상기 장치의 사용이 특히 메스 조직 왔고, 일부 손재주를 필요로한다는 것이다. 대부분의 운영자는 몇 분 연습 후 단시간에 기술을 습득 할 수있다. 제제는 몇 분 밖에 걸리지 만 인스턴트 보존이 필요한 경우, 작은 샘플은 고정 또는 냉동과 같이 제조를위한 통상적 인 조직의 나머지 부분을 취할 수있다.

마우스와 유전자 변형 마우스 1-3 다양한 병리 특히 암과 위장관의 염증과의 관계 연구를위한 귀중한 모델입니다. 이것은 종종 소장 및 / 또는 대장의 전체 마운트의 준비가 필요합니다. 전체 마운트의 제조는 오프셋 위 정밀 쌍으로 수행 될 수 있지만, 마우스를 4 내지 약 20 분 걸릴 수있다. 이 마우스의 상당한 양을 필요로 비교 연구, 매우 실용적되지 않습니다 (통계 분석에 그룹 주제 당 10 말). 또한, 촬영 시간의 길이는 조직의 열화의 위험을 증가시킨다. 이 문제를 완화하려는 시도는 다양한 절단 준비 에이즈의 재판을했다. 첫째는 절단 로브와, 금속판의 시리즈에 기초하지만, 판 조직을 가려 및 절단을 제어하는​​ 것이 곤란 하였다. 통상도우리는 다음 반 연필 모양 메스 (그림 1)에 대한 좋은 가이드를 만들 것입니다 방법을 볼 수 있기 때문에 L 여섯 양면 연필 마지막으로, 절단 장치에 대한 영감을 제공했다. 이 4 개의 절단 가이드 5 프레임의 설계 결과. 도 4의 제제는 가위 제조 및 제조 장치의 차이점을 설명으로이 장치의 효과는 극적이었다. 원래 장치의 상단 금속의 여러 조각, 나중에 사람들로 구성되었으며, 현재의 모델은 두랄루민의 단단한 조각에서 가공했다. 염기는 고품질 고밀도 수지에서 가공 하였다. 장치는 크게 속도 및 넓은 범위의 애플리케이션들을 갖는다는 제제의 품질 및 일관성을 향상으로 마우스의 소장 전체 마운트의 제조에 아주 유용하게 사용될 입증되었다.

<table><tbody><tr><td>Delrin</td><td>Ryan Plastics, Earls Barton, UK</td><td></td><td>High-density acetal resin similar material would suffice</td></tr><tr><td>Duralumin plate</td><td>Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK</td><td></td><td>Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Finished device(s) ready for use</td><td>Contact Dr Goodlad&amp;nbsp; r.goodlad@imperial.ac.uk</td><td></td><td>Contact&amp;nbsp; r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details</td></tr></tbody></table>

a simple device to rapidly prepare whole mounts of the mouse intestine

이후 분석 또는 정량 마우스 소장과 대장의 전체 마운트를 준비하는 것은 시간이 많이 걸리고 어려울 수 있습니다. 우리는 신속하게 손에 의해 달성 될 수있는 그에게 우수하고 균일 한 품질의 전체 마운트 준비를 준비하는 절단 할 수있는 간단한 장치의 사용과 &#39;롤&#39;마우스의 장에 대해 설명합니다. 장치는 4 스테인리스 봉 및 절단 가이드 역할 가기를 보유 염기를 포함한다. 로드는 소장 [분으로 분할] 및 결장의 루멘에 삽입된다. 로드 및 샘플을 다음의 장치를베이스에 유지 슬롯 여과지 또는 카드의 부분 위에 배치된다. 소자의 상단은 위치 및 절단 가이드로서 기능한다. 상부 부분의 중앙에 두 개의 각진 부분이 칼이나 외과 용 메스를 안내하는데 사용 봉의 상부에 종 방향으로 장을 절단한다. 장내 부분이 절단 된 후에, 상부는 제거되고, 카드, 담배 마는UE와로드 부드럽게 장치에서 제거하고 벤치에 배치합니다. 로드는 부드럽게 평평 및 필터 종이 또는 카드의 기본 조각에 장 세그먼트를 막대기 옆으로 롤백됩니다. 최종 제제는 조사 또는 고정하고 나중에 분석을 위해 저장 될 수있다. 준비는 정상 또는 유전자 변형 마우스 모델에서 장 변화의 연구를위한 귀중한 있습니다. 준비는 염증 (대장염), 손상, 전암 병변의 효과에 대한 연구 및 정량화를 위해 사용되어왔다 (비정상적인 토굴 초점 (하는 ACF)과 초점 (MDF에서) 고갈 점액) 및 용종 또는 종양.

