Name: measuring the effects of bacteria on c. elegans behavior using an egg retention assay
Uploaded: 2013-10-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 36 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay at JoVE.com

Yazarlar E. tedarik Haziran Middleton teşekkür etmek istiyorum faecalis suşları ve rehberlik için bakteri kültürü ile. C. elegans Araştırma Altyapısı Programları NIH Ofisi (P40 OD010440) tarafından finanse edilmektedir CGC, tarafından verilmiştir.

Nematod Büyüme Medya 1) hazırlanması (NGM) <ol><li> 50 levha yapmak için, 1.5 g NaCl, 8.5 g saf olan Ağar ve 1 Lflask 1.25 g pepton ekleyin. </li><li> Balona dH 2 O 487.5 ml ekleyin. Alüminyum folyo bir parça balonun açılış karıştırmak ve karşılamak için yavaşça girdap. </li><li> Standart koşullar (121 psi, 120 ° C, 20 dakika) otoklav ile çözüm sterilize edin. </li><li> Çözüm bir su banyosunda 45 ° C soğumasını bekleyin. </li><li> 5 mg / ml stok çözeltisi (etanol içinde çözülmüş), 500 ul 1 M CaCI2, 500 ul 1 M MgSO 4 ve 12.5 ml KPO 4 tampon maddesi (54.15 g ile 500 ul: kolesterol çözeltisine, sırayla aşağıdaki eklemek dH 2 O 500 ml KH 2 PO 4 ve 17.8 g K 2 HPO 4) 18 olarak tanımlanmıştır. </li><li> Steril pipetler kullanarak, her 60 mm polistiren Petri kabı agar çözüm 10 ml ekleyin. Medya oda sıcaklığında overn katılaşmaya izinight. </li></ol> B Broth E. 2) hazırlanması coli Medya <ol><li> Beş, 100 ml kültür hale getirmek için, bir behere Bacto Tripton, 2.5 g maya özütü, 5.0 g NaCl, 5.0 g ekleyin. </li><li> 500 ml &#39;lik bir son hacim için steril, damıtılmış su ekleyin. Çözünen çözünmüş kadar, karıştırarak, sıcak bir plaka üzerinde çözüm ısıtın. </li><li> Beş cam şişe (en az 200 ml hacim) içine Oda suyu 100 ml dökün. </li><li> Standart koşullar (121 psi, 120 ° C, 20 dakika) otoklav ile çözüm sterilize edin. </li><li> B suyu kullanmadan önce oda sıcaklığına kadar soğumasını bekleyin. </li></ol> 3) Tohumlama C. elegans Bakım Tabaklar <ol><li> NGM plakalar en az bir hafta için oda sıcaklığında kuruması için izin verdikten sonra, E. birkaç koloni ile bir 100 ml oda suyu kültürü aşılamak coli (OP50). </li><li> E. büyütün 37 ° C&#39;de gece boyunca kültür coli. </li><li> Pipet bir-iki damlası (yaklaşık 10081, l) OP50 kültürünün her NGM plaka ortasına üzerine. Tabaklar genellikle kapak tarafı yukarı dizilir. (Ekim) pipetleme zaman, yığının altındaki plaka üzerine kültür pipetleme başlar. Her yığın şekilde çalışır. Bu kültür çok yakın plakanın kenarlarına alamadım önemlidir çünkü, tohumlama sonra plakaları taşımak için çalışın. </li><li> Tohumlanan plakalar kullanılarak önce en az bir hafta için oda sıcaklığında kurumaya bırakın. </li><li> Tohumlu plakalar oda sıcaklığında kapalı plastik kaplarda (ters) saklanır. </li></ol> 4) C. bakımı elegans Suşlarının <ol><li> Iyi beslenen C. korumak için elegans stokları, her 3-4 günde bir yeni bir, numaralı seribaşı NGM plaka için üç L4S veya gebe yetişkin taşımak için almak bir solucan kullanın. </li><li> Mağaza plakalar (ters) tercihen bir inkübatör içinde 15 - 22 ° C Açıklanan tahlillerinde kültürler 20 ° C C de muhafaza edildi elegans geliştirme sıcaklığa bağlıdır. Maintena gibisıcaklık artışları nce, gelişim evreleri arasında zaman azalır. </li></ol> Triptik soya ağarı (TSA) E. 5) hazırlanması faecalis Kültür Medya <ol><li> Bir ocak, karıştırarak 50 plaka yapmak için, bir balona steril, distile su 500 ml ölçmek ve bir taşım kaynatın. </li><li> Şişeye toz TSA agar 20 g ilave edin ve eritmek için bir çözüm sağlar. </li><li> Standart koşullar (121 psi, 120 ° C, 20 dakika) otoklav ile çözüm sterilize edin. </li><li> Çözüm bir su banyosunda 45 ° C soğumasını bekleyin. </li><li> Steril pipetler kullanarak, her 60 mm polistiren Petri kabı agar çözüm 10 ml ekleyin. Ortam gece boyunca oda sıcaklığında katılaşmaya izin verin. </li></ol> Tryptic Soy Broth (TSB) E. 6) hazırlanması faecalis Kültür Medya <ol><li> Karıştırılırken 250 kültür tüpleri hale getirmek için, bir ocak üzerindeki bir şişeye ve sıcak olarak, steril, damıtılmış su, 500 ml ölçer. </li&gt; <li> Şişeye TSB, agar tozu 15 g ekleyin ve tozu çözmek için izin verir. </li><li> Standart koşullar (121 psi, 120 ° C, 20 dakika) otoklav ile çözüm sterilize edin. </li><li> Steril, 5 ml test tüplerine çözelti oda sıcaklığına soğumaya bırakın ve daha sonra pipet 2 mi. </li></ol> 7) E. için Streptomisin ile Beyin Kalp İnfüzyon (BHI) Medya, hazırlanması, faecalis Kültür <ol><li> Bir şişe içine steril damıtılmış su, 500 ml ölçmek ve bir ocak, karıştırılırken, bir kaynama noktasına getir. </li><li> Şişeye BHI ortamı 26 g ekleyin ve çözelti, çözünmesi için izin verir. </li><li> Standart koşullar (121 psi, 120 ° C, 20 dakika) otoklav ile çözüm sterilize edin. </li><li> Çözüm ° C su banyosunda 45 soğumasını bekleyin. </li><li> Steril tekniği kullanarak, bir 10 mg / ml streptomisin stok solüsyonu ve karıştırmak için girdap 0.5 ml. </li><li> Her 60 mm polistiren Petri kabı çözüm 10 ml ekleyin. </li><li&gt; Veren ortam gece boyunca oda sıcaklığında katılaşmaya bırakılır. Mağaza, 4 tabak (ters) ° kullanmadan önce birkaç saat kadar C. </li></ol> 8) E. bakımı faecalis suşları <ol><li> E. korumak için faecalis hisse senetleri, ayrı triptik soya agar (TSA) plakalar üzerine çizgi tek tek koloniler steril bir döngü kullanın. </li><li> 37 ° C gecede kültür büyütün. Birkaç hafta boyunca oda sıcaklığında kapalı bir torba ya da kutu içinde plakları (ters). </li></ol> 9) E. hazırlanması EIW Testi için faecalis Plakalar <ol><li> E. bir koloni ile 2 ml TSB kültürü aşılamak faecalis ve 37 gece boyunca inkübe ° C </li><li> E. Pipet 20 ul faecalis hazırlanmış BHI-streptomisin plakasının ortasına üzerine kültür ve 37 gece boyunca inkübe ° C </li></ol> 10) E. hazırlanması EIW Testi (Kontrol Levhalar) için coli Tabaklar <ol><li> 100 ml&#39;lik bir B-bro inoküleE. bir koloni ile inci kültürü coli OP50 ve 37 ° C gece boyunca inkübe </li><li> Pipet 20 bir giremeyen NGM plaka merkezi üzerine OP50 kültür ul ve tohumlu plakalar gece boyunca oda sıcaklığında kurumaya bırakın. </li></ol> Solucan Deneyi 11) Yumurta <ol><li> 15 almak - 20 sahnelenen-L4 C. hazırlanmış bir BHI-Strep-E. bakteri çim ortasında üzerine elegans (Şekil 1) faecalis plaka. BHI plakasına OP50 bir sürü aktarmak için dikkatli olun. NGM-OP50 plaka bir kontrol için L4S aynı sayıda seçin. </li><li> 20 ° C&#39;de 40 saat boyunca inkübe edin </li><li> 20% çamaşır suyu çözeltisi hazırlayın. Damıtılmış su, uygun hacmi ile ticari bir çamaşır suyu (% 6.0 sodyum hipoklorit) karıştırın. </li><li> Bir plastik kapak on farklı yerlerde (bir solucan veya bakteriyel plaka) için çamaşır suyu 10 ul damla ekleyin. </li><li> Bir solucan seçim kullanarak, her çamaşır suyu damla içine bir solucan aktarın. Bir Yavaşça girdap ucusolucan seçim sonunda (bir mikroskop altında damlacık görüntüleyerek teyit) yıkanır emin olmak için çamaşır suyu damlacık içinde almak. </li><li> Solucanlar yumurta (Şekil 2) kovma, açık patlayana kadar manikür yaklaşık 10 dakika ya da çözmek için izin verin. Plaka yumurta transferi için dikkatli olun. </li><li> Bir mikroskop kullanarak, çamaşır suyu her damla yumurta sayısı. </li></ol>

