Diyabetik Kardiyomiyopati Fare Modelinde Elektroakupunktur Ön Tedavisi için Fare Elektroakupunktur Fiksasyon Cihazı İmalatı

Burada, farelerde elektroakupunktur kullanımı için bir diyabetik kardiyomiyopati fare modeli ve bir fare elektroakupunktur fiksasyon cihazı oluşturmak için bir protokol sunuyoruz, bu da fareleri tedavi sırasında daha nazikçe sabitleyebilir.

Diyabetik kardiyomiyopati (DCM), kalp yetmezliğine ilerleyebilen ve ilaç kullanımı ile sınırlanan bir diyabet komplikasyonudur. Elektroakupunktur, diyabetik kardiyomiyopatiyi tedavi etmek için geleneksel bir Çin tıbbı harici tedavi yöntemi olarak etkili bir yoldur. Bir fare elektroakupunktur fiksasyon cihazı, elektroakupunktur tedavisi sırasında fareleri kolayca ve nazikçe sabitleyebilir ve farelerin karın ve uzuvlarındaki akupunktur noktalarını ortaya çıkarabilir. Bu makale, kan şekeri gibi kan biyokimyasal indekslerindeki değişiklikleri kapsamlı bir şekilde kaydetmek için kapsamlı ölçümlerle diyabetik kardiyomiyopatinin bir fare modelini oluşturarak, fare elektroakupunktur fiksasyon cihazını tüm adımlar ve önlemlerle birlikte imal etmek için kullanılan yöntemleri açıklamaktadır. Deney 3 grupla yapıldı: bir kontrol grubu, bir model grubu ve her grupta 10 fare bulunan bir ön tedavi grubu. Ön tedavi grubu, her alternatif günde bir olmak üzere toplam 7 seans boyunca Biaoben akupunktur noktaları elektroakupunktur ön tedavisi ile tedavi edildi. Elektroakupunkturdan sonra, ön tedavi grubundaki fareler, diyabet semptomlarında bir azalma ile birlikte kan şekerinde bir azalma gösterdi.

Diyabetik kardiyomiyopati (DCM), spesifik bir lezyonun kardiyak yapısında ve ventriküler diyastolik ve kontraktil fonksiyonunda değişiklikler ile karakterize ve daha sonra kalp yetmezliğine dönüşen diabetes mellitusun yaygın bir komplikasyonudur. Diabetes mellitus hastalarında önde gelen ölüm nedenlerinden biridir ^1,2 ve son yıllarda artan prevalansı yaygın olarak dikkat çekmektedir³. Bu hastalığın patogenezinin esas olarak insülin direnci, inflamatuar yanıt, anormal lipid metabolizması, oksidatif stres, mitokondriyal hasarı^içerdiği bulunmuştur ^4,5.

Şu anda, diyabetik kardiyomiyopatinin klinik tedavisi esas olarak kan şekerini kontrol etmek ve kalp hastalığının semptomlarını hafifletmek için oral ilaçlara dayanmaktadır, ancak ilaç reaksiyonları, böbrek fonksiyon etkileri ve uzun süreli ilaç bağımlılığı gibi bazı sınırlamaları vardır⁶. Geleneksel bir Çin tıbbı dış tedavi yöntemi olan akupunktur, diyabetik kardiyomiyopatili hastalarda kan şekeri, kan lipitleri ve inflamatuar yanıt üzerinde daha iyi düzenleyici bir etkiye sahiptir ve klinik etkinliği dikkat çekicidir⁷. Akupunkturun gastrointestinal ve böbrek fonksiyonları üzerinde olumsuz bir etkisi yoktur ve uzun süreli tedavi bağımlılık yaratmaz. Biaoben akupunktur noktaları teorisi, geleneksel akupunktur teorisinde akupunktur noktalarının seçilmesi ve kullanılması için önemli bir yöntemdir⁸. Hastalıkların belirtilerini iyileştirebilecek akupunktur noktalarını Biao akupunktur noktaları olarak tanımlar ve hastalıklarla ilgili vücudun temel fonksiyonlarını düzenleyebilen ve hastalıkların kök nedenlerini tedavi edebilen akupunktur noktalarına Ben akupunktur noktaları denir. Akupunktur ile Biao akupunktur ve Ben akupunktur noktalarının aynı anda uyarılması, hastalıkların tedavi edilmesinin yanı sıra vücudun hastalıklara karşı direncini artırma ve hastalıkların alevlenmesini ve tekrarlamasını önleme amacına da ulaşabilir⁹. Hastalığın şiddetlenmesini ve tekrarlamasını önleyebilir. Modern araştırmalar, Biaoben akupunktur noktaları ile akupunkturun diyabet ve diyabetik kalp hastalığı, diyabetik nefropati, diyabetik retinopati, diyabetik ayak vb. dahil olmak üzere birçok komplikasyonu için etkili olduğunu kanıtlamıştır^10,11. Biaoben akupunktur noktaları teorisi ile uyumlu bir akupunktur noktası seçim şeması, kalbin fonksiyonlarını düzenleyebilen ve Biao akupunktur noktası¹² gibi inflamatuar yanıtı iyileştirebilen PC6 (Neiguan) ve Ben akupunktur noktası¹³ olarak kan şekeri ve kan şekeri durumunu iyileştirebilen, insülin direncini iyileştirebilen ve oksidatif stresi azaltabilen ST36'yı (Zusanli) seçmektir.

