Name: isolating and using sections of bovine mesenteric artery and vein as a bioassay to test for vasoactivity in the small intestine
Uploaded: 2014-10-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine at JoVE.com

Yazarlar Burada kullanılan deneysel dokuları toplamak için fırsatlar sağlamak için Ryan Chaplin ve Kentucky etler Lab ve Hayvan ve Gıda Bilimleri Bölümü Üniversitesi&#39;nden Dr Gregg Rentfrow kabul.

Hiçbir canlı hayvan kullanılmıştır, çünkü bu çalışmada kullanılan Prosedürler Kentucky Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi Üniversitesi&#39;nden onay gerektiren vermedi. Burada kullanılan herhangi bir numune toplamadan önce, tüm hayvanlar bir esir cıvata ile hayrete ve kan kaybetmiştir. Bu Kentucky Üniversitesi&#39;nde federal teftiş mezbaha tesisinde gerçekleştirildi. USDA Gıda Güvenliği ve Kontrol Servisi resmi bir temsilci karkas canlı hayvan ve kullanımı ile ele tüm faaliyetleri gözlendi. Enstrümantasyon hazırlanması 1. <ol><li> Bir deneyin başlamasından doku örneklerinin koleksiyonları arasında geçen zaman miktarını ayarlamak ekipman en aza indirmek ve (ek personel mevcut olup olmadığını veya bu görevler, eş zamanlı olarak) deney doku toplanmasından önce, tamponlar hazırlamak. NOT: Bu doku deneyler için canlı kalır zaman büyük miktarda sağlar, ancak bazı sadecebu nedenle genellikle mümkün olduğunca erken başlamak için arzu edilir, deneyler uzun süre için çalıştırabilirsiniz (veya bir gün içinde birden çok deneyler tamamlamak için bir arzusu var). </li><li> Güç kadar ilişkili bilgisayar, veri satın almalar ekipmanları, (tampon (s)) su banyosu ve myograph birim (ler). Myograph birim (ler) hakkında kalibrasyon ekipmanları yerleştirin ve sıcaklıkları önceden ısınmaya birimleri ve kalibrasyon ekipmanları (37.5 ° C ayar) myograph ısı açmak ve izin verir. <ol><li> Bilgisayarda önceden oluşturulmuş Grafik yazılım ayarları dosyasını açın ve bir çalışma başlatmak (ancak veri elde değil). </li></ol></li><li> 10 dakika boyunca ekipmanı ısıtın. <ol><li> Veri edinme başlatın. </li><li> Tüm kanalları sıfır. </li><li> Kontrol ve sertifikalı bir ağırlık tarafından sağlanan bir 2-g kuvveti bu kanala ait olan ilgili bir kuvvet transdüktörüne sağlanan elektrik sinyali standardize etmek için her kanalı (multimyograph 4 kanal) (gerekirse) kalibrasyonu yürütmektedirler. </li><li> Kalibrasyon ve bir tane dönüşüm tamamlandıktan sonra, gram olarak sonraki tüm veri depolamak. Her ayrı laboratuvar arzuları dayalı buna göre değişir; donanım ve yazılım gibi milinewton ve volt gibi diğer birimlerin kullanımına izin verir. </li></ol></li><li> Gaz hatları tıkanmalar açık olduğundan emin olun ve (ler) birimleri myograph gaz sağlama (% 95 O 2 /% 5 CO 2) açın. Sürekli bütün prosedür sırasında (myograph odalarına) tüm tamponları gaz. </li><li> % 70 etanol ile tüm myograph haznelerine ve 10 dakika için ıslanmaya, etanol çıkarmak, ve bir ikinci 10 dakika emmek için tekrar edin. <ol><li> Etanol uzaklaştırıldıktan sonra, odacıklar içinde tampon üçüncü ilave bırakarak hazırlanan tampon maddesi (tampon hazırlanması için bakınız bölüm 2) ile üç kez durulanır iyonu giderilmiş su ile üç kez yıkayın. NOT: tampon ve doku hazırlanıncaya kadar bu noktada ekipmanların bu durumda boşta kalabilir ve personel experimen ile devam etmeye hazır olduğunut. </li></ol></li></ol> Tamponlarının 2. Hazırlık <ol><li> 11.1 mM D-glikoz son konsantrasyonları elde etmek için ulaşım ve doku örneklerinin işlemede kullanmak için bir 1 L&#39;lik, Krebs-Henseleit-tampon çözeltisi hazırlayın; 1.2 mm 4 MgSO; 1.2 mM KH 2 PO 4; 4.7 mM KCI; 118.1 mM NaCI; 3,4 mM CaCl2; 24.9 mM NaHCO3. <ol><li> Bir karıştırma plakası üzerinde de-iyonize su, yaklaşık 900 ml Krebs tuzları, 9.6 g karıştırın. </li><li> Istenilen tamponun her bir L başına 2.1 gram sodyum bikarbonat, ardından 0.373 gr kalsiyum klorür dihidrat ilave edin. </li><li> % 95 O 2/5% CO2 ile 20 dakika boyunca gaz tampon çözeltisi. </li><li> L ve 1 hacim ayarlamak; gazı sonra 7,05 pH&#39;ı ayarlamak (nihai hedeflenen pH 7,4 olmalıdır tamponu pH oranını yükselterek, filtrasyon) </li><li> Filtre kullanıma hazır olana kadar 4 ° C&#39;de temiz otoklavlandı 1 L medya şişe ve mağaza tampon içine tampon sterilize. </li></ol></li><li> Ayrı bir Krebs-H &#39;nin HazırlanmasıKrebs-Henseleit kontraktilite deneyler ile ilişkili olan ek bileşikler tamponu taşıma Aşama 2.1 &#39;de tarif edildiği gibi myograph deneylerinde kullanılmak üzere enseleit tampon çözeltisi. NOT: Genellikle 2 L Bu makalede açıklanan deneyler için yeterli olacaktır, ama bu hacim artışı veya deney uzunluğuna göre azalır gerekebilir, myograph odaları ve (tedavi eklemeler göre) sayı tampon değiştirmeleri sayısı. <ol><li> Gazlaştırma aşama (aşama 2.1.3) önce, 9.1 mg eklemek tampona desipramin-HCl tampon (L başına hazırlanmaktadır). </li><li> Propranolol-HCl, 1.0 uM çözeltisi hazırlayın ve Krebs-Henseleit-tampon çözeltisi için bu çözeltinin (tampon hazırlanan her bir L başına) 1 ml. Kullanım gününde bu tampon yapmak ve myograph çalışma sıcaklıklarında (myograph 37,5 ° C sıcaklık veren bir sıcaklıkta) tutun. Not: desipramin biyojenik amin, yeniden alım mekanizmaları önlemek için ilave edilirve daha hızlı gerçekleşmesi için kan damarlarını banyo tampon deneysel eklemeler temizlenmesini sağlar. Propranolol ilavesi adrenerjik reseptörlerinin β muamele bileşiklerin bağlanması belirli olmayan engeller. </li></ol></li></ol> 3. Toplama ve vaskülatürüne hazırlanması <ol><li> En kısa sürede, karkas gastrointestinal sistem kaldırın. Hayvan artık istemsiz refleks sergileyen sonra, baş kaldırmak ve gizlemek ve sonra dikey karkas yükseltmek. Karkas gastrointestinal iç organları (anüs özofagus) kaldırılması onaylı mezbaha personeli (&lt;20 dk zaman ve çarpıcı) tarafından doldurulmalıdır. NOT: Genellikle bağırsak, standart işletim prosedürleri veya tesis personelinin ardından federal zorunlu prosedürler ve toplanan ediliyor konum / tesis ile sınırlıdır nasıl yakında. <ol><li> En tesislerde, mide-bağırsak sisteminin işler gerçekleştirmedengıda kaynağı girmeye yönlendirilmiş olan karkasın işleme ayrı bir yerde. Gastrointestinal sistem almış ve inceleme için dışarı yayılır yakındaki bir konuma kullanın. </li></ol></li><li> Gastrointestinal sistem yayılmış