Наш протокол с использованием анализа походки очень полезен при определении того, имитируют ли мышиные двигатели движения симптом пациента с нарушением походки. Таким образом, анализ походки в стресс-тесте может быть выполнен легко, и без дорогостоящего оборудования, для обнаружения определенных моторных фенотипов у мышей, без спонтанных эффектов. Прежде чем инициировать поведенческий тест, заведать вес каждой мыши, и использовать маркировку пера для обозначения каждого хвоста.
Когда все животные были взвешены и отмечены, поместите мышей в экспериментальной комнате, по крайней мере 30 минут, и установить четкие, 25 на 25 на 40 сантиметров висит окно, с вращающейся крышкой сетки, на скамейке лаборатории. Когда мыши приспособятся, поместите одну мышь в центр крышки сетки и аккуратно переверните крышку вверх дном. Затем измерьте задержку падения мыши с крышки сетки, прежде чем вернуть мышь в домашнюю клетку.
Когда все мыши были протестированы, поместите 9,9 на 42 сантиметра кусок белой бумаги на скамейке лаборатории, и поместите темную коробку цели на дистальный конец бумаги. Поместите другие коробки, примерно такой же длины, как бумага, по обе стороны от взлетно-посадочной полосы, чтобы предотвратить побег. И добавить черные и красные чернила, чтобы отделить 35 миллилитров Петри блюда.
Чтобы обучить мышей для анализа, поместите мышь на проксимальный конец бумаги, перед коробкой цели, и пусть мышь ходить от проксимального конца бумаги к цели поле. Когда мышь достигает коробки, осторожно потертый животное, заправляя спину и хвост между мячом большого пальца и других пальцев, чтобы ограничить движение задних конечностей. И погрузите днища конечностей красными чернилами, а нижнюю часть задних конечностей черными чернилами.
Затем немедленно поместите мышь обратно на проксимальный конец бумаги, лицом к цели поле, и пусть мышь ходить от проксимального конца к цели поле. После высыхания воздуха ноги печатной бумаги, использовать линейку для получения трех измерений длины шага, путем измерения расстояний между теми же частями лапы отпечатков. Из передней ширины основания, рисуя линию между последовательными, одной стороны, передние следы, и измерения длины вертикальной линии от площадки переднего следа, к линии, нарисованной между следами.
И заднего основания ширины, рисуя линию между последовательными правыми задними следами, и измерения длины вертикальной линии от площадки левого заднего следа, к линии, нарисованной между другими правыми следами. Для перекрытия измерьте расстояние между прокладками переднего и заднего следов. Чтобы подготовить удерживающих трубок, используйте квадратную дрель, чтобы сделать 16 двухмиллиметровых отверстий в 50 миллилитровой трубке по шкале знаков, и задняя часть каждой шкалы знака.
Отрежьте кончик трубки, чтобы сделать пятимиллиметровое отверстие, для дыхания, и сделать четырехмиллиметровое отверстие в крышке трубки, для хвоста. Для стресс-загрузки тест, потертый мыши, и поместите животное в голову удерживающих трубки во-первых, с конечностями мягко ограничены. Перейдите хвост через отверстие в крышке, прежде чем крышка трубки.
И поместите мышь на скамейке верхней в течение двух часов при комнатной температуре. В конце периода стресс-загрузки, удалить мышь из трубки, и вернуть животное в свою домашнюю клетку. Как отмечается в этих репрезентативных данных, гетерозиготные быстро начала дистонии Паркинсонизма модели мышей, продемонстрировать значительно короче перед и задний шаг длины, чем их дикий тип помета товарищей в четыре недели возраста.
Стресс гетерозиготных быстрого начала дистонии Паркинсонизма модели мышей, а также проявляют значительно короче шаг длины обеих конечностей, чем у подчеркнул диких типа помета товарищей в восемь недель возраста. Асимметрия длины шага обеих конечностей существенно не отличается, в любой группе мышей, в любом возрасте. Передняя база и перекрытия обеих конечностей также похожи, во всех группах, в всех возрастных группах.
Задняя база значительно шире в этих подчеркнул гетерозиготных быстрого начала дистонии Паркинсонизма модели мышей, чем наблюдается в стресс диких животных типа в 10 недель, что свидетельствует о том, что стресс вызывает двигательный дефицит в гетерозиготных быстрого начала дистонии Паркинсонизма модели мышей. Никаких существенных различий в времени повешения, между диким типом и мутантом, не наблюдается в четыре-10 недель старых животных. В 12 недель возраста, однако, время висяния стресса диких мышей типа значительно дольше, чем у других животных, предполагая, что двигательный дефицит в гетерозиготных быстро начала дистонии Паркинсонизма модели мышей, отличается от диких мышей по сдержанности тест у пожилых животных.
Поместите мышь на бумагу сразу после того, как мышь висит днища конечностей в чернила, чтобы избежать высыхания чернил перед ходьбой тест. Дополнительные тесты на эмоциональные характеристики, такие как открытое поле, повышенный плюс-лабиринт, и весь тест плавать, могут быть выполнены, чтобы ответить, является ли походка аномалии в результате только двигательного дефицита. Наш протокол может быть использован для изучения восприимчивости к стрессу, путем изменения числа и продолжительности загрузки напряжения, а также путем сравнения моторных фенотипов между различными условиями загрузки.
Наш протокол можно использовать для изучения восприимчивости к стрессу, изменяя количество и продолжительность стрессовых нагрузок, а также сравнивая моторные фенотипы между различными условиями загрузки.