Hayvan modelleri, diyabetik kardiyomiyopati çalışmasında önemli bir araçtır, çünkü sıçan veya fare modellerinin, diyabetik kardiyomiyopatinin neden olduğu kalbin yapısal anormalliklerini ve fonksiyonel değişikliklerini iyi taklit ettiği ve diyabetik kardiyomiyopatinin biyokimyasal tespit indeksleri için gerekli örnekleri sağladığı deneysel olarak gösterilmiştir^14,15. Fareleri indüklemek için Streptozotosin çözeltisi ile birlikte yüksek şekerli ve yüksek yağlı yemlerin kullanılması, 4-5 hafta içinde diyabetik modellerin oluşumuna yol açabilir, modelleme süresini etkili bir şekilde kısaltabilir ve başarı oranını artırabilir ve yetiştirme ortamı için özel bir gereklilik yoktur^16,17. Diyabetik kardiyomiyopati, sürekli hipergliseminin kalp yapısında ve fonksiyonunda neden olduğu hasarın neden olduğu bir tür kardiyomiyopatidir. Hastalığın seyrinin uzaması ile diyabetik kalp hastalığı modeli, uzun süreli hiperglisemi altında diyabetik model tarafından doğal olarak geliştirilebilir 18,19,20. Akupunktur ön tedavisi, diyabet oluşumundan sonra ve belirgin miyokard hasarı oluşumundan önce farelerin ön tedavisini ifade eder. Bununla birlikte, tekrarlanan deneysel stimülasyondan sonra, fareler genellikle hareketli hale gelir ve hareketsiz hale getirilmesi zorlaşır ve şiddetli deneysel manipülasyon teknikleri farelerin yaralanmasına neden olabilir veya onları manik veya depresif hale getirebilir²¹. Bu nedenle, fareleri hareketsiz hale getirmek için uygun bir yönteme ihtiyaç vardır. Yaygın olarak kullanılan fare immobilizasyon yöntemleri arasında anestezi ve çemberleme²² bulunur. Anestezi yöntemi akupunktur noktalarını daha iyi ortaya çıkarabilse de, sinir iletimini etkileyebilir ve sonuçta deneysel sonuçları etkileyebilir. Çemberleme yöntemi fiziksel bir immobilizasyon yöntemidir ve anestezi ile aynı fizyolojik etkileri üretmez, ancak bağlı fareler önemli gerginlik, artan kas tonusu ve gelişmiş dışkılama yaşayacaktır^22,23. Ayrıca iğne istenilen pozisyona kolayca ulaşamaz. Burada, elektroakupunktur tedavisinin rahat, güvenli, şiddetsiz ve sekel olmadan yapılabilmesi için elektroakupunktur tedavisi sırasında farelerin hareket etmemesini ve akupunktur noktalarını açığa çıkarmamasını sağlamak için kullanılabilecek bir fare elektroakupunktur fiksasyon cihazını tanıtıyoruz.

Bu makale, fare elektroakupunktur fiksasyon cihazının imalatını ve diyabetik kardiyomiyopatinin bir fare modelinin kurulmasını ayrıntılı olarak açıklamaktadır. Diyabetik kardiyomiyopatiyi Biaoben akupunktur elektroakupunktur ön tedavisi ile tedavi ettik, operasyonunun fare fiksasyon cihazında nasıl gerçekleştirildiğini gösterdik ve Biaoben akupunktur elektroakupunktur ön tedavisinin diyabetik kardiyomiyopati üzerindeki terapötik etkisini glikolipid metabolizması ile ilgili indeksleri ölçerek değerlendirdik.