<ol>
	<li>Horvitz, H. R., Chalfie, M., Trent, C., Sulston, J. E., Evans, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+and+octopamine+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Serotonin and octopamine in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Science. 216, 1012-1014 (1982).</li><li>Sawin, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Genetic and cellular analysis of modulated behaviors in Caenorhabditis elegans [dissertation]. , (1996).</li><li>Trent, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Genetic and behavioral studies of the egg-laying system of Caenorhabditis elegans [dissertation]. , (1982).</li><li>Chase, D. L., Koelle, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+RGS+protein+function+in+Caenorhabditis+elegans.">Genetic analysis of RGS protein function in Caenorhabditis elegans.</a> Methods Enzymol. 389, 305-320 (2004).</li><li>Trent, C., Tsuing, N., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Egg-laying+defective+mutants+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Egg-laying defective mutants of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 104, 619-647 (1983).</li><li>Weinshenker, D., Garriga, G., Thomas, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+pharmacological+analysis+of+neurotransmitters+controlling+egg+laying+in+Caenorhabditis+elegans.">Genetic and pharmacological analysis of neurotransmitters controlling egg laying in Caenorhabditis elegans.</a> J. Neurosci. 15, 6975-6985 (1995).</li><li>Waggoner, L. E., Zhou, G. T., Schafer, R. W., Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+alternative+behavioral+states+by+serotonin+in+Caenorhabditis+elegans.">Control of alternative behavioral states by serotonin in Caenorhabditis elegans.</a> Neuron. 21, 203-214 (1998).</li><li>Bany, A., Dong, M., Koelle, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+cellular+basis+for+acetylcholine+inhibition+of+Caenorhabditis+elegans+egg-laying+behavior.">Genetic and cellular basis for acetylcholine inhibition of Caenorhabditis elegans egg-laying behavior.</a> J. Neurosci. 23, 8060-8069 (2003).</li><li>Dempsey, C. M., Mackenzie, S. M., Gargus, A., Blanco, G., Sze, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+(5HT),+fluoxetine,+imipramine+and+dopamine+target+distinct+5HT+receptor+signaling+to+modulate+Caenorhabditis+elegans+egg-laying+behavior.">Serotonin (5HT), fluoxetine, imipramine and dopamine target distinct 5HT receptor signaling to modulate Caenorhabditis elegans egg-laying behavior.</a> Genetics. 169, 1425-1436 (2005).</li><li>Leung, M. C., Williams, P. L., Bennedetto, A., Au, C., Helmcke, K. J., Aschner, M., Meyer, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans:+an+emerging+model+in+biomedical+and+environmental+toxicology.">Caenorhabditis elegans: an emerging model in biomedical and environmental toxicology.</a> Toxicol. Sci. 106, 5-28 (2008).</li><li>Mylonakis, E., Aballay, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worms+and+flies+as+genetically+tractable+animal+models+to+study+host-pathogen+interactions.">Worms and flies as genetically tractable animal models to study host-pathogen interactions.</a> Infect. Immun. 73, 3833-3841 (2005).</li><li>Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WormBook. , (2005).</li><li>White, J., Southgate, E., Thomson, N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+Caenorhabditis+elegans+nervous+system.">The structure of the Caenorhabditis elegans nervous system.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314, 1-340 (1986).</li><li>Desai, C., Garriga, G., McIntire, S. L., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+pathway+for+the+development+of+the+Caenorhabditis+elegans+HSN+motor+neurons.">A genetic pathway for the development of the Caenorhabditis elegans HSN motor neurons.</a> Nature. 336, 638-646 (1988).</li><li>Garsin, D. A., Sifri, C. D., Mylonakis, E., Qin, X., Singh, K. V., Murray, B. E., Calderwood, S. B., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+model+host+for+identifying+Gram-positive+virulence+factors.">A simple model host for identifying Gram-positive virulence factors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 10892-10897 (2001).</li><li>Aballay, A., Yorgey, P., Ausubel, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salmonella+typhmurium+proliferates+and+establishes+a+persistent+infection+in+the+intestine+of+Caenorhabditis+elegans.">Salmonella typhmurium proliferates and establishes a persistent infection in the intestine of Caenorhabditis elegans.</a> Curr. Biol. 10, 1539-1542 (2000).</li><li>O'Quinn, A. L., Wiegand, E. M., Jeddeloh, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burkholderia+pseudomallei+kills+the+nematode+Caenorhabditis+elegans+using+an+endotoxin-mediated+paralysis.">Burkholderia pseudomallei kills the nematode Caenorhabditis elegans using an endotoxin-mediated paralysis.</a> Cell. Microbiol. 3, 381-393 (2001).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">Genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li><li>Harvey, S. C., Shorto, A., Orbidans, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+genetic+analysis+of+life-+history+traits+of+Caenorhabditis+elegans+in+stressful+environments.">Quantitative genetic analysis of life- history traits of Caenorhabditis elegans in stressful environments.</a> BMC Evol. Biol. 8, 15 (2008).</li><li>Harvey, S. C., Orbidans, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=All+eggs+are+not+equal:+the+maternal+environment+affects+progeny+reproduction+and+developmental+fate+in+Caenorhabditis+elegans.">All eggs are not equal: the maternal environment affects progeny reproduction and developmental fate in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 6, e25840 (2011).</li><li>Klass MR, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+major+biological+and+environmental+factors+influencing+life+span.">Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span.</a> Mech. Ageing. Dev. 6, 413-429 (1977).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Başarılı bir şekilde bu testte performans en kritik adımlar şunlardır: 1) C iyi beslenmiş desteleri kullanarak, tahlil plaka, 3 elegans, 2) kültür bakteri tek tip) doğru belirlenmesi E. maruz kalma L4 solucanlar sahnelenen faecalis, 4) E. maruz kalma süresi tutmak zaman ağartma tüm çalışmalar ve 5 tutarlı faecalis) yumurta parçalanma önlemek için on dakika geçmemelidir. Bu testi için sağlıklı, iyi beslenmiş solucanlar almak için önemlidir. Anne açlık doğurganlık ve döl 19,20 büyüme etkileyebilir, bu nedenle solucanlar de bu tahlil yapmadan önce birkaç nesildir beslenen olduğunu önemlidir. Solucanlar bir iyi beslenmiş stok kolayca sadece yeni bir numaralı seribaşı NGM plaka 2-3 günde bir kaç yetişkin solucanlar aktararak korunur. Tahlil iki gün önce, erişkin solucanlar tahlil için kullanılabilir yeterli L4 döl sahip olmak için OP50 yeni bir çim yerleştirilmelidir. &lt;p = sınıf &quot;jove_content&quot;&gt; Bu EIW tahlil plakaları bakteri yalnızca tek bir tip büyümesini teşvik etmek de önemlidir. E. faecalis suşları BHI plakalar üzerinde yetiştirilmiştir. Streptomisin E. karşı seçmek için plakalara ilave edildi Bu tahlil plakalarına bakım NGM plakalar ikinci transfer olarak L4 solucanlar ile transfer edilir coli OP50,. OP50 da BHI plakaları yetişir. , C. karşı seçili değilse elegans BHI plakaları sırasında bakteri iki tür (E. coli ve E. faecalis) beslenirler olacaktır. E. suşları Bu tahlilde kullanılan faecalis streptomisin direnci vardır. Bakteri farklı bu tahlil, bir antibiyotik, ve belki de farklı kültür ortamı kullanılmıştır durumunda, tercih bakterilerin seçilmesi için kullanılan ve E. karşı olmalıdır coli OP50. Doğru bu tahlil için solucanlar sahnelenen seçimi çeşitli nedenlerden dolayı çok önemlidir. İlk olarak, t sırasında yumurta tutma saymak önemlidir<html> o yumurta üretim süresi / kendini gübreleme C. döşeme elegans. Yumurta üretimi C. ilk beş gün boyunca yalnızca oluşur elegans erişkin (40 saat sonrası L4 etrafında zirve) ve hızlı bir şekilde daha sonra 4,21 azalır. Döllenmiş yumurta üreten değil ise erişkin solucanlar iki üç hafta bir ortalama için yaşamak, pek çok erişkin solucanlar en az bir hafta yaşıyoruz. Bu nedenle, EIW testi bilinmeyen yaş unstaged erişkin solucanlar üzerinde gerçekleştirilen olmadığından emin olmak önemlidir. Kullanmak önemlidir İkinci sebep EIW tayininde hayvanlar solucanlar bakterilere maruz kalmış hangi gelişiminde zaman, toksin veya ilaç sıkı kontrol edilir böyledir düzenledi. C. kültürleri elegans genellikle yumurta, L1 veya L4 aşamalarında eşitlenir. L4 sahne nedeniyle endişe bu tahlil için kullanıldığını E. için uzun pozlama solucanlar gebe yetişkin olmadan önce faecalis öldürücülüğü neden olacaktır. çadır &quot;&gt; zaman solucanlar süresi çamaşır suyu kalır bu kez solucanı solucan değişir olmasına rağmen Worms döllenmiş yumurta sonunda çamaşır suyu ile çözülür., genellikle on dakika altında çözülmesi gerekirken. izlemek için de önemlidir, ama süreç koruyucu bir kabuk bölgesinin varlığı nedeniyle kütikül daha yavaştır. kabuğu daha uzun bir süre 10-15 dakika boyunca çözelti içinde bırakılırsa ağartıcı çözünmüş başlayacaktır. Yumurta tutma yumurta üretimi ve yumurta döşeme arasındaki dengeyi yansıtır. Tek başına EIW testi rahim tutulan yumurta sayısı yumurta üretimi veya yumurtlama değişiklikler nedeniyle olup olmadığı ayırt etmez. Bu bir bakteri suşu veya toksin ile tedavi solucanlar kontrol grubuna göre daha az yumurta korumak, özellikle bir husustur. Özellikle, bu durumda, bir takip kuluçka boyutu tahlilinde yapılmalıdır. Brood boyutu deneyleri solucan üreme ömrü 4 üzerinde yumurta koydu sayısını ölçmek </sup&gt;. Deney ve kontrol gruplarında solucanlar yavru boyutu aynı ise, yumurta saklama farklılıklar yumurtlama davranış farklılıkları bağlanabilir. Bu mümkün değildir çünkü E. gibi hafif patojen bakteri suşları faecalis yumurta üretimi artırmak için hareket edeceğini, bu varsaymak makul olduğunu E. maruz kaldıktan sonra yumurta tutma artış faecalis (Şekil 3&#39;te görüldüğü gibi), azalmış yumurtlama davranışlarının bir sonucudur. EIW testi de bakteri yumurta tutma değiştirebilir hangi mekanizma belirlemez. Bu mümkün olduğunu C bir kötü besin kaynağı olduğu için patojenik bakteriler kolonize ve ağız açıklığı engelleme ya da tarafından besleme etkiler çünkü elegans yumurta muhafaza edebilir. Bu bakteri kolonize ve vulva açılmasını engellemek, ya da yumurta döşeme sistemindeki hücrelerin fonksiyonunu etkileyebilir olması da mümkündür. Diğer analizler WHI mekanizmasını belirlemek için gereklidirch yumurta tutma değişir. Bu EIW test kolayca yumurta tutma üzerinde bileşiklerin çok çeşitli etkilerini belirlemek için değiştirilebilir. Buna ek olarak, bu deney bu patojenin etki için gerekli ya da bilgisayar (C. elegans) veya (E. faecalis) patojen bölgesi, genleri belirlemek için bir ekran içine dahil edilebilir kadar basittir. EIW analiz: yumurtlama düzenleyen kendisi için gerekli olan genlerin taranması için de kullanılabilir. ° C. elegans yumurta döşeme davranış, serotonin ve asetilkolin 5-9 gibi nörotransmitterlerin tarafından modüle ve çeşitli nöronlar ve kas gruplarının 12 koordineli faaliyet gerektirir. EIW deneyleri yapılmış ve nörotransmitter sinyal ve / veya kas aktivitesi için önemli genlerin tanımlanması için kullanılmaya devam etmektedir. EIW deneyleri, bir nicel değil, nitel daha önemli bir C analizini elegans davranış.