폴립 (그림 4) 조직을 조명 옆으로 차가운 광원과 실체 현미경 하에서 쉽게 식별 할 수 있습니다. 그것은 용종이 득점 나중에 논의 될 수 있으며, 다른 사업자들이 합의에 도달 할 수 있도록 관찰 할 때 연필 표시가있는 카드를 표시하는 데 도움이됩니다. 조직은 [메틸렌 블루로] 확인하는 염색 대량 될 수 비정상적인 토굴의 초점 8 이상 또는 트랜스 조명에 의해에서 조명에 의해 고갈 초점 (MDF에서) 9 점액 (그림 5). 병변의 위치는 위치 기준으로 8 득점 할 수 있습니다. 이것을 먼저 공지 된 각종 크기로 여러 격자 늘려서 아세테이트 시트에 인쇄 한 다음, 컴퓨터 드로잉 패키지 10 정사각형의 그리드를 준비이 여러 번 복사해야 할 그라비아가 유용하다 [(도 6 참조) 및 이] 수행하기위한 비교적 간단한 프로그램입니다. 하나는 L에 맞는 그리드를 찾을 수 있습니다<html> 섹션의 ength과 관심의 이벤트 점수를 사용합니다. 일단, 득점 일부 또는 조직의 모든 추가 분석을 위해 제거 할 수 있습니다 또는 전체 섹션은 조직 학적 절편을위한 &#39;스위스 롤&#39;로 롤업 할 수 있습니다. 이 과정은 기술적으로 어려운 10로서 설명 하였지만 제제에도 평평한 Nature이 과정이 훨씬 더 간단하게. 매크로 준비는 &#39;매크로 폴립&#39;과 &#39;마이크로 폴립&#39;(11, 12) (그림 7) 점수를 사용하는 스위스 ​​롤을 득점하는 데 사용할 수 있습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/53042/53042fig1.jpg" /> 장치의 영감 연필 온 방법도 1. 절단 가이드 역할을 절반 연필 형상을 사용하는 아이디어에 생물학적 서비스 부 리드 토론.53042 / 53042fig1large.jpg &quot;대상 =&quot;_ 빈 &quot;&gt;이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/53042/53042fig2.jpg" /> 도 원래 장치 2. 사진. 원래 장치 손으로 제조 된 금속의 여러 조각으로부터 제조 하였다. (A) 장치를 조립. (B) 장치의 위쪽. 위치에서로드를 보여주는 제거 된 <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53042/53042fig2large.jpg" target="_blank">주세요 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/53042/53042fig3.jpg" /> 재 설계된 장치의도 3 사진. (A)의 뚜껑 본체 프레임은 두랄루민 플레이트로부터 기계 가공된다. (B) (흑색으로 보이는)베이스채널 4에 앉아 이동식 봉을 갖는 고밀도 아세틸 수지의 고체 블록으로 이루어진다. . 뚜껑 (A) 분지 (B)의 상단에 배치되어베이스 (블랙)의 상단에 배치 여과지 (화이트) (C) 디바이스의 최종 뷰가 도시되어있다. 센티미터 크기가 표시됩니다. 로드는 반올림 끝 직경 2.4 mm이다. 자세한 내용은 참조 5를 참조하십시오. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53042/53042fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/53042/53042fig4.jpg" /> 만든도 4 거트 준비 시저 및 장치를 이용하여 오프셋. (A) 창자 오프셋 가위를 사용하여 준비 하였다. (B) 직감 커터 소화관 전역에도 폭을 도시하고 준비 창자<html> 계산을 만드는 조직의 더 나은 프리젠 테이션, 그리고 더 쉽게 폴립의 관찰. 세포 증식 6 그림 3에서 수정. 유닛과 스케일 바는 표시됩니다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53042/53042fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/53042/53042fig5.jpg" /> 그림 5. 비정상적인 토굴의 초점은 메틸렌 블루로 염색 대장의 전체 산에서 본입니다. 전체 대장이 대량 화살표로 표시, 비정상적인 토굴의 초점을 식별하기 위해 메틸렌 블루로 염색했다 탑재합니다. 유닛과 스케일 바는 표시됩니다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53042/53042fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <html> 파일 / ftp_upload / 53042 / 53042fig6.jpg &quot;/&gt; 그림 6. 위치 득점에 대한 아세테이트 시트 템플릿. 10 사각형의 격자의 다양한 크기 아세테이트 시트에 인쇄되어 있습니다. 컷 소장이 섹션의 길이에 맞는 그리드에 배치하고, 관심있는 이벤트가 각 광장에서 병변의 카운트 수와 같은 득점한다. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/53042/53042fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 7" src="/files/ftp_upload/53042/53042fig7.jpg" /> 그림 H &amp; E 염색 마우스 소장 7. 스위스 롤. 같이 소장 스위스 롤 잘 장내 종양 기원의 생체 내 모델에있어서, APC (최소 / +) 마우스에서입니다. 화살표 대표 선종을 나타냅니다. 유닛과 스케일 바는 표시됩니다.42 / 53042fig7large.jpg &quot;대상 =&quot;_ 빈 &quot;&gt;이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine at JoVE.com