Tüm hayvan deneyleri, hayvan etiğinin 3R ilkesine uygundur ve Hubei Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Hayvan Deneyleri Etiği Komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır (Etik izin numarası HUCMS00309300). Burada, Hubei İl Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezi'nden 30 SPF dereceli fare elde edildi (Kalite sertifikası NO.42010200009690).

1. Elektroakupunktur fiksasyon cihazının imalatı

1. Bir elektroakupunktur fiksasyon cihazının montajı için şeffaf bir akrilik içi boş plastik tüp ve ana gövde olarak bir elektroakupunktur tedavi aleti elde edin (Şekil 1A). Tüpte bir tüp gövdesi bulundurun ve her iki uçtaki açıklıklarda bulunan kapatma tırnaklarını hazırlayın. Her iki ucun ortasındaki içi boş boruda oluklar açın ve manuel olarak döndürülebilen vidalar kullanarak kapatma tırnaklarını her iki uçtaki oluklara sabitleyin.
2. İçi boş tüpün ortasında, birbirine bitişik olarak dağıtılmış, yaklaşık 2 cm uzunluğunda ve 1 cm genişliğinde üç oval delik açın. Her iki taraftaki delikler, ön ayakların elektroakupunktur tedavisi için fiksasyon için farenin ön ayaklarını çıkarmak için kullanılır ve ortadaki delik, göğüs ve karın bölgelerinin elektroakupunktur tedavisi için farenin göğüs ve karın bölgelerinin akupunktur noktalarını ortaya çıkarmak için kullanılabilir.
3. İçi boş tüpün sonunda, arka uzuvların elektroakupunktur tedavisi için farenin arka bacaklarını çıkarmak için kullanılabilen, merkez oluğun her iki tarafına simetrik olarak dağıtılmış oval bir delik açın (Şekil 1B).
4. İçi boş plastik borunun bütünlüğünü kontrol edin ve kapatma tırnaklarını takın. Vidalar oluklarda kayarken tüp gövdesindeki kapatma tırnaklarını hareket ettirin ve sabitleme uzunluğunu farenin uzunluğuna uyacak şekilde ayarlayabildiğinden emin olun.
5. Elektroakupunktur terapi aletini açın ve çalışır durumda olduğundan emin olun. Her düğmeye bir kez basılarak ayarlanabilir (Şekil 1C).
6. Fareler üzerinde elektroakupunktur tedavileri yapmak için içi boş plastik tüplerin yanına yerleştirilecek elektroakupunktur terapi aletini hazırlayın. Elektroakupunktur terapi aleti, bir elektroakupunktur terapi makinesi ve birkaç çift enerji verici klipsten oluşur; Her bir enerji verici klips çifti, iki kutup enerji sağlayabilir.
7. İğneye enerji vermek için iğne sapını klipslemek için klipsleri kullanırken, iğneyi sabitlemek için bir klips kullanın.
8. Elektroakupunktur terapi makinesinin 11 düğmesi vardır. Elektroakupunkturun frekansını, zamanını ve dalga biçimini ayarlamak için üst 5'i kullanın ve frekans, zaman, sürekli dalga, seyrek ve yoğun dalga ve aralıklı dalga için soldan sağa kullanılır. Elektroakupunkturun mevcut gücünü ayarlamak için alttaki 6'yı kullanın. Bu düğmelerin her birinin altında enerji verici klipsler takmak için bir çentik bulunur; Enerji veren klipslerin sayısı, fare sayısıyla birlikte maksimum 6'ya kadar artabilir veya azalabilir.