Caenorhabditis elegans, mikroskobik, serbest yaşayan yuvarlak kurt, geleneksel olarak insanlara nedeniyle şeffaf anatomi, iyi karakterize geliştirme, tam sıralı genom, kısa nesil zamanlı ve genetik homoloji gelişim ve hücre sinyal süreçleri incelemek için kullanılan bir model organizmadır . Daha yakın zamanda, C. elegans çevresel toksikoloji ve doğuştan gelen bağışıklık 10, 11 alanında bir model organizma haline gelmiştir. Bu kendi kendine gübreleme hermaphroditic solucanlar yumurtadan çıkım iki-üç gün içinde cinsel olgun olur. Yaşam döngüsü, C. sırasında elegans yetişkinliğe ulaşmadan önce, dört larva aşamaları (L1-L4) geçer. Bir izole hermafrodit tepe verimlilik üç gün içinde, ortalama, 300 yavru üretebilir. Üreme olgun C. elegans çift cinsiyetli, döllenmiş yumurta koydu önce birkaç saat boyunca rahim içinde korunur.Herhangi bir anda, rahim içinde depolanan yumurta normal sayıda (en yüksek verimlilik esnasında) on ila onbeş 12&#39;dir. Rahim yumurta sayısı yumurta üretimi oranı ve yumurtlama oranını hem de bir fonksiyonudur. Döllenmiş yumurta vulva 13 açılış etrafında düzenlenmiş on altı vulva kasların kasılması ile rahim kesilir. Hermafrodit özel nörotoksinlerini (HSN) &#39;ın ve dolayısıyla VC nörotoksinlerini kas kasılması etkileyen vulva kasları üzerine sinaps ve yumurtlama davranışı 5,7,13,14. Rahim yumurta ihraç nöronlar ve kasların koordine aktivite nedeniyle oluşur. C. Laboratuar kültürleri elegans genellikle patojen olmayan Escherichia coli OP50 bir diyet yetiştirilir. Doğal ortamda, C. elegans gibi patojen bakteriler gibi gıda kaynakları, çeşitli temas, potansiyel olarak zararlı olabilir. Zararlı maddelere maruz kaldığındaçevre, C. çevreye daha elverişli hale gelinceye kadar elegans yumurta saklayın. Muhtemelen bu yumurta tutma onların soyu korumak için bir çabadır. Solucan (EIW) testi, C bu yumurta elegans, potansiyel olarak patojenik bakteriler, ortamda bulunan Enterococcus faecalis, maruz kalmaktadır. E. patojenik biçimlerine maruz faecalis C. kalıcı bağırsak enfeksiyonu ve hatta ölüme neden olabilir elegans 15. Patojenik bakterilerin diğer formlarına maruz kalma yumurta tutma 16,17 etkilediği gösterilmiştir, bununla birlikte etki miktarı değildi. E. Buna ek olarak, hafif patojenik etkisini suşları faecalis, yumurta döşeme davranış, hemen öldürücü olmayan suşları çalışılmamıştır. EIW deneyleri C rahim korudu yumurta sayısı, sayım içerir elegans 4. Olsa ° C. eleganssaydam, rahim içinde biriken yumurta bozulmamış bir hayvanda ölçmek için zor olabilir. EIW testi gebe yetişkin C. beyazlatma içerir zaman sabit bir süre için bakterilere maruz bırakıldı elegans. Çamaşır suyu solüsyonu geride bırakarak yumurta dış kütikül çözünür. Yumurta kabuğu koruyucu bir varlığı nedeniyle ağartıcı etkilerine refraktif vardır. Ağartma sonra, bir çok kolay beyazlatma üzerine solucanlar rahim salınan yumurta sayısını yapabiliyor. Bu deney, bir anda rahim içinde yumurtaların sayısını ölçmek için basit, ucuz ve hızlı bir yöntemdir, ve böylece E. etkilerini ölçmek yumurta tutma üzerinde faecalis. Bu testte yumurta tutma bakteri, çevresel toksinler veya ilaç diğer türleri etkisini ölçmek için kullanılabilir. Bu deney aynı zamanda bakteriyel patojen için bir ekran olarak kullanılmak üzere bir potansiyele sahiptir.