sonra, ince bağırsak, çekuma ince bağırsağa bağlantı ileoçekal kapağı ve ileoçekal kat (Şekil 1A) proksimal olarak uzanan bir flanş ileum tanımlar. <ol><li> Bir neşter veya bıçak kullanarak, çok hafifçe İleal flanş merkezinde mezenterik zarında bir kesi yapmak. Iki işaret parmaklarını kullanarak, açık açık mezenterik damarsal (Şekil 1B) açığa yağ ve bağ dokusu uzak teşrih. </li></ol></li><li> Bağırsak mezenterinde bu flanş veya şişkinlik, birden fazla şubesi teşrih (~ 2 cm uzunluğunda) ileum (Şekil 1C) bu kısmını destekleyen maruz mezenterik arter ve ven demetleri. <ol><li> If u, doku kavramak doğrudan kavramak veya zarar ve olumsuz doku performansı 14 etkileyebilir germe herhangi bir tür olarak çıkarılırken, tüm kan damarları üzerinde çekmeyin dikkat çekmek için forseps şarkı. Kan damarı çıkarılması iyi kaldırılacak bölümün her iki ucunda arasında kesilmesi ve daha sonra, izole bölümüne yanında ya da paralel olarak kesilmesi ile, yapılır. Kolaylığı için, gemiler forseps bir çift ile kavramak için bazı doku sağlamak için birlikte çevreleyen doku bazı kaldırmak. </li><li> Forseps bir çift, buzla soğutulmuş Krebs-Henseleit tamponu içeren bir tüpe doku numunesi daldırın ve işleme laboratuarda oluşabilir kadar buz üzerinde muhafaza edin. </li></ol></li><li> Bir kesme yüzeyi veya bir petri ince dokulu numuneyi, kısmen buz soğukluğunda Krebs-Henseleit daldırın. <ol><li> Kapsamını # 5 kuyumcular forseps, Noyes iris makası kullanarak ve lamba büyüteç veya kesme, dikkatle çevreleyen yağ ve bağlant uzak teşrih (5,0X büyütme 2,5 yeterlidir)dokuları ettik ve arter ve ven ayrı. Bölümün bir ucunda kap açıklığı belirlenmesi ve dikkatli bir forseps ile kabı çevreleyen fasya tutun. </li><li> Makasla kesme yükseltilmiş Kaplamanın altına makas ucu kaydırarak kabına paralel olun. İlk kesildikten sonra, yağ, bağ dokusu ve bundan başka, bir makas ile iki tarafı da keserek tekneden ayrılabilir. Gemiler bankta harcamak süreyi en aza indirerek gemiler mümkün olduğunca temiz olduğundan emin olun. </li><li> (Örnekler alındıktan sonra en fazla 24 saat için depolanmış ve halen geçerli veri üretmek kontraktilite kalabilir), 4 ° C &#39;de taze Krebs-Henseleit tamponu ve mağaza tüplere kan damarlarının dönün. </li><li> Bir jilet kullanarak, dilim damar 2-mm kesit istenilen sayıda içine myograph kullanılacak (tutarlı kesitler elde etmek için bir doku dilimleme makinesi kullanmak yararlı olur). </li><li> Diseksiyon sco altında her bölümü inceleyinpe (12,5X büyütme) her bölüm yanlışlıkla diseksiyon ve temizlenmesi sırasında yapılan herhangi bir anormallik, şube, vanalar, ya da yüzeysel hasar sahip olmasını sağlamak. Herhangi bir anormallik, şube, kapak, ya da yüzeysel hasar varsa damar bölümü değiştirin. </li></ol></li><li> Myograph odaları (genellikle &lt;30 dk) montaj için hazır olana kadar C buz üzerinde veya 4 ° (Krebs-Henseleit tamponunda batık) Mağaza kabul dilimlenmiş gemi bölümleri. </li><li> Yavaşça bir lümen aracılığı ile destek takarak myograph üzerindeki toplama kabı yuvası ve bir 2-3 g okumasının oldukça üzerindedir damarları germek için dikkatli olmak (myograph üzerindeki micropositioner kullanarak) gerilimi arttırır. </li><li> Tüm odaları kaplıdır sonra, tüm odalarından tampon vakum ve tampon 5.0 ml dolum ve dengeleme dönemi ve deney başlamak için 15 dakika zamanlayıcı başlar. </li></ol> 4. Deney <ol><li> Istikrarlı res elde etmek için 1.5 saat boyunca, tüm gemi bölümleri dengeye1.0 g ting gerilim. <ol><li> Krebs-Henseleit inkübasyon tamponu her 15 dakikada bir değiştirin. </li><li> Dengeleme sırasında, sürekli olarak 2 g, kan damarı bölümleri üzerindeki gerilimi ayarlamak kadar ve daha sonra yaklaşık 0.80 g aşağı rahatlamak için izin verir. Gemiler (onlar bağlar kayabilir) çok dinlenmek için izin çalışın. Damar ayarı gerekmeksizin 1 gr gerginliği tutan bir sabit başlangıç ​​gerilimi elde etmek için deneyin. </li></ol></li><li> Dengeleme sırasında, KCI sulu 1.32 M çözelti, bir referans olarak kullanılmak üzere hazırlanması. </li><li> Tatmin edici bir dengeleme tamamlanmasından sonra, banyo kabına 5.5 ml çözelti içinde 0.12 M çözelti ile sonuçlandığı 1.32 M KCI çözeltisi 500 ul ilave edin. <ol><li> Bu ilave gelen azami tepki doku canlılığını ölçmek için kullanılmaktadır ve bir A (tedavi verileri normalize etmek için, örneğin konsantrasyon yanıtlar kullanılabilir üzere manüel olarak gerginliğini ayarlamak için değil, 1.32 M KCl eklenmesini takibengonist). </li><li> Gerilim 1.0 g başlangıç ​​değerine geri dönene kadar 15 dakikalık aralıklarla tampon değiştirin. </li></ol></li><li> Temel ulaşıldığında, tampon değiştirme ve aynı zamanda, 1 dakika süre zamanlayıcı başlar. Başlangıç ​​kez şaşırtıcı önlemek için aynı anda tüm odaları için bunu yapın. <ol><li> Eklenecek standart vorteks ve 1 dakika geri sayım esnasında gözün 1 yorum hazırlar. </li><li> (Bu toplam hacminin% 0.5 altında tutan tedavi) verildi gerektirdiği her bölmeye 25 ul alikolar içinde standart ekleyin. </li><li> Son standart eklendiğinde, 9 dakika zamanlayıcı başlar. </li><li> 9 dk standart İnkübasyonun sonunda, bölmeden gelen tedavi içeren tampon kaldırmak ve taze tampon maddesi içinde 5.0 ml ekleyin ve 2.5 dakika zaman ölçeri başlat. </li><li> Adımı tekrarlayın 4.4.4. </li><li> İkinci 2.5 dakika çalkalama sonunda odacıkları, vakum ve taze tampon eklemek ve Secon başlamasından geri sayım, 1 dakika süre zaman ölçeri başlatd standart ekleme. </li></ol></li><li> Günün standart eklemeler için tüm bu döngüyü devam edin. </li><li> Nihai standart ek ve sonraki 9 dakika inkübasyon sırasında 500 ul çalışma referans dozunun yanı sıra bir sonu için 1.32 M KCI referans bileşik hazırlamak. </li><li> Son bir muamele ilave edilmesinden sonra 1 dakika aranın ardından KCI ekleyin ve 9 dk zaman ölçeri başlat. NOT: KCI ilaveli deney sonuca doku canlılığını onaylamak ve önemsiz tepki ile sonuçlanan bir tedaviyi tatbik durumunda yararlıdır. </li><li> Nihai 9 dk referans bileşiği İnkübasyonun sonunda, vakum odası ya da tümünden tampon çıkarın. Taze tampon katmayın. Denemeyi sonlandırın. </li><li> , Grafik dosyayı kaydedin kan damarı bölümleri çıkarmak ve imha ediniz ve yukarı temiz protokolü takip (üretici tarafından sağlanan ve laboratuvar spesifik olabilir) myograph ekipman için. </li></ol>