2. Diyabetik kardiyomiyopatinin bir fare modelinin oluşturulması

1. 30 fareyi rastgele sayı tablosu yöntemiyle 3 gruba bölün: bir kontrol grubu, bir model grubu ve her grupta 10 fare bulunan bir ön tedavi grubu. Diyabetik kardiyomiyopati modelini oluşturmak için model grubunda ve ön tedavi grubunda toplam 20 fareyi denekleyin. Ön tedavi grubunu Biaoben akupunktur noktaları elektroakupunktur ile tedavi edin.
   NOT: Model uzun bir süre boyunca inşa edilmiştir ve 16 hafta sonra önemli kardiyomiyopati gelişir. Tedavi süremiz 36. günden 70. güne (6. haftadan 10. haftaya kadar) kadardır. Bu tedavi diyabet kurulduktan sonra, ancak önemli miyokard hasarından önce seçildi. 6 haftanın sonunda fare kalbi çıkarıldı ve önemli diyabetik kardiyomiyopatiye sahip olduğu bulundu. Bu nedenle, bu zaman noktasında tedavi seçimi, ön tedavi kategorisine aittir.
2. Kontrol grubundaki fareleri 16 hafta boyunca normal yemekle besleyin. Diyabetik duruma çok benzeyen bir metabolik durumu indüklemek için model grubundaki ve ön tedavi grubundaki fareleri 16 hafta boyunca yüksek yağlı ve yüksek şekerli bir diyetle besleyin. Yüksek yağlı ve yüksek şekerli yem bileşimi %67.0 standart yem, %10.0 domuz yağı, %2.5 kolesterol, %20.0 sükroz ve %0.5 safra tuzlarıdır.
3. Bir fare diyabetik kardiyomiyopati modeli oluşturmak için intraperitoneal Streptozotosin solüsyonu enjekte edin.
   1. 29. günde% 1'lik Streptozotosin çözeltisini hazırlayın. Streptozotosin, sitrik asidin trisodyum sitrat (pH = 4.4) ile karıştırılmasıyla hazırlanan bir tampon içinde çözün.
   2. 29. günde 12 saat boyunca sadece su sağlayın ve yiyecek vermeyin. Daha sonra, her fareye aşağıda tarif edildiği gibi 150 mg / kg Streptozotosin çözeltisinin tek bir intraperitoneal enjeksiyonunu verin.
   3. Fareyi sağ elinizle kuyruğundan tutun ve kafesten dışarı çıkarın. Fareyi kafesin yüzeyine yerleştirin ve kuyruğunu yavaşça dışarı çekin. Fareyi sol elinizle hareketsiz hale getirin ve karnı ortaya çıkarmak için ters çevirin.
   4. Fareyi sağ elinizi kullanarak, uygun miktarda Streptozotosin çözeltisi önceden çekilmiş olarak hazırlanmış 1 mL'lik bir şırınga ile intraperitoneal olarak enjekte edin.
4. Biaoben akupunktur noktaları ile akupunktur tedavisi yapın.
   1. Biaoben teorisine göre akupunktur noktalarını seçin, bilateral PC6 ve ST36 dahil olmak üzere¹³ akupunktur noktaları. Ön tedavi grubu için, 36. günde, toplam 18 tedavi için her gün bir kez akupunktur yapın ve tedavi toplam 5 hafta sürer (36. günden 70. güne kadar; Şekil 2).
      1. Biao akupunktur noktası: Biao akupunktur noktası olarak bilateral PC6'yı seçin; PC6, ön ayağın medial tarafında, el bileği eklemlerinden yaklaşık 3 mm uzakta ulnar-radial sütürler arasında bulunur. Ben akupunktur noktası: Ben akupunktur noktası olarak bilateral ST36'yı seçin; ST36, diz ekleminin arka-lateral yönünde, fibula tüberozitesinin yaklaşık 2 mm altında bulunur.
   2. Fareyi kavrayın, kuyruğunu sıkıştırın ve kafesin yüzeyine yerleştirin. Akrilik içi boş plastik tüpün ağzını yatay düzleme 30°'lik bir açıyla, merkezdeki küçük delik yere bakacak ve tüpün ağzı farenin kafası ile aynı hizada olacak şekilde tutun.
   3. Farenin kafasını tüpün ağzına yerleştirin. İstemli hareket ve hafif bir itme kullanarak farenin kafasını yavaşça tüpün içine döndürün. Farenin kalçalarını nazikçe okşayın, böylece fare otonom olarak ve tamamen tüpün içine itilir.
   4. Kapatma tırnaklarını ayarlayın, farenin kuyruğunu oluktan kaldırın, somunu sıkın ve farenin hareketini kısıtlamak için üst ve alt uçlardaki kapatma tırnaklarını kullanın. Bu noktada, fare artık tüp gövdesinde serbestçe hareket edemez.
   5. Farenin dört uzvunu her iki taraftaki dört küçük deliğin her birinden nazikçe çıkarmak için cımbız kullanın. Dört uzuv küçük deliklerden çekildikten sonra, bunları tüp gövdesinin dışına nazikçe sabitleyin. Bu noktada, farenin dört uzvu artık yer değiştiremezdi.
   6. Tek kullanımlık paslanmaz çelik iğne sapını (0.3 mm x 13 mm) sağ elinizin baş parmağı ve işaret parmağıyla tutun ve akrilik tüpü ve hareketsiz fareleri sol elinizle tutun.
   7. Sağ elinizin orta parmağıyla PC6 ve ST36'nın bulunduğu yere dokunun ve bulun, ardından iğne ucuyla farenin derisini nazikçe delin. Eğik olarak enjekte edilen iğneyi yaklaşık 3 mm hızla yerleştirin ve sağ elinizi hızla çıkarın.
5. Elektroakupunktur ön işlemi yapın
   1. Elektroakupunktur terapi makinesini açın ve aralıklı dalgaya, 1 Hz'ye ayarlayın. Her fare için 15 dakika boyunca elektroakupunktur tedavisi uygulayın.
   2. İğne sapını tutmak için elektroakupunktur terapi makinesinin eşleşen enerjili klipsini, bir iğne sapı için bir klipsi kullanın.
   3. Klips 1 mA'ya takılıyken düğmenin akımını ayarlayın (Şekil 3).
   4. 15 dakika bekleyin ve elektroakupunktur ön işlemi sırasında farelerin durumunu gözlemleyin.
   5. Tedavinin sonunda klipsi serbest bırakın ve akupunktur iğnesini çıkarın. Kapatma tırnaklarını ayarlayın ve fareleri elektroakupunktur sabitleme cihazından serbest bırakın.
   6. Farelerin tüm vücudunu inceleyin ve farelerin yaralı olup olmadığını veya herhangi bir anormalliği olup olmadığını gözlemleyin.
6. Streptozotosin solüsyonunun 7 günlük enjeksiyonundan sonra, 36. günden 70. güne kadar bir fare elektroakupunktur fikstüründe toplam 18 tedavi için her gün akupunktur tedavileri yapın.
7. Deneyi 112. günde bitirin (16. haftanın sonu).
   1. % 2 pentobarbital sodyumun intraperitoneal enjeksiyonu ile anestezi uygulayın ve ayak parmağı sıkıştırma yanıtı ile anesteziyi onaylayın. Ekokardiyografi kullanarak farelerin kardiyak fonksiyonunu ölçün.
      1. Sol ventrikül diyastol sonu çapını (LVEDD), sol ventrikül sistolik uç çapını (LVESD), sol ventrikül ejeksiyon fraksiyonunu (LVEF) ve sol ventrikül fraksiyonel kısalmasını (LVFS) kaydedin.
   2. Ötenazi servikal çıkık ile fareler. Kalbi çıkarın, fizyolojik tuzlu suyla yıkayın ve% 4 paraformaldehite batırın.