<table><tbody><tr><td>Agar, ultrapure</td><td>Affymetrix</td><td>10906</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Peptone</td><td>Becton Dickinson</td><td>211677</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Tryptone</td><td>Becton Dickinson</td><td>211705</td><td></td></tr><tr><td>Brain Heart Infusion dehydrated medium</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>781781</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;C. elegans&lt;/em&gt;, N2 strain</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td></td><td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Alfa Aesar</td><td>A11470</td><td></td></tr><tr><td>Culture plates for &lt;em&gt;C. elegans&lt;/em&gt;</td><td>Tritech Research Inc.</td><td>T3308</td><td></td></tr><tr><td>Culture plates for &lt;em&gt;E. faecalis&lt;/em&gt;</td><td>Fisher Scientific-Fisherbrand</td><td>875713</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;E. coli &lt;/em&gt;(OP50)</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td></td><td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;E. faecalis&lt;/em&gt; strains</td><td></td><td></td><td>provided by J. Middleton. All isolates were confirmed as enterococci</td></tr><tr><td colspan="4">by observing growth on enterococcosel agar (BBL) and in 6% NaCl broth;</td></tr><tr><td colspan="4"> &lt;p&gt;all strains grew at 44.5 &amp;ordm;C and were catalase negative and hydrolyzed esculin. A simplified&amp;nbsp;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;dichotomous key based on pigmentation and fermentation reactions for six sugars&amp;nbsp;&lt;/span&gt;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;(arabinose, mannitol, methyl-&amp;alpha;-D-glucopyranoside (MGP), ribose, sorbose and sorbitol) allowed&amp;nbsp;&lt;/span&gt;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;presumptive identification of all &lt;em&gt;E&lt;/em&gt;. &lt;em&gt;faecalis&lt;/em&gt; strains (Efs lacks pigmentation and is arabinose, MGP&amp;nbsp;&lt;/span&gt;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;and sorbose negative and sorbitol, mannitol and ribose positive). All presumptive Efs strains&amp;nbsp;&lt;/span&gt;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;were confirmed using the API 20 STREP system (Biomerieux).&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Motic</td><td>SMZ 168B</td><td>any microscope with transmitted illumination and 50X magnification should be sufficient</td></tr><tr><td>Streptomycin sulfate</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP910-50</td><td></td></tr><tr><td>Tryptic Soy Agar (Soybean-Casein Digest Agar Medium), Difco</td><td>Becton Dickinson</td><td>236950</td><td></td></tr><tr><td>Trypticase Soy Broth (Soybean-Casein Digest Medium), BBL</td><td>Becton Dickinson</td><td>211768</td><td></td></tr><tr><td>Yeast extract</td><td>Acros</td><td>61180-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