<ol>
	<li>Matheson, P. J., Wilson, M. A., Garrison, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+intestinal+blood+flow.">Regulation of intestinal blood flow.</a> The Journal of surgical research. 93, 182-196 (2000).</li><li>Dobson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+flow+and+absorption+from+the+rumen.">Blood flow and absorption from the rumen.</a> Quarterly journal of experimental physiology. 69, 599-606 (1984).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260, 617-619 (1976).</li><li>Nielsen-Kudsk, F., Poulsen, B., Ryom, C., Nielsen-Kudsk, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+strain-gauge+myograph+for+isometric+measurements+of+tension+in+isolated+small+blood+vessels+and+other+muscle+preparations.">A strain-gauge myograph for isometric measurements of tension in isolated small blood vessels and other muscle preparations.</a> Journal of pharmacological. 16, 215-225 (1986).</li><li>Mulvany, M. J., Aalkjaer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+small+arteries.">Structure and function of small arteries.</a> Physiological reviews. 70, 921-961 (1990).</li><li>Klotz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+vasoconstrictive+potential+of+D-lysergic+acid+using+an+isolated+bovine+lateral+saphenous+vein+bioassay.">Assessment of vasoconstrictive potential of D-lysergic acid using an isolated bovine lateral saphenous vein bioassay.</a> Journal of animal science. 84, 3167-3175 (2006).</li><li>Klotz, J. L., Bush, L. P., Strickland, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+vascular+contractility+bioassay+using+bovine+right+ruminal+artery+and+vein.">A vascular contractility bioassay using bovine right ruminal artery and vein.</a> Journal of animal science. 89, 1944-1951 (2011).</li><li>Westendorf, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+ruminal+and+physiological+responses+to+endophyte-infected+tall+fescue.">In vitro and in vivo ruminal and physiological responses to endophyte-infected tall fescue.</a> Journal of dairy science. 76, 555-563 (1993).</li><li>Strickland, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Board-invited+review:+St.+Anthony&amp;#34;s+Fire+in+livestock:+causes,+mechanisms,+and+potential+solutions.">Board-invited review: St. Anthony&amp;#34;s Fire in livestock: causes, mechanisms, and potential solutions.</a> Journal of animal science. 89, 1603-1626 (2011).</li><li>Eckert, H., Kiechel, J. R., Rosenthaler, J., Schmidt, R., Schreier, E., B, B. e. r. d. e., HO, S. c. h. i. l. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+11.">Ch. 11.</a> Ergot Alkaloids and Related Compounds. , (1978).</li><li>Rhodes, M. T., Paterson, J. A., Kerley, M. S., Garner, H. E., Laughlin, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+blood+flow+to+peripheral+and+core+body+tissues+in+sheep+and+cattle+induced+by+endophyte-infected+tall+fescue.">Reduced blood flow to peripheral and core body tissues in sheep and cattle induced by endophyte-infected tall fescue.</a> Journal of animal science. 69, 2033-2043 (1991).</li><li>Foote, A. P., Harmon, D. L., Strickland, J. R., Bush, L. P., Klotz, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ergot+alkaloids+on+contractility+of+bovine+right+ruminal+artery+and+vein.">Effect of ergot alkaloids on contractility of bovine right ruminal artery and vein.</a> Journal of animal science. 89, 2944-2949 (2011).</li><li>Foote, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ergot+alkaloids+from+endophyte-infected+tall+fescue+decrease+reticuloruminal+epithelial+blood+flow+and+volatile+fatty+acid+absorption+from+the+washed+reticulorumen.">Ergot alkaloids from endophyte-infected tall fescue decrease reticuloruminal epithelial blood flow and volatile fatty acid absorption from the washed reticulorumen.</a> Journal of animal science. 91, 5366-5378 (2013).</li><li>Hocking, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+effects+of+mechanical+stretch+on+smooth+muscle+function+in+saphenous+veins.">Detrimental effects of mechanical stretch on smooth muscle function in saphenous veins.</a> Journal of vascular surgery. 53, 454-460 (2011).</li><li>Smith, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+intestinal+surgery.">Bovine intestinal surgery.</a> Modern veterinary practice. 65, 705-710 (1984).</li><li>Budras, K. D., Habel, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bovine Anatomy An Illustrated Text. , (2003).</li><li>Klotz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonism+of+lateral+saphenous+vein+serotonin+receptors+from+steers+grazing+endophyte-free,+wild-type,+or+novel+endophyte-infected+tall+fescue.">Antagonism of lateral saphenous vein serotonin receptors from steers grazing endophyte-free, wild-type, or novel endophyte-infected tall fescue.</a> Journal of animal science. 91, 4492-4500 (2013).</li><li>Egert, A. M., Kim, D. H., Schrick, F. N., Harmon, D. L., Klotz, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+exposure+to+ergot+alkaloids+decreases+contractility+of+bovine+mesenteric+vasculature.">Dietary exposure to ergot alkaloids decreases contractility of bovine mesenteric vasculature.</a> Journal of animal science. 92, 1768-1779 (2014).</li></ol>

Ticari adı, tescilli ürün veya belirtilen ekipmanların Mansiyon USDA tarafından bir garanti anlamına gelmez ve mevcut olabilecek diğer ürünlerin dışlayarak onay anlamına gelmez.