3. Hematoksilen-eozin (HE) boyaması

1. Kalbi kurutun, gömün, dilimleyin, mumdan arındırın ve standart prosedüre göre HE boyama yapın.
2. Işık mikroskobu altında fare kalp dokusunun patolojik değişikliklerini gözlemleyin.

4. Fareler üzerinde gözlemler

1. 27, 36 ve 49. günlerde bir kan şekeri ölçüm cihazı kullanarak kan şekerini ölçün.
2. Farelerin ne kadar yediklerini gözlemleyin, her gün su alımlarını ve idrara çıkma hacimlerini ölçün ve kilo değişikliklerini kaydedin.

5. İstatistiksel analiz

1. Kan şekeri verilerini toplayın ve istatistiksel anlamlılığı belirlemek için tek yönlü ANOVA kullanın. İstatistiksel anlamlılığı p < 0.05 olarak belirleyin.
2. Verileri, deney koşullarına kör olan asistanlar tarafından nicelleştirin. Verileri ortalama ± standart sapma olarak ifade edin.

Yukarıda açıklanan prosedürü takip ettik ve diyabetik kardiyomiyopatinin bir fare modelini oluşturduk. HE ile boyanmış resimlerde (Şekil 4) görülebileceği gibi, kontrol grubundaki fareler sağlam miyokard doku yapısına, düzenli kardiyomiyosit düzenine sahipti ve belirgin bir lezyon yoktu. Model grubunda, miyokard hücreleri düzensiz olarak düzenlenmiş, bazı miyokard hücreleri hasar görmüş ve parçalanmış (siyah ok) ve interstisyumda (sarı ok) belirgin inflamatuar hücre infiltrasyonu gözlenmiştir. Model grubundaki farelerin miyokard hasarına sahip olduğu ileri sürülmektedir. Tedavi öncesi grupta, farelerin miyokardiyal doku yapısı açıktı, miyokard hücreleri düzensiz olarak düzenlendi, az sayıda miyokard hücresi hasar gördü ve parçalandı (siyah oklar) ve başka belirgin lezyonlar gözlenmedi. Buna karşılık, kontrol grubunun miyokard dokusunda belirgin bir lezyon yoktu ve model grubundaki miyokard dokusu yaralanması daha ciddiydi. Tedavi öncesi gruptaki miyokard dokusu hasarının derecesi, model grubundakinden anlamlı olarak daha düşüktü. Bu, tedavi öncesi tedavinin miyokard hasarını azaltabileceğini düşündürmektedir.