A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

The use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

간단한 장치는 빠르게 마우스 소장의 전체 마운트를 준비하는 방법

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

a-simple-device-to-rapidly-prepare-whole-mounts-of-the-mouse-intestine

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

19.5K 조회수.  National Institutes of Health. The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

비디오: A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

Tissue Engineering of the Intestine in a Murine Model

Tissue-engineered small intestine (TESI) has successfully been used to rescue Lewis rats after massive small bowel resection, resulting in return to preoperative weights within 40 days.1 In humans, massive small bowel resection can result in short bowel syndrome, a functional malabsorptive state that confers significant morbidity, mortality, and healthcare costs including parenteral nutrition dependence, liver failure and cirrhosis, and the need for multivisceral organ transplantation.2 In this paper, we describe and document our protocol for creating tissue-engineered intestine in a mouse model with a multicellular organoid units-on-scaffold approach. Organoid units are multicellular aggregates derived from the intestine that contain both mucosal and mesenchymal elements,3 the relationship between which preserves the intestinal stem cell niche.4 In ongoing and future research, the transition of our technique into the mouse will allow for investigation of the processes involved during TESI formation by utilizing the transgenic tools available in this species.5The availability of immunocompromised mouse strains will also permit us to apply the technique to human intestinal tissue and optimize the formation of human TESI as a mouse xenograft before its transition into humans. Our method employs good manufacturing practice (GMP) reagents and materials that have already been approved for use in human patients, and therefore offers a significant advantage over approaches that rely upon decellularized animal tissues. The ultimate goal of this method is its translation to humans as a regenerative medicine therapeutic strategy for short bowel syndrome.

This article and the accompanying video present our protocol for generating tissue-engineered intestine in the mouse, using an organoid units-on-scaffold approach.

손쥐 모델에서 창자의 조직 공학

Tissue-engineered small intestine (TESI) has successfully been used to rescue Lewis rats after massive small bowel resection, resulting in return to ...

연구

생체공학

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the complex cellular and molecular of intestinal pathology. Although the tunica mucosa is often the organ of interest in many inflammatory diseases, recent works demonstrated that the muscularis externa (ME) is also a highly immunocompetent organ that harbours a dense network of resident immunocytes.1,2 These works were performed within the standardized model of intestinal manipulation (IM) that leads to inflammation of the bowel wall, mainly limited to the ME. Clinically this inflammation leads to prolonged intestinal dysmotility, known as postoperative ileus (POI) which is a frequent and unavoidable complication after abdominal surgery.3 The inflammation is characterized by liberation of proinflammatory mediators such as IL-64 or IL-1&beta; or inhibitory neurotransmitters like nitric oxide (NO).5 Subsequently, tremendous numbers of immunocytes extravasate into the ME, dominated by polymorphonuclear neutrophils (PMN) and monocytes and finally maintain POI.2 Lasting for days, this intestinal paralysis leads to an increased risk of aspiration, bacterial translocation and infectious complications up to sepsis and multi organ failure and causes a high economic burden.6
In this manuscript we demonstrate the standardized model of IM and in vivo assessment of gastrointestinal transit (GIT) and colonic transit. Furthermore we demonstrate a method for separation of the ME from the tunica mucosa followed by immunological analysis, which is crucial to distinguish between the inflammatory responses in these both highly immunoactive bowel wall compartments. All analyses are easily transferable to any other research models, affecting gastrointestinal function.

Postoperative ileus (POI) is a complication of abdominal surgery leading to increased morbidity and a prolonged hospital stay. Because prophylactic or therapeutic strategies are lacking intensified research is necessary. Therefore we established a standardized and feasible mouse model to investigate the pathophysiology of POI and to study potential therapeutic options.