Bu biyoanalizde gelişiminde ilk zorluk mezenterik damarların bir tekrarlanabilir toplama sitenin kurulması oldu. Ileum ve sonuç olarak mezenter yoluyla jejunumda ilerlemesi sırasında, ince bağırsak değişim bazı fonksiyonlarını benzer bir modeli farklılaşabilecektir olarak Örnek Alanı tutarlılığı büyük önem taşımaktadır. Mezenterik arter ve ven İleal dalları en kolay tespit anatomik noktalara aracılığıyla vardı. Çekum bulma ve mezenter sol tarafında kendi terminaline ileosekal kat izleyerek, bu kranial mezenterik arter 15 sonlandırılması yakındır. Uzun mezenterin alanı ve ileoçekal kat uzantısı (bir sığır cinsi hayvan için benzersiz) çok tekrarlanabilir sayıda hayvan genelinde 16 yapılan örnekleme (flanş adlandırılır). Yapılabilir büyük tuzaklar bir biyolojik deneyi bu aşamasında. Mekanik germe sonraki gemi p üzerinde büyük bir olumsuz etkiye sahiptirperformansı alabilirsiniz 14 ve araştırmacı aşırı çıkarılması ve daha sonraki temizleme sırasında manipüle veya gerilir gemiler referans bileşik kullanılan yanıt vermez göreceksiniz. Bu ne yazık ki gerçekten işlevsel bir seviyede ve güvenilir verilerin oluşturulması için daha fazla düşünülmemelidir KCl yanıt vermeyen gemiler damar hazırlık kalitesini değerlendirmek için tek yoldur. Burada sunulan son yöntemine neden diğer iki yöntem doğrulama adımlarından (gösterilmemiştir), referans bileşikleri ve 24 saat depolamadan sonra, kan damarlarının canlılığını test etmek gibi başka kimyasal maddelerin kullanılması olmuştur. Norepinefrin ve serotoninin referans bileşikleri olarak değerlendirilir, ancak bunları başarıyla kullanılabilir için mezenterik arter ve ven ile kap tipi yanıtları boyunca ve hayvanlar arasında çok değişken edildi. Bunun aksine, 120 mM KCl eklenmesi arter ve ven preparasyonlar arasında çok tekrarlanabilir tepkisiyle sonuçlanmıştır. BirLSO, arter ve ven yanıtları toplama gününü değerlendirmiş ve 24 saat sonrası koleksiyonu yeniden değerlendirilmesi ve arter veya ven ya agonist yanıtta hiçbir fark edildi. Orada uygulanabilir tedavi (ya da çeşitli tedavi kombinasyonları), çok sayıda, genellikle, ancak araştırmacılar myograph ve zaman alanı ile sınırlıdır gibi bu biyolojik deneyi önemli bir yönü oldu. Koleksiyonundan 24 saat dışarı canlılığı süresini uzatarak, ek deneme için zaman büyük ölçüde artar. Araştırmacı bu bioassay uygulanan tedavi yapısının esnekliği anlamak için önemlidir. Bir araştırmacı Klotz ve ark durumunda o kronik biyolojik alaka şey kontrol etmek amacıyla veya tedavi olarak kan damarlarını açığa ilgilenen kuluçka tamponu herhangi bir bileşiği (ekleyebilirsiniz. 17, bu ile yapıldı yanal safen damarları sürekli maruz keilgi, bir serotonin reseptörü antagonize tanserin). Mesentrik kan damarlarının bir kontraktil yanıt deney gerçekleştirilmeden önce, ilgi konusu bir bileşik ile önceden muamele edilebilir. Biyodeney, sunulduğu gibi, agonistler gibi ergot alkaloidleri de ve vasküler yanıtı 18 etkilenen ergo alkaloidleri öncesinde diyet maruz olmadığını seyir kümülatif yoğunluk yanıtı deney yapmak için tasarlanmıştır. Temsilci sonuçlar, bu yöntem, bir ölçülebilir damar yanıt üretebilir ve yalnızca dört konsantrasyonlar elde etmek için kullanılabilir olduğunu göstermektedir. Egert ve diğ. 18 durumunda, bir tepki eğrisi oluşturmak için kullanılabilir en fazla 10, farklı konsantrasyonlarda vardı. Bu yöntem, zaman içinde küçük bir pencerede tek bir hayvana ilişkin farklı bileşiklerin veya kan damarlarında alıcılannın büyük bir sayısını değerlendirmek için kullanılan bir yöntemdir.

Bir doku yatağına kan akışında değişimler organ fonksiyonu üzerinde büyük bir etkiye sahip olabilir. İnce bağırsağın birincil fonksiyonu, besin emilmesidir. Besin emilimini ve kan akışı artar yüzeyi boyunca digesta 1 hareket ederken, besin emilimini yardımcı olmak için barsağın emme yüzeyine arter kan akışı gerekmektedir. Kan akışında bir azalma, transepitelyal gradyanı 2 bir azalmaya besin emilimini bir azalmaya neden olabilir. Besin ek olarak, ince bağırsak, aynı zamanda mezenter lokalize kan akışı üzerinde bir etki gösterebilir sekonder metabolitler, ilaçlar veya toksinlere maruz kalabilir. Geviş getiren hayvanın durumunda, bileşikler, bir yem serbest bırakılabilir (örneğin, amino asitler, veya ergot alkaloitler gibi toksinler gibi besinler) ön bağırsağının fermantasyon süreçleri yoluyla. Bu bileşikler, rumen fermentasyon mikrobik metabolizmanın hayatta, şimdi emilim için kullanılabilirya da etkileşim ve hayvanın mide-bağırsak sistemi boyunca hareket ederken. In vivo kan akışını ölçmek için kullanılabilir farklı yöntemler vardır (örneğin, Doppler ultrason, kan akış ölçerler, radyoaktif işaretli mikroküreler ve gösterge-seyreltme teknikleri kalıcı) çeşitli deneysel senaryolar veya tedavilerin değerlendirilmesine imkan. Mulvany ve Halpern 3 tel tekniğini açıklayan bir makale bir myograph vasküler halka hazırlıklarını monte zamana kadar yayınlanmış Ancak, damar düz kas mekanik veya farmakolojik özellikleri hakkında bilgi edinmek için, yöntem büyük damarların sınırlı kalmıştır. Bu tekniğin geliştirilmesi için, modifikasyonlar tüp şekilli yapıların değerlendirilmesi için çeşitli uygulamaların çeşitli izin ilişkili myograph sistemlere yapılacak devam etmektedir. Sistem ayrıca nerede perfüzyon daha büyük gemilerin 4 montaj için sabit çubuklar kullanmak için adapte edilmiştirteknikler arzu edilmez. Damar ve hayvan türünden farklı hayvan türleri, verilerden aynı damarlarda anatomik kökeni ve ayrımlar gelen damar farklılıklardan dolayı kolay bir şekilde farklı damarlar ya da farklı hayvan türlerine 5, aynı kap üzerinde tahmin edilemez. Sonuç olarak, ayrı biyotahliller geliştirilmiş ve bu yönleri değişti zaman valide edilmelidir. Son zamanlarda birçok biyoassayler safen ven ve sağ rumen arter ve ven 6,7 sığırlarda kullanılan bu teknolojiler ile yanal geliştirilmiştir. Bu biyoanaliz ergo alkaloidleri ince bağırsağa destekleyen damar üzerinde sahip olduğu özel etkilerini araştırmak için geliştirilmiştir. Bu beslenen alkaloit% 50-60 abomasal içeriği görünür olduğu bildirildi, ancak sadece% 5 dışkı 8 kurtarıldı. Strickland ve diğ. 9, ergo alkaloidleri bir yorumda bu mevcut veriler Sugg belirttiest ince bağırsak ergopeptine emilmesi için en önemli site olabilir. Eckert ve ark. Ergo alkaloidleri 10 biofarmasötik yönleri ve epitel bariyeri geçmeye kez, ergo alkaloidleri subklavian ven veya mezenterik ven yoluyla ve portal kana lenfatik sistem tarafından ya taşınan belirtti. Rhodes vd. 11 yüksek endofit-enfekte (yüksek ergot) diyet tüketen yükleyiciler bir duodenum kan akımında azalma ve kolon bildirdi. Doğru rumen arter ve ven biyolojik tayini kullanılarak, Foote ve ark. Ergot alkaloitleri, 12 rumen damar vazoaktif olduğunu göstermiştir. Foote ve ark. 13, daha sonra in vivo koşullarında ortaya bir azalma işkembe epitel kan akışında ergot alkaloitleri, sonuçlar rumen maruz kalma. Rumen emilim yüzeyi kan akışındaki bu azalma beraberinde besin (uçucu yağ asidi) akı bir azalmaya neden olmuştur. Qu göz önüne alındığındaforegut gelen ince bağırsağa aktarılması ergo alkaloidleri Antite; küçük bağırsak damar ve besin emilimi üzerinde benzer bir etki meydana olacağı varsayılmıştır. Bu sığır proksimal ileal mezenterik arter ve ven biyoassay geliştirilmesini gerekli kılmıştır.