Ekokardiyografinin kardiyak fonksiyon indeksleri (Şekil 5), kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, model grubundaki sol ventrikül diyastol sonu hacminin ve sol ventrikül sistol sonu hacminin anlamlı olarak arttığını, model grubundaki sol ventrikül ejeksiyon fraksiyonunun ve sol ventrikül fraksiyonel kısalmasının önemli ölçüde azaldığını gösterdi. Aradaki fark istatistiksel olarak anlamlıydı (P < 0.05). Model grubundaki farelerin miyokardiyal sistolik ve diyastolik fonksiyonlarında azalma olduğu ve kardiyak morfoloji ve yapının anormal olduğu ileri sürülmektedir^24,25. Model grubu ile karşılaştırıldığında, tedavi öncesi grupta sol ventrikül diyastol sonu çapı ve sol ventrikül sistolik sonu çapı önemli ölçüde azaldı ve tedavi öncesi grupta sol ventrikül ejeksiyon fraksiyonu ve sol ventrikül fraksiyonel kısalması önemli ölçüde arttı. Aradaki fark istatistiksel olarak anlamlıydı (P < 0.05). Ön tedavi grubundaki farelerin kardiyak fonksiyonunun iyileştirildiği öne sürülmektedir. Bu, diyabetik kardiyomiyopati modelinin model grubunda başarılı bir şekilde kurulduğunu ve tedavi öncesi tedavinin kardiyak fonksiyonu iyileştirebileceğini göstermiştir²⁶.

Fare elektroakupunktur fiksasyon cihazını monte edin ve Şekil 3'te gösterildiği gibi elektroakupunkturu gerçekleştirmek için elektroakupunktur terapi aletini bağlayın. Fareler, bilateral PC6 ve ST36'nın iğnelenmesi sırasında akrilik plastik tüplere hapsedildi ve şeffaf tüpler, farelerin her zaman gözlemlenmesine izin verdi.

Tedavi sırasında, farelerin fiksasyon cihazında sessizce elektroakupunktur aldığı gözlemlenebilir. Serbest bırakıldıktan sonra, fareler stres reaksiyonu göstermedi, yırtılmadı ve kafeste hızlı bir şekilde koşmadı. Bu, fare elektroakupunktur fiksasyon cihazının güvenliğini ve tekrarlanabilirliğini gösterir.

Streptozotosin çözeltisinin enjeksiyonundan 7 gün sonra, model grubundaki ve ön tedavi grubundaki fareler, aşırı içme suyu, yemek yeme, idrar yapma ve kilo kaybı gibi diyabetle ilişkili semptomlar gösterdi. Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, model ve tedavi öncesi grupların kan şekeri 36. günde anlamlı olarak daha yüksekti ve fark anlamlıydı (p < 0.05), bu da diyabetik kalp hastalığı farelerinin modellemesinin başarılı olduğunu gösterdi. Elektroakupunktur rejimi tamamlandıktan sonra, model grubuyla karşılaştırıldığında, önceden tedavi edilen gruptaki farelerin kan şekeri 49. günde önemli ölçüde azaldı. Fark anlamlıydı (p < 0.05), bu da Biaoben akupunktur elektroakupunktur ön tedavisinden sonra kan şekerinin önemli ölçüde azaldığını gösterdi (Şekil 6). Bu, tedavi öncesi tedavinin kan şekeri seviyelerini etkili bir şekilde kontrol edebileceğini, miyokard hücre hasarını hafifletmek için hiperglisemiyi iyileştirebileceğini ve diyabetik kardiyomiyopatiyi iyileştirebileceğini gösterdi. Ayrıca fare elektroakupunktur fiksasyon cihazı destekli elektroakupunktur tedavisinin fizibilitesini kanıtladı.

Şekil 1: Elektroakupunktur fiksasyon cihazının bileşimi. (A) Akrilik içi boş plastik tüp, bir tüp gövdesinden ve her iki uçtaki açıklıklarda bulunan kapatma tırnaklarından oluşur. Kapatma tırnakları, manuel olarak döndürülebilen vidalarla her iki uçtaki oluklara sabitlenir. Tüp 11 cm uzunluğunda ve 3 cm çapındadır. (B) Merkez oluğun her iki tarafında simetrik olarak dağıtılmış dört oval delik vardır. (C) Elektroakupunktur makinesinin 11 düğmesi vardır. Üst 5, elektroakupunkturun frekansını, zamanını ve dalga biçimini ve soldan sağa ayarlamak için kullanılır: frekans, zaman, sürekli dalga, seyrek ve yoğun dalga ve aralıklı dalga. Alttaki 6, elektroakupunkturun mevcut gücünü ayarlamak için kullanılır. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 2: Deneyin akış ve zaman noktaları. Kontrol grubundaki fareler 16 hafta boyunca normal yemek ile beslendi. Model grubundaki ve ön tedavi grubundaki fareler, 16 hafta boyunca yüksek yağlı ve yüksek şekerli bir diyetle beslendi ve 29. günde Streptozotosin çözeltisi enjekte edildi. Ardından her gün akupunktur tedavileri, fare elektroakupunktur fiksasyon cihazında 36. günden 70. güne kadar toplam 18 tedavi uygulandı. Ve deneyi 112. günde bitirdik. Farelerde elektroakupunktur fiksasyon cihazının fizibilitesini doğrulamak için, her gruptaki farelerin kan şekerini 29. gün, 36. gün ve 49. günde tespit ettik. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 3: Bir elektroakupunktur fiksasyon cihazı kullanılarak farelerin elektroakupunkturu. Elektroakupunktur terapi makinesini başlatın, akımı 1 mA, aralıklı dalga, 1 Hz ve 15 dakikaya ayarlayın. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 4: HE boyama sonuçları. (A) Kontrol grubu; (B) Model grubu; (C) Ön tedavi grubu. Görüntüler 200x'te çekildi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 5: Her gruptaki farelerin kardiyak fonksiyon indeksleri. (A) Sol ventrikül diyastol sonu çapı (LVEDD); (B) sol ventrikül sonu sistolik çapı (LVESD); (C) sol ventrikül ejeksiyon fraksiyonu (LVEF); (D) sol ventrikül fraksiyonel kısalma (LVFS). Grafik, standart sapma ± ortalamasını göstermektedir (n = 10). İstatistiksel anlamlılık tek yönlü varyans analizi kullanılarak hesaplandı; kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, ^##P < 0. 01; model grubuyla karşılaştırıldığında, **P < 0,01. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 6: 27, 36 ve 49. günlerde her bir fare grubunda kan şekerindeki değişiklikler. Grafik, standart sapma ± ortalamasını göstermektedir (n = 10). İstatistiksel anlamlılık tek yönlü varyans analizi kullanılarak hesaplandı; kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, ^##P < 0. 01; model grubuyla karşılaştırıldığında, **P < 0,01. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Bu çalışmada, yüksek kan şekeri olan ve diyabet belirtileri gösteren fareler, etkili ve tanınmış bir modelleme yöntemi olan Streptozotosin çözeltisinin intraperitoneal enjeksiyonu ile elde edilmiştir²⁷. Biaoben akupunktur noktaları²⁸ teorisine göre PC6, Biao noktası olarak ve ST36 Ben noktası olarak seçildi. Bu noktaların tümü farenin uzuvları üzerindedir, bu nedenle karnı açığa çıkarabilen ve uzuvları hareketsiz hale getirebilen akrilik tüpler bu noktaların iğnelenmesi için çok uygundur. Fareler tüp gövdesine sokuldu ve sabitlendi ve iğnelemeden sonra elektroakupunktur tedavisi için elektroakupunktur cihazı açıldı. Elektroakupunktur ile tedavi edilen lokal kasların hafifçe titriyor gibi göründüğü gözlemlenebilir, bu normaldir ve hiçbir yan etkisi yoktur.

Geleneksel Çin tıbbında önemli bir araç olan akupunktur, glikolipid metabolizmasını düzenleyerek ve inflamatuar yanıtı iyileştirerek diyabetik kardiyomiyopatiyi tedavi eder^29,30. Elektroakupunktur, yaygın olarak kullanılan ve niceliksel olarak uygulanan akupunktur tedavisi yöntemlerinden biridir ve diyabetik kardiyomiyopatinin klinik tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır³¹. Elektroakupunktur, akupunktur noktalarına sürekli olarak stimülasyon sağlamak ve akupunkturun terapötik etkisini iyileştirmek için akupunktur bölgesine aralıklı dalgalar şeklinde elektrik sinyalleri verir. Bu çalışmada Biao noktası olarak PC6, Ben noktası olarak ST36 seçilmiştir. Bunlar arasında, PC6, diyabetik kardiyomiyopatili farelerde miyokardiyal yeniden şekillenmeyi ve sistolik ve diyastolik fonksiyonu iyileştirebilir ve ST36 oksidatif stresi azaltabilir, insülin direncini iyileştirebilir ve glikoz ve lipid metabolizması seviyesini artırabilir. Elektroakupunktur tedavisi ile birlikte, diyabetik kardiyomiyopati³² tedavi etme amacına ulaşır. Bu deneyde, elektroakupunktur ön tedavi grubundaki fareler, 36. günden 49. güne kadar kontrol grubundaki farelere kıyasla daha düşük kan şekeri ve aşırı içme, yeme ve idrara çıkma gibi diyabetik semptomlarda azalma gösterdi. Ön tedavinin kan şekeri seviyesini kontrol edebileceğini ve miyokard hasarını hafifletmek için kan şekerini azaltabileceğini göstermektedir. 2 haftalık tedavi sırasında, fare elektroakupunktur cihazının geleneksel fare ceketinden daha uygun ve daha güvenli olduğu gözlemlendi, bu da tedavi verimliliğini büyük ölçüde artırdı. Elektroakupunktur tedavisine yardımcı olmada bir fare elektroakupunktur fiksasyon cihazının fizibilitesini gösterir.

Şu anda, fareler elektroakupunktur tedavisi sırasında, fareleri dizginlemek için ev yapımı fare giysileri kullanılarak hareketsiz hale getirilmektedir, bu da yapılması ve kullanılması sakıncalıdır³³. Elektroakupunktur fiksasyon cihazı, elektroakupunktur tedavisi için farelerin uzuvlarını hızlı ve nazikçe hareketsiz hale getirebilir. Bu cihaz daha hızlı, daha güvenli ve fareleri ajite etme olasılığı daha düşüktür, tahriş, ısırma ve ölümden kaçınır, böylece hayvanların refahını ve deneycilerin güvenliğini korur. Bir fare, tüpün iç duvarının yoğun bir şekilde çizilmesi veya vücut seğirmesi gibi anormal bir durum geliştirirse, immobilizeri açın ve fareyi çıkarın, fareyi düz bir masa üstü veya fare kafesi çerçevesine yerleştirin ve fareyi sakinleştirin, ardından anormallik hızla çözülecektir. Ek olarak, iğneleme için vücudun diğer bölgelerinde, örneğin sırtta akupunktur noktalarına ihtiyaç duyulursa, bu, farelerin girişi sırasında akrilik tüplerin konumunu değiştirerek gerçekleştirilebilir. Bu cihazın sınırlaması, fareler tüp gövdesi içinde hapsedildiğinden, sadece karın, sırt ve uzuvlardaki akupunktur noktalarını açığa çıkardığından ve kafa bir akrilik tüp ve bir kapatma tabakası ile kaplandığından, kafada bulunan akupunktur noktalarının iğnelenmesi için iyi çalışmamasıdır. Ayrıca bu cihaz, tavşan ve köpek gibi büyük hayvanlardan ziyade fareler için uygundur. Gelecekte, bu cihaz, farelerin elektroakupunktur ile tedavi edilmesini kolaylaştırmak, deneylerin verimliliğini artırmak ve hem farelerin hem de deneycinin güvenliğini korumak için yaygın kullanım için uygulanabilir.

Özetle, bu deneyde, bir fare elektroakupunktur fiksasyon cihazı imal etmek için bir metodolojinin ayrıntılı bir tanımını sunuyoruz. Cihaz, elektroakupunktur tedavisi sağlamak için farelerin karın ve uzuvlarındaki akupunktur noktalarını açığa çıkarır ve hareketsiz hale getirir. Bir fare elektroakupunktur fiksasyon cihazının kullanılması, diyabetik kardiyomiyopati fareleri için elektroakupunktur tedavisinin daha iyi kullanılmasına ve analiz edilmesine yardımcı olur ve diyabetik kardiyomiyopati için akupunktur tedavisinin araştırılması için daha fazla olasılık sağlar.

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Bu çalışma, Hubei Doğa Bilimleri Vakfı ortak projesi 2022CFD024'ten bir hibe ile desteklenmektedir; Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı, No. 81704142; Hubei Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi 2023 çift birinci sınıf inşaat anahtarı özel bilimsel araştırma projesi,2023ZZXT005; Hubei Geleneksel Çin Tıbbı İl İdaresi'nin anahtar projesi kapsamında miyokardiyal iskemi-reperfüzyon hasarı (MIRI) olan sıçanlarda miyokardiyal hücrelerin ferroptozunun düzenlenmesinde Biaoben akupunktur noktaları, elektroakupunktur ön koşullandırmasının mekanizmasını incelemek, ZY2025D001; Wuhan Bilim ve Teknoloji Bürosu Bilgi İnovasyon Projesi, No. 2023020201010172; Hubei Shi Zhen Yetenek Mühendisliği Projesi, E Wei Han [2024]256.