장 조작의 표준화 된 모델의 분석 : 쥐의 장 운동성 및 내장 벽의 염증의 기능 평가

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

의학

The Ex Vivo Culture and Pattern Recognition Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organoids

Primary intestinal organoids are a valuable model system that has the potential to significantly impact the field of mucosal immunology. However, the complexities of the organoid growth characteristics carry significant caveats for the investigator. Specifically, the growth patterns of each individual organoid are highly variable and create a heterogeneous population of epithelial cells in culture. With such caveats, common tissue culture practices cannot be simply applied to the organoid system due to the complexity of the cellular structure. Counting and plating based solely on cell number, which is common for individually separated cells, such as cell lines, is not a reliable method for organoids unless some normalization technique is applied. Normalizing to total protein content is made complex due to the resident protein matrix. These characteristics in terms of cell number, shape and cell type should be taken into consideration when evaluating secreted contents from the organoid mass. This protocol has been generated to outline a simple procedure to culture and treat small intestinal organoids with microbial pathogens and pathogen associated molecular patterns (PAMPs). It also emphasizes the normalization techniques that should be applied when protein analysis are conducted after such a challenge.

The Ex Vivo Culture and Pattern Recognition Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organoids

Here, a protocol to harvest, maintain, and treat mouse small intestinal organoids with pathogen associated molecular patterns (PAMPs) and Listeria monocytogenes is described, as well as emphasis on gene expression and proper normalization techniques for protein.

그만큼<em&gt; 전의 VIVO</em마우스 소장 Organoids의&gt; 문화 및 패턴 인식 수용체 자극

Primary intestinal organoids are a valuable model system that has the potential to significantly impact the field of mucosal immunology. However, the ...

면역학 및 감염병학

Video Imaging and Spatiotemporal Maps to Analyze Gastrointestinal Motility in Mice

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central nervous system. Changes in ENS function are a major cause of GI symptoms and disease and may contribute to GI symptoms reported in neuropsychiatric disorders including autism. It is well established that isolated colon segments generate spontaneous, rhythmic contractions known as Colonic Migrating Motor Complexes (CMMCs). A procedure to analyze the enteric neural regulation of CMMCs in ex vivo preparations of mouse colon is described. The colon is dissected from the animal and flushed to remove fecal content prior to being cannulated in an organ bath. Data is acquired via a video camera positioned above the organ bath and converted to high-resolution spatiotemporal maps via an in-house software package. Using this technique, baseline contractile patterns and pharmacological effects on ENS function in colon segments can be compared over 3-4 hr. In addition, propagation length and speed of CMMCs can be recorded as well as changes in gut diameter and contraction frequency. This technique is useful for characterizing gastrointestinal motility patterns in transgenic mouse models (and in other species including rat and guinea pig). In this way, pharmacologically induced changes in CMMCs are recorded in wild type mice and in the Neuroligin-3R451C mouse model of autism. Furthermore, this technique can be applied to other regions of the GI tract including the duodenum, jejunum and ileum and at different developmental ages in mice.

This article describes a video imaging technique and high-resolution spatiotemporal mapping to identify changes in the neural regulation of colonic motility in adult mice. Subtle effects on gastrointestinal (GI) function can be detected using this approach in isolated tissue preparations to advance our understanding of GI disease.

비디오 이미징 및 시공간지도는 마우스에서 위장관 운동성을 분석하는

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central ...

신경과학

Creation of Colonic Anastomosis in Mice

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of colonic surgeries and can occur in up to 26% of surgical anastomoses, with mortality being up to 39% for patients with such a leak. Currently, there remains a paucity of data detailing the cellular mechanisms of anastomotic healing. Devising preventative strategies and treatment modalities for anastomotic leak could be greatly potentiated by a better understanding of appropriate anastomotic healing.
A murine model is ideal as previous studies have shown that the murine anastomosis is the most clinically similar to the human case as compared with other animal models. We offer an easily reproducible murine model of colonic anastomosis in mice that will allow for further illustration of anastomotic healing.

Anastomotic leak or breakdown after surgery is a major cause of postoperative morbidity and mortality. Our surgery for creating a colonic anastomosis is a reliable and reproducible method for studying the healing mechanisms of anastomoses.

쥐에 있는 저 승 문 합의 창조

Intestinal anastomoses are commonly performed in both elective and emergent operations. Even so, anastomotic leaks are a highly feared complications of ...