<table><tbody><tr><td>Multi Myograph</td><td>Danish Myo Technologies</td><td>610M</td><td>A myograph is critical to this bioassay, but there are other platforms available for use that will suffice.&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Powerlab 8/sp</td><td>ADIntruments</td><td>ML785</td><td></td></tr><tr><td>LabChart 7</td><td>ADInstruments</td><td>Version 7</td><td></td></tr><tr><td>Force Calibration Kit</td><td>Danish Myo Technologies</td><td>100055</td><td>Specific to DMT myographs</td></tr><tr><td>Bottle-top Filter</td><td>Nalgene</td><td>595-4520</td><td>0.22 &amp;#956;m pore size; 45 mm neck size</td></tr><tr><td>#5 Jewler&amp;rsquo;s Forceps</td><td>Miltex</td><td>555008FT</td><td>Any brand of forceps can be used</td></tr><tr><td>Noyes Iris Scissors</td><td>Miltex</td><td>18-1510</td><td>Any brand of scissors can be used</td></tr><tr><td>Dissecting Scope</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000-C</td><td>Any brand of dissecting light microscope will suffice</td></tr><tr><td>Adjustable Tissue Matrice</td><td>Braintree Scientific</td><td>TM C12</td><td>This is not critical to the assay, but greatly reduces section to section variation in length and speeds up the slicing process greatly</td></tr><tr><td>Krebs-Hensleit Buffer</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>K3753-10x1L</td><td>It is not necessary to buy Krebs, this can be made in house</td></tr><tr><td>Calcium chloride dehydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7902-500G</td><td></td></tr><tr><td>Sodium bicarbonate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr><tr><td>Desipramine-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D3900-5G</td><td></td></tr><tr><td>Propranolol-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0884-1G</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333-500G</td><td></td></tr><tr><td>95% O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;/5% CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Scott Gross</td><td>UN3156</td><td></td></tr></tbody></table>

isolating and using sections of bovine mesenteric artery and vein as a bioassay to test for vasoactivity in the small intestine

Memeli mide-bağırsak sistemlerinin sürekli ve bu sistemi için kan akışı üzerinde bir etkiye sahip olabilir bileşikler (istenen ve istenmeyen) maruz kalır. Ince bağırsağa kan akışında değişimler organın emme işlevlerine etkilere neden olabilir. Fermantatif ve sindirim süreçleri ile yemlerin kurtuldu toksinler özellikle faiz üretken verimliliği gelişmiş olabilir bir alanda gibi geviş getiren hayvanlarda gelişmiştir. Bu makale ile ilişkili video sığır mezenterik arter izole enine kesitlerde vazoaktiviteye ve bir multimyograph kullanarak damar bileşikleri taramak için geliştirilmiş bir in vitro biyo-tahlili tarif eder. Kan damarlarının monte edilir ve myograph içinde dengelenmiş sonra, biyolojik tayin kendisi kullanılabilir: gerilme tepkisini ya da ilgi çekici bir bileşik vazoaktiviteye değerlendirmek için bir tarama aracı olarak; farmakolojik olarak spesifik bir agoniste sahip reseptörleri hedefleyerek reseptör tiplerinin varlığını belirlemeks; Bir veya daha fazla antagonistlerinin varlığında bir reseptörünün rolünü belirlemek; veya antagonistleri ile ilgi çekici bir bileşik olası etkileşimleri belirler. Tüm bu sayesinde, verileri gerçek zamanda toplanır, tek bir hayvandan alınan doku farklı deneysel tedavilerin büyük sayıda (bir in vitro avantaj) maruz bırakılmış, ve doğru bir temin etmek üzere, kılcal damar yataklarının her iki tarafında damar sistemini temsil edilebilir ince bağırsağa destekleyen afferent ve efferent kanlanma oluyor ne olabilir resim.