measuring the effects of bacteria on c. elegans behavior using an egg retention assay

C. elegans yumurta döşeme davranış, osmolaritesi 1 ve titreşim 2 gibi çevresel ipuçları etkilenir. Gıda C. toplam yokluğunda elegans da yumurta döşeme ateşkes ve rahim 3 döllenmiş yumurta korumak. Ancak, özellikle farklı gıda kaynakları, özellikle patojen bakteri ve yumurta döşeme davranış Enterococcus faecalis, etkisi iyi karakterize değildir. Yumurta-in-solucan (EIW) testi bu durumda E&#39;de, bakteri farklı etkilerini ölçmek için bir araçtır faecalis, yumurta döşeme davranış. EIW deneyleri C rahim korudu yumurta sayısı, sayım içerir elegans 4. EIW testi sahnelenen ağartma, gebe yetişkin C. içerir elegans manikür kaldırmak ve hayvan muhafaza yumurta ayırmak için. Önce beyazlatma için, solucan bakteri (veya çevresel işaret her türlü maruz kalan) Zaman belirli bir süre için. Ağartma sonra, bir çok kolay solucanlar rahim içinde muhafaza yumurta sayısını yapabiliyor. E. sonra yumurta tutma Bu deneyde, ölçülebilir bir artış faecalis maruz kolaylıkla ölçülebilir. EIW tahlil patojenik bakteri veya çevresel toksinler varlığı açısından taranması için kullanılabilecek bir davranış deneyidir. Buna ek olarak, EIW testi yumurta döşeme davranış, serotonin ve asetilkolin 5-9 gibi nörotransmitterlerin tarafından modüle olduğu için sinyalizasyon nörotransmitter etkileyen ilaçlar için ekrana bir araç olabilir.