Studying Murine Small Bowel Mechanosensing of Luminal Particulates

Gastrointestinal (GI) motility is critical for normal digestion and absorption. In the small bowel, which absorbs nutrients, motility optimizes digestion and absorption. For this reason, some of the motility patterns in the small bowel include segmentation for mixing of luminal contents and peristalsis for their propulsion. Physical properties of luminal contents modulate the patterns of small bowel motility. The mechanical stimulation of GI mechanosensory circuits by transiting luminal contents and underlying gut motility initiate and modulate complex GI motor patterns. Yet, the mechanosensory mechanisms that drive this process remain poorly understood. This is primarily due to a lack of tools to dissect how the small bowel handles materials of different physical properties. To study how the small bowel handles particulates of varying sizes, we have modified an established in vivo method to determine small bowel transit. We gavage live mice with fluorescent liquid or tiny fluorescent beads. After 30 minutes, we dissect out the bowels to image the distribution of fluorescent contents across the entirety of the GI tract. In addition to high-resolution measurements of the geometric center, we use variable size binning and spectral analysis to determine how different materials affect small bowel transit. We have explored how a recently discovered "gut touch" mechanism affects small bowel motility using this approach.

To study how the small bowel handles particulates of varying sizes, we have modified an established in vivo method to determine small bowel transit.

내강 미립자의 쥐 소장 기계 감지 연구

Gastrointestinal (GI) motility is critical for normal digestion and absorption. In the small bowel, which absorbs nutrients, motility optimizes digestion ...

Whole Cell Electrophysiology of Primary Cultured Murine Enterochromaffin Cells

Enterochromaffin (EC) cells in the gastrointestinal (GI) epithelium constitute the largest subpopulation of enteroendocrine cells. As specialized sensory cells, EC cells sense luminal stimuli and convert them into serotonin (5-hyroxytryptamine, 5-HT) release events. However, the electrophysiology of these cells is poorly understood because they are difficult to culture and to identify. The method presented in this paper outlines primary EC cell cultures optimized for single cell electrophysiology. This protocol utilizes a transgenic cyan fluorescent protein (CFP) reporter to identify mouse EC cells in mixed primary cultures, advancing the approach to obtaining high-quality recordings of whole cell electrophysiology in voltage- and current-clamp modes.

Enterochromaffin (EC) cells comprise a small subset of gastrointestinal epithelial cells. EC cells are electrically excitable and release serotonin, yet difficulties in culturing and identifying EC cells have limited physiological studies. The method presented here establishes a primary culture model amenable to examination of single EC cells by electrophysiology.

기본 교양된 Murine Enterochromaffin 셀의 전체 셀 전기 생리학

Enterochromaffin (EC) cells in the gastrointestinal (GI) epithelium constitute the largest subpopulation of enteroendocrine cells. As specialized sensory ...

생물학

Imaging Fixture Supported Mouse Liver Staging for Multiphoton Microscopy Based Vascular Visualization: A Stabilization Device-assisted Imaging Technique to Obtain Multi-dimensional Images of Blood Vessels in Mouse Liver

Source: Rongrong, W. et al. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/video/60932" target="_blank">Multiphoton Microscopic Observation of Vessels in Mouse Liver Tissue</a>. J. Vis. Exp. (2021)
This video describes an imaging procedure to observe and study intravascular dynamics of a mouse liver tissue using multiphoton microscopy following stabilization of the organ. Multiphoton microscopy enables the imaging of biological tissue at high spatial resolution in vivo.

다광자 현미경 기반 혈관 시각화를 위한 이미징 픽스처 지원 마우스 간 스테이징: 마우스 간 혈관의 다차원 이미지를 얻기 위한 안정화 장치 보조 이미징 기술

Source: Rongrong, W. et al. Multiphoton Microscopic Observation of Vessels in Mouse Liver Tissue. J. Vis. Exp. (2021)
This video describes an imaging ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Rodent Models

Adult

Whole Mount Preparation of Mouse Intestine: Using a Simple Gut-incising Device to Prepare Whole Mount

Source: Yoneda, M. et al. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/video/53042" target="_blank">A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine.</a> J. Vis. Exp. (2015)
In this video, we demonstrate whole mount preparation of the mouse intestine using a simple gut-incising device. The resulting mounts are of superior and uniform quality and can be used for histological analyses.

마우스 장의 전체 마운트 준비: 간단한 장 절개 장치를 사용하여 전체 마운트 준비

Source: Yoneda, M. et al. A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine. J. Vis. Exp. (2015)
In this video, we demonstrate whole ...

암 연구학

Gastrointestinal Cancer

Assays and techniques

Generation of Mouse Proximal Colon Loop Model: A Surgical Procedure to Generate Proximal Colon Loop and Measure Intestinal Permeability by Detection of Fluorescent Markers in Serum Following Intraluminal Injection

Source: Boerner, K. et al. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/v/62093">Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model.</a> J. Vis. Exp. (2021).
In this video, we describe a surgical procedure to generate mouse proximal colon loop or pcLoop segment followed by intraluminal injection of fluorescent markers into the segment to study the intestinal epithelial permeability.