Dahil sonuçları üretmek için kullanılan kan damarları, 3 hafta aralığında olan 6 Holstein yükleyiciler (425 ± 8 kg) toplanmıştır. KCl ve konsantrasyon içerisinde arttırılarak tedavi eklemeler için tipik damar mezenterik kasılma tepkisinin bir örneği cevabının büyüklüğü (verici hayvanın boyutu ile ilişkili) kabın boyutu ile bir değişir. Şekil 2&#39;de sunulmuştur, ama aynı zamanda bir can yanlış kullanım sonucu (olumsuz) etkilenir toplanması ve temizlenmesi sırasında gemilerin (germe). Bu nedenle, KCI ye karşı en gemi maruz önemli bir gerilme tepkisini gözlemlemek önemlidir. Ihmal edilebilir bir tepki bu noktada görülürse, o gemi ile prosedür içine herhangi bir daha devam etmek tavsiye edilmez. Şekil 2&#39;de 9 dakika kuluçka süresi de görüldüğü gibi, artan konsantrasyonları ile karşılık gelen tepki olarak artan artış vardır. Bu parçacık halinde için istenmesine rağmenular deneysel tasarım, her zaman oluşabilir veya diğer tedaviler ile aranılır olması. Toplanan verilerin işlenmesinde kullanılan her ne kadar bu geminin herhangi bir yanıt değilse o (deney süresi bitiminde doku canlılığını teyit daha önemli hale gelir deney sonuca KCI ilaveli, çok önemlidir Tedavi eklemeler). Şekil 2&#39;de sunulan veriler, gerilim gram cinsinden kaydedilir. Bu, herhangi bir hayvan arası hayvan ve damar-için-damar değişikliğini en aza indirmek için bu verileri normalleştirmek için önemlidir. Böylece, canlılığının bir göstergesi olarak kullanılan ek olarak, maksimum KCI yanıt tedavi eklenen tüm normalize etmek için kullanılır. Bu, maksimum KCI bir yüzdesi olarak kontraktil yanıt verilerini üretir. Bu 5-hidroksitriptamin konsantrasyonunu artıran yükleme mezenterik arter ve ven tepki eğrileri, bir (serotonin Şekil 3) ve norepinefrin ( <strong&gt; Şekil 4) sunulmuştur. Bu şekillerde yer alan verilerin lineer olmayan regresyondan yararlanılarak uydurulmakta ve sigmoid konsantrasyon karşılık eğrisi olmuştur. 5-hidroksitriptamin (Şekil 3) ve norepinefrin (Şekil 4) hem mezenterik ven tepkisi negatif değerler başladı. Bu, ilk KCI eklenmesinden önce kaydedilen baz gerilimi ile, her biri 9 dakikalık kuluçka süresi boyunca kaydedilen maksimum gerilimi düzeltme bir sonucudur. Bu temel düzeltme gerginlik herhangi hafif farklılıklar analizlere dahil ve sunulan veriler gerginlik sadece bir değişikliği yansıtmak için izin olmasını sağlar. Rahatlatıcı ve sonraki tedavi ek önce ön-KCI taban seviyesinin altında bırakarak kan damarından negatif değer sonuçlar. Bu tedavisi veya agonistin ilk konsantrasyonları bir gerilme tepkisini neden olmak için çok düşük olan venöz kan örneklerinde yaygındır. Bu benim için böyle değildi<html> damar tedavi eklemeler yanıt başlayana kadar çizgisinin üstünde gerginlik düzenlenen biyojenik amin birine mezenterik arter yanıt. Bu fark, iki, kılcal damar yataklarının tarafında ve hem de neden Bu deneyde bir parçası olarak kabul edilmiştir üzerinde damarlarda farklılıkları örneklendirmektedir. Bu biyo-tahlil ince bağırsağa gıda maddelerinin yanı sıra ince bağırsağın uzak emilir ve besin maddelerini kan damarları besleyen kan damarları üzerinde bileşiklerin vazoaktiviteye değerlendirmek için de kullanılabilir. Şekiller 3 ve 4&#39;te, bu veriler elde edilebilir ne kadar basit örnekleridir. 5-hidroksitriptamin (Şekil 3) durumunda, arteryel ya da venöz kontraktil yanıt olarak bir farklılık yoktu. Tersine, norepinefrin, artan yoğunluklarda mesenterik damarından kontraktil yanıt mezenterik arter daha fazla idi. Güre 1 &quot;fo: İçerik-width =&quot; 3in &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 52020 / 52020fig1highres.jpg &quot;width =&quot; 300 &quot;/&gt; Şekil 1:. Mesenterik kan damarlarının kaynağı olarak kullanılan sığır bağırsak sisteminin bir örneği, Kırmızı Yıldız işareti bir referans noktası olarak üç bölmelerinde ileoçekal kıvrımın görünür kısmını gösterir. (A) damar örnekleme meydana İleal flanş gösteren kırmızı oval bütün yolu. Mezenterik damar yatağında (B) Pozlama. (C) İris makası mezenterik ven (görünür) ve arter (görünmez) koleksiyonuna hemen önce bir maruz dalına işaret ediyor. <img alt="Şekil 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52020/52020fig2highres.jpg" width="500" /> Şekil 2: norepinefrin artan konsantrasyonları için mezenterik damarın bir konsantrasyon yanıt Örneği (1 x 10 -7 1× 10 -4 M). Iz başında ve sonunda büyük olaylar 0.12 M KCI eklemeler tepkilerdir. Kırmızı dikdörtgen, her tedavi ilave edilmesi için 9 dakikalık kuluçka süresi ile ilgili veri toplama bölgesini belirtir. Bu takip 3 ince sivri tampon değiştirmeleri tarafından yaratılan eserler ve analize dahil edilmemiştir. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/52020/52020fig2highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52020/52020fig3highres.jpg" width="500" /> Şekil 3: mezenterik arter (MS) ve ven kasılmalarını ortalama (PD n = 6 sığırı), 5-hidroksitriptamin (serotonin) artan konsantrasyonları için bir sigmoidal verileri uyması için doğrusal olmayan regresyon analizi kullanılarak elde edilmiştir gösterilmiştir Hatları. R konsantrasyonuesponse aşağıdaki denklemi eğri kullanılır: y = alt + [(üst - alt) / (1 ​​+ 10 (logEC 50 - X))] üst ve alt platolar 120 mM KCI, maksimum kasılma tepkisinin yüzdesi olduğu, ve AT 50 KCI maksimum tepkinin% 50&#39;sini üreten alkaloid molar konsantrasyonudur. <img alt="Şekil 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52020/52020fig4highres.jpg" width="500" /> Şekil 4: mezenterik arter (MS) ve ven kasılmalarını ortalama (PD n = 6 sığırı) norepinefrin artan konsantrasyonları için kullanılan bir sigmoidal konsantrasyon-tepki eğrisi için verilerin uyması için doğrusal olmayan regresyon analizi kullanılarak elde edilmiştir gösterilmiştir Hatları. Aşağıdaki denklem: y = alt + [(üst - alt) / (1 ​​+ 10 (logEC 50 - x))], alt ve üst 120 mM KCI maksimum c yüzdesi neredeplatoların buna tepki ontractile ve EC50 KCI maksimum tepkinin% 50&#39;sini üreten alkaloid molar konsantrasyonudur.

Watch this Scientific Journal Video about Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine at JoVE.com

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Ince bağırsak sık sık kan akışını etkileyen ve olumsuz besin emilimini etkileyebilir toksinler maruz kalmaktadır. , Bileşikleri veya ilgi duyulan bir toksin multimyograph ve mezenterik arter ve damar izole kullanarak vazoaktiviteye için taranabilir.

Bir Biyoassay olarak Sığır Mezenterik Arter ve Ven Bölüm yalıtma ve kullanma İnce Barsak vazoaktiviteye için Test

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

isolating-using-sections-bovine-mesenteric-artery-vein-as-bioassay-to

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

9.6K Görüntüleme.  USDA-Agricultural Research Service.  Ince bağırsak sık sık kan akışını etkileyen ve olumsuz besin emilimini etkileyebilir toksinler maruz kalmaktadır. , Bileşikleri veya ilgi duyulan bir toksin multimyograph ve mezenterik arter ve damar izole kullanarak vazoaktiviteye için taranabilir. 

Video: Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

Otomatik Tel kasılmaların kâğıda çizilmesi Yüklü daralma ve Rahatlama Çalışmaları

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Tıp

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

Basınç myography kullanma Direnç Mezenterik Arter ise andMyogenic Tepkisi ve vazoaktiviteye Değerlendirilmesi

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying tissue compartments, restricting the transport of smaller molecules across the epithelium and almost completely prohibiting epithelial macromolecular transport. This selectivity is determined by the mucous gel layer, which limits the transport of lipophilic molecules and both the apical receptors and tight junctional protein complexes of the epithelium. In vitro cell culture models of the epithelium are convenient, but as a model, they lack the complexity of interactions between the microbiota, mucous-gel, epithelium and immune system. On the other hand, in vivo assessment of intestinal absorption or permeability may be performed, but these assays measure overall gastrointestinal absorption, with no indication of site specificity. Ex vivo permeability assays using &#34;intestinal sacs&#34; are a rapid and sensitive method of measuring either overall intestinal integrity or comparative transport of a specific molecule, with the added advantage of intestinal site specificity. Here we describe the preparation of intestinal sacs for permeability studies and the calculation of the apparent permeability (Papp) of a molecule across the intestinal barrier. This technique may be used as a method of assessing drug absorption, or to examine regional epithelial barrier dysfunction in animal models of gastrointestinal disease.

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

This protocol describes the use of excised intestinal tissue preparations or "intestinal sacs" as an ex vivo model of intestinal barrier function. This model may be used to assess integrity of both the epithelial barrier and the mucous gel layer at specific intestinal sites in animal models of digestive disease.