Bu testte bir C içinde muhafaza yumurta sayısı ölçmek için sağlar E. maruz kaldıktan sonra elegans faecalis. L4 solucanlar (kendi vulva, Şekil 1 üzerinde şeffaf açık alan ile karakterize) E. maruz bırakıldı sahnelenen yetişkinlik boyunca faecalis. E. maruz kalma kırk saat sonra faecalis, ağartma uygulandı. Kütikül ağartma damlacık içinde çözüldüler olarak, yumurta (Şekil 2) daha da belirgin hale geldi. Muhafaza yumurta sayısı kolayca mikroskop diseksiyon altında görüntülerken sayılarak belirlendi. Daha yumurta E. varlığında muhafaza edildi E. faecalis suşları karşılaştırıldığında, test coli OP50 kontroller (Şekil 3). Çeşitlemeleri E. herhangi birine suşu etkisi yoktur bireysel solucanlar üzerinde faecalis, gibi hata çubukları görüldüğü. Bununla birlikte, E. suşları etkisi yumurta tutma içinde üzerinde faecalissolucanlar nüfusu denetimlerden önemli ölçüde farklılık yok. Yumurta tutma derecesi E. farklı suşları tarafından ortaya çıkarılan faecalis test de değişebilir. Bu çeşitli etki her bir suş farklı virülans faktörleri ifadesi bağlı olabilir. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51203/51203fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51203/51203fig1.jpg" /> Şekil 1. Belirleme, inşa L4 C. düzenledi elegans. bir. L4 aşamada C. elegans larva erişkin solucanlar daha uzunluğunda levha-sadece biraz daha kısa en büyük larva mevcuttur. L4S muhafaza yumurta (erişkin solucanlar biraz daha geniş yapmak olan). B olmaması nedeniyle sıra yetişkinler, daha incedir. Yetişkinlere göre biraz daha kısa olan bu larva belirledikten sonra, C. L4-aşamalı elegans daha bulunan hafif yarım ay nokta ile tanımlanırvücut ortasında (siyah ok başları). Bu noktada küçük larva (L2 ve L3 aşamalarında) görülebilir, ancak yetişkin yoktur. Tüm resimler diseksiyon mikroskobu (A ve B, sırasıyla için 40X ve 50X büyütme) için monte edilmiş bir kamera ile, NGM plakalar üzerinde solucanlar alınmıştır. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/51203/51203fig1highres.jpg">Daha büyük resim için tıklayınız</a> . <img alt="Şekil 2," fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51203/51203fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51203/51203fig2.jpg" /> Şekil 2. Ağartma solüsyonu C&#39;de erir zamanla elegans kütikül. Aşamalı yetişkin kurt (A), ağartma çözeltisinin bir damlacık içine yerleştirilir. Beş ila on dakika içinde, solucanın manikür (BF) çözmek için başlar. Kütikül çoğu çözülür olarak, yumurta (F Siyah oklar) görünür duruma gelir. Solucan als içinde yağ depolar<html> çamaşır suyu yavaş yavaş çözülür ve (F, gri oklar) görünür kalır o. Tüm resimler diseksiyon mikroskobu (40X) için monte edilmiş bir kamera ile, NGM plakalar üzerinde solucanlar alınmıştır. <a href="https://www-jove-com.bdigitaluss.remotexs.co/files/ftp_upload/51203/51203fig2highres.jpg">Daha büyük resim için tıklayınız</a> . <img alt="Şekil 3," fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51203/51203fig3.jpg" src="/files/ftp_upload/51203/51203fig3.jpg" /> Şekil 3,. Bazı E. faecalis suşları maruz kalma 40 saat sonra artan yumurta tutma neden. altı E. iki maruz Worms faecalis suşları (turuncu bar) solucanlar beslenen E. göre yumurta tutma artan bir düzeyde gösterdi coli (OP50) kontrol suşu (mavi bar). On solucanlar her deneme her bakteri suşu beslendi. Denemeler, farklı günlerde üç kopya halinde yapıldı. * Gösterir p &lt;0.05 (Student t-testi).&quot;&gt; Büyük resim görmek için buraya tıklayın.

Watch this Scientific Journal Video about Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay at JoVE.com

Yumurta Tutma Testi Kullanılarak Bakterilerin C. Elegans Davranışı Üzerindeki Etkilerinin Ölçülmesi | Biyoloji | Video

Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay

Bir yumurta-in-solucan (EIW) testi yumurtlama davranışı ölçmek için yararlı bir yöntemdir. Yumurtlama değişiklikler model organizma bir davranış tepki olabilir<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Bu patojen bakteriler tarafından üretilen gibi zararlı çevresel maddelere.

Üzerinde Bakterilerin Etkilerinin Ölçme<em&gt; C. Elegans</emBir Yumurta Tutma Testi Kullanma&gt; Davranış

C. elegans egg-laying behavior is  affected by environmental cues such as osmolarity1 and  vibration2. In the total absence of food C. elegans also cease ...

measuring-effects-bacteria-on-c-elegans-behavior-using-an-egg

Nanyang Technological University

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay

Ecology

Behavior

SCIENTISTS IN ACTION

17.0K Görüntüleme.  Fairleigh Dickinson University. Bir yumurta-in-solucan (EIW) testi yumurtlama davranışı ölçmek için yararlı bir yöntemdir. Yumurtlama değişiklikler model organizma bir davranış tepki olabilir Caenorhabditis elegans Bu patojen bakteriler tarafından üretilen gibi zararlı çevresel maddelere.

Video: Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the intestine the primary location for disease. The nematode intestine structurally and functionally mimics mammalian intestines and is transparent making it amenable to microscopic study of colonization. Here we show that pathogens can cause disease and death. We are able to identify microbial mutants that show altered virulence. Its conserved innate response to biotic stresses makes C. elegans an excellent system to probe facets of host innate immune interactions. We show that hosts with mutations in the dual oxidase gene cannot produce reactive oxygen species and are unable to resist microbial insult. We further demonstrate the versatility of the presented survival assay by showing that it can be used to study the effects of inhibitors of microbial growth. This assay may also be used to discover fungal virulence factors as targets for the development of novel antifungal agents, as well as provide an opportunity to further uncover host-microbe interactions. The design of this assay lends itself well to high throughput whole-genome screens, while the ability to cryo-preserve worms for future use makes it a cost-effective and attractive whole animal model to study.

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

Here, we present the nematode Caenorhabditis elegans as a versatile host model to study microbial interaction.

Nematot Caenorhabditis Elegans - konak-mikrop etkileşimleri çalışmaya çok yönlü Vivo içinde manken

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the ...

Genetik

Automated Analysis of a Nematode Population-based Chemosensory Preference Assay

The nematode, Caenorhabditis elegans' compact nervous system of only 302 neurons underlies a diverse repertoire of behaviors. To facilitate the dissection of the neural circuits underlying these behaviors, the development of robust and reproducible behavioral assays is necessary. Previous C. elegans behavioral studies have used variations of a "drop test", a "chemotaxis assay", and a "retention assay" to investigate the response of C. elegans to soluble compounds. The method described in this article seeks to combine the complementary strengths of the three aforementioned assays. Briefly, a small circle in the middle of each assay plate is divided into four quadrants with the control and experimental solutions alternately placed. After the addition of the worms, the assay plates are loaded into a behavior chamber where microscope cameras record the worms' encounters with the treated regions. Automated video analysis is then performed and a preference index (PI) value for each video is generated. The video acquisition and automated analysis features of this method minimizes the experimenter's involvement and any associated errors. Furthermore, minute amounts of the experimental compound are used per assay and the behavior chamber's multi-camera setup increases experimental throughput. This method is particularly useful for conducting behavioral screens of genetic mutants and novel chemical compounds. However, this method is not appropriate for studying stimulus gradient navigation due to the close proximity of the control and experimental solution regions. It should also not be used when only a small population of worms is available. While suitable for assaying responses only to soluble compounds in its current form, this method can be easily modified to accommodate multimodal sensory interaction and optogenetic studies. This method can also be adapted to assay the chemosensory responses of other nematode species.

We present a behavior recording setup and protocol that enables automated analysis of the nematode, Caenorhabditis elegans' preference for soluble compounds in a population-based assay. This article describes the construction of a behavior chamber, the behavioral assay protocol, and video analysis software usage.

Nematod Popülasyona Dayalı Kemoterapi Tercihi Testinin Otomatik Analizi

The nematode, Caenorhabditis elegans' compact nervous system of only 302 neurons underlies a diverse repertoire of behaviors. To facilitate the dissection ...

Davranış

C. elegans Çimden Kaçınma Testi için Akıllı Telefon Tabanlı Görüntüleme

A Smartphone-Based Imaging Method for C. elegans Lawn Avoidance Assay

When exposed to toxic or pathogenic bacteria, the nematode Caenorhabditis elegans displays a learned lawn avoidance behavior, in which the worms gradually leave their food source and prefer to remain outside the bacterial lawn. The assay is an easy way to test the worms' ability to sense external or internal cues to properly respond to harmful conditions. Though a simple assay, counting is time consuming, particularly with multiple samples, and assay durations that span overnight are inconvenient for researchers. An imaging system that can image many plates over a long period is useful but costly. Here, we describe a smartphone-based imaging method to record lawn avoidance in C. elegans. The method requires only a smartphone and a light emitting diode (LED) light box, to serve as a transmitted light source. Using free time-lapse camera applications, each phone can image up to six plates, with sufficient sharpness and contrast to manually count worms outside the lawn. The resulting movies are processed into 10 s audio video interleave (AVI) files for every hourly time point, then cropped to show each single plate to make them more amenable for counting. This method is a cost-effective way for those looking to examine avoidance defects and can potentially be extended to other C. elegans assays.

Yazar Spotlight: C. elegans Çimden Kaçınma Testi için Akıllı Telefon Tabanlı Bir Görüntüleme Yöntemi  

This article describes a simple, low-cost method of recording the lawn avoidance behavior of Caenorhabditis elegans, using readily available items such as a smartphone and a light emitting diode (LED) light box. We also provide a Python script to process the video file into a format more amenable for counting.

C. elegans Çim Önleme Testi için Akıllı Telefon Tabanlı Bir Görüntüleme Yöntemi

When exposed to toxic or pathogenic bacteria, the nematode Caenorhabditis elegans displays a learned lawn avoidance behavior, in which the worms gradually ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C.&#160;elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C.&#160;elegans.

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

Locomotion Speed ​​Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

Nörobilim

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

To ensure survival, organisms must be capable of avoiding unfavorable habitats while ensuring a consistent food source. Caenorhabditis elegans alter their locomotory patterns upon detection of diverse environmental stimuli and can modulate their suite of behavioral responses in response to starvation conditions. Nematodes typically exhibit a decreased aversive response when removed from a food source for over 30 min. Observation of behavioral changes in response to a changing nutritional status can provide insight into the mechanisms that regulate the transition from a well-fed to starved state.
We have developed an assay that measures a nematode&#39;s ability to cross an aversive barrier (i.e. copper) then reach a food source over a prolonged period of time. This protocol builds upon previous work by integrating multiple variables in a manner that allows for continued data collection as the organisms shift towards an increasingly starved condition. Moreover, this assay permits an increased sample size so that larger populations of nematodes can be simultaneously evaluated.
Organisms defective for the ability to detect or respond to copper immediately cross the chemical barrier, while wild type nematodes are initially repelled. As wild type worms are increasingly starved, they begin to cross the barrier and reach the food source. We designed this assay to evaluate a mutant that is incapable of responding to diverse environmental cues, including food sensation or detection of aversive chemicals. When evaluated via this protocol, the defective organisms immediately crossed the barrier, but were also incapable of detecting a food source. Hence, these mutants repeatedly cross the chemical barrier despite temporarily reaching a food source. This assay can straightforwardly test populations of worms to evaluate potential pathway defects related to aversion and starvation.

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

Here, we present a Caenorhabditis elegans-specific assay designed to evaluate changes in copper aversion behavior and the ability to locate a common food source, as the organism progresses from a well-fed to starved nutritional state.

bir<emCaenorhabditis elegans</emBeslenme Durumuna Dayalı Bakır Kaçınma Deneyi

To ensure survival, organisms must be capable of avoiding unfavorable habitats while ensuring a consistent food source. Caenorhabditis elegans alter their ...

Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

Toxicological evaluation is crucial for understanding the effects of chemicals on living organisms in basic and applied biological science fields. A non-mammalian soil round worm, Caenorhabditis elegans, is a valuable model organism for toxicology studies due to its convenience and lack of animal ethics issues compared with mammalian animal systems. In this protocol, a detailed procedure of toxicological evaluation of chemicals in C. elegans is described. A clinical anticancer drug, etoposide, which targets human topoisomerase II and inhibits DNA replication of human cancer cells, was selected as a model testing chemical. Age-synchronized C. elegans eggs were exposed to either dimethyl sulfoxide (DMSO) or etoposide, and then the growth of C. elegans was monitored every day for 4 days by the stereo microscope observation. The total number of eggs laid from C. elegans treated with DMSO or etoposide was also counted by using the stereo microscope. Etoposide treatment significantly affected the growth and reproduction of C. elegans. By comparison of the total number of eggs laid from worms with different treatment periods of chemicals, it can be decided that the reproductive toxicity of chemicals on C. elegans reproduction is reversible or irreversible. These protocols may be helpful for both the development of various drugs and risk assessment of environmental toxicants.

Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

A basic protocol to evaluate the toxicity of chemicals in a model animal, Caenorhabditis elegans, is described. The method is convenient and useful for the development of pharmaceuticals as well as for the risk assessment of various environmental pollutants.

Büyüme ve üreme Caenorhabditis elegans kimyasallar etkisi ölçme

Toxicological evaluation is crucial for understanding the effects of chemicals on living organisms in basic and applied biological science fields. A ...

Tıp

C. elegans Chemotaxis Assay

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates. Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis behavior.
 The premise behind testing the response of the worms to an odorant is to place them in an area and observe the movement evoked in response to an odorant. Even with the many available assays, optimizing worm starting location relative to both the control and test areas, while minimizing the interaction of worms with each other, while maintaining a significant sample size remains a work in progress 1-10. The method described here aims to address these issues by modifying the assay developed by Bargmann et al.1. A Petri dish is divided into four quadrants, two opposite quadrants marked "Test" and two are designated "Control". Anesthetic is placed in all test and control sites. The worms are placed in the center of the plate with a circle marked around the origin to ensure that non-motile worms will be ignored. Utilizing a four-quadrant system rather than one 2 or two 1 eliminates bias in the movement of the worms, as they are equidistant from test and control samples, regardless of which side of the origin they began. This circumvents the problem of worms being forced to travel through a cluster of other worms to respond to an odorant, which can delay worms or force them to take a more circuitous route, yielding an incorrect interpretation of their intended path. This method also shows practical advantages by having a larger sample size and allowing the researcher to run the assay unattended and score the worms once the allotted time has expired.

C. elegans Chemotaxis Assay

A method of quantitatively evaluating the chemotactic response of Caenorhabditis elegans is described. A chemotactic index (CI) was employed as a way to precisely evaluate the response of worms to certain targets, and serve as a platform of comparison between strains and compounds of interest.

C. elegans Kemotaksis Deneyi

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

Biyoloji

Paraformaldehit Kullanılarak Caenorhabditis elegans'ta Bakteriyel Metabolik İnaktivasyon

Methodology to Metabolically Inactivate Bacteria for Caenorhabditis elegans Research

Caenorhabditis elegans is a common model organism for research in genetics, development, aging, metabolism, and behavior. Because C. elegans consume a diet of live bacteria, the metabolic activity of their food source can confound experiments looking for the direct effects of various interventions on the worm. To avoid the confounding effects of bacterial metabolism, C. elegans researchers have used multiple methods to metabolically inactivate bacteria, including ultraviolet (UV)-irradiation, heat-killing, and antibiotics. UV treatment is relatively low-throughput and cannot be used in liquid culture because each plate must be examined for successful bacterial killing. A second treatment method, heat-killing, negatively affects the texture and nutritional quality of the bacteria, leading to the developmental arrest of C. elegans. Finally, antibiotic treatment can directly alter C. elegans physiology in addition to preventing bacterial growth. This manuscript describes an alternative method to metabolically inactivate bacteria using paraformaldehyde (PFA). PFA treatment cross-links proteins within bacterial cells to prevent metabolic activity while preserving cellular structure and nutritional content. This method is high-throughput and can be used in liquid culture or solid plates, as testing one plate of PFA-treated bacteria for growth validates the whole batch. Metabolic inactivation through PFA treatment can be used to eliminate the confounding effects of bacterial metabolism on studies of drug or metabolite supplementation, stress resistance, metabolomics, and behavior in C. elegans.

Yazar Spotlight: Paraformaldehitle Tedavi Edilmiş Bakterileri Kullanarak Caenorhabditis elegans Araştırmasını İlerletmek 

The food source for Caenorhabditis elegans in the lab is live Escherichia coli. Since bacteria are metabolically active, they present a confounding variable in metabolic and drug studies in C. elegans. A detailed protocol to metabolically inactivate bacteria using paraformaldehyde is described here.

Caenorhabditis elegans Araştırmaları için Bakterileri Metabolik Olarak İnaktive Etme Metodolojisi

Caenorhabditis elegans is a common model organism for research in genetics, development, aging, metabolism, and behavior. Because C. elegans consume a ...

Üzerinde Bakterilerin Etkilerinin Ölçme

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Nematot Caenorhabditis Elegans - konak-mikrop etkileşimleri çalışmaya çok yönlü Vivo içinde manken

Nematod Popülasyona Dayalı Kemoterapi Tercihi Testinin Otomatik Analizi

C. elegans Çim Önleme Testi için Akıllı Telefon Tabanlı Bir Görüntüleme Yöntemi

C. elegans Çim Önleme Testi için Akıllı Telefon Tabanlı Bir Görüntüleme Yöntemi

C. elegans Çim Önleme Testi için Akıllı Telefon Tabanlı Bir Görüntüleme Yöntemi

Locomotion Speed Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi

bir

Büyüme ve üreme Caenorhabditis elegans kimyasallar etkisi ölçme

C. elegans Kemotaksis Deneyi

Caenorhabditis elegans Araştırmaları için Bakterileri Metabolik Olarak İnaktive Etme Metodolojisi

Üzerinde Bakterilerin Etkilerinin Ölçme

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Nematot Caenorhabditis Elegans - konak-mikrop etkileşimleri çalışmaya çok yönlü Vivo içinde manken

Nematod Popülasyona Dayalı Kemoterapi Tercihi Testinin Otomatik Analizi

C. elegans Çim Önleme Testi için Akıllı Telefon Tabanlı Bir Görüntüleme Yöntemi

C. elegans Çim Önleme Testi için Akıllı Telefon Tabanlı Bir Görüntüleme Yöntemi

C. elegans Çim Önleme Testi için Akıllı Telefon Tabanlı Bir Görüntüleme Yöntemi

Locomotion Speed ​​Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi

bir

Büyüme ve üreme Caenorhabditis elegans kimyasallar etkisi ölçme

C. elegans Kemotaksis Deneyi

Caenorhabditis elegans Araştırmaları için Bakterileri Metabolik Olarak İnaktive Etme Metodolojisi

Locomotion Speed Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi