Меня зовут доктор Томас Прево. Я ученый в Центре наркомании и психического здоровья, или CAMH, и доцент в Университете Торонто на кафедре психиатрии. Моя группа особенно заинтересована в снижении базовой тревоги и реактивности у мышей, чтобы уменьшить изменчивость данных и улучшить благосостояние животных.
Мыши оказались бесценными активами в фундаментальной науке и доклинических исследованиях, однако очень немногие лаборатории по всему миру контролируют исходную тревогу и реактивность своих лабораторных животных, что усложняет воспроизводимость данных между лабораториями. Основным фактором, способствующим базовой тревоге, являются неконтролируемые переменные окружающей среды, такие как жилищные условия, обогащение окружающей среды и воздействие стресса. В то время как стандартизация жилищных условий и обогащение помогли улучшить эту проблему, воздействие стресса во время взаимодействия с экспериментаторами все еще в значительной степени не рассмотрено у мышей.
Обработка хвоста, процесс подъема мыши за хвост, по-прежнему является широко используемой техникой обработки мыши, несмотря на то, что она особенно стрессовая. Хотя появились альтернативы обработке хвоста, включая обработку туннелей и обработку чашек. Внедрение этих методов было медленным.
Здесь мы описываем новую технику, похожую на обработку чашек, которая может быть реализована всего за три дня привыкания или 3D-обработки. Постепенно увеличивая степень и сложность взаимодействия и прогрессируя в ответ на реактивность мыши на определенные этапы обработки, мы можем уменьшить стресс и облегчить рутинную обработку. Мы оцениваем эффективность 3D-обработки у мышей в поведенческих тестах, оценивая тревожное поведение, взаимодействие с экспериментаторами и периферический гормон стресса, кортикостерон, уровни и проводим сравнение с туннельной обработкой и методами обработки хвоста.
Осторожно откройте клетку и положите крышку сбоку. Введите руку в перчатке в домашнюю клетку, прежде чем пытаться поднять мышь. Дайте мыши привыкнуть к присутствию руки в течение примерно 30 секунд.
Затем попытайтесь поднять мышь в руки. Если мышь не может быть легко поднята, сведите обе руки вместе и используйте их, чтобы направить мышь в угол клетки. Затем обеими руками возьмите мышь.
Как только мышь будет извлечена из клетки, держите руки как можно более плоскими и открытыми. Позвольте мыши свободно исследовать. Это обеспечивает плоскую платформу для мыши, чтобы наступить и ограничивает риск укуса.
Держите руку открытой и плоской, ладонью вверх. Поместите другую руку рядом с мышью и позвольте мышке свободно перемещаться из рук в руки без каких-либо ограничений. После одной минуты обработки плоскими руками расслабьте ладонь и слегка закуйте мышь в голове, прежде чем осторожно перекатывать мышь между руками.
Продолжайте в течение четырех минут, чередуя мягкое катание между руками и свободное исследование открытых рук. В течение последних двух минут выполните тест на укрытие. Позвольте мыши переместиться к краю вашей руки и сведите две руки вместе.
Очень медленно, сжимайте руки так, чтобы мышь помещалась внутри укрытия, образованного руками. Обязательно оставьте отверстие, чтобы мышь могла сбежать в случае необходимости. Старайтесь держать мышь в укрытии от пяти до 10 секунд без каких-либо ограничений.
Повторите тест на укрытие три-четыре раза в течение последних двух минут. Не торопить процесс. Если мышь испытывает стресс, будучи запертой внутри руки, продолжайте кататься между руками и свободное исследование в течение 30 секунд, а затем повторите тест на укрытие.
Оставьте свободное исследование в руках в течение 30 секунд, затем аккуратно замените мышь в ее клетке. Очистите столешница от любых кала и мочи 70% этанолом или соответствующим чистящим раствором. Очищайте перчатки от кала и мочи по мере необходимости, а при переодении в новую клетку промойте перчатки 70% этанолом или меняйте перчатки.
Ко второй день уже должно быть целесообразно вынуть мышь из клетки в руках. Если мышь кажется реактивной, выполните плоскую руку и свободное исследование открытых голов в течение 30 секунд до минуты. В противном случае приступайте к проворачиваем между руками и тесту на укрытие.
Выполняйте роль между руками и ступенями укрытия с первого дня в течение двух-трех минут. Выполните каждый шаг несколько раз. Если мышь кажется непринужденной в тесте на укрытие, попробуйте погладить мышь по спине и голове.
Если мышь не пытается бежать от контакта, приступайте к тычку в нос. Осторожно прикоснитесь мышкой к кончику морды. Если он не кусается или не пытается повернуть голову, это хороший признак привыкания.
Для теста на ласку и тычок в нос, не торопить процесс. Если мышь испытывает стресс, будучи запертой внутри рук, или не хочет, чтобы ее трогали, продолжайте кататься между руками в течение нескольких минут, а затем повторите попытку. Прекратите этот сеанс примерно через три минуты обработки, если животное хорошо реагирует на укрытие, поглаживание головой и тыканье носом.
И если животное, по-видимому, готово исследовать ваши руки без каких-либо признаков стресса, таких как попытки убежать, прыжки с рук или избегание контакта с руками. Если мышь продолжает проявлять признаки стресса или не реагирует хорошо на тест на укрытие или тест на тыканье носом, продолжайте сеанс до достижения пяти минут, как в первый день. Замените мышь в клетке и почистите столешницы и перчатки.
На третий день выполните те же шаги, что и на второй день. Подберите мышь на ладони. Перемещеть мышь между руками.
Осторожно заведите мышь в руки с кубиком. Если мышь хорошо реагирует на эти шаги, попробуйте погладить мышь и попытаться провести тест на тыканье носом. На третий день мышь должна быть достаточно расслаблена, чтобы сидеть на ладони, не отрываясь, и вы должны быть в состоянии пройти через эти шаги в течение примерно двух-трех минут.
Замените мышь в клетке и почистите столешницы и перчатки. На третий день. если животное будет удерживаться для экспериментальных целей, таких как пероральная инъекция или внутриперитонеальная инъекция, мыши могут быть подвергнуты тесту на защемление шеи.
Возьмите мышь за затылок, между большим и указательным пальцами, и поднимите мышь на пять сантиметров над рукой на две-три секунды. Обычно это неудобное положение для взрослых мышей, и если мыши остаются почти неподвижными, они хорошо привыкли к обращению и их будет легко удерживать для инъекций. Положите мышь обратно на плоскую руку и позвольте ей свободно исследовать в течение одной минуты.
Животные были проверены на их готовность добровольно взаимодействовать с экспериментатором и простоту обращения в экспериментальном контексте. В одном исследовании мыши, обработанные либо обработкой трубок, либо 3D-обработкой, с меньшей вероятностью убегали, когда экспериментатор пытался забрать мышь. Кроме того, исследование одной мыши, обработанной с использованием 3D-техники, провело больше времени в том же квадранте, что и рука экспериментатора, что указывает на повышенную готовность взаимодействовать с экспериментатором.
Во во второй главе исследования мыши, обработанные либо обработкой трубок, либо 3D-обработкой, с меньшей вероятностью убегали, когда экспериментатор пытался поднять мышь, по сравнению с мышами с хвостом. Однако во воском исследовании техника обработки не оказала существенного влияния на время, проведенное в том же квадранте, что и рука экспериментатора. Эффект 3D и туннельной обработки сравнивался с обработкой хвоста в двух тестах тревожного поведения, тесте на питание с подавленной новизной и приподнятом плюс-лабиринте.
В одном исследовании, в тесте на питание с подавленной новизной, наблюдалась тенденция к снижению тревоги у мышей с туннельной обработкой и 3D-обработкой. В возвышенном плюсовом лабиринте не было общего эффекта от управляемости. При обобщении в виде Z-балла наблюдалось значительное снижение общей тревоги у мышей с туннельной обработкой и 3D-обработкой по сравнению с мышами с хвостовым управлением.
Во второй части исследования не было общего влияния обработки на меры тревоги в тесте на питание с подавленной новизной или в лабиринте повышенного плюса. При суммировании в виде Z-балла техника обработки не оказала общего влияния на беспокойство. В качестве физиологической меры стресса мы собрали сыворотку с мышей с хвоста, 3D-обработки и туннельной обработки через 15 минут после короткого сеанса обработки и проверили уровень кортикостерона.
В одном исследовании не было общего эффекта от обработки. Во второй части исследования 3D-обработка значительно снизила уровень кортикостерона по сравнению с обработкой хвоста. Основываясь на наблюдениях, что методы обработки у мышей не широко признаны научным сообществом, мы описали использование новой техники обработки.
В обоих представленных исследованиях туннельная и 3D-обработка уменьшали попытки мышей бежать при поднятии, что потенциально облегчало рутинную обработку. Кроме того, у пожилых самцов мышей этот метод уменьшал тревожное поведение и увеличивало взаимодействие с экспериментатором. У молодых самок.
этот метод снижал уровень кортикостерона, наблюдаемый в ответ на обращение. Внедрение этого метода может снизить изменчивость данных, улучшить благосостояние животных и облегчить рутинное обращение.