Ex Vivo Bağırsak Sacs Gastrointestinal Hastalık Modelleri mukozal geçirgenliği Değerlendirmek için

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Rat Mesentery Angiogenesis Assay

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in vivo [see review papers], which is the dominating form of angiogenesis in human tumors and non-tumor 
tissues, as discussed in invited review papers1,2. Angiogenesis induced in the membranous mesenteric parts by intraperitoneal (i.p.) injection of a pro-angiogenic factor can be modulated
by subcutaneous (s.c.), intravenous (i.v.) or oral (p.o.) treatment with modifying agents of choice. Each membranous part of the mesentery is 
translucent and framed by fatty tissue, giving it a window-like appearance.
The assay has the following advantageous features: (i) the test tissue is natively vascularized, albeit 
sparsely, and since it is extremely thin, the microvessel network is virtually two-dimensional, which allows the entire network 
to be assessed microscopically in situ; (ii) in adult rats the test tissue lacks significant physiologic angiogenesis, which characterizes
 most normal adult mammalian tissues; the degree of native vascularization is, however, correlated with age, as discussed in1; 
(iii) the negligible level of trauma-induced angiogenesis ensures high sensitivity; (iv) the 
assay replicates the clinical situation, as the angiogenesis-modulating test drugs are administered systemically and the responses 
observed reflect the net effect of all the metabolic, cellular, and molecular alterations induced by the treatment; (v) the assay 
allows assessments of objective, quantitative, unbiased variables of microvascular spatial extension, density, and network pattern 
formation, as well as of capillary sprouting, thereby enabling robust statistical analyses of the dose-effect and molecular 
structure-activity relationships; and (vi) the assay reveals with high sensitivity the toxic or harmful effects of treatments in 
terms of decreased rate of physiologic body-weight gain, as adult rats grow robustly.
Mast-cell-mediated angiogenesis was first demonstrated using this assay3,4. The model demonstrates a high level of 
discrimination regarding dosage-effect relationships and the measured effects of systemically administered chemically or functionally closely related drugs and proteins, 
including: (i) low-dosage, metronomically administered standard chemotherapeutics that yield diverse, drug-specific effects (i.e., 
angiogenesis-suppressive, neutral or angiogenesis-stimulating activities5); (ii) natural iron-unsaturated human lactoferrin, which stimulates 
VEGF-A-mediated angiogenesis6, and natural iron-unsaturated bovine lactoferrin, which inhibits VEGF-A-mediated angiogenesis7; and (iii) 
low-molecular-weight heparin fractions produced by various means8,9. Moreover, the assay is highly suited to studies of the combined 
effects on angiogenesis of agents that are administered systemically in a concurrent or sequential fashion.
The idea of making this video originated from the late Dr. Judah Folkman when he visited our laboratory and witnessed the methodology being demonstrated.
Review papers (invited) discussing and appraising the assay
Norrby, K. In vivo models of angiogenesis. J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).
Norrby, K. Drug testing with angiogenesis models. Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).

Normal adult vascularized mammalian tissue that lacks physiologic angiogenesis and that has not been exposed to surgical intervention is used to study: (i) the initiation and development of angiogenesis following intraperitoneal administration of test agents; and (ii) modification of angiogenesis following systemic administration of selected test agents.

Rat mezenter Anjiyogenez Testi

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in ...

Biyoloji

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

The isolated microvessel preparation is an ex vivo preparation that allows for examination of the different contributions of factors that control vessel diameter, and thus, perfusion resistance1-5. This is a classic experimental preparation that was, in large measure, initially described by Uchida et al.15 several decades ago. This initial description provided the basis for the techniques that was extensively modified and enhanced, primarily in the laboratory of Dr. Brian Duling at the University of Virginia6-8, and we present a current approach in the following pages. This preparation will specifically refer to the gracilis arteriole in a rat as the microvessel of choice, but the basic preparation can readily be applied to vessels isolated from nearly any other tissue or organ across species9-13. Mechanical (i.e., dimensional) changes in the isolated microvessels can easily be evaluated in response to a broad array of physiological (e.g., hypoxia, intravascular pressure, or shear) or pharmacological challenges, and can provide insight into mechanistic elements comprising integrated responses in an intact, although ex vivo, tissue. The significance of this method is that it allows for facile manipulation of the influences on the integrated regulation of microvessel diameter, while also allowing for the control of many of the contributions from other sources, including intravascular pressure (myogenic), autonomic innervation, hemodynamic (e.g., shear stress), endothelial dependent or independent stimuli, hormonal, and parenchymal influences, to provide a partial list. Under appropriate experimental conditions and with appropriate goals, this can serve as an advantage over in vivo or in situ tissue/organ preparations, which do not readily allow for the facile control of broader systemic variables. 
The major limitation of this preparation is essentially the consequence of its strengths. By definition, the behavior of these vessels is being studied under conditions where many of the most significant contributors to the regulation of vascular resistance have been removed, including neural, humoral, metabolic, etc. As such, the investigator is cautioned to avoid over-interpretation and extrapolation of the data that are collected utilizing this preparation. The other significant area of concern with regard to this preparation is that it can be very easy to damage cellular components such as the endothelial lining or the vascular smooth muscle, such that variable source of error can be introduced. It is strongly recommended that the individual investigator utilize appropriate measurements to ensure the quality of the preparation, both at the initiation of the experiment and periodically throughout the course of a protocol.

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

An ex vivo preparation is described for isolation of the largest gracilis muscle resistance arterioles for interrogation of both vascular responses to vasoactive stimuli and the assessment of basic structural properties via passive wall mechanics.

Ex vivo</emVasküler Reaktivite incelenmesi için> İzole İskelet mikrodamar Hazırlık

The isolated  microvessel preparation is an ex vivo preparation that allows for examination of the different contributions of  factors that control vessel ...

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

Contraction or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries determines the artery diameter and thereby controls flow of blood through the vessel and contributes to systemic blood pressure. The contraction process is regulated primarily by cytosolic calcium concentration ([Ca2+]cyt), which is in turn controlled by a variety of ion transporters and channels. Ion channels are common intermediates in signal transduction pathways activated by vasoactive hormones to effect vasoconstriction or vasodilation. And ion channels are often targeted by therapeutic agents either intentionally (e.g. calcium channel blockers used to induce vasodilation and lower blood pressure) or unintentionally (e.g. to induce unwanted cardiovascular side effects).
Kv7 (KCNQ) voltage-activated potassium channels have recently been implicated as important physiological and therapeutic targets for regulation of smooth muscle contraction. To elucidate the specific roles of Kv7 channels in both physiological signal transduction and in the actions of therapeutic agents, we need to study how their activity is modulated at the cellular level as well as evaluate their contribution in the context of the intact artery.
The rat mesenteric arteries provide a useful model system. The arteries can be easily dissected, cleaned of connective tissue, and used to prepare isolated arterial myocytes for patch clamp electrophysiology, or cannulated and pressurized for measurements of vasoconstrictor/vasodilator responses under relatively physiological conditions. Here we describe the methods used for both types of measurements and provide some examples of how the experimental design can be integrated to provide a clearer understanding of the roles of these ion channels in the regulation of vascular tone.

Measurements of Kv7 (KCNQ) potassium channel activity in isolated arterial myocytes (using patch clamp electrophysiological techniques) in parallel with measurements of constrictor/dilator responses (using pressure myography) can reveal important information about the roles of Kv7 channels in vascular smooth muscle physiology and pharmacology.

Patch Clamp Elektrofizyoloji ve Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak arteriyel düz kas KV7 Potasyum Kanal Fonksiyon Exploring

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Isolation of Microvascular Endothelial Tubes from Mouse Resistance Arteries

The control of blood flow by the resistance vasculature regulates the supply of oxygen and nutrients concomitant with the removal of metabolic by-products, as exemplified by exercising skeletal muscle. Endothelial cells (ECs) line the intima of all resistance vessels and serve a key role in controlling diameter (e.g.&#160;endothelium-dependent vasodilation) and, thereby, the magnitude and distribution of tissue blood flow. The regulation of vascular resistance by ECs is effected by intracellular Ca2+ signaling, which leads to production of diffusible autacoids (e.g.&#160;nitric oxide and arachidonic acid metabolites)1-3 and hyperpolarization4,5 that elicit smooth muscle cell relaxation. Thus understanding the dynamics of endothelial Ca2+ signaling is a key step towards understanding mechanisms governing blood flow control. Isolating endothelial tubes eliminates confounding variables associated with blood in the vessel lumen and with surrounding smooth muscle cells and perivascular nerves, which otherwise influence EC structure and function. Here we present the isolation of endothelial tubes from the superior epigastric artery (SEA) using a protocol optimized for this vessel.
To isolate endothelial tubes from an anesthetized mouse, the SEA is ligated in situ to maintain blood within the vessel lumen (to facilitate visualizing it during dissection), and the entire sheet of abdominal muscle is excised. The SEA is dissected free from surrounding skeletal muscle fibers and connective tissue, blood is flushed from the lumen, and mild enzymatic digestion is performed to enable removal of adventitia, nerves and smooth muscle cells using gentle trituration. These freshly-isolated preparations of intact endothelium retain their native morphology, with individual ECs remaining functionally coupled to one another, able to transfer chemical and electrical signals intercellularly through gap junctions6,7. In addition to providing new insight into calcium signaling and membrane biophysics, these preparations enable molecular studies of gene expression and protein localization within native microvascular endothelium.

We present a preparation for visualizing and manipulating calcium signaling in native, intact microvascular endothelium. Endothelial tubes freshly isolated from mouse resistance arteries supplying skeletal muscle retain in vivo morphology and dynamic signaling within and between neighboring cells. Endothelial tubes can be prepared from microvessels of other tissues and organs.

Fare Direnç arterlerden mikrovasküler endotel Tüpler İzolasyonu

The control of blood flow by the resistance vasculature regulates the supply of oxygen and nutrients concomitant with the removal of metabolic ...

Microperfusion Technique to Investigate Regulation of Microvessel Permeability in Rat Mesentery

Experiments to measure the permeability properties of individually perfused microvessels provide a bridge between investigation of molecular and cellular mechanisms regulating vascular permeability in cultured endothelial cell monolayers and the functional exchange properties of whole microvascular beds. A method to cannulate and perfuse venular microvessels of rat mesentery and measure the hydraulic conductivity of the microvessel wall is described. The main equipment needed includes an intravital microscope with a large modified stage that supports micromanipulators to position three different microtools: (1) a beveled glass micropipette to cannulate and perfuse the microvessel; (2) a glass micro-occluder to transiently block perfusion and enable measurement of transvascular water flow movement at a measured hydrostatic pressure, and (3) a blunt glass rod to stabilize the mesenteric tissue at the site of cannulation. The modified Landis micro-occlusion technique uses red cells suspended in the artificial perfusate as markers of transvascular fluid movement, and also enables repeated measurements of these flows as experimental conditions are changed and hydrostatic and colloid osmotic pressure difference across the microvessels are carefully controlled. Measurements of hydraulic conductivity first using a control perfusate, then after re-cannulation of the same microvessel with the test perfusates enable paired comparisons of the microvessel response under these well-controlled conditions. Attempts to extend the method to microvessels in the mesentery of mice with genetic modifications expected to modify vascular permeability were severely limited because of the absence of long straight and unbranched microvessels in the mouse mesentery, but the recent availability of the rats with similar genetic modifications using the CRISPR/Cas9 technology is expected to open new areas of investigation where the methods described herein can be applied.

The modified Landis technique enables paired measurement of the hydraulic conductivity of individual microvessels in the mesentery of normal and genetically modified rats under control and test conditions using microperfusion techniques. It provides a convenient method to evaluate mechanisms that regulate microvessel permeability and transvascular exchange under physiological conditions.

Şekilde, mikro Tekniği Sıçan mezenter mikrodamar geçirgenliği Yönetmelik Araştırma

Experiments to measure the permeability properties of individually perfused microvessels provide a bridge between investigation of molecular and cellular ...

Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic diseases. Endothelial dysfunction represents a major culprit for the reduced vasodilatation and enhanced vasoconstriction of arteries. Adipose (fat) tissues surrounding the arteries play important roles in the regulation of endothelium-dependent relaxation and/or contraction of the vascular smooth muscle cells. The cross-talks between the endothelium and perivascular adipose tissues can be assessed ex vivo using mounted blood vessels by a wire myography system. However, optimal settings should be established for arteries derived from animals of different species, ages, genetic backgrounds and/or pathophysiological conditions.

The protocol describes the use of wire myography to evaluate the transmural isometric tension of mesenteric arteries isolated from mice, with special consideration of the modulation by factors released from endothelial cells and perivascular adipose tissues.

Perivasküler Adipose dokularında modülasyon odaklı Izole mezenterik arterlerin kullanıldığı vasküler ton tepkisini değerlendirmek

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic ...

<meta charset="utf8"></head><body>Gastrointestinal Dinamikleri ve İlaçların Motilite Üzerindeki Etkilerini İnceleme Protokolü

Using An In Vitro Tissue Perfusion System to Detect the Functional Activities of Isolated Intestinal Tubes in Real Time

Gastrointestinal diseases, which have a high incidence, pose considerable challenges for humans. The small intestine is integral to food and drug digestion and absorption and plays a crucial role in treating these diseases. The intestinal tube movement experiment, a common and essential in vitro method, is utilized to study gastrointestinal dynamics. This includes the preparation of the isolated intestinal tube, as well as the suspension of the prepared intestinal tube in the bath and its connection to a signal detector. This is followed by the recording and analysis of a series of parameters, such as tension, which can be used to assess intestinal motor function, as well as considerations for keeping the intestinal tube active in vitro. The standardized program from sampling to data collection greatly improves the repeatability of the experimental data and ensures the authenticity of the recording of intestinal tension after physiological, pathological, and drug intervention. Here we present the key problems in experimental operation and a valuable reference experimental protocol for studying drugs that regulate gastrointestinal motility.

<meta charset="utf8"></head><body>Yazar Spotlight: Sıçan Bağırsak Tüpleri Üzerindeki İlaç Etkisinin Güvenilir ve Tekrarlanabilir İn Vitro Değerlendirmesi

We present a method for isolating rat intestinal tubes and assessing the impact of drugs on their tension, frequency, and amplitude in vitro. This method offers a valuable approach for researchers investigating intestinal tubes.

Bir Biyoassay olarak Sığır Mezenterik Arter ve Ven Bölüm yalıtma ve kullanma İnce Barsak vazoaktiviteye için Test

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler